獸醫(yī)檢驗(yàn)理論考核試題及答案一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共40分）1.革蘭氏染色過程中，關(guān)鍵的區(qū)分步驟是：A.結(jié)晶紫初染B.碘液媒染C.95%乙醇脫色D.沙黃復(fù)染答案：C解析：革蘭氏染色的核心在于乙醇脫色步驟。革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁肽聚糖層厚，乙醇處理后脫水使孔徑縮小，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物保留，呈紫色；革蘭氏陰性菌肽聚糖層薄，類脂含量高，乙醇溶解類脂后細(xì)胞壁通透性增加，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物被洗脫，復(fù)染后呈紅色。2.檢測(cè)豬瘟病毒抗原最常用的血清學(xué)方法是：A.間接血凝試驗(yàn)（IHA）B.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）C.瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（AGP）D.免疫熒光試驗(yàn)（IFA）答案：B解析：ELISA因操作簡(jiǎn)便、敏感性高、可批量檢測(cè)，是豬瘟病毒抗原檢測(cè)的首選方法。IFA雖特異性強(qiáng)但需熒光顯微鏡，AGP敏感性較低，IHA主要用于抗體檢測(cè)。3.犬細(xì)小病毒（CPV）核酸檢測(cè)的常用靶基因是：A.VP1基因B.VP2基因C.NS1基因D.E基因答案：B解析：VP2基因是CPV的主要衣殼蛋白編碼基因，具有高度保守性和特異性，是RT-PCR檢測(cè)的常用靶標(biāo)。NS1為非結(jié)構(gòu)蛋白基因，VP1與VP2部分重疊但變異性較高，E基因常見于冠狀病毒。4.奶牛布魯氏菌病實(shí)驗(yàn)室診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”是：A.虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）B.試管凝集試驗(yàn)（SAT）C.細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定D.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）答案：C解析：細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定通過從病料中分離布魯氏菌并進(jìn)行生化鑒定，是確診布魯氏菌病的最直接依據(jù)。其他方法為血清學(xué)篩查，可能出現(xiàn)假陽性或假陰性。5.雞球蟲病糞便檢查時(shí)，最常用的蟲卵濃縮方法是：A.離心沉淀法B.飽和鹽水漂浮法C.自然沉淀法D.蔗糖溶液漂浮法答案：B解析：球蟲卵囊密度（約1.10-1.15）小于飽和鹽水（1.18），漂浮法可使卵囊上浮便于觀察。蔗糖溶液雖密度更高，但成本較高；沉淀法適用于密度大的蟲卵（如吸蟲卵）。6.檢測(cè)血清中IgM抗體時(shí)，為避免IgG干擾，常用的處理方法是：A.56℃滅活30分鐘B.加入二巰基乙醇（2-ME）C.用SPA吸附IgGD.超速離心分離答案：B解析：2-ME可破壞IgM的二硫鍵使其失活，但對(duì)IgG影響較?。↖gG二硫鍵更穩(wěn)定），因此常用于區(qū)分IgM（急性期）和IgG（恢復(fù)期）抗體。SPA（葡萄球菌蛋白A）可結(jié)合IgG的Fc段，但無法特異性去除IgG。7.進(jìn)行細(xì)菌藥敏試驗(yàn)時(shí)，MH培養(yǎng)基的pH值應(yīng)嚴(yán)格控制在：A.6.8-7.0B.7.0-7.2C.7.2-7.4D.7.4-7.6答案：C解析：MH培養(yǎng)基（Mueller-Hinton瓊脂）的pH值直接影響抗菌藥物的活性，pH7.2-7.4時(shí)藥物擴(kuò)散和細(xì)菌生長(zhǎng)最適，超出范圍會(huì)導(dǎo)致抑菌圈大小異常（如堿性環(huán)境增強(qiáng)氨基糖苷類活性，酸性環(huán)境增強(qiáng)大環(huán)內(nèi)酯類活性）。8.犬瘟熱病毒（CDV）的核酸類型是：A.單股正鏈RNAB.單股負(fù)鏈RNAC.雙股RNAD.雙股DNA答案：B解析：CDV屬于副黏病毒科，基因組為單股負(fù)鏈RNA（-ssRNA），需先轉(zhuǎn)錄為正鏈RNA才能翻譯蛋白。單股正鏈RNA病毒如犬冠狀病毒（CCoV），雙股RNA病毒如輪狀病毒，雙股DNA病毒如犬腺病毒（CAV）。9.牛結(jié)核病PPD皮內(nèi)試驗(yàn)的注射部位是：A.頸部皮內(nèi)B.尾根皮內(nèi)C.耳背皮內(nèi)D.肩胛部皮下答案：A解析：牛結(jié)核PPD試驗(yàn)規(guī)范要求注射于頸部中1/3處皮內(nèi)（劑量0.1mL），72小時(shí)后測(cè)量注射部位皮厚變化（≥4mm為陽性）。尾根或耳背因皮膚薄厚不均易影響結(jié)果。10.檢測(cè)弓形蟲IgG抗體時(shí)，若出現(xiàn)“前帶現(xiàn)象”，主要原因是：A.抗原過量B.抗體過量C.電解質(zhì)濃度不當(dāng)D.溫度過高答案：B解析：前帶現(xiàn)象指抗體濃度過高時(shí)，抗原與抗體結(jié)合形成小復(fù)合物，無法形成可見沉淀或凝集，導(dǎo)致假陰性。后帶現(xiàn)象為抗原過量所致。11.豬偽狂犬病病毒（PRV）gE基因缺失疫苗免疫豬群后，區(qū)分野毒感染的檢測(cè)靶標(biāo)是：A.gB抗體B.gC抗體C.gD抗體D.gE抗體答案：D解析：PRV基因缺失疫苗（如gE-缺失苗）免疫豬僅產(chǎn)生gB、gC、gD抗體，而野毒感染豬會(huì)同時(shí)產(chǎn)生gE抗體。因此檢測(cè)gE抗體可區(qū)分疫苗免疫和野毒感染。12.羊泰勒蟲病血液涂片染色時(shí)，最常用的染色劑是：A.瑞氏染色B.姬姆薩染色C.革蘭氏染色D.抗酸染色答案：B解析：姬姆薩染色對(duì)血液寄生蟲（如泰勒蟲、巴貝斯蟲）的胞漿和核結(jié)構(gòu)著色更清晰，可觀察到紅細(xì)胞內(nèi)的蟲體（環(huán)形、梨形等形態(tài)）。瑞氏染色常用于白細(xì)胞分類，革蘭氏染色用于細(xì)菌，抗酸染色用于分枝桿菌。13.進(jìn)行病毒空斑試驗(yàn)時(shí)，培養(yǎng)基中加入羧甲基纖維素的主要目的是：A.提供營養(yǎng)B.限制病毒擴(kuò)散C.調(diào)節(jié)pH值D.防止細(xì)菌污染答案：B解析：羧甲基纖維素為半固體物質(zhì)，可限制病毒在培養(yǎng)基中的擴(kuò)散，使每個(gè)感染的細(xì)胞形成獨(dú)立空斑，便于計(jì)數(shù)病毒滴度（PFU/mL）。14.馬傳染性貧血（EIA）的特異性診斷方法是：A.瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（Coggins試驗(yàn)）B.中和試驗(yàn)C.血凝抑制試驗(yàn)D.PCR檢測(cè)答案：A解析：Coggins試驗(yàn)（馬傳貧瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)）是OIE推薦的EIA確診方法，檢測(cè)馬血清中的抗EIAV抗體，特異性強(qiáng)且結(jié)果穩(wěn)定。PCR雖敏感但可能因病毒載量低出現(xiàn)假陰性。15.禽白血病病毒（ALV）的主要傳播方式是：A.水平傳播B.垂直傳播C.蟲媒傳播D.接觸傳播答案：B解析：ALV可通過種蛋垂直傳播（經(jīng)卵傳遞），是雛雞感染的主要途徑。水平傳播（接觸分泌物）效率較低，蟲媒傳播無明確證據(jù)。16.檢測(cè)牛奶中結(jié)核分枝桿菌時(shí)，樣本前處理常用的消化劑是：A.NaOH溶液B.胰酶溶液C.生理鹽水D.福爾馬林答案：A解析：牛奶中含大量蛋白質(zhì)和脂肪，需用4%NaOH消化（破壞雜菌和雜質(zhì)），離心后取沉淀接種培養(yǎng)基。胰酶用于組織消化，福爾馬林用于固定。17.犬巴貝斯蟲病的病原學(xué)診斷首選方法是：A.糞便蟲卵檢查B.血液涂片鏡檢C.血清抗體檢測(cè)D.PCR檢測(cè)答案：B解析：巴貝斯蟲寄生于紅細(xì)胞內(nèi)，血液涂片（姬姆薩染色）可直接觀察到蟲體（梨形、環(huán)形），是最快速的病原學(xué)診斷方法。PCR雖敏感但需實(shí)驗(yàn)室條件，抗體檢測(cè)無法區(qū)分現(xiàn)癥感染。18.豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）的基因分型依據(jù)是：A.ORF1a基因B.ORF3基因C.ORF5基因D.NSP2基因答案：C解析：ORF5基因編碼主要囊膜蛋白（GP5），變異率高，是PRRSV基因分型（如歐洲型、美洲型）的主要依據(jù)。NSP2基因用于區(qū)分高致病性毒株。19.奶牛隱性乳房炎檢測(cè)常用的方法是：A.乳汁pH測(cè)定B.體細(xì)胞計(jì)數(shù)（SCC）C.細(xì)菌分離培養(yǎng)D.乳脂率檢測(cè)答案：B解析：SCC（體細(xì)胞數(shù)）是隱性乳房炎的核心指標(biāo)（正常≤4×105個(gè)/mL，感染時(shí)≥5×105個(gè)/mL）。pH測(cè)定受飼料影響大，細(xì)菌培養(yǎng)需時(shí)間，乳脂率與炎癥無直接關(guān)聯(lián)。20.狂犬病病毒的包涵體（內(nèi)基氏小體）最常出現(xiàn)在：A.大腦海馬回神經(jīng)細(xì)胞B.肝細(xì)胞C.肺泡上皮細(xì)胞D.腎小管上皮細(xì)胞答案：A解析：內(nèi)基氏小體是狂犬病病毒在神經(jīng)細(xì)胞胞漿內(nèi)形成的嗜酸性包涵體，最易在大腦海馬回、小腦浦肯野細(xì)胞中檢出，是狂犬病的特征性病理標(biāo)志。二、判斷題（每題1分，共10分。正確打“√”，錯(cuò)誤打“×”）1.細(xì)菌的莢膜是必需結(jié)構(gòu)，缺失后會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌死亡。（×）解析：莢膜是細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)（非必需），主要功能是抗吞噬和黏附，缺失后細(xì)菌仍可存活。2.病毒的復(fù)制周期包括吸附、穿入、脫殼、生物合成、裝配與釋放。（√）3.糞便潛血試驗(yàn)陽性提示消化道出血超過5mL/天。（√）解析：潛血試驗(yàn)（如鄰聯(lián)甲苯胺法）靈敏度為5-10mL/天，陽性提示少量出血。4.支原體因無細(xì)胞壁，對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素敏感。（×）解析：β-內(nèi)酰胺類（如青霉素）作用于細(xì)胞壁肽聚糖合成，支原體無細(xì)胞壁，故不敏感（對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類敏感）。5.雞白痢沙門氏菌可通過全血平板凝集試驗(yàn)快速檢測(cè)。（√）解析：全血平板凝集試驗(yàn)使用雞白痢多價(jià)抗原，滴加全血后1-2分鐘觀察凝集，適用于現(xiàn)場(chǎng)篩查。6.犬瘟熱病毒可通過呼吸道、消化道和胎盤傳播。（√）7.寄生蟲的感染性蟲卵是指含有幼蟲的蟲卵。（√）解析：如蛔蟲卵需在外界發(fā)育為含幼蟲的感染性蟲卵（約2-3周），被宿主攝入后才能感染。8.間接ELISA中，酶標(biāo)記的是抗原。（×）解析：間接ELISA的酶標(biāo)記物是二抗（抗宿主IgG的抗體），直接ELISA的酶標(biāo)記物是抗原。9.牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）可引起持續(xù)感染（PI牛），其血液中病毒載量極高。（√）10.熒光定量PCR（qPCR）的Ct值與初始模板量成反比。（√）解析：Ct值（循環(huán)閾值）越小，說明達(dá)到熒光閾值所需循環(huán)數(shù)越少，初始模板量越多。三、簡(jiǎn)答題（每題8分，共40分）1.簡(jiǎn)述細(xì)菌分離培養(yǎng)的基本步驟及注意事項(xiàng)。答案：步驟：（1）樣本采集：無菌操作采集病料（如組織、分泌物），避免雜菌污染；（2）樣本處理：液體樣本直接劃線，固體樣本用無菌生理鹽水稀釋成懸液；（3）接種培養(yǎng)基：根據(jù)目標(biāo)菌選擇培養(yǎng)基（如血瓊脂用于需氧菌，厭氧培養(yǎng)基用于厭氧菌），采用分區(qū)劃線法或涂布法；（4）培養(yǎng)條件：需氧菌37℃培養(yǎng)18-24小時(shí)，厭氧菌需厭氧環(huán)境（如厭氧罐），微需氧菌需5%CO2；（5）純化培養(yǎng)：挑取單個(gè)菌落再次劃線，獲得純培養(yǎng)物。注意事項(xiàng)：（1）嚴(yán)格無菌操作，避免環(huán)境雜菌污染；（2）根據(jù)細(xì)菌特性選擇培養(yǎng)基（如麥康凱用于腸道桿菌，SS瓊脂用于沙門氏菌）；（3）控制培養(yǎng)時(shí)間，避免過度培養(yǎng)導(dǎo)致細(xì)菌自溶；（4）記錄培養(yǎng)條件（溫度、氣體環(huán)境），便于后續(xù)鑒定。2.簡(jiǎn)述PCR技術(shù)的基本原理及在獸醫(yī)檢驗(yàn)中的應(yīng)用。答案：原理：PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）通過變性、退火、延伸三步循環(huán)擴(kuò)增特定DNA片段。變性（94-95℃）使雙鏈DNA解旋為單鏈；退火（50-65℃）使引物與單鏈DNA模板特異性結(jié)合；延伸（72℃）在TaqDNA聚合酶作用下，以dNTP為原料合成互補(bǔ)鏈。每輪循環(huán)模板量翻倍，30輪后可擴(kuò)增10^9倍。應(yīng)用：（1）病原檢測(cè)：如檢測(cè)病毒（PRRSV、CDV）、細(xì)菌（布魯氏菌、結(jié)核分枝桿菌）、寄生蟲（弓形蟲）的核酸；（2）基因分型：通過擴(kuò)增可變區(qū)基因（如PRRSVORF5）區(qū)分毒株亞型；（3）耐藥基因檢測(cè)：如檢測(cè)細(xì)菌β-內(nèi)酰胺酶基因（bla）；（4）轉(zhuǎn)基因動(dòng)物檢測(cè)：擴(kuò)增外源插入基因片段。3.列舉5種常見動(dòng)物寄生蟲的實(shí)驗(yàn)室診斷方法（包括蟲種、樣本類型、檢測(cè)方法）。答案：（1）豬蛔蟲：樣本為糞便，檢測(cè)方法為飽和鹽水漂浮法（觀察蛔蟲卵，橢圓形、棕黃色、外有蛋白膜）；（2）犬心絲蟲：樣本為血液，檢測(cè)方法為微絲蚴檢查（厚血膜法或離心沉淀法，鏡檢血液中的微絲蚴）；（3）雞球蟲：樣本為糞便或腸黏膜刮取物，檢測(cè)方法為飽和鹽水漂浮法（觀察球蟲卵囊，圓形或橢圓形，有雙層殼）；（4）牛泰勒蟲：樣本為血液，檢測(cè)方法為姬姆薩染色血涂片鏡檢（紅細(xì)胞內(nèi)可見環(huán)形、梨形蟲體）；（5）羊腦包蟲（細(xì)粒棘球蚴）：樣本為血清，檢測(cè)方法為間接血凝試驗(yàn)（IHA）或ELISA（檢測(cè)抗棘球蚴抗體）。4.簡(jiǎn)述血清學(xué)試驗(yàn)中“假陽性”和“假陰性”的常見原因。答案：假陽性原因：（1）交叉反應(yīng)：檢測(cè)抗原與其他病原體有共同抗原表位（如布魯氏菌與耶爾森菌O:9型）；（2）非特異性反應(yīng)：血清中存在類風(fēng)濕因子（RF）、異嗜性抗體等干擾物質(zhì)；（3）操作誤差：樣本污染、試劑過期、判讀錯(cuò)誤；（4）前帶現(xiàn)象：抗體濃度過高導(dǎo)致抗原-抗體復(fù)合物過小，無法顯色（常見于高免血清）。假陰性原因：（1）抗體未產(chǎn)生：處于感染窗口期（如病毒感染早期，抗體尚未達(dá)到檢測(cè)閾值）；（2）抗體水平過低：慢性感染或免疫抑制狀態(tài)；（3）后帶現(xiàn)象：抗原過量導(dǎo)致抗體被完全結(jié)合，無游離抗體與檢測(cè)試劑反應(yīng)；（4）試劑靈敏度不足：如使用低效價(jià)抗原或過期酶標(biāo)抗體；（5）樣本保存不當(dāng)：血清反復(fù)凍融導(dǎo)致抗體失活。5.簡(jiǎn)述奶牛布魯氏菌病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)流程（包括篩查試驗(yàn)和確診試驗(yàn)）。答案：（1）篩查試驗(yàn)（現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)）：①虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）：取0.03mL虎紅抗原與0.03mL待檢血清混合，2-4分鐘內(nèi)觀察凝集（出現(xiàn)凝集顆粒為陽性）；②全乳環(huán)狀試驗(yàn)（MRT）：取1mL乳汁與0.05mL布魯氏菌染色抗原混合，37℃孵育1小時(shí)，觀察乳脂層顏色（藍(lán)色環(huán)為陽性，紅色均勻?yàn)殛幮裕＃?）確診試驗(yàn)（實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證）：①試管凝集試驗(yàn)（SAT）：血清倍比稀釋（1:25、1:50、1:100等），加入抗原后37℃孵育24小時(shí)，以50%凝集（++）的最高稀釋度為效價(jià)（?！?:100為陽性）；②補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）：檢測(cè)IgG抗體，特異性高于SAT（?！?:10為陽性）；③細(xì)菌分離培養(yǎng)：采集流產(chǎn)胎兒胃內(nèi)容物、胎盤或乳汁，接種改良Thayer-Martin培養(yǎng)基，37℃5%CO2培養(yǎng)7-10天，分離布魯氏菌后進(jìn)行生化鑒定（氧化酶+、尿素酶+、H2S+等）。四、案例分析題（每題15分，共30分）案例1：某豬場(chǎng)育肥豬群出現(xiàn)發(fā)熱（40-41.5℃）、咳嗽、呼吸困難，部分豬皮膚發(fā)紅，剖檢可見間質(zhì)性肺炎、淋巴結(jié)腫大。懷疑為豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS），請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方案（包括樣本采集、檢測(cè)方法、結(jié)果判讀）。答案：（1）樣本采集：①病豬：采集抗凝血（EDTA抗凝，用于病毒核酸檢測(cè)）、血清（用于抗體檢測(cè)）、肺臟/淋巴結(jié)組織（10%福爾馬林固定用于病理檢查，無菌保存用于病毒分離）；②病死豬：重點(diǎn)采集肺臟（PRRSV靶器官）、扁桃體（病毒載量高），無菌分裝冷凍保存。（2）檢測(cè)方法及結(jié)果判讀：①病毒核酸檢測(cè)（RT-PCR/qPCR）：提取樣本RNA，擴(kuò)增ORF5基因。陽性結(jié)果（Ct≤35）提示PRRSV感染；陰性需結(jié)合抗體檢測(cè)或重復(fù)檢測(cè)（可能處于窗口期）。②血清抗體檢測(cè)（ELISA）：檢測(cè)PRRSV抗體（IgM/IgG）。IgM陽性提示近期感染（感染后7-14天出現(xiàn)），IgG陽性提示感染2周后或疫苗免疫（需區(qū)分野毒與疫苗株，如檢測(cè)NSP2抗體）。③病毒分離鑒定：將組織勻漿接種Marc-145細(xì)胞（PRRSV敏感細(xì)胞），觀察細(xì)胞病變（CPE：細(xì)胞圓縮、脫落），通過間接免疫熒光（IFA）確認(rèn)病毒抗原。④病理檢查：肺組織切片可見間質(zhì)性肺炎（肺泡隔增寬、淋巴細(xì)胞浸潤），免疫組化（IHC）檢測(cè)肺組織中的PRRSV抗原（陽性細(xì)胞胞漿呈棕黃色）。（3）綜合判讀：若RT-PCR陽性且抗體IgM陽性，結(jié)合臨床癥狀可確診為急性PRRSV感染；若僅IgG陽性無核酸陽性，可能為既往感染或疫苗免疫；若核酸陰性但臨床癥狀典型，需考慮混合感