第50講微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用

課標(biāo)內(nèi)容（1）闡明在發(fā)酵工程中防止雜菌污染是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的前提。（2）闡明無(wú)

菌技術(shù)是在操作過(guò)程中，保持無(wú)菌物品與無(wú)菌區(qū)域不被微生物污染的技術(shù)。（3）舉例說(shuō)明通過(guò)

調(diào)整培養(yǎng)基的配方可有目的地培養(yǎng)某種微生物。

（4）概述平板劃線法和稀釋涂布平板法是實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行微生物分離和純化的常用方法。（5）概述

稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法。

考點(diǎn)一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)

基礎(chǔ)?精細(xì)梳理夯實(shí)必備知識(shí)

1.培養(yǎng)基的配制

⑴培養(yǎng)基的概念、類型和用途

年、人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求.配制

里步出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)

按物理「液體培養(yǎng)基:工業(yè)生產(chǎn)

性質(zhì)分工..培養(yǎng)基:微生物分離、鑒定、活

匕菌計(jì)數(shù)

（@）加凝固劑：瑯脂

「選擇培養(yǎng)基：富集、分離出特定的微

按用生物

途分

L鑒別培養(yǎng)基：鑒別不同種類的微生物

用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其

遮爹一代謝物

⑵培養(yǎng)基的配方

①主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、碳遮、氮源、無(wú)機(jī)鹽。

②其他條件：pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧氣。如下表：

微生物乳酸菌霉菌細(xì)菌厭氧微生物

特殊需添加維生pH調(diào)至酸pH調(diào)至中性

無(wú)氧

求素性或弱堿性

2.無(wú)菌技術(shù)

（D目的獲得純凈的培養(yǎng)物。

⑵關(guān)鍵防止雜菌污染。

⑶常用方法消毒和滅菌。

(4)無(wú)菌技術(shù)的主要方法及適用對(duì)象(連一連)

［措施;:操作對(duì)象;［主要方法)

/.培養(yǎng)基\1①灼燒滅菌

/n.接種環(huán)

a.消毒一/②干熱滅菌

力操作者、\<③巴氏消毒

、雙手x

玄④紫外線消毒

b.滅菌/一仁!￥.培養(yǎng)皿〈，

飛⑤化學(xué)藥物消毒

、V.無(wú)菌室產(chǎn)

7⑥濕熱滅菌

'vi.牛奶/

3.微生物的純培養(yǎng)

(1)概念辨析

接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的

［培養(yǎng)物］

"含特定種類微生物的群體

1純￡養(yǎng)物)?由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體

分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面

［菌落］?或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見(jiàn)的、有二

定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體

［純/養(yǎng)］

?獲得純培養(yǎng)物的過(guò)程

(2)酵母菌純培養(yǎng)的操作步驟

|配制|稱取去皮的馬鈴薯200g、切塊一加水1000mL、

|培養(yǎng)基|加熱煮沸f紗布過(guò)濾一加20g葡萄糖一加

15~20g瓊脂f用蒸儲(chǔ)水定容至1000mL

貢丫a.培養(yǎng)基滅菌：濕熱滅菌(高壓蒸汽滅菌)法

匐fb.培養(yǎng)皿滅菌：干熱滅菌法

條件：待培養(yǎng)基冷卻至5()七左右時(shí)，在酒精燈

火焰附近倒平板

b.操作步眺：

c.I、u、m中的滅菌方法是灼燒滅菌

d.N中的操作需要等待培養(yǎng)基冷卻凝固后才能進(jìn)行

接

種方法：平板劃線法

和

分原理：通過(guò)接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線

離

的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培

養(yǎng)基的表面。經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分

離得到單菌落

培方法：將接種后的平板和一個(gè)未接種的平板倒

養(yǎng)置,放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

酵

母條件：組七左右

菌

時(shí)間：24-48h

I工情境推理

下圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖，請(qǐng)分析并回答下列問(wèn)題:

⑴獲得圖A效果和圖B效果的接種方法分別是什么？。

⑵某同學(xué)在純化土壤中的細(xì)菌時(shí)，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成了一片，最可能的原因是什么？

應(yīng)當(dāng)怎樣操作才可避免此種現(xiàn)象？

⑶接種操作為什么一定要在火焰附近進(jìn)行？

提示（1）獲得圖A效果的接種方法為稀釋涂布平板法，獲得圖B效果的接種方法為平板劃線

法

⑵最可能的原因是菌液濃度過(guò)高或劃線時(shí)在劃下一區(qū)域前未將接種環(huán)灼燒滅菌；采取的措施

是增大稀釋倍數(shù)或每次劃新區(qū)域前先將接種環(huán)灼燒滅菌

⑶火焰附近存在著無(wú)菌區(qū)域

-重點(diǎn)透析

1.倒平板的操作步驟

名師解讀

①培養(yǎng)基要冷卻到50c左右時(shí)開(kāi)始倒平板。溫度過(guò)高會(huì)燙手，過(guò)低培養(yǎng)基又會(huì)凝固。②要使

錐形瓶的瓶口通過(guò)酒精燈火焰。通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。③倒平板時(shí)，

要用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，不要完全打開(kāi)，以免雜菌污染培

養(yǎng)基。④平板冷凝后，要將平板倒置。因?yàn)槠桨謇淠?，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，平板倒置后，既

可避免培養(yǎng)基表面的水分過(guò)快地?fù)]發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。

2.平板劃線法操作步驟

①將接種⑧將平板倒置,

環(huán)放在火放入培養(yǎng)箱中

焰上灼燒”培養(yǎng)

直到接種

環(huán)的金屬⑦灼燒接種環(huán),

絲燒紅待其冷卻后，從

第一次劃線的

末端開(kāi)始作第

二次劃線。重

復(fù)以上操作，作

第三、四、五次

劃線。注意不要

將最后一次的

劃線與第一次

的劃線相連

⑥在火焰附

近將皿蓋打

開(kāi)一條縫隙,

，用接種環(huán)在

培養(yǎng)基表面

迅速劃三至

五條平行線,

蓋上皿蓋

④在火焰

附近用接⑤將試管口

種環(huán)蘸取、通過(guò)火焰，

一環(huán)菌液并塞上棉塞

(1)實(shí)驗(yàn)成功關(guān)鍵點(diǎn)

第一次劃線及每次劃線之前都需灼燒接

種環(huán)滅菌，劃線操作結(jié)束仍需灼燒接

種環(huán)

灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后才能伸

入菌液，以免溫度太高殺死菌種

在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，總

是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線,這樣才

能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而

逐步減少，最終得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而

II來(lái)的菌落

t劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連

劃線用力大小要適當(dāng)，防止用力過(guò)大將

培養(yǎng)基劃破

（2）平板劃線法操作中幾次灼燒接種環(huán)的目的

----①----——②—

第一次劃線每次劃線前最后一次劃

前灼燒一灼燒一線結(jié)束灼燒

殺死上次劃線殺死接種環(huán)上

避免接種環(huán)上結(jié)束后接種環(huán)殘留的菌種，

可能存在的微上殘留的菌種,避免微生物污

生物污染培養(yǎng)使下次劃線的染環(huán)境和感染

物菌種均來(lái)自上操作者

次劃線的末端

I典例?精心深研提升學(xué)科素養(yǎng)

考向1結(jié)合培養(yǎng)基的配制和無(wú)菌技術(shù)，考查科學(xué)思維

1.（2024.廣東深圳聯(lián)考）某同學(xué)將5個(gè)手指尖在貼有“洗手前”標(biāo)簽的固體培養(yǎng)基上輕輕按一

下，然后用肥皂將該手洗干凈，再將5個(gè)手指尖在貼有“洗手后”標(biāo)簽的同種培養(yǎng)基上輕輕按

一下。將這兩個(gè)培養(yǎng)皿放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

24h后，發(fā)現(xiàn)貼有“洗手后”標(biāo)簽的培養(yǎng)皿中菌落較少。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.這個(gè)實(shí)驗(yàn)中需要進(jìn)行滅菌處理的材料用具有培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基等

B."將手指尖在培養(yǎng)基上輕輕按一下”相當(dāng)于微生物培養(yǎng)中的接種

C.從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，洗手后的操作不會(huì)污染培養(yǎng)基

D.培養(yǎng)基中的氮元素是微生物合成蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)所必需的

答案C

解析從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，貼有“洗手后”標(biāo)簽的培養(yǎng)皿中菌落較少，并不能說(shuō)明洗手后的操作不

會(huì)污染培養(yǎng)基，C錯(cuò)誤。

2.（2024.西安高新一中模擬）在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物，需要人為地為微生物提供適宜的營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境

條件。下列關(guān)于培養(yǎng)基配制的說(shuō)法正確的是（）

A.培養(yǎng)基中需要碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽齊全

B.培養(yǎng)基中必須添加瓊脂

C.培養(yǎng)基制備中均需調(diào)節(jié)pH至酸性

D.無(wú)論哪種培養(yǎng)基均需要滅菌

答案D

解析培養(yǎng)固氮微生物時(shí)，培養(yǎng)基中可以不添加氮源，A錯(cuò)誤；只有配制固體（或半固體）培養(yǎng)

基時(shí)才需要添加瓊脂，B錯(cuò)誤；適宜的pH是微生物生長(zhǎng)的必需條件，因此配制過(guò)程中需要調(diào)

節(jié)pH,培養(yǎng)霉菌時(shí)一般需要將pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，一般需要將培養(yǎng)基調(diào)至中性或弱

堿性，C錯(cuò)誤；培養(yǎng)基均需要滅菌，D正確。

考向2結(jié)合微生物的純培養(yǎng)，考查科學(xué)探究能力

3.（2024.東北育才中學(xué)模擬）下列關(guān)于“酵母菌的純培養(yǎng)”實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的是（）

A.馬鈴薯?yè)v爛后的濾液中含有酵母菌生長(zhǎng)所需的多種營(yíng)養(yǎng)成分

B.接種環(huán)滅菌時(shí)，頂端的環(huán)和環(huán)后的部分柄均需通過(guò)火焰灼燒

C.平板劃線時(shí)，接種環(huán)應(yīng)在固體培養(yǎng)基表面輕輕地連續(xù)劃線

D.完成平板劃線后，應(yīng)將平板立刻倒置培養(yǎng)以免污染培養(yǎng)基

答案D

解析馬鈴薯?yè)v爛后的濾液中含有酵母菌生長(zhǎng)所需的多種營(yíng)養(yǎng)成分，如碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽等,

A正確；接種環(huán)滅菌時(shí)，頂端的環(huán)和環(huán)后的部分柄均需通過(guò)火焰灼燒，防止雜菌的污染，B正

確；平板劃線時(shí)，接種環(huán)應(yīng)在固體培養(yǎng)基表面輕輕地連續(xù)劃線，防止劃破培養(yǎng)基表面，影響實(shí)

驗(yàn)結(jié)果的觀察，C正確；完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，再將平板倒置培養(yǎng)，D錯(cuò)誤。

4.（2024.廣州聯(lián)考）為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種分解尿素的細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。

下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.為保證無(wú)菌操作，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌

B.倒平板后需間歇晃動(dòng)，以保證表面平整

C.圖中I、II區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從HI區(qū)挑取單菌落

D.該實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)了單菌落，能達(dá)到菌種純化的目的

答案B

解析倒平板后無(wú)需晃動(dòng)，B錯(cuò)誤。

考點(diǎn)二微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)

I基礎(chǔ)?精細(xì)梳理夯實(shí)必備知識(shí)

1.選擇培養(yǎng)基

在微生物學(xué)中，允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，

?同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基

篩選土壤中分解尿素的細(xì)菌的選擇培養(yǎng)基是以

尿素為唯一的氮源的

舉

例,將培養(yǎng)基放在直溫環(huán)境中培養(yǎng)，可分離出耐高

溫的微生物

名師解讀

常見(jiàn)選擇培養(yǎng)基舉例

①缺少氮源的培養(yǎng)基可以篩選能利用大氣中N2的微生物。

②含青霉素的培養(yǎng)基可淘汰細(xì)菌，篩選出真菌。

③無(wú)有機(jī)碳源的培養(yǎng)基可篩選出自養(yǎng)微生物。

2.稀釋涂布平板法

(1)系列稀釋操作

取1mL上清液加入盛有9mL無(wú)菌水的試管中，依次等比稀釋。

稀釋液稀釋液稀釋液稀釋液稀釋液稀釋液

(2)涂布平板操作

取().1mL菌液，滴加到

培養(yǎng)基表面。

用涂布器將菌液均勻地涂將涂布器放在火焰上灼

布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可燒，待酒精燃盡、涂布

轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使涂布均勻。器冷卻后，再進(jìn)行涂布,

3.微生物的數(shù)量測(cè)定

(1)利用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)

①為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)為30?300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并且在同一稀釋度下，應(yīng)

至少對(duì)、個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，并求平均值。

②統(tǒng)計(jì)結(jié)果往往比實(shí)際值少。

(2)利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)

①需用特定的細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板。

②統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和。

4.土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)操作

(1)實(shí)驗(yàn)原理

①土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗?/p>

分離們能合成麻酶

原理②配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠在該

培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌

(2)操作步驟

從酸堿度接近中性且潮濕的土壤中取樣。

土壤

-先鏟去表層土，在距地表3~8cm的土壤

取樣

層取樣

選用一定稀釋范圍的稀釋液進(jìn)行培養(yǎng)，

樣品段保證獲得菌落數(shù)在3的平板進(jìn)行

稀釋

計(jì)數(shù)

不同種類的微生物，往往需要不同的

培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間

每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目,選取菌落

數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果

(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評(píng)價(jià)

5.分解纖維素的微生物的分離

(1)分離方法與原理

③g)-利用富含纖維素的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)

!因?yàn)榕囵B(yǎng)基中含有豐富的纖維素，所以能夠

(S)-分解纖維素的微生物具有更多的生存機(jī)會(huì)而

大量繁殖

(2)纖維素分解菌的培養(yǎng)基成分及鑒定原理

以纖維素為唯一碳源;加入剛果紅染料

?y的成5分*?■——

1

剛果紅紅色復(fù)合物k紅色消失，出現(xiàn)

鑒定一《纖維1素透明圈

原理,

纖維素酶一纖維素分解菌

■考點(diǎn)速覽

(1)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板既可用于酵母菌的數(shù)量測(cè)定，也可用于細(xì)菌的數(shù)量測(cè)定。(2023?江蘇卷,7D)(X)

提示血細(xì)胞計(jì)數(shù)板不適用于微小的細(xì)菌計(jì)數(shù)。

⑵某同學(xué)欲分離產(chǎn)月尿酶菌，可在選擇培養(yǎng)基中添加尿素作為唯一氮源。(2022.江蘇卷，3B)(V)

(3)稀釋涂布平板法和平板劃線法均能得到單菌落，都可用于細(xì)菌計(jì)數(shù)。(2021.浙江6月選考，

17C)(X)

提示平板劃線法只能用于細(xì)菌分離，不能用于細(xì)菌計(jì)數(shù)。

(4)利用尿素固體培養(yǎng)基可迅速殺死其他微生物，而保留利用尿素的微生物。(2020.浙江7月選

考，19A)(X)

提示尿素固體培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，以尿素為唯一氮源，不能利用尿素的微生物因缺乏可

利用的氮源而不能在此培養(yǎng)基上生存，故尿素固體培養(yǎng)基的作用并不是迅速殺死這些微生物。

■情境推理

1.為什么只有能分解尿素的微生物才能在尿素固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)？

提示分解尿素的微生物能合成腺酶，而腺酶可將尿素分解成氨，從而為微生物提供氮源

2.在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌的原因是

提示生物與環(huán)境具有相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對(duì)較高,

從這種土樣中獲得目的微生物的概率要高于普通環(huán)境

3.在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅對(duì)纖維素分解菌進(jìn)行選擇形成透明圈的原因是

提示剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物，而當(dāng)纖維素被纖維素分解菌分解后，復(fù)合物就無(wú)法形

成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以這些菌為中心的透明圈

典例?精心深研提升學(xué)科素養(yǎng)

考向1結(jié)合微生物的選擇培養(yǎng)，考查科學(xué)思維

1.（2024.廣東佛山模擬）野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株

無(wú)法合成某種氨基酸，只能在完全培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，下圖為純化某氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株的部

分流程圖，①②③④代表培養(yǎng)基，A、B、C表示操作步驟，D、E為菌落。下列敘述錯(cuò)誤的是

()

無(wú)菌落

A.圖中①②④為基本培養(yǎng)基，③為完全培養(yǎng)基

B.A操作的目的是提高突變頻率，增加突變株的數(shù)量

C.B的正確操作是用涂布器把菌液均勻地涂布在②表面

D.經(jīng)C過(guò)程原位影印及培養(yǎng)后，可從④中挑取D進(jìn)行純化培養(yǎng)

答案A

解析野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株無(wú)法合成某種氨

基酸，只能在完全培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，根據(jù)題圖可知，圖中①②④為完全培養(yǎng)基，③為基本培養(yǎng)基,

A錯(cuò)誤；紫外線可以提高突變的頻率，從而增加突變株的數(shù)量，B正確；B的正確操作是將菌

液滴加到培養(yǎng)基表面，再用涂布器將菌液均勻地涂布在②表面，C正確；從圖中可知，D在基

本培養(yǎng)基中無(wú)法生長(zhǎng)，在完全培養(yǎng)基中可生長(zhǎng)，說(shuō)明D是氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株菌落，故

經(jīng)C過(guò)程原位影印及培養(yǎng)后，可從④中挑取D菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)，D正確。

2.（2024.江西新余調(diào)研）耐高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中有很大的實(shí)用性。嗜熱菌可以在高溫

環(huán)境中生存，其產(chǎn)生的淀粉酶最適溫度較高。篩選能產(chǎn)生耐高溫淀粉酶的嗜熱菌過(guò)程如圖1

所示，其中I號(hào)培養(yǎng)基用碘液處理的結(jié)果如圖2所示。下列敘述正確的是（）

嗜熱菌樣品甲乙培養(yǎng)基培養(yǎng)基丙

圖1

周圍顯藍(lán)色

的菌落

(°。、松鼠周圍不顯藍(lán)

色的菌落

圖2

A.圖2中周圍不顯藍(lán)色的菌落含有所需菌種

B.倒平板后對(duì)培養(yǎng)皿進(jìn)行高壓蒸汽滅菌

C.淀粉是圖2所示固體培養(yǎng)基的唯一碳源

D.甲、乙試管中均為選擇培養(yǎng)基

答案A

解析淀粉與碘液反應(yīng)呈現(xiàn)藍(lán)色，能分解淀粉的嗜熱菌在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)可釋放淀粉酶，分解

培養(yǎng)基中的淀粉，故周圍不顯藍(lán)色的菌落含有所需菌種，A正確；倒平板前培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基都

已滅菌處理，因此倒平板后不需要對(duì)培養(yǎng)皿再進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，B錯(cuò)誤；據(jù)圖2可知，培養(yǎng)

基上出現(xiàn)周圍顯藍(lán)色的菌落和周圍不顯藍(lán)色的菌落，因此淀粉可能不是圖2所示固體培養(yǎng)基的

唯一碳源，C錯(cuò)誤；圖1中①過(guò)程是梯度稀釋，②過(guò)程是用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種，因此甲、

乙試管主要是對(duì)嗜熱菌樣品進(jìn)行稀釋，不具備選擇作用，不屬于選擇培養(yǎng)基，D錯(cuò)誤。

考向2結(jié)合微生物的分離與計(jì)數(shù)，考查科學(xué)思維

3.(2024?河北石家莊調(diào)研)北京冬奧會(huì)食堂讓各國(guó)運(yùn)動(dòng)健兒愛(ài)上中國(guó)味道，其餐余垃圾在垃圾集

中點(diǎn)采用生化+霧化+膜過(guò)濾技術(shù)處理后，可以達(dá)到無(wú)二次污染的標(biāo)準(zhǔn)。為篩選對(duì)抗生素有抗

性、高效降解淀粉的微生物，提高“生化”處理的效率，研究人員將餐余垃圾機(jī)械化處理后加

入裝有無(wú)菌水的錐形瓶中制備餐余垃圾浸出液，然后進(jìn)行如圖所示操作，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是

培養(yǎng)出

冗處理后一^大量高

效降解

---)XJA淀粉的

餐余垃圾養(yǎng)最

微生物

浸出液

A.餐余垃圾浸出液在接種前通常需要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌處理

B.可用稀釋涂布平板法將餐余垃圾浸出液接種在X培養(yǎng)基上

C.X培養(yǎng)基含有淀粉和抗生素，Y培養(yǎng)基是不含瓊脂的液體培養(yǎng)基

D.圖中高效降解淀粉的微生物是⑤，可根據(jù)菌落特征初步判斷微生物類型

答案A

解析若對(duì)餐余垃圾浸出液進(jìn)行高壓蒸汽滅菌會(huì)殺死菌種，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗，A錯(cuò)誤；微生物的

接種方法包括稀釋涂布平板法和平板劃線法，可用稀釋涂布平板法將餐余垃圾浸出液接種在X

培養(yǎng)基上，B正確；結(jié)合題意可知，本實(shí)驗(yàn)的目的是篩選對(duì)抗生素有抗性、高效降解淀粉的微

生物，故圖中X培養(yǎng)基以淀粉為唯一碳源，且應(yīng)添加抗生素起選擇作用；Y培養(yǎng)基是液體培

養(yǎng)基，進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，其中不含凝固劑瓊脂，C正確；淀粉遇碘變藍(lán)色，加入碘液后，能夠分

解淀粉的菌落周圍出現(xiàn)透明圈，圖中能高效降解淀粉的微生物是⑤（透明圈最大），不同微生物

形成的菌落特征不同，可根據(jù)菌落特征初步判斷微生物類型，D正確。

4.（2024.廣東湛江模擬）自生固氮菌是土壤中能獨(dú)立進(jìn)行固氮的細(xì)菌?？蒲腥藛T進(jìn)行了土壤中自

生固氮菌的分離和固氮能力測(cè)定的研究，部分實(shí)驗(yàn)流程如圖。已知步驟④獲得的3個(gè)平板的菌

落數(shù)分別為90、95、100,對(duì)照組平板為0。下列相關(guān)敘述正確的是（）

擴(kuò)大

培養(yǎng)

固氮

鬻能力

鑒定

log無(wú)菌水懸浮液無(wú)菌水化培養(yǎng)

A.步驟②振蕩20min的目的是擴(kuò)大菌種數(shù)量，屬于選擇培養(yǎng)

B.步驟④一⑤使用接種環(huán)劃線接種，使用前需要灼燒滅菌

C.lg土壤中平均自生固氮菌數(shù)約為9.5X106個(gè)

D.所用培養(yǎng)基應(yīng)加入碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、水和瓊脂

答案C

解析步驟②需充分振蕩的主要目的是使土壤中的微生物充分釋放到無(wú)菌水中，A錯(cuò)誤；由題

圖可知，步驟⑤平板中的菌落分布均勻，故步驟④一⑤所用的接種工具是涂布器，接種方法是

稀釋涂布平板法，B錯(cuò)誤；1g土壤中平均自生固氮菌數(shù)約為（90+95+100）/3+0.1X1（）4=

9.5X106（個(gè)），C正確；本實(shí)驗(yàn)需要分離的自生固氮菌可以利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈?，故?/p>

用培養(yǎng)基中不能加入氮源，D錯(cuò)誤。

跳出題海

兩種純化細(xì)菌的方法的比較

項(xiàng)目平板劃線法稀釋涂布平板法

將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，

通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表然后將不同稀釋度的菌液分別涂

面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)

純化原理種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。行培養(yǎng)。稀釋度足夠高時(shí)，聚集

經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得在一起的微生物將被分散成單個(gè)

到單菌落細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成

單菌落

主要步3聚平板劃線操作系列稀釋操作和涂布平板操作

接種工具接種環(huán)涂布器

平板示意圖

■關(guān)鍵?真題必刷

1.（2023?江蘇卷，7）下列關(guān)于細(xì)菌和酵母菌實(shí)驗(yàn)的敘述正確的是（）

A.通常酵母菌培養(yǎng)基比細(xì)菌培養(yǎng)基有更高的碳氮比

B.通常細(xì)菌的生長(zhǎng)速度比酵母菌快，菌落比酵母菌菌落大

C.通常細(xì)菌培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌法滅菌，酵母菌培養(yǎng)基用過(guò)濾除菌法除菌

D.血細(xì)胞計(jì)數(shù)板既可用于酵母菌的數(shù)量測(cè)定，也可用于細(xì)菌的數(shù)量測(cè)定

答案A

解析微生物種類不同，所需營(yíng)養(yǎng)物的碳氮比也不同，具有高碳氮比的生物需要高碳氮比的營(yíng)

養(yǎng)物，反之則低；酵母菌的碳氮比高于細(xì)菌，所以培養(yǎng)酵母菌的培養(yǎng)基需要更高的碳氮比，A

正確；通常細(xì)菌的生長(zhǎng)速度比酵母菌快，但形成的菌落不一定大于酵母菌菌落，這與細(xì)菌種類

有關(guān)，B錯(cuò)誤；微生物培養(yǎng)基通常都采用高壓蒸汽滅菌法滅菌，C錯(cuò)誤；血細(xì)胞計(jì)數(shù)板適用于

酵母菌的計(jì)數(shù)，不適用于微小的細(xì)菌計(jì)數(shù)，D錯(cuò)誤。

2.（2023?湖南卷，5）食品保存有干制、腌制、低溫保存和高溫處理等多種方法。下列敘述錯(cuò)誤

的是（）

A.干制降低食品的含水量，使微生物不易生長(zhǎng)和繁殖，食品保存時(shí)間延長(zhǎng)

B.腌制通過(guò)添加食鹽、糖等制造高滲環(huán)境，從而抑制微生物的生長(zhǎng)和繁殖

C.低溫保存可抑制微生物的生命活動(dòng)，溫度越低對(duì)食品保存越有利

D.高溫處理可殺死食品中絕大部分微生物，并可破壞食品中的酶類

答案C

解析干制能降低食品中的含水量，使微生物不易生長(zhǎng)和繁殖，進(jìn)而延長(zhǎng)食品保存時(shí)間，A正

確；腌制通過(guò)添加食鹽、糖等制造高滲環(huán)境，從而抑制微生物的生長(zhǎng)和繁殖，B正確；低溫保

存可以抑制微生物的生命活動(dòng)，但不是溫度越低越好，一般食品保存溫度為零上低溫，C錯(cuò)誤;

高溫處理可殺死食品中絕大部分微生物，并通過(guò)破壞食品中的酶類，降低酶類對(duì)食品有機(jī)物的

分解，有利于食品保存，D正確。

3.（2022.湖北卷，5）滅菌、消毒、無(wú)菌操作是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)的操作。下列敘述正確的是（）

A.動(dòng)、植物細(xì)胞DNA的提取必須在無(wú)菌條件下進(jìn)行

B.微生物、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染

C.為防止蛋白質(zhì)變性，不能用濕熱滅菌法對(duì)牛肉膏蛋白腺培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌

D.可用濕熱滅菌法對(duì)實(shí)驗(yàn)中所使用的微量離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等進(jìn)行滅菌

答案D

解析動(dòng)、植物細(xì)胞DNA的提取不需要在無(wú)菌條件下進(jìn)行，A錯(cuò)誤；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中需添

加一定量的抗生素以防止污染，保證無(wú)菌環(huán)境，而微生物的培養(yǎng)一般不能加入抗生素，B錯(cuò)誤;

一般用濕熱滅菌法對(duì)牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，以防止雜菌污染，C錯(cuò)誤；可用濕熱滅菌

法對(duì)實(shí)驗(yàn)中所使用的微量離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等進(jìn)行滅菌，以防止雜菌污染，D正確。

4.（2023?廣東卷，10）研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的

嗜熱菌。根據(jù)堆肥溫度變化曲線（如圖）和選擇培養(yǎng)基篩選原理來(lái)判斷，下列最可能篩選到目標(biāo)

菌的條件組合是（）

0()123456

堆肥時(shí)間/天

A.A點(diǎn)時(shí)取樣、尿素氮源培養(yǎng)基

B.3點(diǎn)時(shí)取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基

C.3點(diǎn)時(shí)取樣、蛋白腺氮源培養(yǎng)基

DC點(diǎn)時(shí)取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基

答案D

解析研究目的是篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，因此目標(biāo)菌具有既

要耐高溫，又要能夠高效降解角蛋白的功能，所以在C點(diǎn)時(shí)取樣，并且用角蛋白氮源培養(yǎng)基

進(jìn)行選擇培養(yǎng)，D正確。

5.（2022.江蘇卷，3）下列是某同學(xué)分離產(chǎn)月尿酶菌的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，不合理的是（）

A.選擇農(nóng)田或公園土壤作為樣品分離目的菌株

B.在選擇培養(yǎng)基中需添加尿素作為唯一氮源

C.適當(dāng)稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落

D.可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產(chǎn)胭酶菌株

答案D

解析農(nóng)田或公園土壤中含有較多的含腺酶的微生物，A正確；為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，

配制的培養(yǎng)基應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源，產(chǎn)腺酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)，B正確；當(dāng)樣

品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，C正確；

在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的腺酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的pH升高，

酚紅指示劑將變紅，因此在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，能對(duì)分離的菌種做

進(jìn)一步鑒定，D錯(cuò)誤。

6.（2023?山東卷，15）平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說(shuō)法正確的是（）

A.不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)

B.平板涂布時(shí)涂布器使用前必須進(jìn)行消毒

C.接種后未長(zhǎng)出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄

D.利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成服酶的微生物

答案D

解析不含氮源的平板可用于固氮菌的培養(yǎng)，A錯(cuò)誤；平板涂布時(shí)涂布器使用前必須滅菌，B

錯(cuò)誤；使用后的培養(yǎng)基即使未長(zhǎng)出菌落也要在丟棄前進(jìn)行滅菌處理，不能直接丟棄，以免污染

環(huán)境，C錯(cuò)誤；腺酶可以催化尿素分解，在以尿素為唯一氮源的平板上，能合成腺酶的微生物

可以分解尿素獲得氮源而進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖，不能合成腺酶的微生物因缺乏氮源而無(wú)法生長(zhǎng)，因此

以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成腺酶的微生物，D正確。

7.（2023?全國(guó)乙卷，37改編）某研究小組設(shè)計(jì)了一個(gè)利用作物秸稈生產(chǎn)燃料乙醇的小型實(shí)驗(yàn)。其

主要步驟是：先將粉碎的作物秸稈堆放在底部有小孔的托盤中，噴水浸潤(rùn)、接種菌T,培養(yǎng)一

段時(shí)間后，再用清水淋洗秸稈堆（清水淋洗時(shí)菌T不會(huì)流失），在裝有淋洗液的瓶中接種酵母菌,

進(jìn)行乙醇發(fā)酵（酒精發(fā)酵）。實(shí)驗(yàn)流程如圖所示。

種菌T清水淋洗

回答下列問(wèn)題：

（1）在粉碎的秸稈中接種菌T,培養(yǎng)一段時(shí)間后發(fā)現(xiàn)菌T能夠?qū)⒔斩捴械睦w維素大量分解，其

原因是O

⑵采用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)酵母菌，可以用淋洗液為原料制備培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中還需要加入氮源

等營(yíng)養(yǎng)成分，氮源的主要作用是（答出1點(diǎn)即可）。

⑶將酵母菌接種到滅菌后的培養(yǎng)基中，擰緊瓶蓋，置于適宜溫度下培養(yǎng)、發(fā)酵。擰緊瓶蓋的

主要目的是。但是在酵母菌發(fā)酵過(guò)程中，還需適時(shí)擰松瓶蓋，原因是

發(fā)酵液中的乙醇可用溶液檢測(cè)。

⑷本實(shí)驗(yàn)收集的淋洗液中的可以作為酵母菌生產(chǎn)乙醇的原料。與以糧食為原料發(fā)酵

生產(chǎn)乙醇相比，本實(shí)驗(yàn)中乙醇生產(chǎn)方式的優(yōu)點(diǎn)是

答案（1）菌T能夠產(chǎn)生纖維素酶，纖維素酶可將纖維素分解

（2）為酵母菌蛋白質(zhì)合成提供原料

（3）為酵母菌進(jìn)行無(wú)氧呼吸產(chǎn)生乙醇創(chuàng)造無(wú)氧條件乙醇發(fā)酵有CO2產(chǎn)生，擰松瓶蓋可以放出

CO2,避免因瓶?jī)?nèi)氣壓過(guò)大引起危險(xiǎn)酸性重銘酸鉀

（4）葡萄糖節(jié)約糧食，實(shí)現(xiàn)了廢物利用

解析（1）菌T能夠?qū)⒗w維素變成酵母菌發(fā)酵所需的葡萄糖，利用的是其能夠產(chǎn)生分解纖維素

的酶，能夠高效催化纖維素分解。（2）N元素是構(gòu)成體內(nèi)一些物質(zhì)的必需元素，如氨基酸、核

甘酸等。（3）擰緊瓶蓋的主要目的是營(yíng)造無(wú)氧條件。酵母菌無(wú)氧呼吸產(chǎn)生乙醇的同時(shí)還會(huì)產(chǎn)生

二氧化碳，擰松瓶蓋可以釋放二氧化碳，防止容器壓力過(guò)大引起危險(xiǎn)。酸性條件下重鋁酸鉀溶

液可以用來(lái)鑒定乙醇。（4）纖維素分解產(chǎn)生的葡萄糖可以用來(lái)作為發(fā)酵原材料，從社會(huì)責(zé)任感

角度和實(shí)際生產(chǎn)角度出發(fā)分析即可，如節(jié)約糧食，生產(chǎn)成本低，實(shí)現(xiàn)了廢物利用，保護(hù)環(huán)境等。

限時(shí)強(qiáng)化練

（時(shí)間：40分鐘）

【對(duì)點(diǎn)強(qiáng)化】

考點(diǎn)一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)

1.（2024.東北育才中學(xué)）地衣芽抱桿菌具有調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道微生態(tài)平衡，增加動(dòng)物機(jī)體抗病能力的

功能。仔兔飼喂地衣芽抱桿菌20?40天后，其免疫器官生長(zhǎng)發(fā)育迅速，血漿中T淋巴細(xì)胞值

較對(duì)照組高。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.培養(yǎng)地衣芽抱桿菌時(shí)，需要將培養(yǎng)基調(diào)至酸性

B.可用液體培養(yǎng)基對(duì)地衣芽抱桿菌擴(kuò)大培養(yǎng)

C.使用后的培養(yǎng)基在丟棄前要經(jīng)過(guò)滅菌處理

D.地衣芽抱桿菌改變了仔兔腸道菌群的結(jié)構(gòu)

答案A

解析地衣芽抱桿菌屬于細(xì)菌，其培養(yǎng)基一般呈中性或弱堿性，A錯(cuò)誤；液體培養(yǎng)基可使菌種

與培養(yǎng)液更好地接觸，有利于菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)，B正確；使用后的培養(yǎng)基在丟棄前要經(jīng)過(guò)滅菌

處理，防止對(duì)環(huán)境造成污染，C正確；地衣芽抱桿菌能調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道微生態(tài)平衡，改變了仔兔

腸道菌群的結(jié)構(gòu)，D正確。

2.（2024.山東濰坊模擬）金黃色葡萄球菌是一種常見(jiàn)的病原菌，在血平板（完全培養(yǎng)基中添加適量

血液）上生長(zhǎng)時(shí)，可破壞菌落周圍的紅細(xì)胞，使其褪色。某研究小組通過(guò)稀釋涂布平板法測(cè)定

了某處土壤中金黃色葡萄球菌數(shù)量，相關(guān)說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）

A.從功能上分類，血平板屬于選擇培養(yǎng)基

B.在制作血平板時(shí)需要在平板冷卻后加入血液，防止高溫破壞血細(xì)胞

C.待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后應(yīng)倒置培養(yǎng)，防止水分過(guò)度蒸發(fā)

D.實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低

答案A

解析根據(jù)題干信息可知，血平板屬于鑒別培養(yǎng)基，A錯(cuò)誤。

3.（2024.成都七中診斷）下圖為微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的有關(guān)操作，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

①把接種工②將接種工具③接種

具灼燒至在火焰附近

變紅冷卻

A.步驟①中，需將接種工具灼燒至變紅，以殺滅雜菌

B.步驟②中，將接種工具冷卻時(shí)不宜距酒精燈火焰太遠(yuǎn)

C.圖中接種方法的目的是使菌種逐漸稀釋，經(jīng)培養(yǎng)后獲得單個(gè)菌落

D.接種后應(yīng)將培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)，培養(yǎng)后可以根據(jù)結(jié)果進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)

答案D

解析步驟①中，接種前灼燒接種環(huán)至變紅，目的是殺滅接種環(huán)上可能引起污染的微生物，A

正確；步驟②中，將接種工具冷卻時(shí)不宜距酒精燈火焰太遠(yuǎn)，防止受到雜菌污染，B正確；圖

中所示的接種方法是平板劃線法，目的是使接種的菌種逐漸稀釋，經(jīng)培養(yǎng)后獲得由單個(gè)菌體繁

殖而來(lái)的菌落，C正確；圖示的平板劃線法不能用于微生物的計(jì)數(shù)，D錯(cuò)誤。

4.（2024.深河高中質(zhì)檢）下圖為實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)和純化酵母菌過(guò)程中的部分操作步驟，下列說(shuō)法錯(cuò)誤

的是（）

A.①步驟使用的培養(yǎng)基是已經(jīng)滅菌的培養(yǎng)基

B.①②③步驟操作時(shí)需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行

C.③到④的過(guò)程中，接種環(huán)共灼燒了5次

D.④步驟操作時(shí)，不能將第1區(qū)和第5區(qū)的劃線相連

答案C

解析接種環(huán)在每次劃線前和接種結(jié)束后都要通過(guò)灼燒來(lái)滅菌，所以③到④的過(guò)程中5次劃線

操作前都要灼燒滅菌，接種結(jié)束后還需灼燒滅菌1次，防止造成污染，由此可見(jiàn)，③到④的過(guò)

程中共需灼燒接種環(huán)6次，C錯(cuò)誤。

考點(diǎn)二微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)

5.（2024.安徽淮北調(diào)研）平板劃線法和稀釋涂布平板法是分離并純化微生物的常用方法。下列相

關(guān)敘述正確的是（）

A.平板劃線法分離微生物前一般需要將菌液進(jìn)行梯度等比稀釋

B.細(xì)菌的純化培養(yǎng)通常比霉菌需要更高的溫度和更少的培養(yǎng)時(shí)間

C.使用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的微生物數(shù)量是活菌和死菌的總和

D.接種后的平板放置在搖床上倒置培養(yǎng)，防止雜菌的污染

答案B

解析平板劃線法分離微生物前一般不需要將菌液進(jìn)行梯度等比稀釋，A錯(cuò)誤；細(xì)菌的培養(yǎng)溫

度一般為30?37℃,霉菌的培養(yǎng)溫度一般為25?28℃,B正確；使用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的

微生物數(shù)量是活菌的數(shù)量，不包括死菌的數(shù)量，C錯(cuò)誤；接種后的平板放置在恒溫培養(yǎng)箱中培

養(yǎng)，防止雜菌的污染，倒置培養(yǎng)的目的是防止皿蓋上的冷凝水滴落到平板表面，同時(shí)也能防止

培養(yǎng)基中水分過(guò)快揮發(fā)，D錯(cuò)誤。

6.（2024.江蘇南京、鹽城模擬）為了解病原微生物對(duì)四種抗生素的敏感程度，某研究小組進(jìn)行了

相關(guān)藥敏實(shí)驗(yàn)，圖1為部分實(shí)驗(yàn)器材。將含有相同濃度的抗生素I?IV四個(gè)大小相同的紙片分

別貼在長(zhǎng)滿測(cè)試菌的平板上，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2。下列相關(guān)敘述正確的是（）

4\^/v”含做抗中生素

①②③o1④'近女/7的菌落

圖1圖2

A.為獲得長(zhǎng)滿測(cè)試菌的平板，需要使用圖1中器材①②③

B.圖2中II形成的抑菌圈較小，可能是病原微生物對(duì)藥物較敏感

C.圖2抑菌圈中的菌落可能是在抗生素IV作用下產(chǎn)生了突變株

D.不同抗生素在平板上的擴(kuò)散速度不同會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果

答案D

解析為獲得長(zhǎng)滿測(cè)試菌的瓊脂平板，需要采用稀釋涂布平板法，該方法需要使用圖1中①酒

精燈（操作需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，酒精燈對(duì)涂布器進(jìn)行灼燒滅菌）、④涂布器和③培養(yǎng)基，

②為接種環(huán)（接種工具），是平板劃線法接種時(shí)需要使用的接種工具，用平板劃線法不能獲得長(zhǎng)

滿測(cè)試菌的平板，A錯(cuò)誤；圖2中n處透明圈最小，說(shuō)明此處微生物對(duì)該藥物敏感度最低，B

錯(cuò)誤；突變株的出現(xiàn)不是在抗生素的作用下產(chǎn)生的，抗生素只能起選擇作用，C錯(cuò)誤。

7.（2024.山東煙臺(tái)模擬）養(yǎng)殖業(yè)中常用的土霉素（一種抗生素）在畜禽類糞便和污水中的殘留量較

iWjo科研人員欲篩選一種能身效降解土霉素的菌株，以解決養(yǎng)殖業(yè)廢棄物中土霉素含量超標(biāo)問(wèn)

題。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.制備培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)先滅菌后定容再倒平板

B.篩選時(shí)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)的增加，土霉素的用量也應(yīng)逐步增加

C.利用稀釋涂布平板法測(cè)得的高效降解土霉素菌株的密度較實(shí)際值低

D.若計(jì)數(shù)時(shí)平板上菌落過(guò)于密集，則應(yīng)該進(jìn)一步提高稀釋的倍數(shù)

答案A

解析制備培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)先定容再滅菌，滅菌后定容容易導(dǎo)致培養(yǎng)基污染，A錯(cuò)誤。

8.（2024?河北邢臺(tái)調(diào)研）屠宰場(chǎng)廢棄血污不經(jīng)過(guò)處理直接排放，會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染。傳統(tǒng)的處理

方法有填埋法和焚燒法等。填埋法易造成地表環(huán)境、地下水資源污染。焚燒法處理會(huì)造成大氣

污染，且廢棄物中所含的蛋白質(zhì)資源不能得到有效利用。研究人員以屠宰場(chǎng)血污堆積土壤為分

離基質(zhì)，利用血平板培養(yǎng)基（添加了動(dòng)物血液），分離出了高效降解血紅蛋白的菌株，并初步用

于降解廢棄血液，生產(chǎn)氨基酸液態(tài)肥料。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

樣品

A.題述菌株分離純化過(guò)程中用到了稀釋涂布平板法和平板劃線法

B.菌株培養(yǎng)后進(jìn)行計(jì)數(shù)，只能采用稀釋涂布平板法

C.血平板培養(yǎng)基上透明水解圈大的菌落分泌的蛋白酶的活性往往較高

D.利用該菌株降解廢棄血液可在保護(hù)環(huán)境的同時(shí)實(shí)現(xiàn)資源的可持續(xù)利用

答案B

解析菌株培養(yǎng)后進(jìn)行計(jì)數(shù)，除了采用稀釋涂布平板法外，還可以用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法，B錯(cuò)

誤。

【綜合提升】

9.（2024.山東棗莊模擬）如圖所示，自來(lái)水經(jīng)濾膜過(guò)濾后，轉(zhuǎn)移到牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基上，適宜

條件下培養(yǎng)48h,染色后統(tǒng)計(jì)變色菌落數(shù)目為165。下列說(shuō)法正確的是（）

（過(guò)濾5L自來(lái)水

-----

百

宜了培養(yǎng)皿

膜漏斗

A.若培養(yǎng)基含伊紅一亞甲基藍(lán)，大腸桿菌菌落呈藍(lán)綠色

B.自來(lái)水中大腸桿菌濃度是33(個(gè)］-I比真實(shí)值大

C.為了提高準(zhǔn)確度，需設(shè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，但不用空白對(duì)照

D.若培養(yǎng)基菌落數(shù)目大于300,可適當(dāng)減少自來(lái)水量

答案D

解析若培養(yǎng)基含伊紅一亞甲基藍(lán)，大腸桿菌菌落呈深紫色，有金屬光澤，A錯(cuò)誤；自來(lái)水中

大腸桿菌濃度是165+5=33(個(gè)1一),由于兩個(gè)或多個(gè)大腸桿菌可能長(zhǎng)成一個(gè)菌落，因此比真

實(shí)值小，B錯(cuò)誤；為了提高準(zhǔn)確度，需設(shè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，同時(shí)需要設(shè)置空白對(duì)照，C錯(cuò)誤；若培養(yǎng)

基菌落數(shù)目大于300,說(shuō)明細(xì)菌數(shù)目較多，可適當(dāng)減少