1、腎陰虛抑郁癥大鼠模型的建立及評(píng)價(jià)【摘要】目的建立腎陰虛抑郁癥大鼠模型。方法將50只大鼠隨機(jī)分為正常組、單純應(yīng)激組、溫燥組、甲狀腺素組及激怒組；采用慢性溫和不可預(yù)見性慢性應(yīng)激建立抑郁癥“脖模的同時(shí)，正常組、單純應(yīng)激組灌胃生理鹽水，甲狀腺素組灌胃甲狀腺素，溫燥組灌胃溫燥藥；激怒組采用長(zhǎng)期激怒法并灌胃生理鹽水。使大鼠在抑郁的根底上表現(xiàn)出一定的陰虛“證，以大鼠一般狀態(tài)、敞箱試驗(yàn)、液體消耗試驗(yàn)、血清雌二醇E2、睪酮T及血漿環(huán)腺苷酸AP、環(huán)鳥苷酸GP作為檢測(cè)指標(biāo)，對(duì)各模型進(jìn)展比擬。結(jié)果與正常組比擬，各模型組的體質(zhì)量、程度得分、垂直得分、中央格停留時(shí)間、糖水消耗、總液體消耗各指標(biāo)測(cè)值減少,溫燥組、甲狀腺素組

2、及激怒組普遍出現(xiàn)活動(dòng)減少，大便枯燥，毛濕無光澤，易驚怒以及血漿AP含量升高，其中甲狀腺素組和激怒組大鼠血清E2、E2/T比值顯著升高。結(jié)論甲狀腺素合并應(yīng)激抑郁模型所致的腎陰虛抑郁，更符合臨床實(shí)際，簡(jiǎn)單易行，可作為腎陰虛抑郁癥造模方法之一?！娟P(guān)鍵詞】溫燥藥；抑郁癥；腎陰虛；甲狀腺素；動(dòng)物模型；熟附片；肉桂；大鼠Testablishabetterexperientaldelfkidney-yindefiienyanddepressinsyndre.ethdsAll50ratseredividedintnral,stressnly,ar-dryness,thyrxineandirritatingru

3、ps;alltheratsereildlyandhrniallyirritatedtestablishthedelsfdepressinsyndre.Theratsasfedithnralsalineinthenralandstressnlygrups,iththyrxineinthyrxinegrupandar-dryediineinar-drynessgrup,andtheratsinirritatingrupasirritatedinlng-terandfedithnralsaline,hihuldauseratsinadepressinstateithkidneydefiientsyn

4、dre.Andallthegeneralnditins,pen-fieldtest,fluidnsuptin,nentratinfAPandGPinplasa,andnentratinfE2,Tinserueredetetedandpared.Resultsparedithnralgrup,thetargetsinallgrups,suhasbdyEight,hrizntalsres,vertialsres,stppingtieinenter,sugaraternsuptinandttalbdyfluidnsuptin,eredereased,thetinsfratsinthyrxine,ar

5、-drynessandirritatingrupsereleredithdrystl,easyirritatinandinreasedseruAPnentratin,inhih,theratifseruE2,E2/Tinthyrxinegrupandirritatingrupasinreasedbviusly.nlusinThedelfkidneyyindefiienyanddepressinsyndre,induedbyfeedingthyrxineandirritateddepressin,issipleandpreparedeasily,hihanbethefirstseletinfrt

6、hedelingfkidneyyindefiienyanddepressinsyndre.depressinsyndre;kidneyyindefiieny;anialdel;rats腎陰虛型抑郁癥是由于長(zhǎng)期情志不暢，以致耗傷陰精，肝腎陰虧，髓海不充所致，是抑郁癥中比擬常見的證型，尤其多見于疾病后期及中老年人群。近年來就抑郁癥和腎陰虛證本質(zhì)的研究較多，但對(duì)腎陰虛型抑郁癥動(dòng)物模型的研究尚未見報(bào)道。本文將3種陰虛證“證模分別與慢性應(yīng)激致抑郁癥“脖模合并，建立3種不同的陰虛抑郁模型，試圖尋找一種符合臨床實(shí)際的腎陰虛抑郁癥模型。1材料與方法1.1材料1.1.2藥物及試劑甲狀腺素片濟(jì)南維爾康生化制藥，產(chǎn)

7、品批號(hào)：0505505，用蒸餾水配成濃度為0.25g/L的混懸液；溫燥藥濃縮液由湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院提供，熟附片干姜肉桂按111比例稱取藥材，提取揮發(fā)油后，水煎3次過濾，濃縮，兌入揮發(fā)油制成含生藥1.5g/L的溶液；雌二醇E2、睪酮T放免分析試劑盒北京科美東雅生物技術(shù)公司，批號(hào)050925，環(huán)腺苷酸AP、環(huán)鳥苷酸GP放免分析試劑盒上海中醫(yī)藥大學(xué)同位素室，批號(hào)050920。1.1.3儀器敞箱自制：由不透明材料制成，底面為100100的正方形，被等分為25個(gè)等邊方格，高50；放射免疫計(jì)數(shù)器(G-1200放射免疫計(jì)數(shù)器,中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)科技實(shí)業(yè)；電子天平型號(hào):ES-600電子天平,湘儀天平儀器

8、；低溫大容量高速離心機(jī)型號(hào)：KD-2046低溫大容量離心機(jī),中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)科技實(shí)業(yè)。1.2方法1.2.1動(dòng)物分組試驗(yàn)前對(duì)所有大鼠進(jìn)展敞箱實(shí)驗(yàn)和液體消耗實(shí)驗(yàn)，根據(jù)敞箱實(shí)驗(yàn)得分和液體消耗實(shí)驗(yàn)結(jié)果，將動(dòng)物分為5組，每組10只：即正常對(duì)照組、慢性應(yīng)激抑郁模型組簡(jiǎn)稱應(yīng)激組、慢性應(yīng)激抑郁模型+溫燥藥簡(jiǎn)稱溫燥組、慢性應(yīng)激抑郁模型+甲狀腺素簡(jiǎn)稱甲狀腺素組、慢性應(yīng)激抑郁模型+激怒簡(jiǎn)稱激怒組。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中動(dòng)物自由攝食和飲水禁食禁水應(yīng)激除外)，室溫(223)(熱、冷應(yīng)激除外)，自然晝夜節(jié)律光照，相對(duì)濕度60%70%，背景噪音(4010)db。1.2.23種腎陰虛型抑郁動(dòng)物模型的建立參照文獻(xiàn)1方法并加以改良，8種

9、應(yīng)激因子隨機(jī)安排到21d中：晝夜顛倒(24h)；禁食禁水(24h)；潮濕墊料、鼠籠傾斜；40高溫環(huán)境(5in)；夾尾(1in)；4冰水游泳(5in)；生疏異常物品(如塑料杯、木勺等)；電擊足底18V，5s，除正常組外，各組大鼠均孤養(yǎng)并按程序給予應(yīng)激刺激，造成大鼠抑郁。在應(yīng)激使大鼠抑郁的同時(shí)，從試驗(yàn)第1天起，所有動(dòng)物每天灌胃1次，連續(xù)21d，溫燥組2灌胃溫燥藥濃縮液；甲狀腺素組3灌胃甲狀腺素混懸液；應(yīng)激組、激怒組和正常對(duì)照組灌胃生理鹽水,各組灌胃容量都為10L/kg。激怒組參照文獻(xiàn)4從第1天開場(chǎng)將大鼠雙后肢束縛，成對(duì)吊在籠內(nèi)，以引起激怒，首次20in，以后每隔1d，增加10in。整個(gè)實(shí)驗(yàn)共21d

10、。1.2.3觀察模型動(dòng)物一般狀態(tài)及體質(zhì)量變化實(shí)驗(yàn)過程中觀察大鼠外表、性情、活動(dòng)情況、飲水量、大便情況。每周測(cè)1次體質(zhì)量。1.2.4液體消耗試驗(yàn)5試驗(yàn)前在安靜的房間內(nèi)，訓(xùn)練動(dòng)物適應(yīng)含糖飲水，每籠同時(shí)放置2個(gè)水瓶，第1個(gè)24h，2瓶均裝有1蔗糖水，隨后的24h，1個(gè)瓶裝1蔗糖水，1個(gè)瓶裝純水。23h的禁食禁水后，進(jìn)展動(dòng)物的根底糖水純水消耗試驗(yàn)，同時(shí)給予每只大鼠事先定量好的2瓶水：1瓶1蔗糖水，1瓶純水。60in后，取此2瓶并稱質(zhì)量。計(jì)算動(dòng)物的總液體消耗、糖水消耗、純水消耗、糖水偏愛=糖水消耗量/總液體消耗100)。每周進(jìn)展1次糖水消耗試驗(yàn)。1.2.5敞箱試驗(yàn)6安靜的房間內(nèi)進(jìn)展此項(xiàng)試驗(yàn)觀察。將大鼠置

11、于中心方格內(nèi)，觀察大鼠在5in內(nèi)中央格停留時(shí)間(s)、穿越格數(shù)(四爪均進(jìn)入的方格方可記數(shù)，為程度運(yùn)動(dòng)得分)、后肢直立次數(shù)(兩前爪騰空或攀附墻壁，為垂直運(yùn)動(dòng)得分)、清潔運(yùn)動(dòng)記數(shù)、糞便粒數(shù)。徹底清潔敞箱后再進(jìn)展下1只大鼠的觀察，每只觀察1次。每周進(jìn)展1次敞箱實(shí)驗(yàn)。1.2.6大鼠血清E2、T及血漿AP、GP的測(cè)定實(shí)驗(yàn)第22天，頸動(dòng)脈插管取血，一局部血低溫下自然退縮，按放免試劑盒說明書測(cè)血清E2、T；另一局部約12L注入含EDTANa250?滋L的試管中，搖勻放入冰浴中，1h內(nèi)，4,2000r/in離心10in，按試劑盒說明書制備血漿樣本，用于測(cè)定AP、GP。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包

12、作為統(tǒng)計(jì)工具，計(jì)量資料用“s表示，方差齊者用單因素方差分析，方差不齊者采用Tahan分析。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2結(jié)果2.1各實(shí)驗(yàn)組大鼠一般狀態(tài)的比擬造模2周后，各模型組均出現(xiàn)活動(dòng)減少的情況，但是激怒組、溫燥組和甲狀腺素組還出現(xiàn)毛濕，毛無光澤、大便枯燥、易激怒的現(xiàn)象。從飲水量來看，各組大鼠在實(shí)驗(yàn)初期都有降低趨勢(shì)，應(yīng)激組和激怒組這種趨勢(shì)持續(xù)到實(shí)驗(yàn)完畢，甲狀腺素組、溫燥組的飲水量經(jīng)過短暫的減少后，有增加趨勢(shì)，到實(shí)驗(yàn)第18天到達(dá)最高值，最后才有所減少，其中甲狀腺組大鼠飲水量增加具有顯著性，實(shí)驗(yàn)第21天甲狀腺素組大鼠24h飲水量顯著高于正常組，見圖1。2.2各實(shí)驗(yàn)組大鼠體質(zhì)量及行為學(xué)指標(biāo)的比擬實(shí)驗(yàn)前，

13、各組動(dòng)物測(cè)得的體質(zhì)量、敞箱實(shí)驗(yàn)及液體消耗試驗(yàn)的各項(xiàng)指標(biāo)相近，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。實(shí)驗(yàn)第21天，應(yīng)激組、激怒組、溫燥組和甲狀腺素組大鼠體質(zhì)量顯著低于正常對(duì)照組P0.01；各模型組的程度得分、垂直得分、中央格停留時(shí)間、糖水消耗、液體消耗等各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)值減少，與正常對(duì)照組比擬有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0.01，見表1。2.3各實(shí)驗(yàn)組大鼠血清E2、T及血漿AP、GP的比擬與正常組比擬，應(yīng)激組大鼠血漿AP、GP及血清E2、T含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與正常組和應(yīng)激組比擬，溫燥組、甲狀腺素組、激怒組大鼠血漿AP含量、AP/GP比值顯著升高；溫燥組E2、E2/T升高無顯著差異，而甲狀腺素組、激怒組大鼠血清E2、E2/T升高具有顯著

14、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0.01。見表2。3討論抑郁癥的病因尚未徹底說明，目前認(rèn)為慢性、低程度、長(zhǎng)期的應(yīng)激源是促進(jìn)抑郁發(fā)生并加重病情的主要原因。慢性溫和不可預(yù)見性應(yīng)激抑郁模型根據(jù)此理論建立，已成為國(guó)內(nèi)外廣泛應(yīng)用的動(dòng)物模型。本實(shí)驗(yàn)采用3種陰虛證模溫燥藥法、激怒法和甲狀腺素法造模分別合并抑郁癥病模慢性應(yīng)激造模，以建立3種不同的陰虛型抑郁癥病證復(fù)合模型，試圖尋找一種更符合臨床實(shí)際的腎陰虛抑郁癥模型。采用經(jīng)典的敞箱實(shí)驗(yàn)和液體消耗實(shí)驗(yàn)作為測(cè)量大鼠行為學(xué)改變及快感缺失的客觀指標(biāo)，評(píng)價(jià)其是否抑郁。實(shí)驗(yàn)可見，各陰虛抑郁模型組和單純應(yīng)激抑郁模型組大鼠體質(zhì)量增加減慢，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)程度活動(dòng)、垂直活動(dòng)得分及清潔動(dòng)作次數(shù)均較空白對(duì)

15、照組明顯減少，糖水消耗量降低，這說明模型組動(dòng)物食欲減退、活動(dòng)才能下降、興趣喪失、快感缺乏等，說明抑郁模型復(fù)制是成功的。一般認(rèn)為血漿AP升高是陰虛證的共有規(guī)律7，而血清E2升高、T含量降低是腎虛的特異性指標(biāo)8。腎虛病癥和陰虛病癥并見作為腎陰虛的審證要點(diǎn)，那么也可以用腎虛和陰虛的客觀指標(biāo)來作為研究腎陰虛證的檢測(cè)指標(biāo)。溫燥組、甲狀腺素組、激怒組3種模型大鼠都出現(xiàn)血漿AP程度上升，AP/GP比值升高，而正常組和單純應(yīng)激組未見升高；再結(jié)合3種模型組大鼠大便枯燥、毛濕無光澤、易驚怒等陰虛定性病癥，說明溫燥組、甲狀腺組、激怒組大鼠在抑郁的根底上有了一定程度的陰虛表現(xiàn)。溫燥藥法是利用附子、肉桂、干姜溫燥中藥的

16、溫?zé)嶙饔?，大補(bǔ)腎陽(yáng)，陽(yáng)熱傷津耗液而致陰虛，同時(shí)結(jié)合應(yīng)激抑郁模型，建立陰虛型抑郁模型。方法雖然簡(jiǎn)單，但類似于實(shí)熱性亢奮狀態(tài)，陽(yáng)熱傷及的主要是胃陰，故此法僅局部符合臨床實(shí)際；從血清E2、T指標(biāo)來看，溫燥組大鼠血清E2、E2/T含量升高無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此該模型作為腎陰虛模型不太合適。激怒組應(yīng)用長(zhǎng)期激怒法，使“怒傷肝，肝病及腎而致腎陰虛，結(jié)合慢性應(yīng)激建立陰虛抑郁模型。雖然各血指標(biāo)與甲狀腺素組趨于一致，但是在飲水量方面，與其他組比擬變化不同，呈減少趨勢(shì)，這與陰虛內(nèi)熱證的病癥有所不合；將動(dòng)物倒吊令大鼠撕咬，長(zhǎng)期會(huì)對(duì)大鼠造成身體上的傷害，使觀察大鼠行為受到影響,且腎陰虛抑郁癥屬于情志疾病，情志受傷不代表身體

17、上受到本質(zhì)性的傷害，這容易混淆原發(fā)病和繼發(fā)病的概念，因此也與臨床不符；實(shí)驗(yàn)操作太過于復(fù)雜煩難，不利于模型的復(fù)制。甲狀腺素組通過給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大劑量使用甲狀腺素，形成外源性甲狀腺素程度升高，同時(shí)合并應(yīng)激抑郁模型，復(fù)制出甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)致陰虛抑郁癥病證復(fù)合模型。實(shí)驗(yàn)說明：甲狀腺素組大鼠飲水量增多，而體質(zhì)量增長(zhǎng)減緩，說明模型大鼠處于一種虛型亢奮的狀態(tài)；大鼠易驚怒、大便枯燥、毛濕無光澤、捉拿時(shí)反響鋒利，與陰虛內(nèi)熱的表現(xiàn)較為相似；大鼠血漿AP程度上升，血清E2含量、E2/T比值升高，說明此模型存在著內(nèi)在的腎陰虛。實(shí)驗(yàn)顯示該模型大鼠在表現(xiàn)出局部抑郁行為的同時(shí)，也表現(xiàn)了一定的腎陰虛，在一定程度上模擬了腎陰虛型抑郁病癥態(tài)。當(dāng)