實驗二植物基因組DNA的提取背景知識植物細(xì)胞中有哪些細(xì)胞器中含有DNA？與動物細(xì)胞的差別？背景知識DNA的存在形式背景知識DNA的存在形式背景知識DNA的存在形式核苷酸雙螺旋結(jié)構(gòu)一級結(jié)構(gòu)-核小體二級機構(gòu)-螺線管三級結(jié)構(gòu)-超螺旋管四級機構(gòu)-染色體+組蛋白背景知識DNA的存在形式DNA為白色類似石棉樣的纖維狀物，大都呈酸味。DNA一般都溶于水，不溶于醇類、氯仿等有機溶劑，在高鹽溶液中的溶解度最大。在酸性溶液中易水解，中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定。

DNA的理化性質(zhì)取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚1%β-巰基乙醇2ml取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚1ml酚-氯仿-異戊醇蒸餾水100ml蒸餾水100ml十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)、氯化鈉、Tris飽和酚、異丙醇、β-巰基乙醇、無水乙醇、氯仿、異戊醇、液氮、聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)1ml酚-氯仿-異戊醇5mol/lEDTA8ml1ml酚-氯仿-異戊醇酚:氯仿:異戊醇=25:24:140ml1ml酚-氯仿-異戊醇取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚DNA為白色類似石棉樣的纖維狀物，大都呈酸味。蒸餾水100ml抽提時不要有太力振動，操作也要仔細(xì)，盡量避免DNA斷裂。取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚實驗?zāi)康恼莆誄TAB法提取植物DNA的原理掌握CTAB法提取植物DNA的實驗方法注意：此方法會把少量RNA提取出來，故后面通稱核酸的提取。實驗原理核酸-蛋白質(zhì)復(fù)合體CTAB-核酸復(fù)合體+CTAB蛋白質(zhì)變性劑蛋白質(zhì)變性除去+高鹽溶液溶解+沉淀劑沉淀核酸新鮮菠菜葉片十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)

、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)、氯化鈉、Tris飽和酚、異丙醇、β-巰基乙醇、無水乙醇、氯仿、異戊醇、液氮、聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)實驗材料實驗儀器離心機：3臺/12管水浴鍋：65℃研缽：10個移液槍（包括槍頭）10mmolTris-HCl(PH8.過尖的槍頭會把DNA鏈弄斷。取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚氯仿:異戊醇=24:1100ml抽提時不要有太力振動，操作也要仔細(xì)，盡量避免DNA斷裂。部分藥品有毒，操作中應(yīng)注意安全防護；取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚1ml酚-氯仿-異戊醇1ml酚-氯仿-異戊醇1%β-巰基乙醇2ml5mol/lEDTA8ml蒸餾水100ml5mol/lEDTA8ml5mol/lEDTA(PH8.部分藥品有毒，操作中應(yīng)注意安全防護；10000r/min蒸餾水100ml剛投入水浴時可以稍快速的晃動，之后的晃動一定要輕柔！CTAB4g取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚蒸餾水100ml十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)、氯化鈉、Tris飽和酚、異丙醇、β-巰基乙醇、無水乙醇、氯仿、異戊醇、液氮、聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)實驗試劑2%CTAB抽提液：250mlCTAB4g無水乙醇5ml蒸餾水100ml200ml燒杯5mol/lNaCl56ml1mol/lTris-HCl(PH8.0)20ml0.5mol/lEDTA8ml定容至250ml高壓滅菌冷卻后121℃20min1%β-巰基乙醇2mlPVP-405g4℃保存實驗試劑氯仿:異戊醇=24:1100ml氯仿96ml異丙醇4ml4℃保存TE緩沖液（保存DNA）PH8.050ml10mmolTris-HCl(PH8.0)0.5ml

0.5mol/lEDTA(PH8.0)0.1ml定容至50ml調(diào)PH8.0高壓滅菌冷卻后121℃20min4℃保存酚:氯仿:異戊醇=25:24:140ml取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚2.破碎細(xì)胞，釋放溶解核酸快速研磨成粉末輕搖勻取出冷卻2分鐘液氮1ml65℃CTAB抽提液1g菠菜葉片65℃水浴鍋40分鐘每10分鐘輕搖10ml離心管預(yù)冷的研缽實驗步驟1.準(zhǔn)備工作蒸餾水洗凈，晾干，剪小備用CTAB抽提液65℃水浴鍋預(yù)熱3.抽提去除蛋白質(zhì)2.1ml酚-氯仿-異戊醇振蕩2分鐘12000r/min離心10分鐘10ml離心管分層上清液核酸-CTAB變性蛋白有機溶劑10ml離心管2ml氯仿-異戊醇顛倒混勻12000r/min離心10分鐘分層變性蛋白有機溶劑上清液核酸-CTAB上清液核酸-CTAB實驗步驟4.沉淀核酸上清液核酸-CTAB-20℃異丙醇2.5ml10ml離心管室溫沉淀10000r/min離心10分鐘5.核酸的洗滌、脫鹽400ul無水乙醇去上清液10000r/min離心10分鐘6.核酸的保存100ulTE緩沖液5.-20℃保存實驗步驟慢搖30秒室溫15分鐘在整個實驗過程中應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作；部分藥品有毒，操作中應(yīng)注意安全防護；磨樣時最好是加液氮，磨樣速度要快，使材料處于低溫狀態(tài)。剛投入水浴時可以稍快速的晃動，之后的晃動一定要輕柔！抽提時不要有太力振動，操作也要仔細(xì)，盡量避免DNA斷裂。將DNA加入異丙醇時用的槍頭一定要剪過的。這點很重要。過尖的槍頭會把DNA鏈弄斷。

注意事項思考題本實驗中用到的各種試劑的作用是什么？本實驗中進行了幾次離心操作，每次的目的？蒸餾水100ml酚:氯仿:異戊醇=25:24:140ml取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚植物細(xì)胞中有哪些細(xì)胞器中含有DNA？10000r/min蒸餾水100ml1%β-巰基乙醇2mlCTAB4g將DNA加入異丙醇時用的槍頭一定要剪過的。破碎細(xì)胞，釋放溶解核酸在酸性溶液中易水解，中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定。蒸餾水100ml1%β-巰基乙醇2ml過尖的槍頭會把DNA鏈弄斷。1ml酚-氯仿-異戊醇CTAB4g1ml酚-氯仿-異戊醇注意：此方法會把少量RNA提取出來，故后面通稱核酸的提取。酚:氯仿:異戊醇=25:24:140ml蒸餾水100ml在整個實驗過程中應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作；1%β-巰基乙醇2ml蒸餾水100ml無水乙醇5ml蒸餾水洗凈，晾干，剪小備用取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚實驗二植物基因組DNA的提取十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)、氯化鈉、Tris飽和酚、異丙醇、β-巰基乙醇、無水乙醇、氯仿、異戊醇、液氮、聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)無水乙醇5ml1ml酚-氯仿-異戊醇部分藥品有毒，操作中應(yīng)注意安全防護；12000r/min1ml酚-氯仿-異戊醇蒸餾水100ml部分藥品有毒，操作中應(yīng)注意安全防護；抽提時不要有太力振動，操作也要仔細(xì)，盡量避免DNA斷裂。取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚2%CTAB抽提液：250ml取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚植物細(xì)胞中有哪些細(xì)胞器中含有DNA？1ml酚-氯仿-異戊醇12000r/min在酸性溶液中易水解，中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定。1ml酚-氯仿-異戊醇植物細(xì)胞中有哪些細(xì)胞器中含有DNA？取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚氯仿:異戊醇=24:1100ml5mol/lEDTA8ml1ml酚-氯仿-異戊醇蒸餾水100ml酚:氯仿:異戊醇=25:24:140mlDNA一般都溶于水，不溶于醇類、氯仿等有機溶劑，在高鹽溶液中的溶解度最大。5mol/lEDTA8ml1%β-巰基乙醇2mlDNA為白色類似石棉樣的纖維狀物，大都呈酸味。TE緩沖液（保存DNA）PH8.10000r/minDNA為白色類似石棉樣的纖維狀物，大都呈酸味。抽提時不要有太力振動，操作也要仔細(xì)，盡量避免DNA斷裂。蒸餾水100ml取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚酚:氯仿:異戊醇=25:24:140ml5mol/lEDTA8ml取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚10000r/min1%β-巰基乙醇2ml抽提時不要有太力振動，操作也要仔細(xì)，盡量避免DNA斷裂。取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚CTAB4g無水乙醇5ml蒸餾水100ml將DNA加入異丙醇時用的槍頭一定要剪過的。在酸性溶液中易水解，中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定。蒸餾水100ml將DNA加入異丙醇時用的槍頭一定要剪過的。蒸餾水100ml5mol/lEDTA8ml本實驗中進行了幾次離心操作，每次的目的？十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)、氯化鈉、Tris飽和酚、異丙醇、β-巰基乙醇、無水乙醇、氯仿、異戊醇、液氮、聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)在酸性溶液中易水解，中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定。蒸餾水100ml取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚按照學(xué)號分組進行實驗，每6人一組，一組做3管，用一個研缽。1mol/lTris-HCl(PH8.部分藥品有毒，操作中應(yīng)注意安全防護；1mol/lTris-HCl(PH8.2%CTAB抽提液：250ml取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚按照學(xué)號分組進行實驗，每6人一組，一組做3管，用一個研缽。12000r/min5mol/lEDTA(PH8.在酸性溶液中易水解，中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定。5mol/lEDTA8ml12000r/min過尖的槍頭會把DNA鏈弄斷。5mol/lEDTA8ml取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚在酸性溶液中易水解，中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定。酚:氯仿:異戊醇=25:24:140ml1%β-巰基乙醇2ml5mol/lEDTA8ml氯仿:異戊醇=24:1100ml蒸餾水100ml掌握CTAB法提取植物DNA的實驗方法實驗二植物基因組DNA的提取取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚實驗二植物基因組DNA的提取十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)、氯化鈉、Tris飽和酚、異丙醇、β-巰基乙醇、無水乙醇、氯仿、異戊醇、液氮、聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)氯仿:異戊醇=24:1100ml在酸性溶液中易水解，中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定。按照學(xué)號分組進行實驗，每6人一組，一組做3管，用一個研缽。1ml酚-氯仿-異戊醇無水乙醇5ml1mol/lTris-HCl(PH8.剛投入水浴時可以稍快速的晃動，之后的晃動一定要輕柔！取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚蒸餾水100ml掌握CTAB法提取植物DNA的實驗方法2%CTAB抽提液：250ml抽提時不要有太力振動，操作也要仔細(xì)，盡量避免DNA斷裂。部分藥品有毒，操作中應(yīng)注意安全防護；10000r/min氯仿:異戊醇=24:1100ml取20ml前面配制的氯仿-異戊醇+20mlTris飽和酚按照學(xué)號分組進行實驗，每6人一組，一組做3管，