1、精品分子診斷學(xué)試卷 A二、填空 （每空 0.5 分，共 15 分。請(qǐng)將答案填寫在答題紙上）1.從高溫嗜熱細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)高溫DNApolymerase后，使得 PCR 技術(shù)得以廣泛應(yīng)用，在高溫下有活性的DNA polymerase 有、。其中具有3-5 外切活性的高溫DNApolymerase有和。2.黏粒 (cosmid) 是質(zhì)粒噬菌體雜合載體， 它的復(fù)制子來自 、cos 位點(diǎn)序列來自，最大的克隆片段達(dá)到45kb 。3.感受態(tài)細(xì)胞 (Competentcells) 是一種處于狀態(tài)的細(xì)胞。一般通過 _來誘導(dǎo)大腸桿菌感受態(tài)的形成。4.PCR 反應(yīng)過程分為三個(gè)步驟，即， 和 。5.細(xì)菌的移動(dòng)基因存在著三

2、種類型的轉(zhuǎn)位因子包括、 、 。6.Klenow 酶在 情況下，呈現(xiàn)DNA 聚合酶活性，在 情況下呈現(xiàn)外切酶活性。7.外源基因在原核細(xì)胞中表達(dá)，常用的啟動(dòng)子有、和。8. 在 LacZ 標(biāo)記基因插入外源基因，經(jīng) IPTG 誘導(dǎo)，在 X-gal 培養(yǎng)基中顯 色，為 性克隆，未插入基因的克隆顯 色，為 性克隆。9. 基因序列經(jīng)堿基替代，缺失或插入后，可使遺傳信息產(chǎn)生三種不同的后果，分別為、 。10. 由一個(gè)細(xì)胞或者組織的基因組所表達(dá)的全部相應(yīng)的蛋白質(zhì)，稱為。三、判斷題 （錯(cuò)的打“×”，對(duì)的打“”，每題1 分，共 10 分。請(qǐng)將答案填在答題紙對(duì)應(yīng)的題號(hào)下）1.Maxam-Gilbert化學(xué)降解

3、法測(cè)序時(shí)，從測(cè)序膠上直接讀出的序列是用于測(cè)序的模板的互補(bǔ)序列。2. 蛋白酶 K 可有效地降解內(nèi)源蛋白，能快速水解細(xì)胞裂解物中的 DNA 酶和 RNA 酶，以利于完整 DNA 和 RNA 的分離。3. 電泳時(shí) EB 加在瓊脂糖凝膠中一般會(huì)降低 DNA 在瓊脂糖凝膠電泳中的遷移率。4.提取 DNA時(shí)，若用酚除蛋白質(zhì)，需要用Tris-HCl對(duì)酚進(jìn)行平衡 ,pH 達(dá) 7.8 。5. 基因組研究可以歸納成為構(gòu)建 4 張相互關(guān)聯(lián)的基因組圖譜：遺傳圖、物理圖、序列圖和功能圖。6. DNA 連接酶是一種能催化二條 DNA 鏈之間形成磷酸二酯鍵的酶， 因此該酶既可修復(fù)基因序列中的缺口，也可修復(fù)裂口。7. 質(zhì)粒提

4、取后，在瓊脂糖電泳出現(xiàn)一條帶時(shí)說明質(zhì)粒提取純度高，當(dāng)為三條帶時(shí)為純度不高。8.COS 位點(diǎn)， COS 質(zhì)粒， COS 細(xì)胞它們均含有用于自身環(huán)化的12 個(gè)堿基的互補(bǔ)粘性末端。9.入噬菌體的插入型載體只有一個(gè)單一限制酶切點(diǎn)，替換型載體有2 個(gè)成對(duì)的限制性酶切點(diǎn)。10. 原核細(xì)胞和真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄的 mRNA 均具有與 rRNA 結(jié)合的 SD 序列，以利于進(jìn)行有效的轉(zhuǎn)錄。四、選擇題 （每題 1 分，共 15 分。請(qǐng)將最佳答案填在答題紙對(duì)應(yīng)的題號(hào)下）1. 用于核酸分子雜交的探針不能是放射性標(biāo)記的( )。A DNAB RNAC 抗體D 寡核苷酸2. cDNA 文庫包括該種生物的 ( ) 。A 某些蛋白質(zhì)的

5、結(jié)構(gòu)基因B 所有蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因C所有結(jié)構(gòu)基因D 內(nèi)含子和調(diào)控區(qū)3.關(guān)于堿解法分離質(zhì)粒 DNA ，下面哪一種說法不正確 ?( )A 溶液 I 的作用是懸浮菌體B溶液的作用是使 DNA 變性C溶液的作用是使 DNA 復(fù)性D 質(zhì)粒 DNA 分子小，所以沒有變性，染色體變性后不能復(fù)性4.有關(guān) DNA 序列自動(dòng)化測(cè)定的不正確敘述是（）。A 不再需要引物 B激光掃描分析代替人工讀序C基本原理與手工測(cè)序相同D 用熒光代替了同位素標(biāo)記5.在重組 DNA 技術(shù)中，不常用到的酶是（）。感謝下載載精品A 限制性核酸內(nèi)切酶B DNA聚合酶C DNA連接酶D DNA解鏈酶6. 關(guān)于 cDNA 的最正確的說法是（ ）。

6、A 以 mRNA為模板合成的雙鏈DNA B 同 mRNA互補(bǔ)的單鏈 DNAC同 mRNA互補(bǔ)的雙鏈DNAD 以上都正確7.在分離 DNA 過程造成 DNA分子斷裂的因素很多，下列說法中哪一項(xiàng)是不正確的（）。A 核酸酶的降解B化學(xué)降解C保存液中未加一滴氯仿D物理剪切8.下列哪一項(xiàng)不是Southernblotting的步驟（ ）。A 用限制酶消化DNA B DNA 與載體的連接C凝膠電泳分離DNA 片段 D DNA 片段轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上9. 下列哪種克隆載體對(duì)外源DNA 的裝載量最大（ ）。A 粘粒B 酵母人工染色體C質(zhì)粒D噬菌體10. 人工染色體載體必須具有的元件是（）。A 染色體端粒B著絲粒

7、C自主復(fù)制序列D以上三項(xiàng)全部11. 噬菌體外包裝目的基因片段的大小應(yīng)為（）。A. 小于 噬菌體 DNA 的 50%B. 小于噬菌體 DNA 的 75%C.大于 噬菌體 DNA 的 105%D. 為噬菌體 DNA 的 75% 105%12. 識(shí)別基因序列不同，但酶切后產(chǎn)生的粘性末端相同的一類酶為（）。A. 同工酶 B.同尾酶 C.同裂酶D.同位酶13. 下列生物體的細(xì)胞基因組哪些會(huì)有斷裂基因？（）A. 大腸桿菌 B.乙肝病毒 C.人 D.噬菌體14.真核細(xì)胞基因表達(dá)的特點(diǎn)為（）。A. 單順反子 B.多順反子 C.轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯連續(xù)進(jìn)行D . 轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯在同一時(shí)空進(jìn)行15.pBR322 質(zhì)粒作為基因克

8、隆載體不具有下列何種調(diào)控元件（）。A .Amp r 和 Tet r B.ori 復(fù)制子 C.LacZ 標(biāo)記 D. 多克隆位點(diǎn)五、問答題 （共 36 分，請(qǐng)將答案填寫在答題紙對(duì)應(yīng)的題號(hào)下）1.真核細(xì)胞基因組中的基因常有內(nèi)含子存在，能否在原核細(xì)胞中表達(dá)？為什么？（5 分）2.質(zhì)粒單酶切點(diǎn)的基因連接如何降低本底和防止自我環(huán)化和提高連接效率？（6 分）3.真核表達(dá)調(diào)控的順式作用元件有哪些？其作用特點(diǎn)是什么？（8 分）4.基因工程疫苗研究開發(fā)應(yīng)遵循的原則是什么？（8 分）5.有哪幾種反義核苷酸基因失活療法？簡述其原理。（9 分）答案 -試卷 A一、名詞解釋 （每題 3 分，共 24 分。請(qǐng)將答案填寫在答

9、題紙上）1. 分子診斷：是指通過檢測(cè)基因的結(jié)構(gòu)異?；蚱浔磉_(dá)異常，對(duì)人體的健康狀況和疾病做出診斷的方法。2. 實(shí)時(shí)定量PCR(real-timePCR)：7.實(shí)時(shí) PCR：通過特定設(shè)計(jì)的PCR 儀器來實(shí)時(shí)檢測(cè)PCR 擴(kuò)增過程每一輪循環(huán)產(chǎn)物的累積數(shù)量，推算模板的起始濃度，這種工作方式就稱為實(shí)時(shí)PCR3. 重疊基因：不同基因的核苷酸序列有時(shí)為相鄰兩個(gè)基因共用，將核苷酸彼此重疊的兩個(gè)基因稱為重疊基因4. 鋅指結(jié)構(gòu)：由兩個(gè)半胱氨酸（ Cys ）殘基和兩個(gè)組氨酸（ His ）殘基通過位于中心的鋅離子結(jié)合成一個(gè)穩(wěn)定的指狀結(jié)構(gòu) , 并以鋅輔基敖合形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)作為活性單位, 在指狀突出區(qū)表面暴露的堿基及其極性

10、氨基酸與DNA 結(jié)合有關(guān)5. 基因置換：是指將致病基因整個(gè)地被有功能的正?；蛩脫Q，使致病基因永久地得到更正。6. 基因敲除： 基因敲除是向正常生物個(gè)體內(nèi)引入某個(gè)突變的基因位點(diǎn)而選擇性地使某特定基因功能失活的技術(shù)。感謝下載載精品7. 基因芯片：將大量的基因片段有序地、高密度地排列在玻璃片或纖維膜等載體上，稱之為基因芯片（又稱 DNA 芯片、生物芯片）。8. 蛋白質(zhì)組學(xué)：指應(yīng)用各種技術(shù)手段來研究蛋白質(zhì)組的一門新興學(xué)科，即研究細(xì)胞在不同生理或病理?xiàng)l件下蛋白質(zhì)表達(dá)的異同，對(duì)相關(guān)蛋白質(zhì)進(jìn)行分類和鑒定。更重要的是蛋白質(zhì)組學(xué)的研究要分析蛋白質(zhì)間相互作用和蛋白質(zhì)的功能.二、填空 （每空 0.5 分，共 1

11、5 分。請(qǐng)將答案填寫在答題紙上）1. Taq DNA 聚合酶 Tth DNA 聚合酶 Vent DNA 聚合酶 Pwo DNA 聚合酶 Pfu DNA 聚合酶 PwoDNA 聚合酶 Pfu DNA 聚合酶2. 質(zhì)粒 噬菌體3. 容易接受外源 DNA 片段 CaCl 2 法4. 變性 退火 延伸5. 插入序列 轉(zhuǎn)位子 噬菌體 Mu 和 D1086. 有 dNTP 沒有 dNTP7. 乳糖啟動(dòng)子Trp 啟動(dòng)子Tac 啟動(dòng)子噬菌體的PL 和 PR 啟動(dòng)子脂蛋白啟動(dòng)子8. 白陽性藍(lán)陰9. 同義突變 錯(cuò)義突變 無義突變10. 蛋白質(zhì)組三、判斷題 （錯(cuò)的打“×”，對(duì)的打“”，每題1 分，共 10

12、分。請(qǐng)將答案填在答題紙對(duì)應(yīng)的題號(hào)下）題號(hào)12345678910答案×××××四、選擇題 （每題 1 分，共 15 分。請(qǐng)將最佳答案填在答題紙對(duì)應(yīng)的題號(hào)下）題號(hào)123456789101112131415答案CADADACBBDDBCAC五、問答題 （共 36分，請(qǐng)將答案填寫在答題紙對(duì)應(yīng)的題號(hào)下）1. 真核細(xì)胞基因組中的基因常有內(nèi)含子存在，能否在原核細(xì)胞中表達(dá)？為什么？（5 分）答：不能，因?yàn)樵思?xì)胞缺乏對(duì)真核基因中內(nèi)含子的剪接功能和轉(zhuǎn)錄后加工系統(tǒng)。原核生物必須有相應(yīng)的原核 RNA 聚合酶可識(shí)別原核細(xì)胞的啟動(dòng)子, 以催化 RNA的合成?；虮磉_(dá)是以

13、操縱子為單位，操縱子由數(shù)個(gè)相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因和調(diào)控功能的部位組成的。因此在構(gòu)建原核表達(dá)載體時(shí)必須有1 個(gè)強(qiáng)的原核啟動(dòng)子及其兩側(cè)的調(diào)控序列。2. 質(zhì)粒單酶切點(diǎn)的基因連接如何降低本底和防止自我環(huán)化和提高連接效率？（6分）答：目的基因片斷與載體由相同的單一限制性核酸內(nèi)切酶（如EcoRI ）消化酶切后 , 兩者的兩端均具有相同的粘性末端 ,稱為單酶切點(diǎn)的粘性末端,又稱全同源性粘性末端 高背景載體經(jīng)單一限制性核酸內(nèi)切酶切割后, 載體分子易于自我環(huán)化, 既不利于目的基因的重組連接, 大大降低陽性克隆效率,又可使非重組性載體造成高背景。為了防止載體的自我環(huán)化，通常用堿性磷酸酶去除載體粘性末端的5 -P 以抑制

14、DNA 的自我環(huán)化。在連接反應(yīng)中, 具有 5 -P ，的目的基因DNA 片斷可有效地與去磷酸化質(zhì)粒DNA 載體通過粘性末端發(fā)生互補(bǔ)連接, 盡管產(chǎn)生的重組 DNA分子于連接點(diǎn)含有兩個(gè)缺口的開環(huán)分子 , 盡管在轉(zhuǎn)化時(shí)其轉(zhuǎn)化效率高于線性低于閉和環(huán), 但轉(zhuǎn)化大腸桿菌后,在菌體內(nèi)其缺口可獲得修復(fù)。如第二章圖2-6 雙向插入感謝下載載精品經(jīng)單一限制核酸內(nèi)切酶（如EcoRI ）切割的目的基因和載體, 因二者的粘性末端是相同的, 因此在連接反應(yīng)中 , 目的基因可發(fā)生雙向插入, 載體對(duì)目的基因表達(dá)是有方向的, 而目的基因可雙向與之相連, 這種連接若以克隆目的基因片段為目的沒有影響, 若以表達(dá)為目的, 我們就要對(duì)

15、插入的片段進(jìn)行方向鑒定, 因目的基因由起始密碼子向終止密碼子方向表達(dá)是定向轉(zhuǎn)錄的, 一旦啟動(dòng)子與目的基因編碼順序方向相反就不能正確轉(zhuǎn)錄目的基因的mRNA 。若構(gòu)建表達(dá)DNA 重組體選用雙酶切切割目的基因和載體，可使目的基因與載體的連接發(fā)生定向連接重組, 以便定向克隆。3. 真核表達(dá)調(diào)控的順式作用元件有哪些？其作用特點(diǎn)是什么？（8 分）答：順式作用元件為一些能與DBP 結(jié)合的特定序列的DNA片段 , 決定轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)和RNA 聚合酶的轉(zhuǎn)錄效應(yīng) ,按功能可分為啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、沉默子、衰減子和終止子等DNA 序列片段。 啟動(dòng)子真核基因啟動(dòng)子是基因表達(dá)時(shí)與基因轉(zhuǎn)錄起始有關(guān)的5' 端 DNA 序

16、列 ,包括在 -30bp區(qū)富含有AT 的典型 TATA 盒（框）（ TATAbox ）和在 -70 -80bp區(qū)域（在TATAbox 上游）啟動(dòng)元件。前者是引導(dǎo)RNA 聚合酶在正確起始位點(diǎn)轉(zhuǎn)錄mRNA所必需的 DNA序列 , 即保證轉(zhuǎn)錄的精確起始。后者UPE 是調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄起始頻率和提高轉(zhuǎn)錄效率的調(diào)控序列，后者的序列常為GGTCAAT 和 GGGCCC 序列 , 稱為 GC box, 它們經(jīng)協(xié)同作用,以調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄效率。啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄效率因細(xì)胞而異，因此需要根據(jù)宿主細(xì)胞的類型選擇不同的啟動(dòng)子，以便真核基因的高效表達(dá)。常用的啟動(dòng)子有Rous 肉瘤病毒啟動(dòng)子RSV 和巨細(xì)胞病毒的啟動(dòng)子CMV 。還有

17、SV40 早期啟動(dòng)子, 腺病毒的晚期啟動(dòng)子。 增強(qiáng)子增強(qiáng)子是使啟動(dòng)子的基因轉(zhuǎn)錄效率顯著提高（增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄活性）的一類順式作用元件，其本身不具有啟動(dòng)子活性，是由多個(gè)獨(dú)立的，具有特征性的核苷酸序列所組成。其基本的核心組件常由812bp組成 , 以單拷貝或多拷貝串聯(lián)的形式存在。增強(qiáng)子一般有以下特性：增強(qiáng)子能提高同一條DNA鏈上基因轉(zhuǎn)錄的速率 ;增強(qiáng)子對(duì)同源或異源基因都有效; 增強(qiáng)子的位置可在基因5' 上游、 3' 下游或內(nèi)部 ; 無方向性 ,增強(qiáng)子從 5' 3' 或是從 3' 5' 均可對(duì)啟動(dòng)子發(fā)揮作用; 增強(qiáng)子可遠(yuǎn)離轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn); 增強(qiáng)子一般無基因特異性,

18、 對(duì)各種基因啟動(dòng)子均有作用, 但具有組織或細(xì)胞特異性。典型的增強(qiáng)子首先發(fā)現(xiàn)于SV40 的病毒中 , 為 SV40 的早期基因增強(qiáng)子, 約 200bp,含 2 個(gè) 72bp的重復(fù)序列 , 位于早期啟動(dòng)子上游, 增強(qiáng)子可促使病毒基因轉(zhuǎn)錄效率提高100倍，因此具有這一增強(qiáng)子的載體已得到了廣泛的應(yīng)用。近些年來，來自于Rous 肉瘤病毒基因長末端重復(fù)序列和人類巨細(xì)胞病毒（CMV ）增強(qiáng)子也已被廣泛用于真核細(xì)胞的基因表達(dá)。增強(qiáng)子能增強(qiáng)啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄能力，有效的增強(qiáng)子能促進(jìn)轉(zhuǎn)錄達(dá)10 倍或 100 倍以上 , 在某些情況下 ,表達(dá)產(chǎn)物可能具有細(xì)胞毒效應(yīng)。因此，最好使用一種可被外界刺激信號(hào)誘導(dǎo)表達(dá)外源基因的誘導(dǎo)

19、型啟動(dòng)子,誘導(dǎo)型啟動(dòng)子有熱休克啟動(dòng)子、金屬硫蛋白啟動(dòng)子、糖皮質(zhì)激和固醇類激素誘導(dǎo)的啟動(dòng)子，熱休克啟動(dòng)子的誘導(dǎo)可通過提高細(xì)胞的培養(yǎng)溫度使啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄水平提高，重金屬離子可有效地促進(jìn)金屬硫蛋白啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性。感謝下載載精品 RNA 剪接信號(hào)多數(shù)高等的真核基因都含有內(nèi)含子序列, 在細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的前體mRNA 要經(jīng)過剪接過程去掉內(nèi)含子順序后才成為成熟的mRNA分子。雖然許多基因的cDNA轉(zhuǎn)入哺乳類動(dòng)物細(xì)胞后, 其表達(dá)不受有或無內(nèi)含子的影響 , 但有些基因在真核細(xì)胞中表達(dá)需要有內(nèi)含子的存在。一般來說，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞的表達(dá)載體中最好有一段內(nèi)含子序列的剪接信號(hào)，以提供外源基因cDNA表達(dá)的需要。常用的內(nèi)

20、含子剪接序列有SV 40 的小 t 抗原的內(nèi)含子序列等。 負(fù)調(diào)控元件沉默子和衰減子是抑制基因轉(zhuǎn)錄的 DNA 序列 , 稱為負(fù)調(diào)控元件 , 它們與反式作用因子相互結(jié)合而起作用。這些負(fù)調(diào)控元件不受距離和方向的限制，并可對(duì)異源基因表達(dá)起作用。 終止子和polyA信號(hào)真核基因轉(zhuǎn)錄的確切終止信號(hào)和終止機(jī)制, 目前尚不清楚 , 終止過程不是在RNA 聚合酶指導(dǎo)下完成的, 在不明機(jī)制下發(fā)生轉(zhuǎn)錄終止。現(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)模板DNA 分子的 3' 端有轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列, 稱終止子。通常由轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的具有 polyA 尾的基因終止信號(hào)是在多聚腺苷酸化位點(diǎn)下游的一段長度為數(shù)百個(gè)堿基的 DNA 區(qū)域內(nèi)的 G/T 簇, 例

21、如在 SV 40 中的 AGGTTTTTT 的 DNA 序列為終止轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件。 一般轉(zhuǎn)錄終止子為發(fā)夾結(jié)構(gòu)的反向重復(fù)序列。現(xiàn)在基因工程表達(dá)載體上所使用的轉(zhuǎn)錄終止子都是病毒基因或細(xì)胞基因的3' 端的一段序列 , 其中也包括 3' 端不翻譯區(qū)。如 SV40 小 t 抗原和 - 球蛋白的轉(zhuǎn)錄終止片段常用于構(gòu)建真核基因表達(dá)載體。一般認(rèn)為 polyA的存在增加了mRNA 分子的穩(wěn)定性 ,使之能成功地進(jìn)行翻譯。準(zhǔn)確而有效地進(jìn)行多聚腺苷酸化需要兩種序列：位于 polyA 位點(diǎn)下游的 GU 豐富區(qū)或 U 豐富區(qū) ; 位于 polyA 位點(diǎn)上游的 11 30 個(gè)核苷酸處的一個(gè)由6 個(gè)核苷酸組成的

22、高度保守序列（5'-AAUAAA ）, 這些序列與轉(zhuǎn)錄后的 RNA切割和加尾有關(guān)。最常用的polyA 信號(hào)是用 SV40 的一段 237kb 的 BamHI-BcLI 酶切片段 , 它包含早期和晚期轉(zhuǎn)錄單位的切割和加polyA 信號(hào) , 兩套信號(hào)分別位于不同的DNA 鏈上 , 作用方向相反 , 它們對(duì) mRNA 的加工都同樣有效。在雙啟動(dòng)子的表達(dá)載體中，啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄方向?yàn)橥驎r(shí)，上游啟動(dòng)的轉(zhuǎn)錄由于會(huì)穿過下游啟動(dòng)子，這樣就使得下游的轉(zhuǎn)錄受到極大的影響，造成下游轉(zhuǎn)錄水平的下降，但是如果在兩個(gè)啟動(dòng)子間插入一個(gè)轉(zhuǎn)錄終止子后，上游啟動(dòng)子對(duì)下游啟動(dòng)子的影響就被消除了，這樣下游啟動(dòng)子的表達(dá)量會(huì)有明顯

23、提高。當(dāng)兩個(gè)啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄方向相反時(shí)，基因表達(dá)可能會(huì)被轉(zhuǎn)錄形成的反義RNA 所抑制 , 這時(shí)插入轉(zhuǎn)錄終止子將會(huì)消除這種抑制作用。4. 基因工程疫苗研究開發(fā)應(yīng)遵循的原則是什么？（8 分）答：(1) 不能或難于培養(yǎng)的的病原體如乙型肝炎病毒(HBV) ，丙型肝炎病毒 (HCV) ，戊型肝炎病毒 (HEV) ，EB 病毒 (Epstein-Barr病毒， EBV) ，巨細(xì)胞病毒 (CMV) ，人乳頭瘤病毒(HPV) ，麻風(fēng)桿菌，疾原蟲、血吸蟲等。(2) 有潛在致癌性或免疫病理作用的病原體，前者如 1 型嗜人 T 淋巴細(xì)胞病毒 (HTLV-I) ，人免疫缺損病毒(HIV), 單純皰疹病毒 (HSV) ，還有

24、EBV、CMV 、HPV 等。后者如呼吸道合胞病毒(RSV),登革熱病毒 (DGV) ，感謝下載載精品腎綜合征出血熱病毒(HFRSV) ；(3) 常規(guī)疫苗免疫效果差，如霍亂和痢疾菌苗；或者反應(yīng)大，如百日咳和傷寒菌苗。(4)能大大節(jié)約成本，簡化免疫程序的多價(jià)疫苗，如以痘苗病毒，腺病毒，卡介苗或沙門氏菌為載體的多價(jià)活疫菌；5. 有哪幾種反義核苷酸基因失活療法？簡述其原理。（9 分）答：（1 ）將特異的反義基因重組到表達(dá)載體上（病態(tài)載體或質(zhì)粒），導(dǎo)入靶細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄出反義RNA ，形成雙鏈 RNA （RNA/RNA雙鏈體），阻礙基因的翻譯。（2）人工合成寡聚脫氧核糖核酸（ODN ）經(jīng)過化學(xué)修飾導(dǎo)入細(xì)胞，

25、與mRNA和 DNA結(jié)合，形成RNA/DNA雜鏈或 DNA核苷酸三聚體，影響基因的翻譯或轉(zhuǎn)錄。（3 ）特異性的核酶，根據(jù)癌基因設(shè)計(jì)出特異的“錘頭”或“發(fā)夾”結(jié)構(gòu)，它能夠催化切割，降解異常表達(dá)基因的mRNA而影響基因的翻譯。分子診斷學(xué)試卷B二、選擇題（每題1 分，共 15 分; 請(qǐng)將答案填寫在答題紙上）1. 限制性核酸內(nèi)切酶是由細(xì)菌產(chǎn)生的，其生理意義是( )。A.修復(fù)自身的遺傳缺陷B.促進(jìn)自身的基因重組C.強(qiáng)化自身的核酸代謝D.提高自身的防御能力2. 生物工程的下游技術(shù)是 ( )。A.基因工程及分離工程B. 蛋白質(zhì)工程及發(fā)酵工程C.基因工程及蛋白質(zhì)工程D. 分離工程及蛋白質(zhì)工程3. 基因工程操作

26、常用的酶是:(I 內(nèi)切酶 II 連接酶 III 末端轉(zhuǎn)移酶IV 聚合酶 ( )。A.I+IIB.I+III+IVC.II+III+IVD.I+II+IV+III4. 限制性內(nèi)切核酸酶的星活性是指 ( )。A. 在非常規(guī)條件下，識(shí)別和切割序列也不發(fā)生變化的活性。B. 活性大大提高C. 切割速度大大加快D.識(shí)別序列與原來的完全不同5. 下列五個(gè) DNA 片段中含有回文結(jié)構(gòu)的是 ( ) 。A. GAAACTGCTTTGACB. GAAACTGGAAACTGC. GAAACTGGTCAAAGD. GAAACTGCAGTTTC6. 關(guān)于 cDNA 的不正確的提法是 ( ) 。A. 同 mRNA互補(bǔ)的單鏈

27、RNAB.同 mRNA互補(bǔ)的含有內(nèi)含子的DNAC.以 mRNA為模板合成的雙鏈RNAD.以上都不正確7. 下列有關(guān)連接反應(yīng)的敘述，錯(cuò)誤的是( )。A. 連接反應(yīng)的最佳溫度為 37 B. 連接反應(yīng)緩沖體系的甘油濃度應(yīng)低于10%C. 連接反應(yīng)緩沖體系的 ATP 濃度不能高于 1mMD. 連接酶通常應(yīng)過量 2-5 倍8. T 4 -DNA連接酶是通過形成磷酸二酯鍵將兩段DNA 片段連接在一起，其底物的關(guān)鍵基團(tuán)是( )。A. 2'-OH和 5'P B. 2' -OH和 3'-PC. 3'-OH和 5'P D. 5' -OH和 3'-P感謝

28、下載載精品9. 載體的功能是 ( )。A. 外源基因進(jìn)入受體的搭載工具B. 不能為外源基因提供整合能力C. 不能提供復(fù)制能力D. 不能為外源基因提供表達(dá)能力10. 黏性末端連接法，不僅操作方便，而且( )。A.產(chǎn)生新切點(diǎn)B.易于回收外源片段C.載體不易環(huán)化D. 影響外源基因的表達(dá)11. 下列哪種克隆載體對(duì)外源 DNA 的容載量最大 ? ( ) A.質(zhì)粒 B.黏粒 C.酵母人工染色體 (YAC) D.噬菌體12. 考斯質(zhì)粒（ cosmid ）是一種 ( )。A.容量最大一種載體B.由 -DNA的 cos區(qū)與一質(zhì)粒重組而成的載體C.是一種單鏈DNA 環(huán)狀載體D.不能在受體細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，但可以表達(dá)13

29、. 13 ( )某一重組 DNA 的載體部分有兩個(gè) BamHI 酶切位點(diǎn)。用 BamHI 酶切后凝膠電泳上出現(xiàn)四條長度不同的帶子，其長度總和與已知數(shù)據(jù)吻合，該重組分子插入片段上的BamHI酶切位點(diǎn)共有( )。A.4個(gè)B.3個(gè)C.1個(gè)D.2個(gè)14. 下列哪一種酶作用時(shí)需要引物 ? ( )A.限制酶B.末端轉(zhuǎn)移酶C.反轉(zhuǎn)錄酶D.DNA 連接酶15. 用下列方法進(jìn)行重組體的篩選，只有( )說明外源基因進(jìn)行了表達(dá)。A.Southem印跡雜交B.Northem印跡雜交C.Western印跡D.原位菌落雜交三、簡答題（每題5 分，共 25 分; 請(qǐng)將答案填寫在答題紙上）1. 什么是包涵體？2. 什么是 -

30、 互補(bǔ)篩選？3. 簡述酶切反應(yīng)體系及反應(yīng)條件？4. 核酸操作的基本技術(shù)有哪些？5. 基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是什么？四、論述題（每題10 分，共 40 分; 請(qǐng)將答案填寫在答題紙上）1. 如何有效地提高外源基因的表達(dá)效率？2. 試述載體構(gòu)建一般方法。3. 試述 5RACE 技術(shù)原理和方法4. 大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)缺點(diǎn)是什么？答案 -試卷 B一、名詞解釋（每題2 分，共 20 分）1.轉(zhuǎn)化： 嚴(yán)格地說是指感受態(tài)的大腸桿菌細(xì)胞捕獲和表達(dá)質(zhì)粒載體DNA 分子的生命過程2. 質(zhì)粒不親和性：在沒有選擇壓力的情況下，兩種不同質(zhì)粒不能夠在同一宿主細(xì)胞系中穩(wěn)定地共存的現(xiàn)象。3.cDNA 文庫：是指某生

31、物某一發(fā)育時(shí)期所轉(zhuǎn)錄形成的cDNA片段與某種載體連接而成的克隆的集合。4.RACE：是一種通過 PCR 進(jìn)行 cDNA 末端快速克隆的技術(shù)，是以 mRNA 為模板反轉(zhuǎn)錄成cDNA 第一鏈后用 PCR 技術(shù)擴(kuò)增出某個(gè)特異位點(diǎn)到3， 或 5 ，端之間未知序列的方法。5.基因文庫：通過克隆方法保存在適當(dāng)宿主中的某種生物，組織，器官或細(xì)胞類型的所有DNA 片段而構(gòu)成的克隆集合體。6.RT-PCR: 先用逆轉(zhuǎn)錄酶作用于 mRNA ，以寡聚 dT 為引物合成 cDNA 第一鏈， 然后用已知一對(duì)引物， 擴(kuò)增嵌合分子，這種方法稱為逆轉(zhuǎn)錄PCR。感謝下載載精品7. 載體：指基因工程中攜帶外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞的運(yùn)

32、載工具，它的本質(zhì)是DNA 復(fù)制子。8.S-D 序列：在大腸桿菌 mRNA 的核糖體結(jié)合位點(diǎn)上， 含有一個(gè)轉(zhuǎn)譯起始密碼子及同16S 核糖體 RNA 3 ，末端堿基互補(bǔ)的序列， 該序列最初由 Shine 、Dalgarno 發(fā)現(xiàn)，故后來命名為 Shine-Dalgarno序列，簡稱 S-D 序列。9. 穿梭質(zhì)粒載體：指一類由人工構(gòu)建的具有兩種不同復(fù)制起點(diǎn)的選擇標(biāo)記，因而可在兩種不同宿主細(xì)胞中存活和復(fù)制的質(zhì)粒載體。10.MCS ：指載體上人工合成的含有緊密排列的多種限制核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)的DNA 片段。二、選擇題（每題1 分，共 15分）題號(hào)123456789101112131415答案DAADD

33、CACDCCBDCC三、簡答題（共25 分，每題5 分）1. 什么是包涵體？答：重組蛋白在胞內(nèi)表達(dá)時(shí)，常常以不溶性蛋白聚集成的晶狀物形式存在，這種晶狀體即包涵體。包涵體的形成是外源蛋白的高效表達(dá)時(shí)的普遍現(xiàn)象，這是由于肽鏈折疊過程中部分折疊的中間態(tài)發(fā)生了錯(cuò)誤聚合，而不是形成成熟的天然態(tài)或完全解鏈的蛋白。2. 什么是 - 互補(bǔ)篩選？答：質(zhì)粒載體具有- 半乳糖苷酶基因（lac Z），當(dāng)外源DNA 插入到它的lacZ ，可造成表達(dá)后的- 半乳糖苷酶失活，利用這一點(diǎn)就可以通過大腸桿菌轉(zhuǎn)化子菌落在添加有X-gal-IPTG培養(yǎng)基中的顏色變化鑒別出重組子和非重組子。有些大腸桿菌上帶有l(wèi)acZ 基因的部分編碼序列，質(zhì)粒載體中含有別一部分編碼序列，當(dāng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入載體后，可形成具有酶活性的蛋白質(zhì)。這種lacZ 基因上缺失了一部分編碼序列的突變體與帶有這一部分編碼序列的突變體之間實(shí)現(xiàn)互補(bǔ)的現(xiàn)象叫互補(bǔ)。3. 限制性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響？答：酶的純度。 DNA 樣品的純度。 DNA 的甲基化程度。酶切反應(yīng)的溫度與時(shí)間。 DNA 分子的構(gòu)型。限制性核酸內(nèi)切酶的反應(yīng)緩沖液。4. 核酸操作的基本技術(shù)有哪些？答：核酸提取與純化核酸的檢測(cè)與保存核酸的凝膠電泳核酸分子雜交5.基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是什么？答：是現(xiàn)代分子生物學(xué)領(lǐng)域理論上的三大發(fā)現(xiàn)和技術(shù)上的三大