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本科學(xué)生綜合性實(shí)驗(yàn)報(bào)告

學(xué)號(hào)姓名

學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院專業(yè)、班級(jí)

實(shí)驗(yàn)課程名稱植物組培實(shí)驗(yàn)

教師及職稱龍維彪

開(kāi)課學(xué)期2013至2014學(xué)年第二學(xué)期

填報(bào)時(shí)間2014年5月24日

云南師范大學(xué)教務(wù)處編印

一．實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案

實(shí)驗(yàn)序號(hào)

實(shí)驗(yàn)二

實(shí)驗(yàn)名稱

馬鈴薯脫毒種薯的生產(chǎn)程序

實(shí)驗(yàn)時(shí)間

2014-5-12至5-23

實(shí)驗(yàn)室睿智3棟325室

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

2-1通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)，使學(xué)生掌握配制培養(yǎng)基的步驟，能熟練準(zhǔn)確配制培養(yǎng)基，并能根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑O(shè)計(jì)適合的培養(yǎng)基配方。

2-2通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)，掌握馬鈴薯脫毒試管苗快速繁殖的基本技術(shù)；了解馬鈴薯脫毒種薯生產(chǎn)的過(guò)程，為馬鈴薯脫毒種薯的生產(chǎn)提供必要的基礎(chǔ)苗。

2-3

實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)流程或裝置示意圖

實(shí)驗(yàn)原理

2-1將事先配制好的培養(yǎng)基母液按一定比例稀釋至濃度為培養(yǎng)基中規(guī)定的使用濃度，再加入瓊脂、蔗糖、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)等，制備成符合要求的培養(yǎng)基。

2-2利用適宜的培養(yǎng)基，誘導(dǎo)帶有腋芽的馬鈴薯單節(jié)莖段進(jìn)行芽生長(zhǎng)和根再生形成單苗，從而達(dá)到快速繁殖的目的。

2-3

實(shí)驗(yàn)流程

2-1培養(yǎng)基的配置

按照配方MS基本培養(yǎng)基＋0.7％瓊脂＋3％蔗糖配置培養(yǎng)基

分裝滅菌備用

無(wú)菌操作技術(shù)

馬鈴薯脫毒種薯的生產(chǎn)程序

①脫毒苗的培育

植物材料的選??；b.材料的處理；c.莖尖剝離；d.培養(yǎng)；e.病毒檢測(cè)；f.無(wú)病毒苗的擴(kuò)繁

②原原種的生產(chǎn)

③原種生產(chǎn)

④一級(jí)種薯生產(chǎn)

⑤二級(jí)種薯生產(chǎn)

2-3

實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料

實(shí)驗(yàn)設(shè)備

2-1冰箱、普通天平、果醬瓶、移液管、量筒、燒杯、玻璃棒、醫(yī)用口杯、精密pH試紙（pH5.4~7.0）、藥勺、稱量紙、封口膜、橡皮筋/棉線、電爐/電磁爐、高壓蒸汽滅菌鍋等。

2-2酒精棉球、小塊紗布、槍狀鑷子、手術(shù)剪、已滅菌培養(yǎng)皿、酒精燈、超凈工作臺(tái)等。

2-3

藥品和試劑

2-1MS培養(yǎng)基母液、瓊脂、蔗糖、蒸餾水、1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH

2-2馬鈴薯快速繁殖培養(yǎng)基、75%消毒酒精

實(shí)驗(yàn)材料

2-2馬鈴薯脫毒試管苗

2-3擴(kuò)增后的馬鈴薯試管苗

實(shí)驗(yàn)方法步驟及注意事項(xiàng)

2-1馬鈴薯試管苗快速繁殖培養(yǎng)基的配方設(shè)計(jì)及配制體積

A培養(yǎng)基配方及配置體積

配方：MS基本培養(yǎng)基＋0.7％瓊脂＋3％蔗糖

大量元素:25ml;微量元素：2.5ml;有機(jī)物成分：各2.5ml;鐵鹽：2.5ml;蔗糖:15g;瓊脂：3.5g。

配制體積：每小組配制0.5L，用果醬瓶分裝成10瓶，每人2瓶。

B培養(yǎng)基配置

（１）根據(jù)需要配制的培養(yǎng)基的量稱好所需的瓊脂（3.5g），放入醫(yī)用口杯中，加入適量的蒸餾水（估計(jì)加入母液后不超過(guò)配制總量）置于電磁爐上加熱溶解，邊加熱邊用玻棒攪動(dòng)。

（２）MS基本培養(yǎng)基配置：（配置前先檢查各母液情況，如發(fā)現(xiàn)有霉菌和沉淀結(jié)晶產(chǎn)生，就不能再使用）。大量元素母液：25ml；微量元素母液：2.5ml；鐵鹽母液：2.5ml；有機(jī)物母液：各2.5ml。混勻。

（３）待瓊脂完全溶解后，加入規(guī)定用量的蔗糖（15g），繼續(xù)加溫并不斷攪拌，待瓊脂煮透后端離火源，再加入所需用量的母液（可事先取好放于一燒杯中），最后加蒸餾水至所需體積，即500ml。

（4）調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的酸堿性至pH5.8：

由于培養(yǎng)基的pH值直接影響到培養(yǎng)物對(duì)離子的吸收，因而過(guò)酸或過(guò)堿都對(duì)植物材料的生長(zhǎng)有很大影響。此外，瓊脂培養(yǎng)基的pH值還影響到凝固情況。所以，當(dāng)培養(yǎng)基配制好后應(yīng)立即進(jìn)行pH值的調(diào)整。最好用酸度計(jì)測(cè)試，既快又準(zhǔn)，如無(wú)條件也可用精密pH試紙。培養(yǎng)基若偏酸時(shí)用lmol·L-1NaOH來(lái)調(diào)節(jié)，偏堿則可用lmol·L-1HCl來(lái)調(diào)節(jié)。一般來(lái)說(shuō)，當(dāng)pH值高于6.0時(shí)，培養(yǎng)基將會(huì)變硬；pH值低于5.0時(shí)，瓊脂不能很好地凝固。

（5）培養(yǎng)基的分裝：

配制好的培養(yǎng)基要趁熱分裝，分裝時(shí)容器口小者可采用漏斗分注，口大者直接加注。試管、三角瓶等培養(yǎng)容器加注量占其容積的1/4～1/3為宜，果醬瓶每瓶20～30ml，太多既浪費(fèi)培養(yǎng)基，又減少了培養(yǎng)材料的生長(zhǎng)空間；太少又會(huì)因營(yíng)養(yǎng)不良影響生長(zhǎng)。培養(yǎng)基分裝完后，用封口膜封嚴(yán)瓶口，并用棉線扎緊。本次實(shí)驗(yàn)中500ml分裝到10個(gè)果醬瓶，每人兩瓶，剩余兩瓶備用。

（6）培養(yǎng)基的滅菌：

培養(yǎng)基分裝后應(yīng)立即置于高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi)進(jìn)行滅菌。消毒滅菌時(shí)，壓力表讀數(shù)約為1.06kgf·cm-2或0.105MPa（可在0.105～0.12MPa間，但不得超過(guò)0.14MPa），溫度121℃時(shí)保持15～30min左右即可。為了保證滅菌徹底，在蒸氣滅菌鍋增壓前應(yīng)先將滅菌鍋內(nèi)的冷空氣放盡。排凈冷空氣的辦法有兩種：

A、可以事前打開(kāi)滅菌鍋放氣閥，煮沸，待大量熱蒸氣排出后再關(guān)閉；

B、也可采用先關(guān)閉放氣閥，待壓力升到約0.04MPa，溫度超過(guò)108℃時(shí)打開(kāi)放氣閥排出空氣，待壓力表指針回到0時(shí)再關(guān)閉放氣閥。

2-2、馬鈴薯脫毒試管苗的快速繁殖：

A、準(zhǔn)備工作：

①接種室的清潔和消毒

②超凈工作臺(tái)的開(kāi)機(jī)和消毒

③剪刀、鑷子、已滅菌培養(yǎng)皿、酒精棉球、酒精燈、待用培養(yǎng)基等的準(zhǔn)備

④實(shí)驗(yàn)材料的準(zhǔn)備。

B、馬鈴薯試管苗單節(jié)莖段繁殖無(wú)菌操作：

①實(shí)驗(yàn)操作前，操作人員洗手及手和小臂消毒。

②使用的鑷子、解剖刀等用95％酒精浸泡，之后放在酒精燈上灼燒滅菌，再放在滅菌后的培養(yǎng)皿中冷卻后使用。

③培養(yǎng)瓶外壁用酒精拭擦消毒

④將馬鈴薯試管苗剪為單節(jié)莖段后接種到培養(yǎng)基中，在植入材料的前后，培養(yǎng)瓶的瓶口須在酒精燈火焰上燒烤滅菌。

⑤封口、標(biāo)記、將培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)架上，在溫度20-25℃，光照強(qiáng)度2000-3000lx，光照時(shí)間12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)。

2-3

注意事項(xiàng)

（1）玻璃器皿的洗滌。

（2）天平的使用。

（3）培養(yǎng)基的滅菌過(guò)程

（2）無(wú)菌操作技術(shù)

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理方法

采用記錄原數(shù)據(jù)以及課本資料提供數(shù)據(jù)進(jìn)行配制及使用

參考文獻(xiàn)

植物組織培養(yǎng)教程（第3版）李俊明朱登云中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社2005.9

二、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象與結(jié)果

2-2馬鈴薯脫毒試管苗的快速繁殖

如圖所示第一瓶長(zhǎng)的比較差，第二瓶要相對(duì)好一點(diǎn)，長(zhǎng)的比較好的是第三瓶。

2-3

成活率高，長(zhǎng)勢(shì)良好，苗健壯，葉大，莖粗。

對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析及其結(jié)論

第一瓶長(zhǎng)的最差，苗矮，根長(zhǎng)的少，有部分死亡。造成這樣的原因是接種時(shí)選取的葉芽被損傷，甚至沒(méi)有葉芽。

第二瓶長(zhǎng)的一般，苗很健壯，根發(fā)育的很好。

第三瓶長(zhǎng)的最好，苗比較高，枝芽分化明顯，根十分發(fā)達(dá)。

3瓶都沒(méi)有污染情況，說(shuō)明無(wú)菌操作很成功，但是有些苗死了和不長(zhǎng)，原因在于葉芽有損傷，且有部分接種苗插反了，導(dǎo)致生長(zhǎng)不好和死亡。

種在地里后，成活率高，長(zhǎng)勢(shì)良好，苗健壯，葉大，莖粗。

實(shí)驗(yàn)總結(jié)

、本次實(shí)驗(yàn)用了大概3個(gè)星期，時(shí)間跨度大，需要每做一步記錄一步，也需要很大的耐心。

、實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵還是無(wú)菌操作，因此在進(jìn)行操作時(shí)一定要注意消毒滅菌，在無(wú)菌操作臺(tái)上操作，一定要灼燒鑷子等實(shí)驗(yàn)用具，且在酒精燈前操作。

、接種的馬鈴薯苗，在選取時(shí)一定要選取有葉芽的，且插入培養(yǎng)雞時(shí)要使葉芽向上，且與培養(yǎng)基垂直。操作時(shí)要保證鑷子冷卻。

經(jīng)過(guò)這