微生物實驗室管理（一）發(fā)生菌液（或培養(yǎng)液）污染臺面或地面時，應立即以0.1％新潔爾滅溶液或其它消毒液傾復其上，至少30分鐘后再行洗擦工作衣帽口罩等受到菌液污染時，應立即脫去，高壓滅菌后洗滌如有傳染性培養(yǎng)物污染手部，應先用酒精棉球拭去，再浸入0.1％新潔爾滅溶內(nèi)片刻，再用肥皂及清水徹底洗刷干凈。微生物實驗室管理（一）發(fā)生菌液（或培養(yǎng)液）污染臺面或地面時，1微生物實驗室管理（二）

帶菌的實驗用品應浸泡在消毒液內(nèi)48小時后取出，或121℃，30分鐘高壓滅菌后進行洗滌。廢棄帶菌培養(yǎng)物應121℃，30分鐘高壓滅菌后再行處理。微生物限度檢驗室：生物限度檢驗室每周進行清潔消毒并填寫《微生物限度檢驗室清潔記錄》。消毒劑為0.1％新潔爾滅溶液或84消毒液，每月輪換使用，清潔工具與其他區(qū)域的清潔工具嚴格分開。每次操作前用消毒液或酒精棉球擦拭工作面及一些可能污染的死角。用紫外燈殺菌至少30分鐘，并填寫《紫外燈使用記錄》。微生物實驗室管理（二）帶菌的實驗用品應浸泡在消毒液內(nèi)48小2微生物實驗室管理（三）潔凈實驗室的要求：室內(nèi)墻壁光滑，應盡量避免死角，以便于洗刷消毒。應保持密閉、防塵、潔凈、干燥。進行操作時盡量避免走動。室內(nèi)設備簡單，禁止放置雜物。工作臺、地面和墻壁可以用0.1％新潔爾滅溶液或0.5％84消毒液擦洗消毒。微生物實驗室管理（三）潔凈實驗室的要求：3微生物實驗室管理（三）潔凈實驗室內(nèi)的溫度應控制在18-26℃，相對濕度最好在40%-60%。操作間應安裝空氣除菌過濾層流裝置。潔凈度不低于10000級，局部潔凈度為100級。操作間或凈化工作臺的潔凈空氣應保持對環(huán)境形成正壓，不低于10Pa，操作間與緩沖間應保持相對正壓，不低于5Pa。微生物實驗室管理（三）潔凈實驗室內(nèi)的溫度應控制在18-26℃4常用儀器使用注意事項（一）培養(yǎng)箱：取放物品應快速進行，并隨手關閉箱門以維持恒溫；定期檢查加濕用水水位，注意加水。每周要斷電消毒一次。超凈工作臺：在每次操作前后用消毒液擦拭操作臺及可能的死角，然后要打開層流凈化裝置30min。操作者應穿著潔凈工作服、工作鞋、戴口罩。常用儀器使用注意事項（一）培養(yǎng)箱：取放物品應快速進行，并隨手5高壓滅菌鍋：每次使用前都要檢查水位；根據(jù)不同的物品選擇相應的滅菌程序。當屏幕顯示“滅菌完成，可以開門”同時蜂鳴器叫時，才可以開門取出物品。提籃不可以超載，試管，玻璃瓶等的滅菌，應是開口向下豎直放置。培養(yǎng)基滅菌時，裝載量不超過2/3容積，避免外溢。常用儀器使用注意事項（二）高壓滅菌鍋：每次使用前都要檢查水位；根據(jù)不同的物品選擇相應的6檢定菌管理（一）人員要求：菌種設雙人、雙鎖保管。用受過專業(yè)培訓，有足夠的菌種保存經(jīng)驗。檢定菌的申購：根據(jù)檢驗品種的需要，菌種保管員現(xiàn)提出購買檢定菌的申請，并寫明購買菌種名稱、標準編號、數(shù)量，注明要求購回時間，并交QC主管、品管部經(jīng)歷批準。檢定菌的接收：菌種保管員應詳細核對購買回菌種與申購單中內(nèi)容一致后，方可簽字接收，并填寫《陽性菌購置記錄》。檢定菌管理（一）人員要求：菌種設雙人、雙鎖保管。用受過專業(yè)培7檢定菌管理（二）檢定菌的保存、傳代：1菌種應于2～10℃專用冰箱中貯存，并有每天的運行記錄。2每月定期對菌種進行傳代，傳代時須核對編號、代數(shù)、傳代日期、所用培養(yǎng)基，并記錄。3控制傳代次數(shù)。一般傳代次數(shù)不得超過5代。檢定菌管理（二）檢定菌的保存、傳代：8檢定菌管理（三）檢定菌傳代編號方法：1編號由陽性菌簡寫字母+代數(shù)+支數(shù)組成，中間以“—”連接。2陽性菌的簡寫字母：大腸埃希菌：Y，黑曲霉：H，金黃色葡萄球菌：JY，枯草芽孢桿菌：KY，白色念珠菌：BY，沙門菌：SY3保存形式：在陽性菌的簡寫字母后加以漢子說明。保存方式有兩種，瓊脂斜面保存和半固體加封石蠟，斜面保存不用加以說明，如為半固體在陽性菌的簡寫字母后加寫“半”字。4首次購進的檢定菌規(guī)定為0代，以購進時編號表示；第一次傳代后變?yōu)榈谝淮?，代?shù)“1”，第二次傳代后變?yōu)榈诙?，代?shù)“2”，依次類推。檢定菌管理（三）檢定菌傳代編號方法：9培養(yǎng)基管理培養(yǎng)基的配置：按使用說明書上的要求操作。配置培養(yǎng)基時用純化水。填寫配制記錄。在每個已滅菌的培養(yǎng)基容器外做好標記，注明名稱、配制日期，培養(yǎng)基的保存：1環(huán)境條件：2～10℃為宜，不得凍結。2保存時限：自配培養(yǎng)基應在2周內(nèi)用完。3瓊脂平板最好現(xiàn)配，在冰箱內(nèi)密閉保存不應超過一周。4培養(yǎng)基的再融化：只允許再融化一次，45~50℃水浴中保存不超過8小時。5培養(yǎng)基的處理：被污染的培養(yǎng)基要經(jīng)高溫滅菌后在進行處理。培養(yǎng)基管理培養(yǎng)基的配置：按使用說明書上的要求操作。配置培養(yǎng)基10微生物限度檢驗方法（一）通常微生物限度檢驗的方法有平皿法、培養(yǎng)基稀釋法、薄膜過濾法等。

1.平皿法

根據(jù)菌數(shù)報告法規(guī)則取相應稀釋級的供試液1ml，置直徑90mm的無菌平皿中，注入15～20ml溫度不超過45℃的溶化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)。每稀釋級每種培養(yǎng)基至少制備2個平板。

微生物限度檢驗方法（一）通常微生物限度檢驗的方法有平皿法、培11微生物限度檢驗方法（二）2.稀釋法：取規(guī)定量的供試液，加至較大量的培養(yǎng)基中，使單位體積內(nèi)的供試品含量減少至不具抑菌作用。用平板法測定菌數(shù)時，1ml供試液可等量分注多個平血;控制菌檢時，可加大增菌培養(yǎng)基的用量。微生物限度檢驗方法（二）2.稀釋法：取規(guī)定量的供試液，加至12微生物限度檢驗方法（三）3.薄膜過濾法

采用薄膜過濾法，濾膜孔徑應不大于0.45μm，直徑一般為50mm，若采用其它直徑的濾膜，沖洗量應進行相應的調(diào)整。濾器及濾膜使用前應采用適宜的方法滅菌。使用時，應保證濾膜在過濾前后的完整性。水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤濕濾膜。油類供試品，其濾膜和過濾器在使用前應充分干燥。供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100ml?？倹_洗量不得超過1000ml。

微生物限度檢驗方法（三）3.薄膜過濾法

13

計數(shù)方法的驗證（一）驗證方法驗證試驗分4組，至少應進行3次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。

（1）試驗組平皿法計數(shù)時，取試驗可能用的最低稀釋級供試液1ml和50～100cfu試驗菌，分別注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，按平皿法測定其菌數(shù)。薄膜過濾法計數(shù)時，取規(guī)定量試驗可能用的最低稀釋級供試液，過濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入50～100cfu試驗菌，過濾，按薄膜過濾法測定其菌數(shù)。

計數(shù)方法的驗證（一）驗證方法驗證試驗分4組，至少14計數(shù)方法的驗證（二）

（2）菌液組測定所加的試驗菌數(shù)。

（3）供試品對照組取規(guī)定量供試液，按菌落計數(shù)方法測定供試品本底菌數(shù)。

（4）稀釋劑對照組若供試液制備需要分散、乳化、中和、離心或薄膜過濾等特殊處理時，應增加稀釋劑對照組，以考察供試液制備過程中微生物受影響的程度。試驗時，可用相應的稀釋液替代供試品，加入試驗菌，使最終菌濃度為每1ml供試液含50～100cfu，按試驗組的供試液制備方法和菌落計數(shù)方法測定其菌數(shù)。

計數(shù)方法的驗證（二）15計數(shù)方法的驗證（三）

結果判斷在3次獨立的平行試驗中，稀釋劑對照組的菌回收率應均不低于70%。若試驗組的菌數(shù)回收率均不低于70%，照該供試液制備方法和計數(shù)法測定供試品的細菌、霉菌及酵母菌數(shù)；若任一次試驗中試驗組的菌回收率低于70%，應建立性方法，消除供試品的抑菌活性，并重新進行方法驗證。計數(shù)方法的驗證（三）結果判斷在3次獨立的16計數(shù)方法的驗證（四）稀釋劑對照組的菌落回收率=試驗組的菌落回收率=稀釋劑對照組的平均菌落數(shù)菌液組的平均菌落數(shù)試驗組的平均菌落數(shù)-供試品對照組的平均菌落數(shù)菌液組的平均菌落數(shù)×100%×100%計數(shù)方法的驗證（四）稀釋劑對照組的菌落回收率=稀釋劑對照組17菌數(shù)報告規(guī)則（一）宜選取細菌、酵母菌平均菌落數(shù)小于300cfu、霉菌平均菌落數(shù)小于100cfu的平板計數(shù)作為菌數(shù)報告（取兩位有效數(shù)字）的依據(jù)。當僅有一個稀釋級的菌落數(shù)符合上述規(guī)定，以該級的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告菌數(shù)；當有2個或2個以上稀釋劑的菌落數(shù)符合上述規(guī)定，以最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù)報告規(guī)則（一）宜選取細菌、酵母菌平均菌落數(shù)小于3018如各稀釋級的平板均無菌落生長，或僅最低稀釋級的平板有菌落生長，但平均菌落數(shù)小于1時，以＜1乘以最低稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù)。菌數(shù)報告規(guī)則（二）如各稀釋級的平板均無菌落生長，或僅最低稀釋級的平板有菌落生長19控制菌檢查控制菌檢查是用于檢查某些特定微生物（控制菌或其他致病菌），規(guī)定按一次檢出結果為準，不準復試。控制菌應在專門的陽性菌實驗室進行?？刂凭捍竽c埃希菌，大腸菌群，沙門菌，銅綠假單胞菌，金黃色葡萄球菌，梭菌，白色念珠菌?？刂凭鷻z查控制菌檢查是用于檢查某些特定微生物（控制菌或其他致20培養(yǎng)基適用性檢查（一）檢查指標：促生長能力，抑制能力，指示能力培養(yǎng)基滅菌后在能取出的前提下，盡快取出，切忌在高壓鍋內(nèi)過夜存留，固體培養(yǎng)基滅菌活融化后，融化狀態(tài)放置下不得超過8h；一般預制培養(yǎng)基可置潔凈環(huán)境2-25℃保存，但不應超過21天。固體瓊脂培養(yǎng)基融化后再使用應不超過一次。培養(yǎng)基適用性檢查（一）檢查指標：促生長能力，抑制能力，指示能21培養(yǎng)基適用性檢查（二）結果判斷：被檢培養(yǎng)基上的平均菌落數(shù)不小于對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70%，且菌落形態(tài)，大小應和對照培養(yǎng)基上的菌落一致，則判斷該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。培養(yǎng)基適用性檢查（二）結果判斷：被檢培養(yǎng)基上的平均菌落數(shù)不小22微生物實驗室管理（一）發(fā)生菌液（或培養(yǎng)液）污染臺面或地面時，應立即以0.1％新潔爾滅溶液或其它消毒液傾復其上，至少30分鐘后再行洗擦工作衣帽口罩等受到菌液污染時，應立即脫去，高壓滅菌后洗滌如有傳染性培養(yǎng)物污染手部，應先用酒精棉球拭去，再浸入0.1％新潔爾滅溶內(nèi)片刻，再用肥皂及清水徹底洗刷干凈。微生物實驗室管理（一）發(fā)生菌液（或培養(yǎng)液）污染臺面或地面時，23微生物實驗室管理（二）

帶菌的實驗用品應浸泡在消毒液內(nèi)48小時后取出，或121℃，30分鐘高壓滅菌后進行洗滌。廢棄帶菌培養(yǎng)物應121℃，30分鐘高壓滅菌后再行處理。微生物限度檢驗室：生物限度檢驗室每周進行清潔消毒并填寫《微生物限度檢驗室清潔記錄》。消毒劑為0.1％新潔爾滅溶液或84消毒液，每月輪換使用，清潔工具與其他區(qū)域的清潔工具嚴格分開。每次操作前用消毒液或酒精棉球擦拭工作面及一些可能污染的死角。用紫外燈殺菌至少30分鐘，并填寫《紫外燈使用記錄》。微生物實驗室管理（二）帶菌的實驗用品應浸泡在消毒液內(nèi)48小24微生物實驗室管理（三）潔凈實驗室的要求：室內(nèi)墻壁光滑，應盡量避免死角，以便于洗刷消毒。應保持密閉、防塵、潔凈、干燥。進行操作時盡量避免走動。室內(nèi)設備簡單，禁止放置雜物。工作臺、地面和墻壁可以用0.1％新潔爾滅溶液或0.5％84消毒液擦洗消毒。微生物實驗室管理（三）潔凈實驗室的要求：25微生物實驗室管理（三）潔凈實驗室內(nèi)的溫度應控制在18-26℃，相對濕度最好在40%-60%。操作間應安裝空氣除菌過濾層流裝置。潔凈度不低于10000級，局部潔凈度為100級。操作間或凈化工作臺的潔凈空氣應保持對環(huán)境形成正壓，不低于10Pa，操作間與緩沖間應保持相對正壓，不低于5Pa。微生物實驗室管理（三）潔凈實驗室內(nèi)的溫度應控制在18-26℃26常用儀器使用注意事項（一）培養(yǎng)箱：取放物品應快速進行，并隨手關閉箱門以維持恒溫；定期檢查加濕用水水位，注意加水。每周要斷電消毒一次。超凈工作臺：在每次操作前后用消毒液擦拭操作臺及可能的死角，然后要打開層流凈化裝置30min。操作者應穿著潔凈工作服、工作鞋、戴口罩。常用儀器使用注意事項（一）培養(yǎng)箱：取放物品應快速進行，并隨手27高壓滅菌鍋：每次使用前都要檢查水位；根據(jù)不同的物品選擇相應的滅菌程序。當屏幕顯示“滅菌完成，可以開門”同時蜂鳴器叫時，才可以開門取出物品。提籃不可以超載，試管，玻璃瓶等的滅菌，應是開口向下豎直放置。培養(yǎng)基滅菌時，裝載量不超過2/3容積，避免外溢。常用儀器使用注意事項（二）高壓滅菌鍋：每次使用前都要檢查水位；根據(jù)不同的物品選擇相應的28檢定菌管理（一）人員要求：菌種設雙人、雙鎖保管。用受過專業(yè)培訓，有足夠的菌種保存經(jīng)驗。檢定菌的申購：根據(jù)檢驗品種的需要，菌種保管員現(xiàn)提出購買檢定菌的申請，并寫明購買菌種名稱、標準編號、數(shù)量，注明要求購回時間，并交QC主管、品管部經(jīng)歷批準。檢定菌的接收：菌種保管員應詳細核對購買回菌種與申購單中內(nèi)容一致后，方可簽字接收，并填寫《陽性菌購置記錄》。檢定菌管理（一）人員要求：菌種設雙人、雙鎖保管。用受過專業(yè)培29檢定菌管理（二）檢定菌的保存、傳代：1菌種應于2～10℃專用冰箱中貯存，并有每天的運行記錄。2每月定期對菌種進行傳代，傳代時須核對編號、代數(shù)、傳代日期、所用培養(yǎng)基，并記錄。3控制傳代次數(shù)。一般傳代次數(shù)不得超過5代。檢定菌管理（二）檢定菌的保存、傳代：30檢定菌管理（三）檢定菌傳代編號方法：1編號由陽性菌簡寫字母+代數(shù)+支數(shù)組成，中間以“—”連接。2陽性菌的簡寫字母：大腸埃希菌：Y，黑曲霉：H，金黃色葡萄球菌：JY，枯草芽孢桿菌：KY，白色念珠菌：BY，沙門菌：SY3保存形式：在陽性菌的簡寫字母后加以漢子說明。保存方式有兩種，瓊脂斜面保存和半固體加封石蠟，斜面保存不用加以說明，如為半固體在陽性菌的簡寫字母后加寫“半”字。4首次購進的檢定菌規(guī)定為0代，以購進時編號表示；第一次傳代后變?yōu)榈谝淮鷶?shù)“1”，第二次傳代后變?yōu)榈诙?，代?shù)“2”，依次類推。檢定菌管理（三）檢定菌傳代編號方法：31培養(yǎng)基管理培養(yǎng)基的配置：按使用說明書上的要求操作。配置培養(yǎng)基時用純化水。填寫配制記錄。在每個已滅菌的培養(yǎng)基容器外做好標記，注明名稱、配制日期，培養(yǎng)基的保存：1環(huán)境條件：2～10℃為宜，不得凍結。2保存時限：自配培養(yǎng)基應在2周內(nèi)用完。3瓊脂平板最好現(xiàn)配，在冰箱內(nèi)密閉保存不應超過一周。4培養(yǎng)基的再融化：只允許再融化一次，45~50℃水浴中保存不超過8小時。5培養(yǎng)基的處理：被污染的培養(yǎng)基要經(jīng)高溫滅菌后在進行處理。培養(yǎng)基管理培養(yǎng)基的配置：按使用說明書上的要求操作。配置培養(yǎng)基32微生物限度檢驗方法（一）通常微生物限度檢驗的方法有平皿法、培養(yǎng)基稀釋法、薄膜過濾法等。

1.平皿法

根據(jù)菌數(shù)報告法規(guī)則取相應稀釋級的供試液1ml，置直徑90mm的無菌平皿中，注入15～20ml溫度不超過45℃的溶化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)。每稀釋級每種培養(yǎng)基至少制備2個平板。

微生物限度檢驗方法（一）通常微生物限度檢驗的方法有平皿法、培33微生物限度檢驗方法（二）2.稀釋法：取規(guī)定量的供試液，加至較大量的培養(yǎng)基中，使單位體積內(nèi)的供試品含量減少至不具抑菌作用。用平板法測定菌數(shù)時，1ml供試液可等量分注多個平血;控制菌檢時，可加大增菌培養(yǎng)基的用量。微生物限度檢驗方法（二）2.稀釋法：取規(guī)定量的供試液，加至34微生物限度檢驗方法（三）3.薄膜過濾法

采用薄膜過濾法，濾膜孔徑應不大于0.45μm，直徑一般為50mm，若采用其它直徑的濾膜，沖洗量應進行相應的調(diào)整。濾器及濾膜使用前應采用適宜的方法滅菌。使用時，應保證濾膜在過濾前后的完整性。水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤濕濾膜。油類供試品，其濾膜和過濾器在使用前應充分干燥。供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100ml?？倹_洗量不得超過1000ml。

微生物限度檢驗方法（三）3.薄膜過濾法

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計數(shù)方法的驗證（一）驗證方法驗證試驗分4組，至少應進行3次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。

（1）試驗組平皿法計數(shù)時，取試驗可能用的最低稀釋級供試液1ml和50～100cfu試驗菌，分別注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，按平皿法測定其菌數(shù)。薄膜過濾法計數(shù)時，取規(guī)定量試驗可能用的最低稀釋級供試液，過濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入50～100cfu試驗菌，過濾，按薄膜過濾法測定其菌數(shù)。

計數(shù)方法的驗證（一）驗證方法驗證試驗分4組，至少36計數(shù)方法的驗證（二）

（2）菌液組測定所加的試驗菌數(shù)。

（3）供試品對照組取規(guī)定量供試液，按菌落計數(shù)方法測定供試品本底菌數(shù)。

（4）稀釋劑對照組若供試液制備需要分散、乳化、中和、離心或薄膜過濾等特殊處理時，應增加稀釋劑對照組，以考察供試液制備過程中微生物受影響的程度。試驗時，可用相應的稀釋液替代供試品，加入試驗菌，使最終菌濃度為每1ml供試液含50～100cfu，按試驗組的供試液制備方法和菌落計數(shù)方法測定其菌數(shù)。

計數(shù)方法的驗證（二）37計數(shù)方法的驗證（三）

結果判斷在3次獨立的平行試驗中，稀釋劑對照組的菌回收率應均不低于70%。若試驗組的菌數(shù)回收率均不低于70%，照該供試液制備方法和計數(shù)法測定供試品的細菌、霉菌及酵母菌數(shù)；若任一次試驗中試驗組的菌回收率低于70%，應建立性方法，消除供試品的抑菌活性，并重新進行方法驗證。計數(shù)方法的驗證（三）結果判斷在3次獨立的38計數(shù)方法的驗證（四）稀釋劑對照組的菌落回收率=試驗組的菌落回收率=稀釋劑對照組的平