實(shí)驗(yàn)室生物安全柜操作規(guī)程范本1.前言本規(guī)程依據(jù)《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB____）、《生物安全柜》（YY____）等國家標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室實(shí)際使用需求制定。旨在規(guī)范生物安全柜（以下簡稱“BSC”）的操作流程，保障操作人員、實(shí)驗(yàn)環(huán)境及樣本的生物安全，防止病原微生物泄漏與交叉污染，確保實(shí)驗(yàn)活動(dòng)的合法性與科學(xué)性。2.適用范圍本規(guī)程適用于二級(jí)及以上生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-2/BSL-3）中Ⅱ級(jí)A2型、Ⅱ級(jí)B2型生物安全柜的日常使用與維護(hù)。Ⅲ級(jí)生物安全柜的操作需參考制造商特殊要求。3.術(shù)語與定義生物安全柜（BSC）：一種具備氣流控制功能的防護(hù)設(shè)備，用于防止實(shí)驗(yàn)操作中產(chǎn)生的氣溶膠擴(kuò)散，保護(hù)操作人員、環(huán)境及樣本安全。高效空氣過濾器（HEPA）：對0.3μm粒子過濾效率不低于99.97%的空氣過濾器，是BSC的核心部件。下降氣流：從BSC頂部HEPA過濾器吹出的垂直氣流，用于維持操作區(qū)的潔凈環(huán)境。流入氣流：從BSC前面開口處進(jìn)入的水平氣流，用于防止操作區(qū)氣溶膠外溢。4.操作前準(zhǔn)備4.1人員防護(hù)操作人員需穿實(shí)驗(yàn)服（或隔離衣）、戴一次性手套（必要時(shí)戴雙層手套）、護(hù)目鏡（或面罩）。長發(fā)需束起，禁止佩戴首飾、手表等易污染物品。處理高致病性微生物（如HIV、結(jié)核桿菌）時(shí)，需額外佩戴N95口罩。4.2設(shè)備檢查電源：確認(rèn)電源線連接牢固，電源指示燈亮起。風(fēng)機(jī)：啟動(dòng)風(fēng)機(jī)，聽有無異常噪音（如尖叫、卡頓），觀察風(fēng)機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)是否平穩(wěn)。氣流狀態(tài)：下降氣流速度：用風(fēng)速儀檢測操作區(qū)中心位置，Ⅱ級(jí)A2型需達(dá)到0.38-0.51m/s，Ⅱ級(jí)B2型需達(dá)到0.51-0.64m/s。流入氣流速度：檢測前面開口處（距臺(tái)面10cm），需達(dá)到0.51-0.64m/s（Ⅱ級(jí)A2型）或0.76-1.02m/s（Ⅱ級(jí)B2型）。壓差顯示：確認(rèn)壓差表讀數(shù)在正常范圍（Ⅱ級(jí)A2型為10-15Pa，Ⅱ級(jí)B2型為15-25Pa）。HEPA過濾器：檢查過濾器表面有無破損、積塵或變形，若有需立即停止使用并更換。門密封：用煙測試（如點(diǎn)燃線香），煙應(yīng)沿前面開口處向柜內(nèi)流動(dòng)，無泄漏。4.3物品準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)物品需提前消毒（如移液器、試管架用75%乙醇擦拭），并按“清潔-操作-污染”順序擺放：清潔區(qū)（前面）：放置未使用的移液器、試管、培養(yǎng)皿等。操作區(qū)（中間）：預(yù)留足夠空間（約占柜體1/3），用于處理樣本。污染區(qū)（后面）：放置廢液缸、生物安全袋、污染物品容器。兩側(cè)區(qū)域：放置試劑瓶、培養(yǎng)基、離心機(jī)等輔助物品，避免阻擋氣流。禁止放置無關(guān)物品（如書包、筆記本），物品高度不超過柜體1/2，以免影響下降氣流。5.操作流程5.1開機(jī)預(yù)熱啟動(dòng)風(fēng)機(jī)，保持門處于規(guī)定高度（Ⅱ級(jí)A2型為10-15cm，Ⅱ級(jí)B2型為5-10cm），預(yù)熱15-30分鐘，待氣流穩(wěn)定后開始操作。預(yù)熱期間，禁止放置物品或進(jìn)行操作。5.2物品放置按“清潔-操作-污染”順序擺放，避免交叉污染。試劑瓶、培養(yǎng)基需貼好標(biāo)簽，開口朝向遠(yuǎn)離操作人員的方向。離心管、注射器等尖銳物品需放入防刺破容器，避免劃傷手套。5.3操作規(guī)范手臂從前面開口處緩慢進(jìn)出，避免快速移動(dòng)干擾氣流。操作動(dòng)作要輕，如開蓋時(shí)緩慢旋轉(zhuǎn)，避免產(chǎn)生氣溶膠。不要將手臂伸至柜體后面，以免碰到HEPA過濾器。禁止在柜內(nèi)進(jìn)行明火操作（如酒精燈加熱），如需滅菌，使用電子滅菌器。處理樣本時(shí)，保持面部遠(yuǎn)離操作區(qū)（至少30cm），避免吸入氣溶膠。5.4樣本處理血液、體液樣本需使用帶蓋離心管，離心時(shí)平衡重量（誤差≤0.5g）。打開離心管時(shí)，用酒精棉擦拭管口，緩慢旋轉(zhuǎn)開蓋，避免噴濺。若樣本泄漏，立即用吸水紙覆蓋，倒入含氯消毒液（有效氯500mg/L）浸泡30分鐘，再清理。清理后的物品放入生物安全袋，高壓滅菌處理。6.操作后處理6.1消毒清潔用75%乙醇或含氯消毒液（有效氯500mg/L）擦拭臺(tái)面、側(cè)壁、門內(nèi)側(cè)及物品表面，按“清潔-污染”順序擦拭。重點(diǎn)清潔操作區(qū)（如樣本泄漏處），確保無殘留污染物。消毒后，打開風(fēng)機(jī)，保持門開啟狀態(tài)10分鐘，排出殘留氣溶膠。6.2關(guān)閉電源確認(rèn)柜內(nèi)無物品后，關(guān)閉風(fēng)機(jī)，再關(guān)閉電源。將門完全關(guān)閉，避免灰塵進(jìn)入。6.3記錄填寫填寫《生物安全柜使用記錄》，內(nèi)容包括：日期、時(shí)間、操作人員姓名；處理的樣本類型（如血液、細(xì)菌）；設(shè)備運(yùn)行狀態(tài)（如氣流速度、壓差）；異常情況（如泄漏、電源故障）及處理結(jié)果。7.維護(hù)保養(yǎng)7.1日常維護(hù)（每周1次）用75%乙醇擦拭柜體外部（如門把手、側(cè)壁），避免積塵。檢查門密封膠條有無老化、破損，若有需更換。清理廢液缸、生物安全袋，避免溢出。7.2定期檢查（每6個(gè)月1次）檢測HEPA過濾器效率：用粒子計(jì)數(shù)器檢測出風(fēng)口0.3μm粒子濃度，若超過100個(gè)/升，需更換過濾器。校準(zhǔn)氣流速度：用風(fēng)速儀檢測下降氣流和流入氣流速度，若偏離標(biāo)準(zhǔn)值（±10%），調(diào)整風(fēng)機(jī)轉(zhuǎn)速或更換過濾器。檢查風(fēng)機(jī)狀態(tài)：測量風(fēng)機(jī)轉(zhuǎn)速（Ⅱ級(jí)A2型為____轉(zhuǎn)/分鐘），聽有無異常噪音，若有需維修或更換。7.3過濾器更換HEPA過濾器一般每2-3年更換1次，若使用頻率高（如每天處理樣本），可提前更換。更換過濾器需由專業(yè)人員進(jìn)行，更換后需重新驗(yàn)證氣流速度、壓差及過濾器效率。廢棄過濾器需放入生物安全袋，高壓滅菌后按醫(yī)療廢物處理。8.應(yīng)急處理8.1樣本泄漏立即停止操作，戴雙層手套，用吸水紙覆蓋泄漏區(qū)域。倒入含氯消毒液（有效氯1000mg/L），浸泡30分鐘。用鑷子夾取吸水紙，放入生物安全袋，高壓滅菌處理。用75%乙醇擦拭污染區(qū)域，開啟風(fēng)機(jī)通風(fēng)10分鐘。記錄泄漏情況，報(bào)告實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人。8.2人員接觸污染物立即用大量清水沖洗接觸部位（至少15分鐘），然后用75%乙醇消毒。若接觸到高致病性微生物（如HIV），立即報(bào)告實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人，進(jìn)行暴露后預(yù)防處理（如服用抗病毒藥物）。填寫《生物安全事件記錄》，跟蹤觀察1-3個(gè)月。8.3電源故障立即將實(shí)驗(yàn)物品轉(zhuǎn)移至另一個(gè)BSC或高壓滅菌器中，避免樣本污染。關(guān)閉電源，檢查電源線是否松動(dòng)，若為電路問題，聯(lián)系電工維修。電源恢復(fù)后，重新預(yù)熱15-30分鐘，確認(rèn)氣流穩(wěn)定后繼續(xù)操作。8.4火災(zāi)立即關(guān)閉電源，用二氧化碳滅火器滅火（不要用水），對準(zhǔn)火源根部噴射。滅火后，清理現(xiàn)場，檢查柜體有無損壞（如HEPA過濾器是否進(jìn)水）。若柜體損壞，停止使用，聯(lián)系制造商維修。報(bào)告實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人，填寫《火災(zāi)事件記錄》。9.培訓(xùn)與考核操作人員需經(jīng)過理論培訓(xùn)（生物安全柜原理、操作規(guī)程、應(yīng)急處理）和實(shí)操培訓(xùn)（開機(jī)、物品放置、樣本處理），考核合格后上崗。定期復(fù)訓(xùn)（每1年1次），更新知識(shí)（如新標(biāo)準(zhǔn)、新設(shè)備），考核不合格者需重新培訓(xùn)。培訓(xùn)記錄需保存3年以上，包括培訓(xùn)內(nèi)容、考核結(jié)果、培訓(xùn)教師簽名。10.驗(yàn)證與校準(zhǔn)新安裝BSC需進(jìn)行安裝驗(yàn)證（IQ）、運(yùn)行驗(yàn)證（OQ）、性能驗(yàn)證（PQ），符合YY____標(biāo)準(zhǔn)后才能使用。每1年校準(zhǔn)1次，校準(zhǔn)項(xiàng)目包括：氣流速度、壓差、HEPA過濾器效率、氣密性。維修或更換部件（如風(fēng)機(jī)、過濾器）后，需重新驗(yàn)證，確保符合標(biāo)準(zhǔn)。11.附則本規(guī)程由實(shí)驗(yàn)室生物安全委員會(huì)負(fù)責(zé)解釋，每2年修訂1次，若國家法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)發(fā)生變化，及時(shí)更新。使用記錄、維護(hù)記錄、校準(zhǔn)記錄需保存3年以上，到期后經(jīng)負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)銷毀。違反本規(guī)程造成生物安全事故的，按實(shí)驗(yàn)室《生物安全責(zé)任追究制度》處理。實(shí)驗(yàn)室名稱：__________