曲克蘆丁腦蛋白水解物的處方篩選及制備工藝研究

卡克斯坦和腦蛋白質(zhì)的水處理材料已經(jīng)在中國廣泛使用。曲克魯寧腦蛋白水處理藥物是一種由曲克魯丁和腦蛋白水組成的復(fù)方制劑。1996年在中國上市。用于顱腦外傷、腦血管病后遺癥伴有記憶減退及注意力集中障礙的癥狀改善。1儀器和試劑盒1.1u3000計及線性指標(biāo)測定TU-1800SPC紫外可見分光光度計(上海天美);FA1004電子天平(萬分之一);320-S酸度計;液相色譜儀:LC-10AT泵,SPD-10A檢測器(島津制造),進樣閥:RHEODYNE-7725i;色譜柱:Dikmasil-C18柱(150mm×4.6mm,5μm);TL9900色譜工作站;半微量定氮儀。1.2曲克蘆丁中藥流動相:0.1%枸櫞酸溶液-乙腈-四氫呋喃(85∶9∶6);曲克蘆丁原料藥(上?，F(xiàn)代哈森(商丘)藥業(yè)有限公司);曲克蘆丁對照品(中檢所);腦蛋白水解物原料(自制)。2方法2.1支架劑入甘露醇用量設(shè)計處方1中不加其他的輔料;處方2中加入甘露醇作為支架劑。以1000支用量計(每支含曲克蘆丁400mg,腦蛋白水解物5mg),設(shè)計處方見表1。2.2微孔濾膜濾器過濾在無菌條件下,精確稱取處方量曲克蘆丁和腦蛋白水解物原料,置于滅菌容器中,加入配制量90%的注射用水,攪拌,使其溶解。加0.1%針用活性炭攪拌20min,然后用0.45μm微孔濾膜濾器過濾脫炭。補加注射用水至全量,用0.1mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至6.5左右,再經(jīng)0.22μm微孔濾膜濾器過濾。濾液檢測合格后,按每支1mL灌裝于西林瓶中,半加塞、真空冷凍干燥后出箱、壓塞、軋蓋即得成品。2.3外標(biāo)法測定曲克蘆丁曲克蘆丁:參考國家藥品標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-(HD-0226)-2002,采用HPLC法來測定其含量。方法:取本品適量精密稱定,用流動相溶解并稀釋制成每1mL中含曲克蘆丁0.20mg的溶液,取10μL注入液相色譜儀,記錄色譜圖;另精密稱取曲克蘆丁對照品適量,同法測定,按外標(biāo)法以峰面積計算,即得。腦蛋白水解物(以總氮計):參照國家藥品標(biāo)準(zhǔn)腦蛋白水解物注射液(WS1-(X-018)-2001Z)中總氮的測定方法,采用凱氏定氮法測定本品中的總氮量。3制備工藝試驗結(jié)果處方1和處方2凍干后制品以外觀性狀、復(fù)溶性、澄明度、pH值、含量、有關(guān)物質(zhì)為指標(biāo)進行處方和工藝篩選研究,考察處方的可行性。兩種處方上述指標(biāo)檢測結(jié)果見表2。由以上試驗結(jié)果可知,兩處方樣品外觀性狀均無明顯區(qū)別,復(fù)溶性、pH值、復(fù)溶后澄明度、兩主藥含量均合格。為了進一步考察各處方的穩(wěn)定性,以篩選出最佳處方。我們將兩處方樣品置高溫60℃條件下放樣10天,分別于第5、第10天取樣,觀察其外觀性狀、復(fù)溶性、澄明度、pH值、各主藥成分含量、有關(guān)物質(zhì),最終根據(jù)實驗結(jié)果確定處方和制備工藝。兩種處方上述指標(biāo)檢測結(jié)果見表3。結(jié)論:兩處方樣品外觀性狀均無明顯區(qū)別,處方1和處方2經(jīng)高溫60℃放樣10天后,外觀性狀、澄明度、pH值和含量等各項檢查指標(biāo)均無變化。兩處方均可行但相比之下處方1更為簡單,可以節(jié)省成本,所以我們確定處方1為最佳處方。4成品的干燥、干燥和包裝第一階段:預(yù)凍:將凍干前水溶液在常壓下,-45℃預(yù)凍3h左右。第二階段:升華干燥:制品在預(yù)凍3h后,啟動真空泵,當(dāng)干燥箱內(nèi)的真空度達到0.1mmHg以下時,緩慢加熱,供給制品在升華過程中所需的熱量,然后以5℃/h的速度升溫至-15℃左右,并在該溫度下保溫6～7h,此時水分可基本除盡。第三階段:再干燥:當(dāng)升華干燥階段完成后,為盡可能除去殘余的水分,需進一步干燥。將升華干燥后的制品以5℃/h的速度一直升溫到30℃,并在該溫度下保溫3h。冷凍干燥完成后,壓塞,軋蓋,即得成品。繪制凍干曲線見圖1。5樣品的質(zhì)量分析5.1試驗品溶液取曲克蘆丁對照品適量,以流動相為溶劑,精密配制成濃度約為100、160、200、240、300μg/mL一系列濃度的供試品溶液,分別精密量取10μL注入色譜儀,依法試驗。結(jié)果:本品曲克蘆丁含量測定方法下的濃度與峰面積的線性關(guān)系良好,由峰面積、濃度回歸的曲線方程為:A=133302C-76422,R為0.9999。5.2不同含量的樣品的測定按前述“2.3樣品的含量測定方法”對樣品(030801)的含量進行測定,結(jié)果:曲克蘆丁98.63%,腦蛋白水解物(總氮)97.30%。6測試試驗在上述試驗的基礎(chǔ)上,按照確定的注射用曲克蘆丁腦蛋白水解物處方組成及制備工藝,連續(xù)放大制備3批樣品(030820、030821、030822),結(jié)果見表4。放大制備的樣品在40℃恒溫、RH75%恒濕的條件下加速6個月后,各項檢查指標(biāo)與零天測定結(jié)果比較,未見明顯變化。樣品在模擬上市條件下,在25℃恒溫和相對濕度RH60%的恒濕條件中放置24個月后,各項檢查指標(biāo)與零天測定結(jié)果比較,未見明顯變化,結(jié)果均符合規(guī)定。7注射用水、脫炭經(jīng)過上述研究,確定注射用曲克蘆丁腦蛋白水解物的制備工藝如下:在無菌條件下,精確稱取處方量曲克蘆丁400g和腦蛋白水解物(以總氮計)5g,置于滅菌容器中,加入配制量90%的注射用水,攪拌,使其溶解。加0.1%針用活性炭攪拌20min,然后用0.45μm微孔濾膜濾器過濾脫炭。補加注射