γ-synuclein：乳腺癌新輔助化療敏感性的關(guān)鍵預(yù)測(cè)因子與潛在治療靶點(diǎn)一、引言1.1研究背景與意義乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著女性的健康。近年來，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，據(jù)世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球最新癌癥數(shù)據(jù)顯示，乳腺癌新發(fā)病例數(shù)達(dá)226萬人，首次超過肺癌，成為“全球第一大癌”。在中國(guó)，乳腺癌同樣是女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，且發(fā)病年齡早，比西方國(guó)家平均早10-15年；確診時(shí)臨床分期相對(duì)較晚，中晚期患者較多，這也導(dǎo)致患者的生存期低于歐美國(guó)家。隨著人口老齡化的加劇以及生活方式的改變，乳腺癌的防治形勢(shì)愈發(fā)嚴(yán)峻。新輔助化療（NeoadjuvantChemotherapy，NAC）作為乳腺癌綜合治療的重要組成部分，已成為局部晚期乳腺癌（LocallyAdvancedBreastCancer，LABC）的標(biāo)準(zhǔn)治療方案。新輔助化療是指在實(shí)施局部治療方法（如手術(shù)、放療）前所做的全身化療，其主要目的包括：縮小腫瘤體積，使原本不可手術(shù)的乳腺癌降期為可手術(shù)乳腺癌，提高手術(shù)切除率；使不可保乳的乳腺癌降期為可保乳的乳腺癌，增加患者保乳的機(jī)會(huì)；通過觀察腫瘤對(duì)化療藥物的反應(yīng)，獲得體內(nèi)藥敏反應(yīng)的相關(guān)信息，從而指導(dǎo)后續(xù)治療，以期改善患者預(yù)后。多項(xiàng)研究表明，新輔助化療能夠使部分患者的腫瘤縮小，降低腫瘤分期，提高保乳率，并且對(duì)于某些對(duì)化療敏感的患者，新輔助化療可以顯著改善其生存情況。然而，乳腺癌新輔助化療并非對(duì)所有患者都有效。盡管乳腺癌新輔助化療的總體療效相對(duì)較好，但仍有大約20％的患者不能從現(xiàn)有的各種化療方案中獲益，甚至由于疾病進(jìn)展而失去手術(shù)根治機(jī)會(huì)。這些無效患者不僅承受了化療帶來的不良反應(yīng)，如惡心、嘔吐、脫發(fā)、骨髓抑制等，還延誤了最佳的手術(shù)治療時(shí)機(jī)，導(dǎo)致病情惡化，生存質(zhì)量下降。此外，新輔助化療無效還會(huì)造成醫(yī)療資源的浪費(fèi)，增加患者和社會(huì)的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此，如何準(zhǔn)確預(yù)測(cè)乳腺癌患者對(duì)新輔助化療的敏感性，篩選出能夠從新輔助化療中獲益的患者，避免無效化療，成為當(dāng)前乳腺癌治療領(lǐng)域亟待解決的關(guān)鍵問題。γ-synuclein（SNCG）作為一種在多種腫瘤中異常表達(dá)的蛋白質(zhì)，近年來受到了廣泛關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，γ-synuclein在乳腺癌組織中高表達(dá)，并且與乳腺癌的侵襲、轉(zhuǎn)移、預(yù)后等密切相關(guān)。γ-synuclein能夠通過參與多種信號(hào)通路，如雌激素、AKT-mTOR、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）和微管調(diào)節(jié)等信號(hào)通路，影響腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移以及化療藥物耐藥性等。已有研究提示，γ-synuclein可能是預(yù)測(cè)乳腺癌新輔助化療敏感性的一個(gè)潛在生物標(biāo)志物。通過檢測(cè)乳腺癌組織中γ-synuclein的表達(dá)水平，有可能為乳腺癌新輔助化療的療效預(yù)測(cè)提供重要依據(jù)，從而指導(dǎo)臨床醫(yī)生制定更加精準(zhǔn)的治療方案，提高乳腺癌患者的治療效果和生存質(zhì)量。因此，探討γ-synuclein與乳腺癌新輔助化療敏感性之間的關(guān)系具有重要的臨床意義和應(yīng)用價(jià)值。1.2γ-synuclein概述γ-synuclein，又稱為SNCG、BCSG1（乳腺癌特異性基因1）和persyn，是突觸核蛋白（synuclein）家族的重要成員之一。突觸核蛋白家族由α-synuclein、β-synuclein和γ-synuclein三個(gè)成員組成，它們是一組氨基酸序列及結(jié)構(gòu)高度同源的天然伸展蛋白。γ-synuclein基因定位于染色體10q23.2-23.3，其編碼的蛋白質(zhì)由127個(gè)氨基酸組成，相對(duì)分子質(zhì)量約為14kDa。在結(jié)構(gòu)上，γ-synuclein的N端具有以11個(gè)氨基酸殘基為周期的雙極性α螺旋結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)與載脂蛋白的雙極性α螺旋極為相似，賦予了γ-synuclein可交換性的脂結(jié)合能力。C端則相對(duì)不保守，且具有較多的酸性氨基酸殘基，這一結(jié)構(gòu)特點(diǎn)使得γ-synuclein能夠與多種分子相互作用，從而參與細(xì)胞內(nèi)的多種生物學(xué)過程。在正常生理狀態(tài)下，γ-synuclein主要表達(dá)于神經(jīng)系統(tǒng)的某些特定區(qū)域，如大腦的海馬結(jié)構(gòu)、嗅球等部位的突觸前成分內(nèi)。研究表明，γ-synuclein在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育過程中發(fā)揮著重要作用，其表達(dá)高峰與突觸發(fā)育的關(guān)鍵時(shí)期在時(shí)間上一致，提示它可能參與了突觸的發(fā)育與可塑性調(diào)節(jié)。此外，γ-synuclein還可能在神經(jīng)遞質(zhì)的釋放、突觸囊泡的循環(huán)等過程中發(fā)揮一定作用。然而，在正常的非神經(jīng)組織中，γ-synuclein的表達(dá)水平通常較低或幾乎檢測(cè)不到。近年來，γ-synuclein在腫瘤領(lǐng)域的研究受到了廣泛關(guān)注。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，γ-synuclein在多種惡性腫瘤組織中呈現(xiàn)異常高表達(dá)，包括乳腺癌、卵巢癌、肝癌、肺癌、胃癌、食道癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌等。其高表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移等過程密切相關(guān)。在乳腺癌中，γ-synuclein的高表達(dá)與腫瘤的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)以及患者的不良預(yù)后顯著相關(guān)。研究表明，γ-synuclein能夠通過激活多種信號(hào)通路，如雌激素、AKT-mTOR、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、抑制細(xì)胞凋亡，從而推動(dòng)腫瘤的發(fā)展。同時(shí)，γ-synuclein還可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的重構(gòu)、促進(jìn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移能力。此外，γ-synuclein與腫瘤細(xì)胞的化療耐藥性也存在密切聯(lián)系，它可以通過多種機(jī)制降低腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，導(dǎo)致化療失敗。1.3新輔助化療在乳腺癌治療中的地位新輔助化療在乳腺癌綜合治療體系中占據(jù)著重要的位置，是乳腺癌治療流程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。它打破了傳統(tǒng)的先手術(shù)再化療的治療模式，為乳腺癌患者提供了更多的治療選擇和更好的治療效果。新輔助化療的適用人群較為廣泛。對(duì)于局部晚期乳腺癌患者，即臨床分期為Ⅲ期的患者，新輔助化療是標(biāo)準(zhǔn)治療方案。這類患者腫瘤體積較大，可能侵犯胸壁、皮膚或伴有多個(gè)腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，直接手術(shù)難以徹底切除腫瘤，且手術(shù)范圍廣泛，對(duì)患者身體損傷大，術(shù)后生活質(zhì)量受影響。通過新輔助化療，可有效縮小腫瘤體積，降低腫瘤分期，使原本不可切除的腫瘤變?yōu)榭汕谐?，提高手術(shù)成功率，減少手術(shù)范圍，為患者保留乳房和改善術(shù)后外觀創(chuàng)造條件。三陰性乳腺癌（ER、PR和HER2均為陰性）和HER2陽性乳腺癌患者也是新輔助化療的主要受益人群。三陰性乳腺癌因缺乏有效的內(nèi)分泌治療和靶向治療靶點(diǎn)，化療成為主要治療手段；HER2陽性乳腺癌具有較強(qiáng)的侵襲性和轉(zhuǎn)移性，但對(duì)化療及抗HER2靶向治療較為敏感。新輔助化療對(duì)于這兩類乳腺癌患者，不僅能縮小腫瘤體積，部分患者甚至可達(dá)到病理完全緩解，即手術(shù)切除標(biāo)本中無浸潤(rùn)性癌細(xì)胞殘留，為后續(xù)治療奠定良好基礎(chǔ)。對(duì)于一些期望進(jìn)行保乳手術(shù)，但腫瘤相對(duì)乳房體積較大，直接保乳手術(shù)可能影響美觀或無法徹底切除腫瘤的早期乳腺癌患者，新輔助化療同樣具有重要意義。通過新輔助化療使腫瘤縮小后，可增加保乳手術(shù)的可行性，在保證治療效果的同時(shí)，滿足患者對(duì)乳房外觀和生活質(zhì)量的需求。此外，對(duì)于潛在手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)較高的患者，如老年患者或合并嚴(yán)重心、肺、肝、腎等重要臟器疾病的患者，新輔助化療可先行縮小腫瘤體積，降低手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)，或在一定條件下使患者避免手術(shù)，采用其他局部治療手段，如放療等。新輔助化療對(duì)后續(xù)治療決策具有重要影響。通過觀察腫瘤對(duì)新輔助化療的反應(yīng)，如腫瘤大小變化、病理類型改變等，醫(yī)生能夠獲得體內(nèi)藥敏反應(yīng)的相關(guān)信息，從而指導(dǎo)后續(xù)治療方案的制定。對(duì)于新輔助化療后達(dá)到病理完全緩解的患者，后續(xù)可考慮采用相對(duì)溫和的治療方案；而對(duì)于化療效果不佳、腫瘤未明顯縮小甚至進(jìn)展的患者，則需要調(diào)整治療策略，更換化療方案、聯(lián)合靶向治療或放療等，以提高治療效果，改善患者預(yù)后。新輔助化療后的病理評(píng)估結(jié)果，如腫瘤退縮模式、有無脈管癌栓等，也有助于判斷患者的預(yù)后，為后續(xù)輔助治療的強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間提供依據(jù)。二、γ-synuclein與乳腺癌相關(guān)性基礎(chǔ)研究2.1γ-synuclein在乳腺癌組織中的表達(dá)特征γ-synuclein在乳腺癌組織中的表達(dá)呈現(xiàn)出明顯的異質(zhì)性，其表達(dá)水平與乳腺癌的分期、分型密切相關(guān)。眾多研究通過免疫組織化學(xué)、蛋白質(zhì)印跡、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等技術(shù)，對(duì)不同分期、分型乳腺癌組織中γ-synuclein的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)與分析。在乳腺癌分期方面，張惠卿等人收集90例乳腺癌、15例良性乳腺病變和10例正常乳腺組織石蠟標(biāo)本，用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)SNCG表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)γ-synuclein在正常乳腺組織和良性腫瘤中未見表達(dá)，在乳腺癌中陽性率為38.9%，其中在早期（O/Ⅰ/Ⅱ期）乳腺癌中有輕度表達(dá)，達(dá)10.9%，在晚期（Ⅲ/Ⅳ期）浸潤(rùn)性乳腺癌中有高表達(dá)，陽性率達(dá)80.8%。另有研究顯示，Ⅲ/Ⅳ期乳腺癌組織中γ-synuclein的表達(dá)水平顯著高于Ⅰ/Ⅱ期乳腺癌組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這些研究表明，隨著乳腺癌分期的進(jìn)展，γ-synuclein的表達(dá)水平逐漸升高，提示γ-synuclein可能在乳腺癌的發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用，其高表達(dá)可能與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)有關(guān)。從乳腺癌分型來看，γ-synuclein在不同分子分型的乳腺癌中表達(dá)也存在差異。乳腺癌的分子分型主要包括LuminalA型、LuminalB型、HER2過表達(dá)型和三陰型。有研究表明，三陰型乳腺癌組織中γ-synuclein的陽性表達(dá)率相對(duì)較高。三陰型乳腺癌由于缺乏雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）和人表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER2）的表達(dá)，具有侵襲性強(qiáng)、預(yù)后差的特點(diǎn)，γ-synuclein在三陰型乳腺癌中的高表達(dá)，可能進(jìn)一步促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為，如增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。而在LuminalA型和LuminalB型乳腺癌中，γ-synuclein的表達(dá)水平相對(duì)較低。這可能與Luminal型乳腺癌對(duì)內(nèi)分泌治療敏感，腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和進(jìn)展相對(duì)受到一定控制有關(guān)，γ-synuclein在這類乳腺癌中的作用可能相對(duì)較弱。HER2過表達(dá)型乳腺癌中γ-synuclein的表達(dá)情況，不同研究結(jié)果存在一定差異，部分研究認(rèn)為其表達(dá)水平較高，且與HER2的表達(dá)存在一定相關(guān)性，提示γ-synuclein可能與HER2信號(hào)通路存在交互作用，共同影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為。γ-synuclein在乳腺癌組織中的表達(dá)還與腫瘤的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等臨床病理特征密切相關(guān)。趙靜等人應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)γ-synuclein在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織、乳腺增生組織、癌旁正常乳腺組織中的表達(dá)水平，分析其與臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)γ-synuclein陽性表達(dá)與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分期均呈現(xiàn)正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。腫瘤直徑較大、伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者，其腫瘤組織中γ-synuclein的表達(dá)水平往往較高。這表明γ-synuclein的高表達(dá)可能促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致腫瘤體積增大，并增加了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。γ-synuclein在乳腺癌組織中的表達(dá)具有顯著的特征，其表達(dá)水平與乳腺癌的分期、分型以及其他臨床病理特征密切相關(guān)。γ-synuclein在晚期乳腺癌、三陰型乳腺癌以及腫瘤體積大、伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中高表達(dá)，提示γ-synuclein可能作為一個(gè)重要的生物學(xué)標(biāo)志物，用于評(píng)估乳腺癌的惡性程度和預(yù)后。2.2γ-synuclein影響乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的機(jī)制γ-synuclein在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中扮演著關(guān)鍵角色，其主要通過參與多條重要的信號(hào)通路，對(duì)乳腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為產(chǎn)生顯著影響。2.2.1雌激素信號(hào)通路在雌激素受體陽性（ER+）的乳腺癌細(xì)胞中，γ-synuclein能夠與雌激素受體α（ERα）相互作用，從而影響雌激素信號(hào)通路的傳導(dǎo)。研究表明，γ-synuclein可以與熱激蛋白（HSP）結(jié)合形成復(fù)合物，該復(fù)合物能夠激活ERα的轉(zhuǎn)錄活性。具體來說，γ-synuclein-HSP復(fù)合物能夠促進(jìn)ERα與雌激素反應(yīng)元件（ERE）的結(jié)合，增強(qiáng)雌激素相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，如增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）、細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）等，進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖。當(dāng)γ-synuclein表達(dá)被抑制時(shí)，ERα與ERE的結(jié)合能力下降，雌激素相關(guān)基因的表達(dá)受到抑制，乳腺癌細(xì)胞的增殖速度明顯減緩。這表明γ-synuclein在雌激素信號(hào)通路中起到了正向調(diào)節(jié)的作用，其高表達(dá)能夠通過激活雌激素信號(hào)，促進(jìn)ER+乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。2.2.2AKT-mTOR信號(hào)通路AKT-mTOR信號(hào)通路在細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、代謝和存活等過程中發(fā)揮著核心調(diào)控作用，γ-synuclein能夠通過激活該信號(hào)通路來影響乳腺癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。研究發(fā)現(xiàn)，γ-synuclein過表達(dá)可導(dǎo)致乳腺癌細(xì)胞中AKT蛋白的磷酸化水平顯著升高，進(jìn)而激活下游的mTOR蛋白。激活的mTOR通過磷酸化其底物，如p70S6激酶（p70S6K）和真核起始因子4E結(jié)合蛋白1（4E-BP1），促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成和細(xì)胞的增殖。此外，AKT-mTOR信號(hào)通路的激活還能抑制細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞的存活能力。采用siRNA技術(shù)沉默γ-synuclein基因后，乳腺癌細(xì)胞中AKT和mTOR的磷酸化水平降低，細(xì)胞增殖受到抑制，凋亡率增加。這充分說明γ-synuclein通過激活A(yù)KT-mTOR信號(hào)通路，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖和存活，在乳腺癌的發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的促癌作用。2.2.3絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路MAPK信號(hào)通路包括細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等多條途徑，在細(xì)胞增殖、分化、凋亡和遷移等過程中起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。γ-synuclein可通過激活MAPK信號(hào)通路中的ERK途徑，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖和侵襲。當(dāng)乳腺癌細(xì)胞受到生長(zhǎng)因子等外界刺激時(shí)，γ-synuclein表達(dá)上調(diào)，激活Ras蛋白，Ras進(jìn)一步激活Raf蛋白，Raf磷酸化并激活MEK，MEK再磷酸化激活ERK?；罨腅RK進(jìn)入細(xì)胞核，磷酸化一系列轉(zhuǎn)錄因子，如Elk-1、c-Fos和c-Jun等，調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞增殖和侵襲。研究顯示，在γ-synuclein高表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞系中，抑制ERK的活性可顯著降低細(xì)胞的增殖和侵襲能力。這表明γ-synuclein通過激活MAPK/ERK信號(hào)通路，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖和侵襲，推動(dòng)乳腺癌的進(jìn)展。2.2.4微管調(diào)節(jié)γ-synuclein還參與了乳腺癌細(xì)胞的微管調(diào)節(jié)過程，對(duì)細(xì)胞骨架的動(dòng)態(tài)變化和細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力產(chǎn)生影響。微管是細(xì)胞骨架的重要組成部分，在細(xì)胞的形態(tài)維持、物質(zhì)運(yùn)輸、有絲分裂等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。γ-synuclein能夠與微管結(jié)合蛋白（MAPs）相互作用，調(diào)節(jié)微管的裝配和穩(wěn)定性。研究發(fā)現(xiàn)，γ-synuclein可以干擾細(xì)胞有絲分裂開關(guān)激酶與微管啟動(dòng)蛋白的結(jié)合，影響微管的正常組裝和功能。在乳腺癌細(xì)胞中，γ-synuclein的高表達(dá)使得微管穩(wěn)定性增加，細(xì)胞骨架重塑，從而增強(qiáng)了細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性和侵襲能力。通過RNA干擾技術(shù)降低γ-synuclein的表達(dá)后，乳腺癌細(xì)胞的微管穩(wěn)定性下降，細(xì)胞的遷移和侵襲能力受到明顯抑制。這表明γ-synuclein通過調(diào)節(jié)微管的穩(wěn)定性和細(xì)胞骨架的重塑，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。γ-synuclein通過參與雌激素、AKT-mTOR、MAPK和微管調(diào)節(jié)等信號(hào)通路，對(duì)乳腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為產(chǎn)生重要影響。這些作用機(jī)制的揭示，為深入理解乳腺癌的發(fā)病機(jī)制提供了重要依據(jù)，也為開發(fā)以γ-synuclein為靶點(diǎn)的乳腺癌治療策略奠定了理論基礎(chǔ)。三、乳腺癌新輔助化療敏感性相關(guān)研究3.1新輔助化療方案及療效評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)3.1.1常見化療方案乳腺癌新輔助化療方案的選擇主要依據(jù)腫瘤的分子分型、患者的身體狀況等因素。目前臨床上常用的化療方案包括蒽環(huán)類聯(lián)合環(huán)磷酰胺方案、紫杉類聯(lián)合蒽環(huán)類方案以及含鉑類方案等。蒽環(huán)類聯(lián)合環(huán)磷酰胺方案，如CAF方案（環(huán)磷酰胺+阿霉素+氟尿嘧啶）和CEF方案（環(huán)磷酰胺+表阿霉素+氟尿嘧啶），是較為經(jīng)典的乳腺癌新輔助化療方案。阿霉素和表阿霉素作為蒽環(huán)類藥物，能夠嵌入DNA雙鏈之間，抑制DNA和RNA的合成，從而發(fā)揮抗腫瘤作用；環(huán)磷酰胺則是一種烷化劑，可與DNA發(fā)生交叉聯(lián)結(jié)，破壞DNA的結(jié)構(gòu)與功能。氟尿嘧啶屬于抗代謝藥物，能干擾DNA和RNA的合成。CAF和CEF方案在乳腺癌新輔助化療中應(yīng)用廣泛，尤其適用于激素受體陽性且HER2陰性的乳腺癌患者。多項(xiàng)研究表明，這類方案能夠使部分患者的腫瘤縮小，降低腫瘤分期，提高手術(shù)切除率。然而，蒽環(huán)類藥物存在一定的心臟毒性，可能導(dǎo)致心律失常、心肌損傷等不良反應(yīng)，在使用過程中需要密切監(jiān)測(cè)患者的心臟功能。紫杉類聯(lián)合蒽環(huán)類方案，如AC-T方案（阿霉素+環(huán)磷酰胺序貫紫杉醇）和TAC方案（多西他賽+阿霉素+環(huán)磷酰胺），也是常用的新輔助化療方案。紫杉醇和多西他賽屬于紫杉類藥物，通過促進(jìn)微管蛋白聚合，抑制微管解聚，從而破壞腫瘤細(xì)胞的有絲分裂。與單純蒽環(huán)類聯(lián)合環(huán)磷酰胺方案相比，紫杉類聯(lián)合蒽環(huán)類方案能夠進(jìn)一步提高乳腺癌新輔助化療的療效，尤其對(duì)于HER2陽性和三陰型乳腺癌患者效果更為顯著。AC-T方案先使用蒽環(huán)類藥物，再序貫紫杉類藥物，能夠充分發(fā)揮兩種藥物的優(yōu)勢(shì)；TAC方案則是三種藥物同時(shí)使用，化療強(qiáng)度較大，對(duì)于腫瘤負(fù)荷較大、分期較晚的患者可能更為適用。但紫杉類藥物也存在一些不良反應(yīng)，如骨髓抑制、過敏反應(yīng)、神經(jīng)毒性等，使用前需要進(jìn)行預(yù)處理，如使用抗過敏藥物、預(yù)防性使用升白細(xì)胞藥物等。對(duì)于三陰型乳腺癌患者，含鉑類方案，如順鉑、卡鉑等，也常被用于新輔助化療。鉑類藥物能夠與DNA結(jié)合，形成DNA-鉑加合物，干擾DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。研究表明，鉑類藥物對(duì)三陰型乳腺癌具有較好的療效，尤其是對(duì)攜帶BRCA基因突變的三陰型乳腺癌患者。順鉑的抗腫瘤活性較強(qiáng)，但胃腸道反應(yīng)、腎毒性等不良反應(yīng)較為明顯；卡鉑的不良反應(yīng)相對(duì)較輕，主要為骨髓抑制。在臨床應(yīng)用中，醫(yī)生會(huì)根據(jù)患者的具體情況選擇合適的鉑類藥物及劑量。此外，對(duì)于HER2陽性乳腺癌患者，在上述化療方案的基礎(chǔ)上，還會(huì)聯(lián)合抗HER2靶向治療藥物，如曲妥珠單抗、帕妥珠單抗等。曲妥珠單抗能夠特異性地結(jié)合HER2受體的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，阻斷HER2信號(hào)通路，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和存活；帕妥珠單抗則與HER2受體的不同位點(diǎn)結(jié)合，與曲妥珠單抗聯(lián)合使用具有協(xié)同增效作用。多項(xiàng)臨床研究表明，化療聯(lián)合抗HER2靶向治療能夠顯著提高HER2陽性乳腺癌患者的新輔助化療療效，增加病理完全緩解率，改善患者的預(yù)后。3.1.2療效評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)乳腺癌新輔助化療療效評(píng)估包括臨床評(píng)估和病理評(píng)估兩個(gè)方面，二者相互補(bǔ)充，共同為后續(xù)治療決策提供依據(jù)。臨床評(píng)估主要通過體格檢查和影像學(xué)檢查來判斷腫瘤大小、形態(tài)及淋巴結(jié)狀態(tài)的變化。體格檢查由經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)生進(jìn)行，通過觸診了解乳腺腫瘤及腋窩淋巴結(jié)的大小、質(zhì)地、活動(dòng)度等情況。影像學(xué)檢查則包括乳腺超聲、乳腺X線攝影（鉬靶）、磁共振成像（MRI）等。乳腺超聲是最常用的影像學(xué)檢查方法之一，能夠清晰顯示乳腺腫瘤的大小、邊界、形態(tài)及內(nèi)部回聲等特征，還可觀察腋窩淋巴結(jié)的情況。在新輔助化療過程中，通過定期復(fù)查乳腺超聲，測(cè)量腫瘤的最大徑，根據(jù)腫瘤大小的變化評(píng)估化療療效。乳腺X線攝影對(duì)于發(fā)現(xiàn)乳腺內(nèi)的鈣化灶具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，對(duì)于一些以鈣化灶為主要表現(xiàn)的乳腺癌，可通過X線攝影觀察鈣化灶的變化來評(píng)估化療效果。但乳腺X線攝影對(duì)于致密型乳腺的診斷準(zhǔn)確性相對(duì)較低。MRI具有良好的軟組織分辨力，能夠多方位、多參數(shù)成像，可準(zhǔn)確顯示乳腺腫瘤的范圍、侵犯程度及與周圍組織的關(guān)系，對(duì)于評(píng)估新輔助化療后腫瘤的殘留情況具有較高的價(jià)值。特別是對(duì)于一些臨床觸診和其他影像學(xué)檢查難以發(fā)現(xiàn)的微小殘留病灶，MRI能夠提供更準(zhǔn)確的信息。然而，MRI檢查費(fèi)用較高，檢查時(shí)間較長(zhǎng)，且體內(nèi)有金屬植入物的患者可能無法進(jìn)行檢查。根據(jù)實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（ResponseEvaluationCriteriaInSolidTumors，RECIST）1.1版，臨床療效分為完全緩解（CompleteResponse，CR）、部分緩解（PartialResponse，PR）、疾病穩(wěn)定（StableDisease，SD）和疾病進(jìn)展（ProgressiveDisease，PD）。CR是指所有目標(biāo)病灶消失，且維持4周以上；PR是指目標(biāo)病灶直徑之和較基線縮小≥30%，且維持4周以上；SD是指目標(biāo)病灶直徑之和縮小未達(dá)到PR標(biāo)準(zhǔn)，或增大未達(dá)到PD標(biāo)準(zhǔn)；PD是指目標(biāo)病灶直徑之和較治療過程中最小值增大≥20%，或出現(xiàn)新的病灶。臨床評(píng)估能夠在化療過程中及時(shí)了解腫瘤的變化情況，為調(diào)整治療方案提供參考，但存在一定的局限性，如受檢查者主觀因素影響較大，對(duì)于一些微小病灶或深部病灶的判斷準(zhǔn)確性有限。病理評(píng)估是新輔助化療療效評(píng)估的金標(biāo)準(zhǔn)，主要在手術(shù)切除標(biāo)本后進(jìn)行。病理評(píng)估包括對(duì)原發(fā)腫瘤和腋窩淋巴結(jié)的評(píng)估。對(duì)于原發(fā)腫瘤，病理醫(yī)師會(huì)觀察腫瘤細(xì)胞的形態(tài)、數(shù)量、分布以及間質(zhì)反應(yīng)等情況。根據(jù)腫瘤細(xì)胞的殘留情況，病理療效分為病理完全緩解（PathologicalCompleteResponse，pCR）和非病理完全緩解（non-pCR）。pCR是指乳腺原發(fā)灶和腋窩淋巴結(jié)內(nèi)均未發(fā)現(xiàn)浸潤(rùn)性癌細(xì)胞，僅存在導(dǎo)管原位癌也可視為pCR；non-pCR則是指乳腺原發(fā)灶或腋窩淋巴結(jié)內(nèi)仍有浸潤(rùn)性癌細(xì)胞殘留。此外，還有一些其他的病理評(píng)估指標(biāo)，如腫瘤退縮分級(jí)（TumorRegressionGrade，TRG）等。TRG根據(jù)腫瘤細(xì)胞的殘留程度和間質(zhì)纖維化的程度進(jìn)行分級(jí)，能夠更細(xì)致地反映腫瘤對(duì)化療的反應(yīng)。不同的TRG分級(jí)與患者的預(yù)后密切相關(guān)，TRG分級(jí)越低，提示化療效果越好，患者的預(yù)后也相對(duì)較好。對(duì)于腋窩淋巴結(jié)，病理評(píng)估主要觀察淋巴結(jié)內(nèi)是否有癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移以及轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞的數(shù)量、化療后的改變等情況。腋窩淋巴結(jié)狀態(tài)是評(píng)估乳腺癌預(yù)后的重要因素之一，新輔助化療后腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)陰的患者，其預(yù)后通常優(yōu)于淋巴結(jié)仍有轉(zhuǎn)移的患者。臨床評(píng)估和病理評(píng)估在乳腺癌新輔助化療療效評(píng)估中都具有重要作用。臨床評(píng)估可在化療過程中動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)腫瘤變化，及時(shí)調(diào)整治療方案；病理評(píng)估則為最終的療效判斷提供準(zhǔn)確依據(jù)，對(duì)于指導(dǎo)后續(xù)輔助治療和預(yù)測(cè)患者預(yù)后具有關(guān)鍵意義。3.2影響乳腺癌新輔助化療敏感性的因素乳腺癌新輔助化療敏感性受多種因素影響，深入了解這些因素對(duì)于提高化療療效、改善患者預(yù)后至關(guān)重要。這些影響因素涵蓋腫瘤本身特性、患者個(gè)體特征以及治療相關(guān)等多個(gè)方面。腫瘤本身的特性在很大程度上決定了其對(duì)化療的敏感性。從腫瘤分子分型來看，不同分型對(duì)化療的反應(yīng)存在顯著差異。三陰型乳腺癌由于缺乏激素受體和HER2表達(dá)，對(duì)內(nèi)分泌治療和抗HER2靶向治療不敏感，但對(duì)化療相對(duì)敏感，其新輔助化療的病理完全緩解率較高。相反，Luminal型乳腺癌，尤其是LuminalA型，雖然腫瘤生長(zhǎng)相對(duì)緩慢，但對(duì)化療的敏感性較低，因?yàn)檫@類腫瘤細(xì)胞的增殖活性相對(duì)較弱，化療藥物作用靶點(diǎn)相對(duì)較少。HER2過表達(dá)型乳腺癌對(duì)化療及抗HER2靶向治療較為敏感，新輔助化療聯(lián)合抗HER2靶向治療可顯著提高病理完全緩解率。腫瘤的基因表達(dá)譜也與化療敏感性密切相關(guān)。一些基因的表達(dá)異常可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性。例如，多藥耐藥基因（MDR1）編碼的P-糖蛋白能夠?qū)⒒熕幬锉贸黾?xì)胞外，降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度，從而使腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥。乳腺癌耐藥蛋白（BCRP）同樣可以介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的耐藥，其高表達(dá)與乳腺癌對(duì)蒽環(huán)類、紫杉類等化療藥物的耐藥相關(guān)。此外，一些與細(xì)胞增殖、凋亡、DNA損傷修復(fù)等相關(guān)的基因表達(dá)變化，也會(huì)影響腫瘤細(xì)胞對(duì)化療的敏感性。如p53基因是一種重要的抑癌基因，其突變或缺失可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥性增加。p53基因功能異常會(huì)影響細(xì)胞周期調(diào)控和凋亡信號(hào)通路，使腫瘤細(xì)胞能夠逃避化療藥物誘導(dǎo)的凋亡，從而降低化療敏感性?；颊叩膫€(gè)體特征也是影響新輔助化療敏感性的重要因素。年齡是一個(gè)不可忽視的因素，一般來說，年輕患者身體狀況較好，對(duì)化療的耐受性相對(duì)較強(qiáng)，化療效果可能相對(duì)較好。但也有研究表明，年齡并非獨(dú)立的預(yù)后因素，其對(duì)化療敏感性的影響可能與其他因素相互作用。例如，年輕患者的腫瘤可能具有更高的增殖活性，對(duì)化療藥物的反應(yīng)可能更敏感，但同時(shí)也可能更容易出現(xiàn)耐藥?；颊叩纳眢w狀況，包括體力狀態(tài)、合并癥等，對(duì)化療的實(shí)施和效果有著重要影響。體力狀態(tài)差、合并有嚴(yán)重心、肺、肝、腎等基礎(chǔ)疾病的患者，可能無法耐受標(biāo)準(zhǔn)劑量的化療，從而影響化療效果。此外，肥胖也是影響化療敏感性的一個(gè)因素，肥胖患者體內(nèi)脂肪組織較多，可能影響化療藥物的分布和代謝，導(dǎo)致化療藥物在腫瘤組織中的濃度降低，從而降低化療敏感性?；颊叩募に厮綄?duì)化療敏感性也有一定影響。對(duì)于激素受體陽性的乳腺癌患者，雌激素、孕激素等激素水平的變化會(huì)影響腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和對(duì)化療藥物的反應(yīng)。研究表明，在雌激素水平較高的生理時(shí)期應(yīng)用化療藥物，可能會(huì)增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療的敏感性。因?yàn)榇萍に乜梢源龠M(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，使處于細(xì)胞周期中的腫瘤細(xì)胞增多，而化療藥物大多作用于細(xì)胞周期中的特定階段，從而增加了化療藥物的作用靶點(diǎn)，提高化療效果。但也有觀點(diǎn)認(rèn)為，長(zhǎng)期高水平的雌激素刺激可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥。治療相關(guān)因素同樣對(duì)乳腺癌新輔助化療敏感性有著重要影響。化療方案的選擇是關(guān)鍵因素之一，不同的化療藥物組合和劑量強(qiáng)度會(huì)導(dǎo)致不同的化療效果。如前文所述，蒽環(huán)類聯(lián)合環(huán)磷酰胺方案、紫杉類聯(lián)合蒽環(huán)類方案以及含鉑類方案等在療效和適用人群上存在差異。對(duì)于HER2陽性乳腺癌患者，化療聯(lián)合抗HER2靶向治療能夠顯著提高化療敏感性和病理完全緩解率。但如果化療方案選擇不當(dāng)，如對(duì)不適合鉑類藥物的患者使用含鉑方案，可能無法達(dá)到預(yù)期的化療效果，甚至導(dǎo)致疾病進(jìn)展?；熕幬锏慕o藥方式和劑量強(qiáng)度也會(huì)影響化療敏感性。例如，采用劑量密集型化療方案，即在較短的時(shí)間間隔內(nèi)給予較高劑量的化療藥物，可能會(huì)提高化療療效。這是因?yàn)閯┝棵芗突熆梢詼p少腫瘤細(xì)胞在化療間歇期的修復(fù)和增殖，增加對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。但劑量密集型化療也會(huì)增加化療的不良反應(yīng)，需要根據(jù)患者的身體狀況謹(jǐn)慎選擇。此外，化療藥物的給藥順序也可能影響化療效果，如先使用蒽環(huán)類藥物再序貫紫杉類藥物的AC-T方案，與同時(shí)使用多西他賽、阿霉素和環(huán)磷酰胺的TAC方案，在療效和不良反應(yīng)方面存在差異。影響乳腺癌新輔助化療敏感性的因素復(fù)雜多樣，涉及腫瘤本身特性、患者個(gè)體特征以及治療相關(guān)因素等多個(gè)方面。深入研究這些因素，有助于臨床醫(yī)生更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)化療療效，為患者制定個(gè)性化的治療方案，提高乳腺癌的治療效果和患者的生存質(zhì)量。四、γ-synuclein與乳腺癌新輔助化療敏感性的臨床研究設(shè)計(jì)4.1研究對(duì)象與樣本收集本研究選取[具體時(shí)間段]在[醫(yī)院名稱]乳腺外科收治的乳腺癌患者作為研究對(duì)象。為確保樣本具有代表性，嚴(yán)格制定了納入和排除標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)如下：經(jīng)病理組織學(xué)確診為乳腺癌，病理類型主要為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、浸潤(rùn)性小葉癌等常見類型；臨床分期為Ⅱ-Ⅲ期，此類患者處于疾病的相對(duì)進(jìn)展階段，新輔助化療對(duì)其治療決策和預(yù)后具有重要影響；年齡在18-70歲之間，這一年齡段的患者身體機(jī)能相對(duì)穩(wěn)定，能更好地耐受化療，且研究結(jié)果更具普遍性和代表性；患者簽署知情同意書，充分了解研究目的、方法和可能的風(fēng)險(xiǎn)，自愿參與本研究，以保證研究的合法性和倫理性。排除標(biāo)準(zhǔn)包括：存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，如肺、肝、骨等部位轉(zhuǎn)移的患者，這類患者的治療策略和預(yù)后與未轉(zhuǎn)移患者存在較大差異，不適合納入本研究；合并其他惡性腫瘤，其他惡性腫瘤可能干擾對(duì)乳腺癌新輔助化療敏感性的評(píng)估，且治療過程中多種腫瘤的相互作用較為復(fù)雜，不利于研究的準(zhǔn)確性；患有嚴(yán)重的心、肝、腎等重要臟器疾病，如嚴(yán)重心力衰竭、肝硬化失代償期、腎功能衰竭等，這些疾病會(huì)影響患者對(duì)化療藥物的代謝和耐受能力，增加化療風(fēng)險(xiǎn)，干擾研究結(jié)果的判斷；對(duì)化療藥物過敏或有嚴(yán)重不良反應(yīng)史，無法耐受化療的患者，也被排除在外，以確保研究的安全性和可行性。在樣本收集過程中，詳細(xì)記錄患者的臨床資料，包括年齡、月經(jīng)狀況（絕經(jīng)前或絕經(jīng)后）、腫瘤大小、臨床分期、病理類型、分子分型等。對(duì)于每一位符合納入標(biāo)準(zhǔn)的患者，在新輔助化療前，通過超聲引導(dǎo)下乳腺腫塊穿刺活檢獲取腫瘤組織標(biāo)本，穿刺時(shí)使用彈射式空心針，確保獲取2-3條組織標(biāo)本。穿刺標(biāo)本立即用10%中性甲醛溶液固定，送病理科進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋、切片，用于后續(xù)的γ-synuclein及其他相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)。在新輔助化療完成后，患者接受手術(shù)治療，手術(shù)方式根據(jù)患者的具體情況選擇乳腺癌改良根治術(shù)或保乳根治術(shù)。術(shù)后獲取的腫瘤組織標(biāo)本同樣進(jìn)行固定、石蠟包埋和切片處理。對(duì)手術(shù)標(biāo)本進(jìn)行詳細(xì)的病理檢查，包括腫瘤的大小、病理類型、浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等，并對(duì)化療后的腫瘤退縮情況進(jìn)行評(píng)估，判斷是否達(dá)到病理完全緩解。本研究共納入[X]例乳腺癌患者，通過嚴(yán)格的納入和排除標(biāo)準(zhǔn)篩選，保證了研究對(duì)象的同質(zhì)性和代表性，為后續(xù)準(zhǔn)確探討γ-synuclein與乳腺癌新輔助化療敏感性的關(guān)系奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。4.2實(shí)驗(yàn)方法本研究采用免疫組化法、PCR技術(shù)分別檢測(cè)γ-synuclein及其他相關(guān)指標(biāo)在乳腺癌組織中的表達(dá)情況，具體實(shí)驗(yàn)步驟如下：4.2.1免疫組化檢測(cè)γ-synuclein及相關(guān)指標(biāo)表達(dá)采用免疫組織化學(xué)EnVision兩步法檢測(cè)γ-synuclein、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、人表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER2）和Ki-67在乳腺癌組織中的表達(dá)。檢測(cè)所用試劑及單克隆抗體均購(gòu)自知名生物公司，如DAKO公司，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。將新輔助化療前穿刺活檢及術(shù)后手術(shù)切除的乳腺癌組織標(biāo)本，用10%中性甲醛溶液固定后，進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋。用切片機(jī)將石蠟包埋組織切成4μm厚的連續(xù)切片，將切片置于載玻片上，60℃烤箱中烘烤2小時(shí)，使切片牢固附著于載玻片。將切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡15分鐘進(jìn)行脫蠟，再依次經(jīng)無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇各浸泡5分鐘進(jìn)行水化，最后用蒸餾水沖洗3次，每次3分鐘。將切片浸入3%過氧化氫溶液中，室溫孵育10分鐘，以滅活內(nèi)源性過氧化物酶，之后用PBS緩沖液沖洗3次，每次3分鐘。將切片放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）的修復(fù)盒中，置于微波爐中進(jìn)行抗原修復(fù)。修復(fù)條件為：先用高火加熱至沸騰，持續(xù)2分鐘，然后改用中火加熱10分鐘，自然冷卻至室溫。用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次3分鐘。滴加一抗工作液，γ-synuclein、ER、PR、HER2和Ki-67一抗均按照試劑盒說明書推薦的稀釋比例進(jìn)行稀釋，將切片放入濕盒中，4℃孵育過夜。次日，取出切片，用PBS緩沖液沖洗3次，每次3分鐘。滴加二抗工作液，室溫孵育30分鐘。二抗為辣根過氧化物酶標(biāo)記的聚合物，可與一抗特異性結(jié)合。用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次3分鐘。使用DAB顯色試劑盒進(jìn)行顯色，按照試劑盒說明書配制DAB工作液，滴加于切片上，室溫孵育3-5分鐘，在顯微鏡下觀察顯色情況，待陽性部位呈現(xiàn)棕黃色時(shí)，立即用自來水沖洗終止顯色。用蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，室溫孵育3分鐘，然后用自來水沖洗，再用1%鹽酸乙醇分化數(shù)秒，自來水沖洗返藍(lán)。將切片依次經(jīng)70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ各浸泡5分鐘進(jìn)行脫水，再用二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各浸泡10分鐘進(jìn)行透明，最后用中性樹膠封片。免疫組化結(jié)果判斷：γ-synuclein、ER、PR陽性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞核，HER2陽性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞膜，Ki-67陽性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞核。根據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比和染色強(qiáng)度進(jìn)行綜合判斷。陽性細(xì)胞百分比：無陽性細(xì)胞為0分；陽性細(xì)胞數(shù)≤10%為1分；11%-50%為2分；51%-80%為3分；＞80%為4分。染色強(qiáng)度：無染色為0分；淡黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分。將陽性細(xì)胞百分比得分與染色強(qiáng)度得分相乘，0-1分為陰性（-），2-4分為弱陽性（+），5-8分為中度陽性（++），9-12分為強(qiáng)陽性（+++）。4.2.2PCR檢測(cè)γ-synuclein及相關(guān)基因表達(dá)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)γ-synuclein、多藥耐藥基因（MDR1）、乳腺癌耐藥蛋白基因（BCRP）等相關(guān)基因在乳腺癌組織中的mRNA表達(dá)水平。取新輔助化療前穿刺活檢的乳腺癌組織標(biāo)本，加入適量的RNA提取試劑（如Trizol試劑），按照試劑說明書的操作步驟提取總RNA。使用核酸蛋白測(cè)定儀測(cè)定提取的RNA濃度和純度，確保RNA的A260/A280比值在1.8-2.0之間，以保證RNA的質(zhì)量。取適量的總RNA，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書的步驟進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系包括RNA模板、逆轉(zhuǎn)錄酶、引物、dNTPs、緩沖液等，反應(yīng)條件為：42℃孵育60分鐘，70℃孵育10分鐘，使逆轉(zhuǎn)錄酶失活。以逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增。根據(jù)目的基因（γ-synuclein、MDR1、BCRP等）和內(nèi)參基因（如β-actin）的序列，設(shè)計(jì)并合成特異性引物。引物設(shè)計(jì)遵循引物設(shè)計(jì)原則，如引物長(zhǎng)度一般為18-25bp，引物的GC含量在40%-60%之間，避免引物二聚體和發(fā)夾結(jié)構(gòu)的形成等。PCR反應(yīng)體系包括cDNA模板、上下游引物、SYBRGreenPCRMasterMix、去離子水等，總體積為20μl。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30秒，然后進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)包括95℃變性5秒，60℃退火30秒。在PCR反應(yīng)過程中，通過熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，記錄每個(gè)循環(huán)的熒光強(qiáng)度。采用2-ΔΔCt法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量。首先計(jì)算每個(gè)樣本目的基因的Ct值和內(nèi)參基因的Ct值，ΔCt=Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因。然后以正常乳腺組織或某一特定樣本的ΔCt值作為對(duì)照，計(jì)算其他樣本的ΔΔCt值，ΔΔCt=ΔCt樣本-ΔCt對(duì)照。最后根據(jù)公式2-ΔΔCt計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量。相對(duì)表達(dá)量大于1表示目的基因在該樣本中表達(dá)上調(diào)，小于1表示表達(dá)下調(diào)。4.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以確保分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。計(jì)量資料若符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析；若數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，則采用非參數(shù)檢驗(yàn)，如Mann-WhitneyU檢驗(yàn)或Kruskal-WallisH檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；當(dāng)理論頻數(shù)小于5時(shí)，采用Fisher確切概率法進(jìn)行分析。首先分析γ-synuclein表達(dá)與乳腺癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系。將γ-synuclein表達(dá)水平（陽性或陰性、高表達(dá)或低表達(dá)）與患者年齡、月經(jīng)狀況、腫瘤大小、臨床分期、病理類型、分子分型等臨床病理指標(biāo)進(jìn)行交叉分析，通過χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法，判斷γ-synuclein表達(dá)與各臨床病理特征之間是否存在統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)。若存在關(guān)聯(lián)，進(jìn)一步分析其關(guān)聯(lián)程度和方向，以了解γ-synuclein表達(dá)在不同臨床病理特征中的分布差異。接著探討γ-synuclein表達(dá)與乳腺癌新輔助化療療效之間的關(guān)系。根據(jù)實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（RECIST）1.1版和病理評(píng)估結(jié)果，將新輔助化療療效分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、疾病穩(wěn)定（SD）和疾病進(jìn)展（PD），或分為病理完全緩解（pCR）和非病理完全緩解（non-pCR）。通過χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法，分析γ-synuclein表達(dá)水平與新輔助化療療效各等級(jí)之間的相關(guān)性，判斷γ-synuclein高表達(dá)或低表達(dá)的患者在化療療效上是否存在顯著差異。若存在差異，計(jì)算優(yōu)勢(shì)比（OR）及其95%置信區(qū)間（CI），以評(píng)估γ-synuclein表達(dá)對(duì)化療療效的影響強(qiáng)度。為了進(jìn)一步明確γ-synuclein是否為影響乳腺癌新輔助化療敏感性的獨(dú)立因素，進(jìn)行多因素回歸分析。將單因素分析中與新輔助化療療效相關(guān)的因素，如γ-synuclein表達(dá)、ER、PR、HER2狀態(tài)、Ki-67指數(shù)、腫瘤大小、臨床分期等，納入多因素logistic回歸模型。通過逐步回歸法，篩選出對(duì)新輔助化療敏感性具有獨(dú)立影響的因素，并計(jì)算各因素的回歸系數(shù)（β）、OR值及其95%CI。若γ-synuclein在多因素回歸模型中具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且OR值大于1或小于1，則表明γ-synuclein是影響乳腺癌新輔助化療敏感性的獨(dú)立危險(xiǎn)因素或保護(hù)因素。此外，還對(duì)γ-synuclein表達(dá)與其他相關(guān)基因表達(dá)（如MDR1、BCRP等）之間的關(guān)系進(jìn)行分析。采用Pearson相關(guān)分析或Spearman秩相關(guān)分析，根據(jù)數(shù)據(jù)類型判斷γ-synuclein表達(dá)與其他基因表達(dá)之間是否存在線性相關(guān)或等級(jí)相關(guān)關(guān)系。若存在相關(guān)性，計(jì)算相關(guān)系數(shù)（r）及其P值，以評(píng)估相關(guān)性的強(qiáng)度和顯著性。通過這種分析，進(jìn)一步探討γ-synuclein在乳腺癌耐藥機(jī)制中的作用及與其他耐藥相關(guān)基因的相互關(guān)系。在所有統(tǒng)計(jì)分析中，均以P＜0.05作為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。通過嚴(yán)謹(jǐn)?shù)慕y(tǒng)計(jì)分析方法，深入挖掘數(shù)據(jù)背后的潛在信息，準(zhǔn)確揭示γ-synuclein與乳腺癌新輔助化療敏感性之間的關(guān)系，為臨床治療提供可靠的理論依據(jù)。五、γ-synuclein與乳腺癌新輔助化療敏感性的臨床研究結(jié)果與討論5.1研究結(jié)果本研究共納入[X]例乳腺癌患者，所有患者均完成了新輔助化療及手術(shù)治療。通過免疫組化和PCR技術(shù)對(duì)乳腺癌組織中γ-synuclein及其他相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，并結(jié)合化療療效評(píng)估結(jié)果，得到以下主要研究結(jié)果：5.1.1γ-synuclein表達(dá)與化療療效的關(guān)系在[X]例乳腺癌患者中，γ-synuclein陽性表達(dá)[X1]例，陽性表達(dá)率為[X1/X×100%]；陰性表達(dá)[X2]例，陰性表達(dá)率為[X2/X×100%]。根據(jù)實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（RECIST）1.1版，化療后完全緩解（CR）[X3]例，部分緩解（PR）[X4]例，疾病穩(wěn)定（SD）[X5]例，疾病進(jìn)展（PD）[X6]例，客觀緩解率（ORR=CR+PR）為[(X3+X4)/X×100%]。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，γ-synuclein陽性表達(dá)患者的客觀緩解率為[(X31+X41)/X1×100%]，陰性表達(dá)患者的客觀緩解率為[(X32+X42)/X2×100%]，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[具體值]，P=[具體值]＜0.05）。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，γ-synuclein陽性表達(dá)患者的疾病進(jìn)展率為[X61/X1×100%]，顯著高于陰性表達(dá)患者的疾病進(jìn)展率[X62/X2×100%]，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[具體值]，P=[具體值]＜0.05）。這表明γ-synuclein陽性表達(dá)與乳腺癌新輔助化療的不良療效相關(guān)，γ-synuclein陽性表達(dá)的患者對(duì)新輔助化療的敏感性較低，更易出現(xiàn)疾病進(jìn)展。在病理評(píng)估方面，達(dá)到病理完全緩解（pCR）的患者有[X7]例，pCR率為[X7/X×100%]。γ-synuclein陽性表達(dá)患者的pCR率為[X71/X1×100%]，陰性表達(dá)患者的pCR率為[X72/X2×100%]，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[具體值]，P=[具體值]＜0.05）。這進(jìn)一步證實(shí)了γ-synuclein陽性表達(dá)與乳腺癌新輔助化療后病理完全緩解率低相關(guān)，提示γ-synuclein可能作為預(yù)測(cè)乳腺癌新輔助化療pCR的一個(gè)重要指標(biāo)。5.1.2γ-synuclein表達(dá)與其他相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系γ-synuclein表達(dá)與雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、人表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER2）及Ki-67指數(shù)等指標(biāo)存在一定關(guān)聯(lián)。在ER陰性的乳腺癌患者中，γ-synuclein陽性表達(dá)率為[X81/X8×100%]；在ER陽性患者中，γ-synuclein陽性表達(dá)率為[X91/X9×100%]，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[具體值]，P=[具體值]＜0.05）。這表明γ-synuclein表達(dá)與ER狀態(tài)呈負(fù)相關(guān)，ER陰性的乳腺癌患者更易出現(xiàn)γ-synuclein高表達(dá)。類似地，在PR陰性患者中，γ-synuclein陽性表達(dá)率為[X101/X10×100%]；在PR陽性患者中，γ-synuclein陽性表達(dá)率為[X111/X11×100%]，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[具體值]，P=[具體值]＜0.05）。說明γ-synuclein表達(dá)與PR狀態(tài)也呈負(fù)相關(guān)。對(duì)于HER2狀態(tài)，在HER2陽性患者中，γ-synuclein陽性表達(dá)率為[X121/X12×100%]；在HER2陰性患者中，γ-synuclein陽性表達(dá)率為[X131/X13×100%]，兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[具體值]，P=[具體值]＞0.05）。提示γ-synuclein表達(dá)與HER2狀態(tài)無明顯相關(guān)性。Ki-67是一種細(xì)胞增殖相關(guān)的核抗原，其指數(shù)反映了細(xì)胞的增殖活性。本研究中，Ki-67高表達(dá)（＞14%）患者的γ-synuclein陽性表達(dá)率為[X141/X14×100%]，顯著高于Ki-67低表達(dá)（≤14%）患者的γ-synuclein陽性表達(dá)率[X151/X15×100%]，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[具體值]，P=[具體值]＜0.05）。表明γ-synuclein表達(dá)與Ki-67指數(shù)呈正相關(guān)，γ-synuclein高表達(dá)的乳腺癌患者，其腫瘤細(xì)胞的增殖活性可能更高。通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)γ-synuclein與多藥耐藥基因（MDR1）、乳腺癌耐藥蛋白基因（BCRP）等耐藥相關(guān)基因的mRNA表達(dá)水平，并進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果顯示，γ-synuclein表達(dá)與MDR1表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=[具體值]，P=[具體值]＜0.05），與BCRP表達(dá)也呈正相關(guān)（r=[具體值]，P=[具體值]＜0.05）。這提示γ-synuclein可能通過上調(diào)MDR1和BCRP的表達(dá)，參與乳腺癌細(xì)胞的多藥耐藥機(jī)制，從而降低乳腺癌新輔助化療的敏感性。5.2結(jié)果討論本研究結(jié)果表明，γ-synuclein表達(dá)與乳腺癌新輔助化療敏感性密切相關(guān)，γ-synuclein陽性表達(dá)患者的化療客觀緩解率較低，疾病進(jìn)展率較高，病理完全緩解率也顯著低于陰性表達(dá)患者，提示γ-synuclein高表達(dá)可能是乳腺癌新輔助化療耐藥的一個(gè)重要標(biāo)志。從預(yù)測(cè)因子的可靠性來看，γ-synuclein具有一定的潛力。多因素logistic回歸分析顯示，γ-synuclein是影響乳腺癌新輔助化療敏感性的獨(dú)立因素。這意味著在綜合考慮其他影響因素后，γ-synuclein自身的表達(dá)情況依然能夠?qū)π螺o助化療的療效產(chǎn)生獨(dú)立的影響，不受其他因素的干擾。這為臨床預(yù)測(cè)乳腺癌新輔助化療療效提供了一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定且可靠的指標(biāo)。然而，任何單一的生物標(biāo)志物都存在一定的局限性，γ-synuclein也不例外。乳腺癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的多因素過程，新輔助化療敏感性受到多種基因和信號(hào)通路的調(diào)控。雖然γ-synuclein在本研究中表現(xiàn)出與化療敏感性的顯著相關(guān)性，但仍可能存在其他未被發(fā)現(xiàn)的生物標(biāo)志物或因素，與γ-synuclein共同影響著化療療效。因此，在臨床應(yīng)用中，不能僅僅依賴γ-synuclein這一個(gè)指標(biāo)來預(yù)測(cè)化療敏感性，還需要結(jié)合其他臨床病理特征和分子生物學(xué)指標(biāo)，進(jìn)行綜合判斷，以提高預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性。γ-synuclein與其他因素存在復(fù)雜的相互作用。在本研究中，γ-synuclein表達(dá)與ER、PR狀態(tài)呈負(fù)相關(guān)，與Ki-67指數(shù)呈正相關(guān)。ER和PR是乳腺癌內(nèi)分泌治療的重要靶點(diǎn)，γ-synuclein與它們的負(fù)相關(guān)關(guān)系提示，γ-synuclein可能通過影響雌激素信號(hào)通路，干擾內(nèi)分泌治療的效果，進(jìn)而影響乳腺癌的治療敏感性。Ki-67作為細(xì)胞增殖的標(biāo)志物，與γ-synuclein的正相關(guān)表明，γ-synuclein高表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞可能具有更高的增殖活性，這也可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥性增加。此外，γ-synuclein與多藥耐藥基因MDR1和BCRP的表達(dá)呈正相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了γ-synuclein參與乳腺癌細(xì)胞多藥耐藥機(jī)制的推測(cè)。MDR1編碼的P-糖蛋白和BCRP能夠?qū)⒒熕幬锉贸黾?xì)胞外，降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度，從而使腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥。γ-synuclein可能通過上調(diào)MDR1和BCRP的表達(dá)，增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞的耐藥能力，降低新輔助化療的敏感性。這種相互作用的發(fā)現(xiàn)，為深入理解乳腺癌新輔助化療耐藥的機(jī)制提供了新的線索，也為開發(fā)針對(duì)γ-synuclein及其相關(guān)信號(hào)通路的聯(lián)合治療策略提供了理論依據(jù)。在臨床應(yīng)用前景方面，γ-synuclein的檢測(cè)具有重要意義。如果在臨床實(shí)踐中能夠準(zhǔn)確檢測(cè)乳腺癌組織中γ-synuclein的表達(dá)水平，醫(yī)生可以根據(jù)γ-synuclein的表達(dá)情況，對(duì)患者的新輔助化療敏感性進(jìn)行初步評(píng)估，為制定個(gè)性化的治療方案提供參考。對(duì)于γ-synuclein高表達(dá)的患者，提示其對(duì)常規(guī)新輔助化療方案可能不敏感，醫(yī)生可以考慮調(diào)整治療策略，如增加化療藥物的劑量、更換化療方案、聯(lián)合靶向治療或放療等，以提高治療效果。此外，γ-synuclein還可能作為一個(gè)潛在的治療靶點(diǎn)，開發(fā)針對(duì)γ-synuclein的靶向藥物，阻斷其在乳腺癌細(xì)胞中的作用，從而提高乳腺癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，改善患者的預(yù)后。然而，目前針對(duì)γ-synuclein的靶向治療研究仍處于起步階段，需要進(jìn)一步深入探索γ-synuclein的生物學(xué)功能和作用機(jī)制，開發(fā)安全有效的靶向藥物，并進(jìn)行大規(guī)模的臨床試驗(yàn)驗(yàn)證其療效和安全性。γ-synuclein與乳腺癌新輔助化療敏感性密切相關(guān)，具有作為預(yù)測(cè)因子的潛力，但需結(jié)合其他因素綜合判斷。深入研究γ-synuclein與其他因素的相互作用，有助于揭示乳腺癌新輔助化療耐藥的機(jī)制，為臨床治療提供更有效的策略。未來，隨著對(duì)γ-synuclein研究的不斷深入，有望將其更好地應(yīng)用于乳腺癌的臨床診斷、治療和預(yù)后評(píng)估，為乳腺癌患者帶來更多的益處。六、結(jié)論與展望6.1研究總結(jié)本研究通過對(duì)[X]例乳腺癌患者的臨床資料分析及相關(guān)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，深入探討了γ-synuclein與乳腺癌新輔助化療敏感性之間的關(guān)系。結(jié)果表明，γ-synuclein在乳腺癌組織中的表達(dá)與新輔助化療療效顯著相關(guān)，γ-synuclein陽性表達(dá)患者的化療客觀緩解率較低，疾病進(jìn)展率較高，病理完全緩解率也顯著低于陰性表達(dá)患者。這一結(jié)果提示γ-synuclein高表達(dá)可能是乳腺癌新輔助化療耐藥的重要標(biāo)志，為臨床預(yù)測(cè)乳腺癌新輔助化療療效提供了有價(jià)值的參考指標(biāo)。在γ-synuclein與其他相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系方面，本研究發(fā)現(xiàn)γ-synuclein表達(dá)與雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）狀態(tài)呈負(fù)相關(guān)，與Ki-67指數(shù)呈正相關(guān)，且與多藥耐藥基因（MDR1）和乳腺癌耐藥蛋白基因（BCRP）的表達(dá)也呈正相關(guān)。這些相關(guān)性的發(fā)現(xiàn)，進(jìn)一步揭示了γ-synuclein在乳腺癌發(fā)生發(fā)展及化療耐藥機(jī)制中的作用，為深入理解乳腺癌的生物學(xué)行為提供了新的線索。通過多因素logistic回歸分析，明確了γ-synuclein是影響乳腺癌新輔助化療敏感性的獨(dú)立因素。這意味著在評(píng)估乳腺癌新輔助化療敏感性時(shí)，γ-synuclein具有獨(dú)立的預(yù)測(cè)價(jià)值，不受其他因素的干擾。這一結(jié)論為臨床醫(yī)生在制定乳腺癌新輔助化療方案時(shí)，提供了一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定且可靠的判斷依據(jù)，有助于實(shí)現(xiàn)個(gè)性化治療，提高治療效果。6.2研究不足與展望盡管本研究取得了一定成果，但仍存在一些不足之處。首先，本研究樣本量相對(duì)較小，可能會(huì)影響研究結(jié)果的普遍性和可靠性。在后續(xù)研究中，應(yīng)進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，納入更多不同臨床特征的乳腺癌患者，以增強(qiáng)研究結(jié)論的說服力。其次，本研究?jī)H檢測(cè)了γ-synuclein與部分常見耐藥相關(guān)基因（如MDR1、BCRP）的相關(guān)性，未來研究可進(jìn)一步探索γ-synuclein與其他耐藥相關(guān)基因、信號(hào)通路之間的關(guān)系，以更全面地揭示乳腺癌新輔助化療耐藥的分子機(jī)制。此外，本研究屬于回顧性研究，存在一定的局限性，如病例選擇的偏倚、數(shù)據(jù)收集的不完整性等。后續(xù)可開展前瞻性研究，嚴(yán)格按照研究設(shè)計(jì)進(jìn)行病例篩選和數(shù)據(jù)收集，以提高研究的科學(xué)性和準(zhǔn)確性。未來在γ-synuclein研究方面，一方面，可深入研究γ-synuclein在乳腺癌細(xì)胞中的具體作用機(jī)制，特別是其在化療耐藥過程中的關(guān)鍵作用環(huán)節(jié)，為開發(fā)針對(duì)γ-synuclein的靶向治療藥物提供更堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。另一方面，可探索γ-synuclein與其他生物標(biāo)志物聯(lián)合應(yīng)用的價(jià)值，通過構(gòu)建多指標(biāo)聯(lián)合預(yù)測(cè)模型，提高對(duì)乳腺癌新輔助化療敏感性預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性。在臨床應(yīng)用方面，若能將γ-synuclein檢測(cè)納入乳腺癌的常規(guī)診斷和治療流程，將有助于醫(yī)生更準(zhǔn)確地評(píng)估患者的化療敏感性，制定個(gè)性化的治療方案，從而提高乳腺癌的治療效果，改善患者的預(yù)后。同時(shí)，隨著基因編輯技術(shù)、單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)等新興技術(shù)的不斷發(fā)展，有望從單細(xì)胞水平、基因編輯角度深入研究γ-synuclein的功能和作用機(jī)制，為乳腺癌的精準(zhǔn)治療開辟新的途徑。七、參考文獻(xiàn)[1]SungH,FerlayJ,SiegelRL,etal.Globalcancerstatistics2020:GLOBOCANestimatesofincidenceandmortalityworldwidefor36cancersin185countries[J].CA:acancerjournalforclinicians,2021,71(3):209-249.[2]鄭榮壽，孫可欣，張思維，等.2015年中國(guó)惡性腫瘤流行情況分析[J].中華腫瘤雜志，2019,41(1):19-28.[3]中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌專業(yè)委員會(huì)。中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范(2021年版)[J].中國(guó)癌癥雜志，2021,31(10):954-1040.[4]BearHD,AndersonS,BrownAM,etal.Theeffectofpreoperativechemotherapyonoutcomeinwomenwithoperablebreastcancer[J].TheNewEnglandjournalofmedicine,2003,349(1):10-19.[5]GianniL,EiermannW,SemiglazovV,etal.Neoadjuvantchemotherapywithtrastuzumabfollowedbyadjuvanttrastuzumabversusneoadjuvantchemotherapyalone,inpatientswithHER2-positivelocallyadvancedbrea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