1、關(guān)于黃芪、丹參注射液抗四氯化碳致小鼠肝損傷作用的商榷                   作者：王玉鳳，邵勝男，袁靜 黃學(xué)武【摘要】目的研究黃芪、丹參注射液及復(fù)方芪參注射液抗CCl4致小鼠肝損傷作用。方法采用四氯化碳誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷模型，從整體水平上觀察復(fù)方芪參注射液抗CCl4致小鼠肝損傷作用。結(jié)果復(fù)方芪參注射液及陽性藥組(市售丹參注射液、黃芪注射液及兩者配伍)對CCl4致小鼠急性肝損傷無顯著保護(hù)作用。結(jié)論黃芪、丹參注射液對CCl4致

2、小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用，值得商榷。 【關(guān)鍵詞】   丹參黃芪急性肝損傷Abstract：Objective To investigate the protective effect of compound Huangqi and Danshen injection on CCl4 -induced  liver injury in mice. MethodsOverall observation on the protective effect of compound Huangqi and Danshen injection on liver injury was ma

3、de by establishing CCl4-induced acute liver injury model in mice. ResultsCompound Huangqi and Danshen injection and positive control group had no significant protective effect against CCl4-induced acute liver injury.ConclusionIt is still questionable to use Huangqi and Danshen injection as anti-hepa

4、tic injury agent in the CCl4-induced acute liver injury model in mice.Key words：Astragalus membranaceus;  Salvia miltiorrhiza;  Acute liver injury黃芪與丹參是肝病 治療 中較常使用的中藥。上多用丹參和黃芪注射液聯(lián)用治療慢性肝病，取得良好療效1。據(jù) 文獻(xiàn) 報(bào)道黃芪注射液和丹參水溶性成分(丹參總酚酸)對CCl4致小鼠急性肝損傷均有保護(hù)作用24，黃芪總苷對四氯化碳致小鼠肝損傷也有明顯的保護(hù)作用5。張樹劍等6報(bào)道穴位注射丹參注射液配伍黃芪

5、注射液對四氯化碳致小鼠肝損傷具有清除自由基、對抗脂質(zhì)過氧化的作用。但筆者在采用CCl4致小鼠急性肝損傷模型，以市售丹參注射液、黃芪注射液及兩者配伍作為陽性對照藥，研究復(fù)方芪參注射液抗CCl4致小鼠肝損傷作用的過程中發(fā)現(xiàn)，黃芪和丹參注射液對CCl4致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用，值得商榷?，F(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。 1  材料與儀器 1.1  動(dòng)物1822 g成年昆明種小鼠，雌雄兼用，安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(動(dòng)物合格證號: 皖醫(yī)實(shí)動(dòng)字第001號)。1.2  藥品與儀器丹參注射液（正大青春寶藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；規(guī)格：1.5 g原藥材/ml；批號：0505051）；黃芪注射

6、液（成都地奧九泓制藥廠生產(chǎn)；規(guī)格：2 g原藥材/ml；批號：0601026）。UV757CRT紫外可見分光光度計(jì)(上海精密 科學(xué) 儀器有限公司)。黃芪總皂苷(自制；總苷含量為69.9%，黃芪甲苷含量為13.1%)；丹參總酚酸(自制；總酚酸含量為77.7%，丹酚酸B含量為38.4%)；復(fù)方芪參注射液(由黃芪總皂苷和丹參總酚酸組成，劑量見“2.1”項(xiàng)下)。 2  方法 2.1  分組與給藥小鼠120只，雌雄各半，隨機(jī)分為8組，每組15只。高劑量組黃芪：總皂苷32 mg·kg-1·d-1丹參總酚酸80 mg·kg-1·d-1(給藥劑量相當(dāng)于

7、總藥材量：黃芪16 g·kg-1·d-1丹參8 g·kg-1·d-1)；中劑量組：黃芪總皂苷16 mg·kg-1·d-1丹參總酚酸40 mg·kg-1·d-1；低劑量組：黃芪總皂苷8 mg·kg-1·d-1丹參總酚酸20 mg·kg-1·d-1；陽性藥對照組：市售丹參注射液組（簡稱丹參組；給藥劑量相當(dāng)于丹參總藥材量：15 g·kg-1·d-1）、市售黃芪注射液組（簡稱黃芪組；給藥劑量相當(dāng)于黃芪總藥材量：20g·kg-1·d-1）和市售丹

8、參注射液與市售黃芪注射液按11比例混合(給藥劑量相當(dāng)于總藥材量：黃芪10 g·kg-1·d-1丹參7.5 g·kg-1·d-1)組（簡稱復(fù)方組）；（5）正常組和CCl4模型組：等體積生理鹽水。按10 ml·kg-1腹腔注射（ip）給藥或生理鹽水。給藥1次，連續(xù)7 d。給藥第7天稱每只小鼠體質(zhì)量，除正常組外，每只小鼠ip 含0.15%CCl4的花生油溶液10 ml·kg-1，正常組ip等量的花生油，禁食不禁水過夜。1624 h后稱每只小鼠體重，摘眼球取血，離心分離血清。檢測下列指標(biāo)：血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）；取肝、脾臟稱重， 計(jì)算 肝指

9、數(shù)和脾指數(shù)；取小鼠肝大葉相同部位，10%甲醛溶液固定，做病理切片（病理學(xué)檢查）。2.2  分析各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用±s表示。量反應(yīng)資料間比較用t檢驗(yàn)，等級資料間比較采用Ridit分析法。 3  結(jié)果 3.1  各組注射液對CCl4致急性肝損傷小鼠血清ALT的影響見表1，與正常組比較，CCl4顯著升高小鼠血清ALT的水平（P0.01），而與CCl4模型組相比，復(fù)方芪參注射液3個(gè)劑量組及各組陽性藥僅略降低血清ALT水平，但無顯著性差異(P0.05)。3.2  各組注射液對CCl4致急性肝損傷小鼠肝指數(shù)和脾指數(shù)的影響見表2。與正常組比較，CCl4顯著升高模

10、型組小鼠的肝指數(shù)；與模型組比較，復(fù)方芪參注射液3個(gè)劑量組及各組陽性藥的小鼠肝指數(shù)和脾指數(shù)未見顯著降低。表1  對CCl4致急性肝損傷小鼠血清ALT的影響(略)表2  各組注射液對CCl4致急性肝損傷小鼠肝指數(shù)和脾指數(shù)的影響(略)3.3  各組注射液對CCl4致急性肝損傷小鼠肝臟病理組織學(xué)的影響肝臟病理切片染色后觀察結(jié)果(HE染色略)表明，正常組肝組織中細(xì)胞正常，其余各組均有不同程度的肝細(xì)胞損傷和肝細(xì)胞再生，其中模型組最嚴(yán)重，高劑量組較輕。除正常組外，各組的間質(zhì)內(nèi)均可見不同程度的炎細(xì)胞浸潤，模型組最嚴(yán)重。病理組織學(xué)統(tǒng)計(jì)結(jié)果(見表3)顯示，CCl4可誘導(dǎo)小鼠出現(xiàn)明顯的

11、肝細(xì)胞損傷、肝細(xì)胞再生及間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤等病理組織學(xué)變化。復(fù)方芪參注射液的不同劑量組及各組陽性藥均略減輕肝細(xì)胞損傷和間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤以及促進(jìn)肝細(xì)胞再生，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表3  各組注射液對CCl4致小鼠急性肝損傷評分的影響(略)         4  討論丹參注射液主要有效成分是水溶性的丹參總酚酸，黃芪注射液主要有效成分是水溶性的黃芪總皂苷，而復(fù)方芪參注射液由水溶性有效部位黃芪總皂苷和丹參總酚酸組成，不含脂溶性有效部位總丹參酮。 文獻(xiàn) 報(bào)道黃芪和丹參注射液及其水溶性有效部位（黃芪總皂苷和丹參總酚酸）

12、對CCl4誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷有明顯的保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，復(fù)方芪參注射液不同劑量組和各組陽性藥未能使CCl4升高的血清ALT水平、小鼠肝指數(shù)和脾指數(shù)顯著降低；病理切片觀察結(jié)果和病理學(xué)結(jié)果表明，除了正常對照組外，模型組，復(fù)方參芪不同劑量組及各組陽性藥均有一定的肝損傷，且各組的間質(zhì)內(nèi)均可見不同程度的炎細(xì)胞浸潤，其中以模型組最為嚴(yán)重，復(fù)方參芪不同劑量組及各組陽性藥的癥狀稍輕，但與模型組相比，并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明針對CCl4誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷動(dòng)物模型而言，黃芪注射液、丹參注射液及復(fù)方芪參注射液對急性肝損傷的保護(hù)作用并不顯著。黃芪注射液和丹參注射液對CCl4致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用，是否值

13、得商榷? 愿意和大家共同探討。筆者認(rèn)為，出現(xiàn)黃芪和丹參水溶性成分對CCl4誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷無顯著性保護(hù)作用這一現(xiàn)象的主要原因可能與肝損傷動(dòng)物模型及其誘導(dǎo)藥物的選擇有關(guān)。急性CCl4肝損傷動(dòng)物模型是一種經(jīng)典的實(shí)驗(yàn)性肝損傷模型。CCl4通過其代謝產(chǎn)物三氯甲基自由基(·CC13)的作用，引起肝細(xì)胞膜的功能和結(jié)構(gòu)完整性破壞，使膜通透性增加，細(xì)胞內(nèi)容物溢出，最終導(dǎo)致肝細(xì)胞變性、死亡。在形態(tài)學(xué)上主要表現(xiàn)為肝小葉中央壞死和脂肪變性，血清學(xué)檢查可見轉(zhuǎn)氨酶ALT和AST升高，并能靈敏地反映肝損傷的程度7。由于中藥及其復(fù)方作用廣泛、溫和，器官或組織的選擇性及活性不明顯，需長期給藥方顯藥效。盡管黃芪總

14、皂苷和丹參總酚酸具有抗脂質(zhì)過氧化的作用，但對于CCl4誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷模型而言，在短期內(nèi)黃芪總皂苷和丹參總酚酸未必能有效地發(fā)揮其抗脂質(zhì)過氧化的作用，因而不能凸顯黃芪總苷和丹參總酚酸直接保護(hù)肝細(xì)胞免受·CCl3損害的作用。因此，有必要采用其它化學(xué)藥（如對乙酰氨基酚、D-半乳糖胺、甲基亞硝胺、乙醇）誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷動(dòng)物模型，研究黃芪和/或丹參有效部位對急性肝損傷的保護(hù)作用810?；蚋鶕?jù)中藥 治療 慢性肝病用藥周期長，起效慢，器官選擇性差等特點(diǎn)，采用CCl4誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型，研究黃芪和/或丹參有效部位防治CCl4致大鼠肝纖維化的藥效學(xué)作用11，12。【 參考 文獻(xiàn)】 1周發(fā)洋，彭

15、 艷. 黃芪丹參注射液治療早中期肝纖維化100例J.中華實(shí)用中西醫(yī)雜志，2006，19(8):887.2歐陽雁玲，張明升.黃芪注射液對四氯化碳損傷小鼠肝的保護(hù)作用J.太原科技，2002，(3):26. 3許艷麗，宋廣群，王麗萍.黃芪注射液主要藥效學(xué)研究J. 中國 實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2000，6(6):24.4吳百靈.丹參對CCl4所致急性肝損傷保護(hù)作用的研究J.中醫(yī)藥學(xué)刊，2002,20(3):363.5明 亮，張 艷，李衛(wèi)平，等.黃芪皂苷對小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用J.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),1996,31(4):267.6張樹劍，仇裕豐，董自波.足三里穴位注射對小鼠化學(xué)性肝損傷模型血清T-SOD及LPO的影響J.四川中醫(yī),1999,17(8):8.7徐叔云，卞如濂，陳 修.藥理實(shí)驗(yàn)方M.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：1346.8趙麗娟, 李 紅, 楊世杰. 黃芪注射液對D-半乳糖胺所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用J. 吉林大學(xué)學(xué)報(bào), 2003, 29(3):280.9孫沛毅，