3.1.2微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)微生物：是難以用肉眼觀察的微小生物的統(tǒng)稱，包括細菌、真菌、病毒和一些原生生物等。本章提及的微生物主要是用于發(fā)酵的細菌和真菌。菌落：分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體。單菌落：一般是單個微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。菌落A：支原體的菌落

B：酵母菌的菌落

C：細菌的菌落

D：細菌和霉菌混雜的菌落

E：放線菌的菌落

F：霉菌的菌落一般來說，在一定的培養(yǎng)條件下(相同的培養(yǎng)基、溫度及培養(yǎng)時間)，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。這些特征包括菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等方面。菌落特征是鑒定菌種的重要依據(jù)。形態(tài)突起(側(cè)面觀)邊緣(部分)標點狀圓形絲狀不規(guī)則狀假根狀紡錘狀扁平隆起凸透鏡狀墊狀臍突狀完整波狀裂片狀嚙蝕狀絲狀卷曲狀思考1、肺炎雙球菌的S型菌和R型菌的菌落特征有什么區(qū)別？思考2、有鞭毛的細菌和無鞭毛的細菌其菌落邊緣有何不同？3.1.2微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件確保其它微生物無法混入培養(yǎng)基的配置無菌技術(shù)培養(yǎng)基：人們按照微生物對___________的不同需求，配制出的供其___________的營養(yǎng)基質(zhì)。營養(yǎng)組成：給微生物提供碳元素的物質(zhì)自養(yǎng)生物：CO2異養(yǎng)生物：含碳的有機物給微生物提供氮元素的物質(zhì)固氮微生物：空氣中的N2非固氮微生物：NH4+、NO3-

、尿素、含N有機物水無機鹽速效碳源：淀粉、葡萄糖遲效碳源：纖維素（纖維素分解菌）生長繁殖營養(yǎng)物質(zhì)培養(yǎng)基的配制碳源：氮源：給微生物提供碳元素的物質(zhì)自養(yǎng)生物：CO2異養(yǎng)生物：含碳的有機物給微生物提供氮元素的物質(zhì)固氮微生物：空氣中的N2非固氮微生物：NH4+、NO3-

、尿素、含N有機物水無機鹽速效碳源：淀粉、葡萄糖遲效碳源：纖維素（纖維素分解菌）培養(yǎng)基的配制碳源：氮源：此外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)（如維生素、氨基酸和堿基等）以及對氧氣的要求。例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添加_________，培養(yǎng)霉菌時需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至____性，培養(yǎng)細菌時需將pH調(diào)至_________________，培養(yǎng)厭氧微生物時則需要提供_______的條件。維生素酸中性或微堿性無氧1000mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成組分含量提供的主要營養(yǎng)牛肉膏5g碳源、氮源、磷酸鹽和維生素等蛋白胨10g碳源、氮源和維生素等NaCl5g無機鹽水定容至1000mL水固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入_________配制而成。按物理性質(zhì)分液體培養(yǎng)基：配制成的_________狀態(tài)的基質(zhì)。凝固劑（瓊脂）液體培養(yǎng)基的配制固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入_________配制而成。按物理性質(zhì)分液體培養(yǎng)基：配制成的_________狀態(tài)的基質(zhì)。鑒別培養(yǎng)基：按功能分選擇培養(yǎng)基：

選擇培養(yǎng)基：_________________________________________________________________________________。

例如，在培養(yǎng)基中加入_________，可用于選擇培養(yǎng)真菌；在培養(yǎng)基中加入高濃度的鹽水，可用于選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌；不加氮源的無氮培養(yǎng)基可用于選擇培養(yǎng)_______生物；不加碳源的培養(yǎng)基可用于選擇培養(yǎng)_______生物；以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基可用于選擇培養(yǎng)_____________；以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基可用于選擇培養(yǎng)_______________。允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基?？股毓痰责B(yǎng)尿素分解菌纖維素分解菌微生物的大規(guī)模培養(yǎng)微生物的分離和計數(shù)微生物的分離瓊脂液體培養(yǎng)基的配制固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入_________配制而成。按物理性質(zhì)分液體培養(yǎng)基：配制成的_________狀態(tài)的基質(zhì)。鑒別培養(yǎng)基：按功能分選擇培養(yǎng)基：微生物的大規(guī)模培養(yǎng)微生物的分離和計數(shù)微生物的分離瓊脂液體培養(yǎng)基的配制鑒別培養(yǎng)基：根據(jù)微生物的代謝特點，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學試劑配制而成的，用以鑒別不同種類的微生物。大腸桿菌的代謝產(chǎn)物（有機酸）能與伊紅美藍結(jié)合，從而形成深紫色、并帶有金屬光澤的菌落。伊紅美藍培養(yǎng)基大腸桿菌的代謝產(chǎn)物（有機酸）能與伊紅美藍結(jié)合，從而形成深紫色、并帶有金屬光澤的菌落。伊紅美藍培養(yǎng)基在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中，只有能分解尿素的細菌才能利用尿素這種氮源來生長繁殖，并長出菌落。尿素分解菌產(chǎn)生的脲酶能將尿素分解成CO2和NH3，NH3溶于水會電離出NH4+和OH-，使培養(yǎng)基的pH升高。在該培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。培養(yǎng)某種細菌后，如果菌落周圍變紅，說明該細菌能夠分解尿素。剛果紅

+纖維素→紅色復合物纖維素分解菌周圍出現(xiàn)透明圈纖維素分解菌→纖維素酶→纖維二糖+葡萄糖（不能與剛果紅形成紅色復合物）固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入_________配制而成。按物理性質(zhì)分液體培養(yǎng)基：配制成的_________狀態(tài)的基質(zhì)。鑒別培養(yǎng)基：按功能分選擇培養(yǎng)基：微生物的大規(guī)模培養(yǎng)微生物的分離和計數(shù)微生物的分離微生物的鑒定瓊脂液體培養(yǎng)基的配制1、無菌技術(shù)的主要內(nèi)容

獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是______________________。無菌技術(shù)圍繞著如何避免雜菌的污染展開，主要包括以下幾個方面。

①對實驗操作的_________、操作者的____________，進行清潔和_________。

②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行_________。

③為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在_______________附近進行。

④實驗操作時應(yīng)避免_______________的材料用具與周圍物品相接觸。防止外來雜菌的入侵空間衣著和手消毒滅菌酒精燈火焰已經(jīng)滅菌處理無菌技術(shù)某些細菌在其生長發(fā)育后期，在細胞內(nèi)形成的一個圓形或橢圓形，厚壁，含水量低，抗逆性強的休眠體構(gòu)造，稱為芽孢。無菌技術(shù)

日常生活中經(jīng)常用到煮沸消毒法。在100℃煮沸5～6min，可以殺死微生物的營養(yǎng)細胞和一部分芽孢。對于一些不耐高溫的液體，如牛奶，則可使用巴氏消毒法，即在62～65℃消毒30min或80～90℃處理30s～1min，可以殺死牛奶中的絕大多數(shù)微生物，并且不破壞牛奶的營養(yǎng)成分。此外，人們也常使用化學藥物進行消毒，如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等。

除了以上方法，接種室、接種箱或超凈工作臺在使用前，可以用紫外線照射30min，以殺死物體表面或空氣中的微生物。在照射前，適量噴灑石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加強消毒效果。

生物消毒法是指利用生物或其代謝物除去環(huán)境中的部分微生物的方法。例如，有的微生物能夠寄生于多種細菌體內(nèi)，使細菌裂解，因此可以用它們來凈化污水、污泥。無菌技術(shù)

濕熱滅菌：這是一種利用沸水、流通蒸汽或高壓蒸汽進行滅菌的方法，其中高壓蒸汽滅菌的效果最好。實驗室常用的高壓蒸汽滅菌鍋就是以水蒸氣為介質(zhì)，在壓力為100kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30min來滅菌的。

干熱滅菌：將滅菌物品放入密閉容器如干熱滅菌箱，在160～170℃的熱空氣中維持2～3h可以達到滅菌的目的。耐高溫的和需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（如吸管、培養(yǎng)皿等）、金屬用具等，可以采用這種方法滅菌。

灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如涂布器、接種環(huán)、接種針或其他金屬用具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌。此外，在接種過程中，試管口、瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰灼燒來滅菌。無菌技術(shù)火焰旁無菌區(qū)域內(nèi)操作干熱滅菌箱在干熱狀態(tài)下，由于熱穿透力較差，微生物的耐熱性較強,必須長時間受高溫的作用才能達到滅菌的目的。因此，干熱空氣滅菌法采用的溫度一般比濕熱滅菌法_____。高高壓蒸汽滅菌法（排氣-升壓-保壓-降壓）121°C1.5--2個大氣壓15分鐘--30分鐘適用于培養(yǎng)基、生理鹽水、緩沖液、玻璃器皿和工作服等高壓蒸汽滅菌法（排氣-升壓-保壓-降壓）過濾滅菌有時候，需要給培養(yǎng)基里加入一種不耐高溫的成分，應(yīng)如何操作？

濾膜的孔徑為0.1-0.3μm

思考3、培養(yǎng)基滅菌為什么采用高壓蒸汽滅菌而不采用干熱滅菌？

分析：干熱滅菌箱內(nèi)的高溫會導致培養(yǎng)基的_________喪失，而高壓蒸汽鍋內(nèi)的_________較大，不會導致培養(yǎng)基的_________散失。

思考4、如何制備一瓶無菌水？

分析：對一瓶有菌水進行___________________處理。

思考5、某同學在使用高壓蒸汽滅菌鍋時，若壓力達到設(shè)定要求，而鍋內(nèi)并沒有達到相應(yīng)溫度，最可能的原因是？

分析：_____________________。

思考6、某同學從高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)拿出培養(yǎng)基后發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基已經(jīng)濺滿了錐形瓶的瓶壁，最可能的原因是？

分析：___________________________________________，就提前打開了高壓蒸汽鍋。

思考7：用紫外線可以給接種室消毒，其原理是紫外線能___________________。在照射前，適量噴灑石炭酸或煤酚皂溶液等_________，可以加強消毒效果。水分濕度水分高壓蒸汽滅菌未將鍋內(nèi)冷空氣排盡高壓蒸汽鍋的壓力表讀數(shù)還未降至零損傷細菌的DNA消毒液酵母菌的的純培養(yǎng)純培養(yǎng)：獲得由單一個體繁殖所得的微生物群體（單菌落）。微生物的純培養(yǎng)包括：配制培養(yǎng)基、（調(diào)pH、分裝）、滅菌、倒平板、接種和分離、培養(yǎng)等步驟錐形瓶封口膜皿蓋皿底馬鈴薯(200g)去皮馬鈴薯塊切塊加水(1000mL)煮沸軟爛馬鈴薯紗布過濾濾液加葡萄糖/蔗糖(20g)加瓊脂加水定容(1000mL)酵母菌培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基→（調(diào)pH→分裝）→滅菌→倒平板→接種和分離→培養(yǎng)酵母菌培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移包牛皮紙錐形瓶加棉塞皮筋勒緊放入高壓蒸汽滅菌鍋中(100kPa、121℃)滅菌15~30min配制培養(yǎng)基→（調(diào)pH→分裝）→滅菌→倒平板→接種和分離→培養(yǎng)培養(yǎng)皿——干熱滅菌5~8套培養(yǎng)皿幾層牛皮紙包緊滅菌2h放入干熱滅菌箱(160~170℃)配制培養(yǎng)基→（調(diào)pH→分裝）→滅菌→倒平板→接種和分離→培養(yǎng)培養(yǎng)基冷卻到50℃左右，在酒精燈火焰附近倒平板拔出錐形瓶的棉塞將瓶口迅速通過火焰用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養(yǎng)皿(10~20mL)倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上皿蓋待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒過來放置翻轉(zhuǎn)配制培養(yǎng)基→（調(diào)pH→分裝）→滅菌→倒平板→接種和分離→培養(yǎng)高壓蒸汽5044酒精燈火焰空氣中的微生物倒置水分過快揮發(fā)形成水珠落入培養(yǎng)基不能酒精燈火焰旁思考：將制備的空白平板，置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時間，平板上長出了菌落，可能的原因是？配制培養(yǎng)基→（調(diào)pH→分裝）→滅菌→倒平板→接種和分離→培養(yǎng)平板劃線法稀釋涂布平板法1．將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)的金屬絲燒紅。2．在火焰旁冷卻接種環(huán)。同時，拔出裝出酵母菌培養(yǎng)液的棉塞。3．將試管口通過火焰。4．在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液。5．將試管口通過火焰，并塞上棉塞。6．在火焰旁打開一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃3～5條平行線，蓋上蓋子。7．灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復以上操作，作第三、四、五次劃線。注意不要將最后一次的劃線與第一次的劃線相連。配制培養(yǎng)基→（調(diào)pH→分裝）→滅菌→倒平板→接種和分離→培養(yǎng)平板劃線連續(xù)劃線稀釋分散灼燒冷卻末端一劃破配制培養(yǎng)基→（調(diào)pH→分裝）→滅菌→倒平板→接種和分離→培養(yǎng)稀釋涂布平板法配