B巰基乙酸法測定棉花纖維中的木質(zhì)素含量2010-12-30實施2010-12-30實施新疆維吾爾自治區(qū)質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布IDB65/T3184—2010本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》和GB/T20001.4-2001《標(biāo)準(zhǔn)編寫規(guī)則第4部分：化學(xué)分析方法》編寫。本標(biāo)準(zhǔn)由新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出。本標(biāo)準(zhǔn)由新疆維吾爾自治區(qū)農(nóng)業(yè)廳歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院核技術(shù)生物技術(shù)研究所。本標(biāo)準(zhǔn)起草人：范玲，胡文冉，曹雙瑜1DB65/T3184—2010巰基乙酸法測定棉花纖維中的木質(zhì)素含量本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了棉花纖維樣品的準(zhǔn)備、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制、巰基乙酸法測定棉花纖維中木質(zhì)素含量。本標(biāo)準(zhǔn)適用于評估棉花纖維中木質(zhì)素含量。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用丁本文件。GB/T6097-2006棉纖維試驗取樣方法3術(shù)語和定義3.1木質(zhì)素：又稱木質(zhì)或木素，是苯丙烷類化合物的代謝產(chǎn)物，由三種醇單體(對香豆醇、松柏醇、芥子醇)形成的一種復(fù)雜酚類聚合物，是存在于植物纖維中的一種芳香族高分子化合物。3.2巰基乙酸法：是分析植物組織中木質(zhì)素含量的經(jīng)典方法之一，其分析出的木質(zhì)素含量僅是植物體內(nèi)含有的木質(zhì)素的一部分，但該方法反應(yīng)的是最真實的木質(zhì)素。分析的原理是利用巰基乙酸(含有鹽酸)與木質(zhì)素中的苯甲醇基形成巰醚衍生物，化學(xué)修飾后的木質(zhì)素含有酸性基團(tuán)而溶解在堿性溶液中，再用濃鹽酸酸化生成巰基乙酸木質(zhì)素沉淀，根據(jù)木質(zhì)素在280nm波長處的吸收值與木質(zhì)素的濃度值成正比，通過測定280nm波長處的吸收值測定木質(zhì)素的含量。巰基乙酸(Sigma-Aldrich);堿木質(zhì)素(Sigma-Aldrich);TritonX-100(分析純);Tris-HCI(分析純);NaCl(分析純);丙酮(分析純)血清瓶(內(nèi)墊為聚乙烯四氟);天平(ACCULABALC-310.3型);電熱恒溫震蕩水槽(DKZ-2型);MYLAB通風(fēng)櫥；高速冷凍離心機(jī)(CR20B2);紫外-可見分光光度計(CINTRA-20型)。6準(zhǔn)備工作6.1采樣采摘種植在大田自然成熟的棉花纖維，按GB/T6097-2006《棉纖維試驗取樣方法》進(jìn)行取樣，反復(fù)挑揀棉花纖維，徹底揀去棉花纖維中的非纖維雜質(zhì)。2DB65/T3184--20106.2勻一化緩沖液(HBuffer)的配制50mmol/LTris-HCl,10g/LTritonX-100,1mol/LNaCl;pH8.36.3棉花纖維樣品的清洗稱取1.0g棉樣，分別用40mL均一化緩沖液(H-buffer)清洗兩次，40mL80%丙酮洗兩次，40mL純丙酮洗一次，避免可溶物質(zhì)對分析的干擾。每次清洗后都渦旋、反復(fù)擠壓、最后用金屬夾蒜器將纖維中的殘留溶液擠干，45℃烘干備用。7標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制用0.5mol/LNaOH溶液溶解堿木質(zhì)素，配制成濃度為0、10、20、30、40、50、60μg/mL的堿木質(zhì)素溶液。用紫外/可見分光光度計在280nm處測定吸光度值，獲得吸光度值與溶液木質(zhì)素含量之間的線性回歸方程。8木質(zhì)素含量的測定8.1準(zhǔn)確稱取0.10g清洗過的棉纖維，置于30mL血清瓶內(nèi)，加5mL2mol/LHCI,0.75mL巰基乙酸，充分混勻后旋緊瓶蓋，置于電熱恒溫振蕩水浴鍋中，98℃輕緩震蕩(約60rpm/min)水浴4h;8.2反應(yīng)完成后將血清瓶取出后置于冰上快速冷卻以終止反應(yīng)。將溶液轉(zhuǎn)入50mL離心管，12,000rpm,室溫，離心15min,棄上清，用10mL蒸餾水再清洗兩次，離心棄上清；8.3加5mL0.5mol/LNaOH,混勻后放置在搖床上250rpm,室溫下?lián)u動10h~12h;12,000rpm,室溫，離心15min,收集上清保存于4℃;8.4重復(fù)步驟6.3,將兩次上清合并，保存于4℃;8.5將沉淀加5mL2mol/LNaOH,混勻置搖床250rpm,室溫下?lián)u動10h~12h,12,000rpm,室溫，離心15min,將上清合并，保存于4℃;8.6向存有三次上清的離心管中加入1.5mL濃鹽酸，4℃下放置4h,12,000rpm,4℃,離心20min,8.7沉淀干燥后加5mL0.5mol/LNaOH溶解，以0.5mol/LNaOH為空白溶液，在280nm波長測其吸光值。如果測定的吸光度值不在所用的標(biāo)準(zhǔn)曲線的吸光度值范圍內(nèi)，則用0.5mol/LNaOH溶液稀釋所測溶液。8.8棉花纖維中巰基乙酸木質(zhì)素含量的計算8.8.1根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和測定溶液的吸光度值計算溶液的濃度C=a+b×AB?80式中：C-—待測提取液的濃度，ug/mL;a---—回歸方程的截距；b回歸方程的回歸系數(shù)；AB?280——待測溶液在280nm處的吸光值