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文檔簡(jiǎn)介

微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

【課程目標(biāo)】

了解培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí),進(jìn)行微生物培養(yǎng)和無(wú)菌技術(shù)的操作。

【課題重點(diǎn)】

無(wú)菌技術(shù)的操作

【課題難點(diǎn)】

無(wú)菌技術(shù)的操作

基礎(chǔ)知識(shí)

一、培養(yǎng)基

1.概念:人們按照微生物對(duì)的不同需求,配制出供其—的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)叫培養(yǎng)

基。可分為培養(yǎng)基和培養(yǎng)基。

2.營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成:各種培養(yǎng)基一般都含有、、和,此外還

要滿(mǎn)足微生物生長(zhǎng)對(duì)、以及的要求。

3.培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需在培養(yǎng)基中添加、培養(yǎng)霉菌時(shí)需將培養(yǎng)基PH調(diào)至___、

培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)需將PH調(diào)至、培養(yǎng)厭氧.微生物則需提供條件。

K思考12從細(xì)胞的化學(xué)元素組成來(lái)看,培養(yǎng)基中為什么都含有這些營(yíng)養(yǎng)成分?

【補(bǔ)充1】碳源:如C02、糖類(lèi)、脂肪酸等有機(jī)物,構(gòu)成微生物的結(jié)構(gòu)物質(zhì)和分泌物,

并提供能量。

氮源:如N2、氨鹽、硝酸鹽、牛肉膏、蛋白陳等,主要用來(lái)合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮

代謝物等。含有C、H、0、N的化合物既可以作為碳源,又可以作為氮源,如氨基酸等。

二、無(wú)菌技術(shù):閱讀“無(wú)菌技術(shù)”,討論回答下列問(wèn)題:

(一)獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是,具體操作如下:

1.對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的—、操作者的和進(jìn)行。

2,將用于微生物培養(yǎng)的、和等器具進(jìn)行.

3.為避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染,實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在—附近進(jìn)行。

4.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與相接觸。

(二)消毒和滅菌

1.消毒是指o

常用的方法有、.消毒法。

2.滅菌是指:.

常用的方法有:,、、滅菌,分別適用丁那些用具?

K思考2】無(wú)菌技術(shù)除了防止培養(yǎng)物被污染外,還具有的目的是什么?

K思考3》利用干熱滅菌箱對(duì)玻璃器皿滅菌時(shí)物品不能擺得太擠,F(xiàn)I的是什么?

K思考4?物品裝入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后,要首先打開(kāi)排氣閥,煮沸并排除鍋內(nèi)冷空

氣,其目.的是:隨后關(guān)閉排氣閥繼續(xù)加熱,氣壓升至__________,.溫

度為,并維持min;最后切斷熱源,使溫度自然降溫,氣壓務(wù)必降

至?xí)r打開(kāi)鍋蓋,其目的是防止

實(shí)驗(yàn)操作一一大腸桿菌的純化培養(yǎng):

本實(shí)驗(yàn)所用的培養(yǎng)基是,本實(shí)驗(yàn)可分成和

________________兩個(gè)階段進(jìn)行。

一制備牛肉膏蛋白豚固體培養(yǎng)基

I制備牛肉膏蛋白陳固體培養(yǎng)基的操作步驟是:

R思考5』在制備牛肉膏蛋白陳固體培養(yǎng)基的稱(chēng)量操作中,動(dòng)作要迅速,原因是什么?

溶化操作中需要不斷用玻璃棒攪拌的目的是什么?

K思考6》牛肉膏和蛋白陳主要為微生物提供什么等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)?

2.倒平板:待培養(yǎng)基冷卻至____C左右時(shí)在酒精燈火焰附近操作進(jìn)行。

其過(guò)程是:

①在火焰旁右手拿,左手:

②使錐形瓶的瓶口;

③左手將培養(yǎng)皿,右手,立刻蓋上皿蓋。

④待平板冷卻凝固后,將平板:。

R思考7X錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰的目的是什么?

K思考8》倒平板的目的是什么?

K思考9X若皿蓋和皿底之間粘有培養(yǎng)基,則該平板能否培養(yǎng)微生物?為什么?

K思考10》配制斜面培養(yǎng)基作用是什么?,試管為什么要加塞棉塞?

二、純化大腸桿菌

微生物接種:最常用的是法和法。另外還有穿刺接

種和斜面接種等。

1.平板劃線(xiàn)法是的操作,

將聚集的菌種逐步臉?lè)稚⒌脚囵B(yǎng)基的表面。

其操作步驟是:①將在酒精燈火焰上灼燒直至。②在酒精燈火焰旁

冷卻接種環(huán),并打開(kāi)大腸桿菌的菌種試管的棉塞。③將菌種試管口通過(guò)火焰達(dá)到

的目的。④將冷卻的接種環(huán)伸入到O⑤將菌種試管口再次通過(guò)火

焰后塞上棉塞。⑥將皿蓋打開(kāi)一條縫隙,把接種環(huán),蓋上皿蓋,

不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基。⑦灼燒接種環(huán),冷卻后從劃線(xiàn)。重復(fù)

上述過(guò)程,完成三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線(xiàn)。注意不要將相連。

⑧將平板培養(yǎng)。

K思考11》取菌種前灼燒接種環(huán)的目的是什么?為什么除第一次劃線(xiàn)外,其余劃

線(xiàn)前都要灼燒接種環(huán)?取菌種和劃線(xiàn)前都要求接種環(huán)也即后進(jìn)行,其目的是?

最后灼燒接種環(huán)的目的是2在第1次劃線(xiàn)后都從上次劃線(xiàn)末端開(kāi)始的目的是?

2.稀釋涂布平板法則是將菌液進(jìn)行一系列的梯度加隆,然后將

進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)稀釋倍數(shù)足夠高時(shí),即可獲得單個(gè)細(xì)菌形成的標(biāo)準(zhǔn)菌落。

系列稀釋操作:

①取盛有mL水的無(wú)菌試管6支,編號(hào)101、102、103、104、105、106。

②用灼燒冷卻的移液管吸取一mL菌液注入編號(hào)為101試管中,并吹打3次使之混勻。

③從101倍液中吸取mL菌液注入到編號(hào)為102試管內(nèi)吹打均勻,獲得102倍

液。依此類(lèi)推。

K思考12』系列稀釋操作的注意事項(xiàng)是什么?

R思考133涂布平板操作的步驟是什么?

結(jié)果分析與評(píng)價(jià)

1培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是什么?,若有菌落形成,說(shuō)明什么?

2在肉湯培養(yǎng)基上,大腸桿菌菌落顏色?形態(tài)?

3培養(yǎng)12h和24h后的菌落大小2_;菌落分布位置?原因?

R思考143在某培養(yǎng)基上出現(xiàn)了3種特征不同的菌落是什么原因?

K思考153頻繁使用的菌種利用什么法保存?長(zhǎng)期保存菌種的方法是什么?

典例精析

類(lèi)型一微生物的營(yíng)養(yǎng)要素

【例1】下列關(guān)于微生物營(yíng)養(yǎng)的說(shuō)法,正確的是..............................(

A.同一種物質(zhì)不可能既作碳源又作氮源B.凡是碳源都能提供能量

c.除水以外的無(wú)機(jī)物僅提供無(wú)機(jī)鹽D.無(wú)機(jī)氮源也能提供能量

類(lèi)型二無(wú)菌技術(shù)

【例2】細(xì)菌培養(yǎng)過(guò)程中分別采用了高壓蒸氣、酒精、火焰灼燒等幾種不同的處理,這些方

法依次用于殺滅哪些部位的雜菌.....()

A.接種針、手、培養(yǎng)基B.高壓鍋、手,接種針

C.培養(yǎng)基、手、接種針D.接種針、手、高壓鍋

類(lèi)型三制備培養(yǎng)基

[例3]以下關(guān)于制備牛肉膏蛋白豚固體培養(yǎng)基的敘述錯(cuò)誤的是..................()

A.操作順序?yàn)橛?jì)算、稱(chēng)量、溶化、倒平板、滅菌

B.將稱(chēng)好的牛肉膏連同稱(chēng)量紙一同放人燒杯

C.待培養(yǎng)基冷卻至左右時(shí)進(jìn)行倒平板

D.待平板冷卻凝固約5?10min后將平板倒過(guò)來(lái)放置

【例4】下面對(duì)發(fā)酵工程中滅菌的理解不正確的是

A.防止雜菌污染B.消滅雜菌

(4)該細(xì)菌在同化作用上的代謝類(lèi)型是-

(5)該培養(yǎng)基用來(lái)鑒別的細(xì)菌是()

A霉菌B大腸桿菌C酵母菌D乳酸菌

基礎(chǔ)自測(cè)

一、選擇題、

1.下列有關(guān)培養(yǎng)基的敘述正確的是……()

A.培養(yǎng)基是為微生物的生長(zhǎng)繁殖提供營(yíng)養(yǎng)的基質(zhì)

B.培養(yǎng)基只有兩類(lèi):液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基

C.固體培養(yǎng)基中加入少量水即可制成液體培養(yǎng)基

D.微生物在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí),可以形成肉眼可見(jiàn)的單個(gè)細(xì)菌

2.不同培養(yǎng)基的具體配方不同,但一般都含()

A.碳源、磷酸鹽和維生素B.氮源和維生素

C.水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽D.碳元素、氧元素、氫元素、氮元素

3.獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是........()

A.將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌B.接種純種

細(xì)菌

C.適宜環(huán)境條件下培養(yǎng)D.防止外來(lái)雜菌的入侵

4.下列常用的無(wú)菌操作中錯(cuò)誤的是……(

A.用酒精擦拭雙手B.用氯氣消毒水源

c.實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行D.玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)可用酒精擦拭

5.制備牛肉育蛋白豚固體培養(yǎng)基的步驟是()

A.計(jì)算、稱(chēng)量、倒平板、溶化、滅菌B.計(jì)算、稱(chēng)量、溶化、倒平板、滅菌

C.計(jì)算、稱(chēng)量、溶化、滅菌、倒平板I).計(jì)算、稱(chēng)量、滅菌、溶化、.倒平板

6.有關(guān)倒平板的操作錯(cuò)誤的是......()

A.將滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上B.使打開(kāi)的錐形瓶瓶口迅速通過(guò)火焰

c.將培養(yǎng)皿打開(kāi),培養(yǎng)皿蓋倒放在桌子上D.筆待平板冷卻凝固后需要倒過(guò)來(lái)放置

7.有關(guān)平板劃線(xiàn)操作正確的是......()

A.使用已滅菌的接種環(huán)、培養(yǎng)皿,操作過(guò)程中不再滅菌

B.打開(kāi)含菌種的試管需通過(guò)火焰滅菌,取出菌種后需馬上塞上棉塞

c.將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi),劃三至五條平行線(xiàn)即可

D.最后將平板倒置,放人培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

8.有關(guān)稀釋涂布平板法,敘述錯(cuò)誤的是)

A.首先將菌液進(jìn)行??系列的梯度稀釋

B.然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面

C.再放在適宜條件下培養(yǎng)D.結(jié)果都可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落

9.涂布平板操作需要用到...........()

A.接種環(huán)、滴管、酒精燈B.接種環(huán)、移液管、酒精燈

C.涂布器、移液管.、酒精燈D.涂布器、接種環(huán)、酒精燈

10.將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基都放入37c恒溫箱的目的是........(:)

A.對(duì)比觀(guān)察培養(yǎng)基有沒(méi)有被微生物利用B.對(duì)比分析培養(yǎng)基是否被雜菌污染

C.沒(méi)必要放人未接種的培養(yǎng)基I).為了下次接種時(shí)再使用

11關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的敘述中,正確的是

A.是碳源的物質(zhì)不可能同時(shí)是氮源B.凡碳源都提供能量

C.除水以外的無(wú)機(jī)物只提供無(wú)機(jī)鹽D.無(wú)機(jī)氮源也能提供能量

12.作為自養(yǎng)生物唯一碳源的是()

A糖類(lèi)B石油C二氧化碳D花生粉餅

13.大腸桿菌的代謝類(lèi)型是(.)

A自養(yǎng)需氧B異氧嚴(yán)格厭氧C異養(yǎng)需氧D異養(yǎng)兼性厭氧

14.菌種保藏應(yīng)控制的條件是()

(1)濕度(2)低溫(3)干燥(4)有光(5)隔絕空氣(6)適當(dāng)有氧

A(1)(4)(6)B(2)(3)(6)C(1)(5)(6)D(2)(3)(5)

15.下列物質(zhì)中,不能用作酵母菌碳源的是()

A含碳有機(jī)物B蛋白陳C含碳無(wú)機(jī)物D花生粉餅等天然物質(zhì)

16.平板冷卻凝后要將平板倒置.,其意義是()

A利于大腸桿菌的接種B防止雜菌污染

C利于培養(yǎng)的冷卻D防止皿蓋冷卻水倒流入培養(yǎng)基

17o含C、H、O、N的大分子化合物可以作為()

A異養(yǎng)微生物的氮源、能源B異養(yǎng)微生物的碳源、氮源

C自養(yǎng)微生物的氮源、能源、碳源D自養(yǎng)微生物的氮源、能源、碳源

二、非選擇題

18.鑒定培養(yǎng)基的制作是否合格的方法是:將制備好的培養(yǎng)基放在中保溫1-2天

看有無(wú),,如果沒(méi)有說(shuō)明制作合格,反之則不合格。

19.請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要,請(qǐng)選擇合適的方法。

(1)培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿

(2)玻棒、試管、燒瓶和吸管

(3)實(shí)驗(yàn)操作者的雙手

(1)、(2)、(3)

20.19世紀(jì)中期,關(guān)系到法國(guó)經(jīng)濟(jì)命脈的釀造業(yè)曾一度遭受毀滅性的打擊。在生產(chǎn)過(guò)程中,

出現(xiàn)了葡萄酒變酸、變味的怪事。

(1)根據(jù)你所掌握的知識(shí)分析導(dǎo)致生產(chǎn)失敗的根源是什么?

(2)由此得出研究和應(yīng)用微生物的前提是防止

21.在倒平板的過(guò)程中,如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位,這個(gè)平板還能用

來(lái)培養(yǎng)微生物嗎?為什么?

22.在做第二次以及其后的劃線(xiàn)操作時(shí),為什么總是從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始劃線(xiàn)?

參考答案

基礎(chǔ)知識(shí)

一、1.營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)生長(zhǎng)繁殖液體固體

2水.碳源氮源無(wú)機(jī)鹽PII特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)氧氣

3維生素,酸性,中性或微堿性,無(wú)氧

R思考,:C、H、0、N、P、S是構(gòu)成細(xì)胞原生質(zhì)的基本元素,約占原生質(zhì)總量的97%

以上。

二(一)雜菌L空間衣著手,清潔和消毒2.器皿接種用具,培養(yǎng)基,滅菌3.酒

精燈火焰4.周?chē)奈锲?/p>

(二)1.略巴氏消酒精2.略灼燒干熱高壓蒸氣

K思考2U:防止感染實(shí)驗(yàn)操作者o

K思考3》避免妨礙熱空氣流通。

K思考4』有利于鍋內(nèi)溫度升高,100kPa,121℃,15?30,零,容器中的液體暴沸,

實(shí)驗(yàn)操作、

-1計(jì)算一稱(chēng)量一溶化一火菌一倒平板

思考5:防止牛肉膏吸收空氣中水分。防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。

K思考63糖維生素和有機(jī)氮

2:50,錐形瓶,拔出棉塞,迅速通過(guò)火焰,打開(kāi)?條縫隙,將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿,倒過(guò)

來(lái)放置

K思考72消滅瓶口的雜菌,防止雜菌感染培養(yǎng)基。

K思考83防止培養(yǎng)基冷卻過(guò)程中形成的水滴落到培養(yǎng)基表面。

R思考9X不能??諝庵须s菌會(huì)在這些粘附培養(yǎng)基上繁殖,并污染皿內(nèi)培養(yǎng)基。

K思考103增大接種面積,保持通氣并防止雜菌感染。

答案。二、平板劃線(xiàn).稀釋涂布平板

1通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線(xiàn),①接種環(huán),燒紅。③,消滅試管口雜菌。

④菌液中取出一環(huán)菌種。⑥,伸入平板內(nèi)劃3?5條包線(xiàn),⑦,第一區(qū)劃線(xiàn)末端開(kāi)始

向第二區(qū)域內(nèi),,第五區(qū)的劃線(xiàn)與第一區(qū)劃線(xiàn),⑧,倒置放在培養(yǎng)箱中

K思考11R消滅接種環(huán)上的微生物,的目的是消滅接種環(huán)上殘留菌種,防止高溫殺死

菌種;防止細(xì)菌污染環(huán)境和操作者。獲得由單個(gè)細(xì)菌形成的標(biāo)準(zhǔn)菌落。

2不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,

①,9mL,滅菌。②,1。③,1

K思考121操作中試管口和移液管應(yīng)在離火焰1?2cm處。整個(gè)操作過(guò)程中使用了1支移液

結(jié)果分析與評(píng)價(jià)

1對(duì)照,培養(yǎng)基滅菌不徹底。2呈旦色,為圓形,光滑有光澤,邊緣整齊。3大小不同;

菌落分布位置相同。原因是時(shí)間越長(zhǎng),菌落中細(xì)菌繁殖越多,菌落體積越大;菌落的位置不

動(dòng),但菌落數(shù)增多。

K思考143有培養(yǎng)基滅菌不徹底或雜菌感染等。

K思考I5X臨時(shí)保藏法和甘油管藏法。前者利用同體斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)后,保存在4。。

冰箱中,每3?6個(gè)月轉(zhuǎn)種培養(yǎng)一次,缺點(diǎn)是保存時(shí)間較短,容易發(fā)生污染和變異;后者將

菌種與無(wú)菌體積等最混合后保存在一20℃冷凍箱中。

【例1】解析:此題考查學(xué)生對(duì)微生物的營(yíng)養(yǎng)和能源的理解。對(duì)異養(yǎng)微生物來(lái)說(shuō),含C、H、

0、N的化合物既是碳源,又是氮源。C0?是光能自養(yǎng)細(xì)菌的碳源,但不能提供能量。CO,和N。

是無(wú)機(jī)物,也是微生物的碳源和氮源。硝化細(xì)菌所利用的氮源是無(wú)機(jī)氮源氨,同時(shí)氨也為硝

化細(xì)菌提供用以化能合成作用的能源。答案:D

啟示:含C、II、o、N的化合物既是微生物的碳源,又是微生物的氮源;有機(jī)碳源能提

供能量,無(wú)機(jī)碳源不能提供能量:無(wú)機(jī)物也可提供碳源、氮源和能源。

【例2】解析:此題考查學(xué)生對(duì)無(wú)菌技術(shù)的掌握。高壓蒸氣滅菌鍋是滅菌的一個(gè)設(shè)備,通

常用于培養(yǎng)基的滅菌。用酒精擦拭雙手是消毒的一種方法?;鹧孀茻梢匝杆?gòu)氐椎販缇?/p>

適用于微生物的接種工具,如接種環(huán)。答案:C

啟示:微生物培養(yǎng)過(guò)程中的無(wú)菌操作包括消毒和滅菌兩大類(lèi),分別乂有各種不同的方法。

對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手,進(jìn)行清潔和消毒;將用于微生物培養(yǎng)的器皿、.接

種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌。

【例3】解析:制備牛肉膏蛋白陳固體培養(yǎng)基的步驟是計(jì)算、稱(chēng)量、溶化、滅菌、倒平板,

不能顛倒。牛肉音容易吸潮,所以當(dāng)牛肉膏溶化并與稱(chēng)號(hào)紙分離后,用玻棒取出稱(chēng)量紙。待

培養(yǎng)基冷卻至50℃,用手觸摸錐形瓶剛剛不燙手,并且培養(yǎng)基處于溶化狀態(tài)。平板冷卻幾

分鐘后還需倒置。答案:A

啟示:固體培養(yǎng)基的制作步驟是:“計(jì)算-稱(chēng)量-溶化-滅菌-倒平板”順序不能顛

倒。并且在制作過(guò)程特別是倒平板時(shí)徹底做到“無(wú)菌”。

【例4】解析:滅菌是微生物發(fā)酵過(guò)程的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。A說(shuō)的是滅菌的目的,

因?yàn)榘l(fā)酵所用的菌種大多是單一的純種,整個(gè)發(fā)酵過(guò)程不能混入其他微生物(雜

菌),所以是正確的;B是錯(cuò)誤的,因?yàn)闇缇哪康氖欠乐闺s菌污染,但實(shí)際操

作中不可能只消滅雜菌,而是消滅全部微生物。C是正確的,因?yàn)榕c發(fā)酵有關(guān)的

所有設(shè)備和物質(zhì)都要滅菌;發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專(zhuān)門(mén)接種的,滅菌必須在

接種前,如果接種后再滅菌就會(huì)把所接菌種也殺死。答案:B

基礎(chǔ)自測(cè)一、1.A2.C3.D4.D5.C6.C7.D8.D9.C10.B。

UDoo12oCo13oDo14。Bo15oCo16。Do17oBo

二、18.恒溫箱菌落生長(zhǎng),菌落生長(zhǎng)19(1)需要滅菌.(2)需要滅菌(3)需要消毒

20(1)導(dǎo)致生產(chǎn)失敗的根源在于發(fā)酵物中混入了雜成。(2)雜菌入侵,獲得純凈的培養(yǎng)物。

21.不能因空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生,因此最好不要

用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。

22.因劃線(xiàn)后線(xiàn)條末瑞細(xì)菌的數(shù)目比線(xiàn)條起始處要少,每次從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始,

能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線(xiàn)次數(shù)的增加而逐步減少,這樣最終就能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的

菌落。

土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

教學(xué)目標(biāo):

(一)知識(shí)與技能

利用選擇培養(yǎng)基分離細(xì)菌,運(yùn)用相關(guān)技術(shù)解決生產(chǎn)生活中有關(guān)微生物的計(jì)數(shù)

(-)過(guò)程與方法

分析研究思路的形成過(guò)程,找出共性和差異性

(三)情感、態(tài)度與價(jià)值觀(guān)

形成無(wú)菌不在的概念,養(yǎng)成講究衛(wèi)生的習(xí)慣

教學(xué)重點(diǎn):對(duì)土樣的選取和選擇培養(yǎng)基的配制

教學(xué)難點(diǎn):對(duì)分解尿素的細(xì)菌的計(jì)數(shù)

教學(xué)過(guò)程:

(一)引入新課

上節(jié)課我們學(xué)習(xí)了培養(yǎng)基的配置以及接種技術(shù)。下面我們來(lái)學(xué)習(xí)如何進(jìn)行細(xì)菌的分離,

獲得所需要的目的微生物,

(二)進(jìn)行新課

1.基礎(chǔ)知識(shí)

1.1尿素是一種重要的氮肥,農(nóng)作物不能(能,不能)直接吸收利用,而是首先通過(guò)

土壤中的細(xì)菌將尿素分解為氨和C02,這是,因?yàn)榧?xì)菌能合成喔酶。

1.2科學(xué)家能從熱泉中把耐熱細(xì)菌篩選出來(lái)是因?yàn)闊崛母邷貤l件淘汰了絕大多數(shù)微

生物,這樣也適用于實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選,原理是人為提供用利于目的菌株生長(zhǎng)的條件

(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、PH等),同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。

點(diǎn)評(píng):生物適應(yīng)一定環(huán)境,環(huán)境對(duì)生物具有選擇作月。所以通過(guò)配制選擇培養(yǎng)基、控制

培養(yǎng)條件等選擇目的微生物。

K思考在該培養(yǎng)基配方中,為微生物的生長(zhǎng)提供碳源的是曲窗窿,提供氮源的的

是尿素,瓊脂的作用是凝固劑。

K思考2X該培養(yǎng)基對(duì)微生物具有(具有,不具有)選擇作用。如果具有,其選擇機(jī)

制是只有能夠以,尿素作為氮源的微生物才能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。

1.3在統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí),常用來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌數(shù)目的方法是稀釋涂布平板法。除

此之外,顯微鏡直接計(jì)數(shù)也是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法。

【補(bǔ)充】顯微鏡直接計(jì)數(shù)是測(cè)定微牛?物的方法。

公式:觀(guān)察到的.紅細(xì)胞平均數(shù):觀(guān)察到的細(xì)菌平均數(shù)=紅細(xì)胞含量:細(xì)菌含量

1.4采用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的?個(gè)菌落,來(lái)源于樣品

稀釋液中一個(gè)活菌.通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù),就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。

為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般選擇菌落數(shù)在30?300的平板進(jìn)行計(jì),數(shù)。

K思考32從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的菌落數(shù)的計(jì)算方法是(平均菌落數(shù)

?涂布的稀釋液體積)X稀釋倍數(shù)。

K思考42利用稀釋涂布平板法成功統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是恰當(dāng)?shù)南♂尪取?/p>

K思考53第二位同學(xué)的結(jié)果接近真實(shí)值。你認(rèn)為這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)需要改進(jìn)的操作

是第?位同學(xué)需設(shè)置重復(fù)實(shí)驗(yàn)組:第二位同學(xué)統(tǒng)計(jì)的二個(gè)菌落數(shù)相差太大,說(shuō)明操作有誤,

需重新實(shí)驗(yàn)。

1.5統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)比活菌的實(shí)際數(shù)目,。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞在一起時(shí),平

板上觀(guān)察到的只是一個(gè)菌落。因此,統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)來(lái)表示。

1.6設(shè)置對(duì)照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,提高實(shí)驗(yàn)結(jié)

果的可信度。

1.7對(duì)照實(shí)驗(yàn)是指除了檢測(cè)的條件外,其他條件都福瓦的實(shí)驗(yàn)。滿(mǎn)足該條件的

稱(chēng)為對(duì)照組,未滿(mǎn)足該條件的稱(chēng)為實(shí)瞼組“

R思考6X請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn)的對(duì)照實(shí)驗(yàn),組:

方案1:其他同學(xué)用A同學(xué)的土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

方案2:A同學(xué)以不接種的培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。

2.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

2.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的內(nèi)容包括實(shí)驗(yàn)方案、材料用具、實(shí)施步驟和時(shí)間安排等。

2.2根據(jù)圖示2—7填寫(xiě)以下實(shí)驗(yàn)流程:

配制土壤溶液f系列稀釋T涂布平板與培養(yǎng)f菌落計(jì)數(shù)一

2.3十.壤微生物主要分布在距地表0cm的近空性上壤中,約70%?80%為細(xì)菌。

2.4分離不同的微生物采用不同的稀釋度,其原因是不同微生物在土壤中含量不同,

其目的是保證獲得菌落數(shù)在30?300之間、適于計(jì)數(shù)的平板。細(xì)菌稀釋度為10'、IO,、io\

放線(xiàn)菌稀釋度為1()3、io\ioM真菌稀釋度為101i()\io'。

2.5培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。細(xì)菌一般在30?37℃培養(yǎng)1?2d,放線(xiàn)

菌一般在25?28c培養(yǎng)5?7d,霉菌一般在25?28C的溫度下培養(yǎng)3?4d。

2.6在菌落計(jì)數(shù)時(shí),每隔冽h統(tǒng)計(jì)?次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)

果,以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目.

點(diǎn)評(píng):菌種中有些菌體增殖快,有些菌體增值慢,所以用養(yǎng)時(shí)間要充足,使得每個(gè)菌

體都能形成肉眼可觀(guān)察到的菌落。

2.7菌落的特征包括形狀、大小、隆起程度、顏色等方面。

R思考8》土壤微生物種類(lèi)最多、數(shù)量最大的原因是什么?土壤中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量豐富,

環(huán)境條件適宜等。

2.9實(shí)驗(yàn)過(guò)程

1)取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在便用前都要滅菌。

2)應(yīng)在火焰旁稱(chēng)取土壤10g。將稱(chēng)好的土樣倒入盛有90mL無(wú)菌水的錐形瓶中,塞好

棉塞。

3)在稀釋土壤溶液的過(guò)程中,每一步都要在火焰旁進(jìn)行。

4)實(shí)驗(yàn)時(shí)要對(duì)培養(yǎng)皿作好標(biāo)記。注明培養(yǎng)基類(lèi)型、培養(yǎng)時(shí)間、稀釋度、培養(yǎng)物等。

5)為了提高效率,在操作時(shí)更加有條不紊,應(yīng)當(dāng)事先規(guī)劃時(shí)間。

K思考9X在研究未知微生物時(shí)務(wù)必規(guī)范操作,以防被致病微生物感究,實(shí)驗(yàn)后一定要

洗手。

3.結(jié)果分析與評(píng)價(jià)

3.1對(duì)分離的菌種作進(jìn)一步的鑒定.,還需要借助生物化學(xué)的方法。

3.2在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中,細(xì)菌合成的麻酶將尿素分解成了氨。氨會(huì)使

培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng),PH升高。因此,我們可以通過(guò)槍測(cè)培養(yǎng)基皿變化來(lái)判斷該化學(xué)反

應(yīng)是否發(fā)生。

3.3在以為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入?組指示劑。培養(yǎng)某種細(xì)菌后,如果

PH升高,指示劑將變紅,說(shuō)明該細(xì)菌能夠分解尿索。

K思考10X測(cè)定飲水中大腸桿菌數(shù)量的方法是將一定體積的水用細(xì)菌過(guò)濾器過(guò)濾后,

將濾膜放到伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng),大腸桿菌菌落呈現(xiàn)黑色,通過(guò)記述得出水樣中大腸

桿菌的數(shù)量。你認(rèn)為在該實(shí)驗(yàn)中至少應(yīng)取三個(gè)水樣。

(三)課堂總結(jié)、點(diǎn)評(píng)

(四)實(shí)例探究

例1.時(shí)細(xì)菌群體生長(zhǎng)規(guī)律測(cè)定的正確的表述是

A.在液體培養(yǎng)基上進(jìn)行.B.至少接種一種細(xì)菌

C.接種一個(gè)細(xì)菌D.及時(shí)補(bǔ)充消耗的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

解析:細(xì)菌群體生長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定是人們?cè)谝欢l件卜;進(jìn)行的。這些條件是:一種細(xì)菌、

恒定容積的培養(yǎng)基,液體培養(yǎng)基、定時(shí)測(cè)定細(xì)菌總數(shù)。在這些條件下,才能測(cè)定出細(xì)菌的生

長(zhǎng)規(guī)律。測(cè)定時(shí)只能用一種細(xì)菌的子細(xì)胞群體的變化規(guī)律表達(dá)微生物的生長(zhǎng);恒定容積是給

微生物提.供一定的生存環(huán)境;液體培養(yǎng)基才能通過(guò)樣品推測(cè)細(xì)菌總數(shù)。若接種多種細(xì)菌,

則會(huì)發(fā)牛種間斗爭(zhēng)而不能測(cè)定一種微牛物的牛長(zhǎng)規(guī)律。在接種時(shí),要保訐一定的接種量。

答案:A

例2.在微生物群體生長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定中,種內(nèi)斗爭(zhēng)最顯著最激烈的時(shí)期是

A.調(diào)整期B.對(duì)數(shù)期C.穩(wěn)定期D.衰亡期

解析:種內(nèi)斗爭(zhēng)是一種生態(tài)因素。種內(nèi)斗爭(zhēng)反應(yīng)了種內(nèi)生物對(duì)生存空間和生活資源的爭(zhēng)

奪。在生活空間充裕,營(yíng)養(yǎng)充足的時(shí)候,種內(nèi)斗爭(zhēng)的程度是比較低的。隨著微生物個(gè)體數(shù)目

的增加,每個(gè)個(gè)體的生存空間越來(lái)越少,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)也越來(lái)越少,每個(gè)個(gè)體對(duì)生存空間和資源

的爭(zhēng)奪也越來(lái)越激烈,種內(nèi)斗爭(zhēng)就越來(lái)越激烈。由此可知,在穩(wěn)定期的種內(nèi)斗爭(zhēng)最激烈。在

衰亡期,微生物的數(shù)目已經(jīng)開(kāi)始減少,pH已經(jīng)極度不適于微生物的生存,次級(jí)代謝產(chǎn)物積

累到很高的程度,這時(shí)的微生物的生存斗爭(zhēng)主要是與無(wú)機(jī)環(huán)境的斗爭(zhēng)。

答案:C

綜合應(yīng)用

例3.(2005年江蘇〕抗生素作為治療細(xì)菌感染的藥物,其高效性和巨大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值使

抗生素工業(yè)經(jīng)久不衰。其中青霉素的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用具有劃時(shí)代的意義。

⑴青霉素發(fā)酵產(chǎn)生青霉素。青霉菌的新陳代謝類(lèi)型是,青霉素是青霉菌的

代謝產(chǎn)物。

⑵在生產(chǎn)和科研中,常選用處于期的青霉菌作為菌種或研究材料,因?yàn)榇藭r(shí)的

青霉菌代謝旺盛,.和比較穩(wěn)定,

⑶對(duì)青霉菌菌體生長(zhǎng)情況的測(cè)定:取一定體積的發(fā)酵液,經(jīng)離心分離、反復(fù)洗滌

后,,再計(jì)算發(fā)酵罐中菌體的總重量。

解析:青霉菌屬于真菌,其代謝類(lèi)型應(yīng)為異養(yǎng)需氧型,而青霉素作為它的代謝產(chǎn)物,并

不是它生長(zhǎng)、繁殖所必需的,所以青霉素應(yīng)屬于次級(jí)代謝產(chǎn)物。在測(cè)定培養(yǎng)基上青毒南菌體

的生長(zhǎng)情況時(shí),常用的方法有兩種:i種是測(cè)量青霉菌的細(xì)胞數(shù)目,另一種是測(cè)重量,取一

定體積的發(fā)酵液,經(jīng)離心分離、反復(fù)洗滌后,稱(chēng)菌體的濕重,或烘干后稱(chēng)于重,再由此計(jì)

算出其中的細(xì)胞總重量。在細(xì)菌生長(zhǎng)的四個(gè)主要時(shí)期中,因?yàn)樘幱趯?duì)數(shù)期的細(xì)菌代謝旺盛,

個(gè)體的形態(tài)和生理特性比較程定,常作為生產(chǎn)用的菌種和科研的材料。

答案:⑴異養(yǎng)需氧型次級(jí)⑵對(duì)數(shù)個(gè)體的形態(tài)生理特性⑶稱(chēng)菌體的濕重

(稱(chēng)烘干后?的重:量)

(五)鞏固練習(xí)

1.在一個(gè)“淀粉一瓊脂”培養(yǎng)基的5個(gè)圓點(diǎn)位置,分別用不同方法處理,將此實(shí)驗(yàn)裝

置放在37℃恒溫箱中,保溫處理24h后,將碘液滴在培養(yǎng)基的5個(gè)圓點(diǎn)上,其實(shí)驗(yàn)結(jié)

果記錄于下表:(C)

淀粉圓點(diǎn)實(shí)驗(yàn)處理方法碘液處理后的顏色反應(yīng)

①新鮮唾液與鹽酸混合藍(lán)黑色

②經(jīng)過(guò)煮沸的新鮮唾液藍(lán)黑色

③接種面包霉棕黃色

④只有新鮮的唾液??

⑤只有一定濃度的蔗糖溶液?

請(qǐng)指出④和⑤所發(fā)生的顏色反應(yīng),以及③接種的面包霉的分泌物分別是

A.棕黃色、棕黃色、淀粉酶B.藍(lán)黑色、棕黃色、麥芽糖酶

C.棕黃色、藍(lán)黑色、淀粉酶D.棕黃色、藍(lán)黑色、麥芽糖酶

2.實(shí)驗(yàn)測(cè)定鏈霉素對(duì)3種細(xì)菌的抗生素效應(yīng),用3種細(xì)菌在事先準(zhǔn)備好的瓊脂塊平板

上畫(huà)3條等長(zhǎng)的平行線(xiàn)(3條線(xiàn)均與下圖中的鏈霉素帶接觸),將平板置于37℃條件下恒溫

培養(yǎng)3天,結(jié)果如圖所示,從實(shí)短結(jié)果分析以下敘述,不正確的是()

霍亂菌

傷寒菌

結(jié)核菌

A,鏈霉素能阻止結(jié)核菌的生長(zhǎng)B.集族素對(duì)結(jié)核菌比對(duì)霍亂菌更有效

C.鏈霉素對(duì)結(jié)核菌比對(duì)傷寒菌更有效D.鏈霉素可以用于治療傷寒病人

3.利用生物工程生產(chǎn)啤酒、味精、胰島素、酸奶的常用菌種分別是

A.酵母菌、枯草桿菌、大腸桿菌、乳酸菌

B.酵母菌、大腸桿菌、青霉菌、乳酸菌

C.酵母菌、谷氨酸棒狀桿菌、大腸桿菌、乳酸菌

D.黃色短桿菌、酵母菌、大腸桿菌、乳酸菌

4.下列操作不屬「微生物的分離步驟的是

A.稀釋B.劃線(xiàn)或涂布C.接斜面D.培養(yǎng)

5.影響微生物生長(zhǎng)的主要環(huán)境因素是

A.陽(yáng)光、溫度、水分B.溫度、水分、PHC.水分、PH、氧D.溫度、PH、氧

6.下列微生物的產(chǎn)物中沒(méi)有菌種特異性的一組是

A.氨基酸、核昔酸、多糖、色素

B.多糖、脂類(lèi)、維生素、抗生素、氨基酸

C.核甘酸、多糖、維生素、毒素、抗生素

D.核甘酸、維生素、多糖、脂類(lèi)、氨基酸

7.微生物代謝的人工控制是指

A.改變微生物的遺傳特性B.控制發(fā)酵時(shí)的溫度

C.調(diào)節(jié)發(fā)酵過(guò)程中的pH,氧氣通入量D.包括A、B、C三項(xiàng)

8.在微生物群體生長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定中,不可能發(fā)生的是

A.繁殖B.生存斗爭(zhēng)C.種間斗爭(zhēng)D.種內(nèi)斗爭(zhēng)

9.與調(diào)整期長(zhǎng)短有關(guān)的因素中,可縮短調(diào)整期的一組是

①用與菌種相同的培養(yǎng)基②營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基③穩(wěn)定期獲得的菌種④對(duì)數(shù)期

獲得的菌種⑤接種時(shí)訶提前⑥接種量加大⑦接種量減?、嘟臃N種類(lèi)加大

A、①③⑤OB、②③⑤⑦C、①?⑥I)、②④?⑥⑧

10.微生物群體生長(zhǎng)善的測(cè)定方法可以是

①測(cè)定樣品的細(xì)胞數(shù)目②測(cè)定次級(jí)代謝產(chǎn)物的總產(chǎn)量

③測(cè)定培養(yǎng)基中細(xì)菌的體積④測(cè)定樣品的細(xì)胞重量

⑤測(cè)定初級(jí)代謝產(chǎn)物的總產(chǎn)量

A.(2X4)B.C.⑤D.②③④

答案:1—5CDCCD6—10DDCCB

★教學(xué)體會(huì)

本節(jié)課可以從尿素在衣業(yè)上的重要應(yīng)用切入,介紹能分解尿素的細(xì)菌,進(jìn)而說(shuō)明這種細(xì)

菌的作用是能夠合成分解尿素的酶。在教學(xué)過(guò)程中,可以聯(lián)系生產(chǎn)生活實(shí)際,使學(xué)生對(duì)尿素

以及分解尿素的細(xì)菌形成一定的感性認(rèn)識(shí)。同時(shí)通過(guò)課題背景的介紹,可以進(jìn)行STS教育。

對(duì)于實(shí)驗(yàn)中的對(duì)照原則,可以指導(dǎo)學(xué)生分組討論,在掌握,微生物分離技術(shù)的同時(shí)鞏固實(shí)驗(yàn)

設(shè)計(jì)的基本原則。

課題:分解纖維素的微生物的分離

教學(xué)目標(biāo):

(一)知識(shí)與技能

簡(jiǎn)述纖維素酶的種類(lèi)及作用,從土壤中分離出分解纖維素的微生物;掌握從土壤中分離某種

特定微生物的操作技術(shù)

(二)過(guò)程與方法

分析分離分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程,弄懂實(shí)驗(yàn)操作的原理

(三)情感、態(tài)度與價(jià)值觀(guān)

領(lǐng)悟科學(xué)探究的方法,發(fā)展科學(xué)思維和創(chuàng)新能力

教學(xué)重點(diǎn):從土壤中分離分解纖維素的微生物

教學(xué)難點(diǎn):從土壤中分離分解纖維素的微生物

教學(xué)過(guò)程

(-)引入新課

上節(jié)課我們探討學(xué)習(xí)了土壤中尿素分解菌的分離與計(jì)數(shù),這節(jié)課我們以纖維素分解菌的

分離與純化為例,鞏固加深對(duì)這方面技術(shù)的理解和掌握,

(二)進(jìn)行新課

1.基礎(chǔ)知識(shí)

活動(dòng)1:閱讀“纖維素與纖維素酶”,回答下列問(wèn)題:

1.1纖維素是一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物,是含量最豐富的多糖類(lèi)物質(zhì)。

纖維素能被土壤中某些微生物分解利用,這是因?yàn)樗鼈兡軌虍a(chǎn)生纖維素酶。

延伸:草食性動(dòng)物是怎樣消化食物中纖維素的?腸胃中的共生物生物。

1.2棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物。纖維素的分解需要在紅維素酶的催化

作用卜.完成,請(qǐng)完成下列過(guò)程:

麗釬CM/x酶x纖維三糖葡嬲苴醇二藐

R思考實(shí)驗(yàn)分析:投影的小實(shí)驗(yàn)是如何構(gòu)成對(duì)照的?

在一支試管中添加纖維素酶,另一支試管不添加纖維素酶;盡管醋酸一醋酸鈉緩沖液用

量不同,但都能維持相同的pH。

K思考211個(gè)酶活力單位是指在溫度為咨;C,其它反應(yīng)條件最適宜情況下,在」jnin

內(nèi)轉(zhuǎn)化1mmol的底物所需要的酶質(zhì)。

活動(dòng)2:閱讀“纖維素分解菌的篩選”,回答下列問(wèn)題:

1.3篩選纖維素分解菌的方法是剛果紅染色法。該方法可以通過(guò)顏魚(yú)反應(yīng)直接篩選。

2.4其原理是:剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物,當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后,紅

色復(fù)合物無(wú)法形成,出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈,我們可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)

篩選纖維素分解菌。

2.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

活動(dòng)3:完成實(shí)驗(yàn)方案流程圖,討論回答問(wèn)題:

K思考3』實(shí)驗(yàn)流程中“選擇培養(yǎng)”的培養(yǎng)基類(lèi)型是什么?該培養(yǎng)的目的是什么?.

液體選擇培養(yǎng)基。其目的是使纖維素分解菌增殖,含量增多。

K思考43本實(shí)驗(yàn)流程與尿素分解菌的分離實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同?

尿素分解菌的分離實(shí)撿流程是將土樣制成的菌懸液直接涂布在選擇培養(yǎng)基上;本課題通

過(guò)選擇培養(yǎng)使細(xì)菌增殖后,再涂布在鑒別培養(yǎng)基上。其它操作基本基本共同。

活動(dòng)4:閱讀投影資料一“土壤取樣”,何答下列問(wèn)題:

2.1纖維素分解菌大多分布在富含纖維素的環(huán)境中。

2.2為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌?

生物適應(yīng)一定環(huán)境,環(huán)境對(duì)牛.物具有選擇作用,只有在纖維素含量豐富的環(huán)境中纖維素分

解菌的含量才會(huì)高于其它普通環(huán)境,從而提高獲得目的微生物的幾率。

2.3將濾紙埋在土壤中有什么作用?你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深?

人工設(shè)置適宜環(huán)境,使纖維素分解菌相對(duì)聚集。將紙埋于深約10cm的腐殖土壤中,

活動(dòng)5:閱讀投影資料二“選擇培養(yǎng)基”,回答以下三個(gè)問(wèn)題:

2.4纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基屬于蠅培養(yǎng)基,原因是沒(méi)有添加瓊脂成分。

2..5培養(yǎng)基選擇作用機(jī)制是以纖維素粉為唯一碳源,只有纖維素分解菌才能生存,

2.6若設(shè)置一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)說(shuō)明選擇培養(yǎng)的作用,應(yīng)控制的變量是將纖維素粉改為葡萄糖。

活動(dòng)5:閱讀投影資料三“剛果紅染色法”,填表比較兩種染色法的各自的優(yōu)缺點(diǎn):

染色法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)

顏色反應(yīng)基不上是操作繁瑣

方法一

纖維素分解菌的作用剛果紅會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜

操作簡(jiǎn)便產(chǎn)生淀粉酶的微生物也產(chǎn)生模糊透明圈,

方法二

不存在菌落混雜問(wèn)題有些微生物能降解色素,形成明顯的透明圈。

K思考5X為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物?

在選擇培養(yǎng)條件卜.,可使能夠適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖,而那些不適應(yīng)

這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物的繁殖.被抑制,因此可以起到“濃縮”的作用。

3.結(jié)果分析與評(píng)價(jià)

活動(dòng)6:閱讀“課題延伸”,回答:

3.1為了確定分離得到的是纖維素分解菌,還需要進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素.酶實(shí)驗(yàn),纖

維素酶的發(fā)酵方法有液體.發(fā)酵和固體發(fā)酵。

3.2紂維素酶測(cè)定方法是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素所產(chǎn)生的葡萄糖含量進(jìn)行定

量測(cè)定。

(三)課堂總結(jié)、點(diǎn)評(píng)

解—>熨驗(yàn)設(shè)計(jì)—>土壤取樣一?富含纖維素土壤

選擇培養(yǎng)

涂布培養(yǎng)

(四)實(shí)例探究

例1.有關(guān)谷氨酸發(fā)醉的敘述中正確的是

A.發(fā)酵中要不斷通入空氣B.培養(yǎng)條件不當(dāng)將不能得到產(chǎn)品

C.攪拌的唯一目的是使空氣成為小泡D.冷卻水可使酶活性下降

解析:進(jìn)行谷氨酸發(fā)酵的菌種是異養(yǎng)需氧型微生物,所以要在培養(yǎng)過(guò)程中不斷通入空氣,

但是必須通入的是無(wú)菌空氣,普通空氣是不行的,容易造成雜菌污染。攪拌不但使空氣成為

小氣泡以增加培養(yǎng)基中的溶氧量,還能使培養(yǎng)基與菌種充分接觸,提高原料的利用率。在培

養(yǎng)過(guò)程中,由于微生物的代謝產(chǎn)熱和機(jī)械磨擦生熱,會(huì)使培養(yǎng)基的溫度升高,高到一定程度,

就會(huì)使酶的結(jié)構(gòu)和核酸的結(jié)構(gòu)遭到破壞,培養(yǎng)會(huì)因此而受到影響。降低溫度,是保證酶正常

活性的條件之一而不會(huì)使酶的活性下降。當(dāng)培養(yǎng)條件不恰當(dāng)時(shí),不能得到谷氨酸。如pH降

低時(shí)將得到乙酰谷氨酰胺,溶氧.低時(shí)將得到乳酸或琥珀酸。

答案:B

例2.溫度對(duì),發(fā)酵過(guò)程的影響,不正確的是

A.溫度過(guò)高,發(fā)酵周期縮短,產(chǎn)量降低B,溫度不影響生物合成的途徑

C.溫度能影響菌種對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收

D.菌體生長(zhǎng)和產(chǎn)物合成所需的最適溫度不一定相同

解析:解答此題需要從以下幾方面入手分析:第一,發(fā)酵過(guò)程需要適宜的溫度,如果溫

度過(guò)高,酶很快失活,菌體哀老,發(fā)酵周期就會(huì)縮短,產(chǎn)量也會(huì)降低;第二,溫度能影響生

物合成的途徑,這是因?yàn)樯锖铣蛇^(guò)程需要酶,酶的活性與溫度高低有關(guān):第三,菌種吸收

營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)一部分是通過(guò)主動(dòng)運(yùn)輸來(lái)

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