維生素a、c、e對(duì)克氏原螯蝦幼蝦生長(zhǎng)和生長(zhǎng)的影響

克氏原始繁殖蝦（procalanude權(quán)益）也被稱為小型水生隆蝦，屬于甲殼類、足食、海關(guān)科和元海蝦。它是中國(guó)重要的淡水經(jīng)濟(jì)蝦。由于克氏原螯蝦肉味鮮美,營(yíng)養(yǎng)豐富1材料和方法1.1研究基地養(yǎng)殖蝦實(shí)驗(yàn)用克氏原螯蝦幼蝦為在華中師范大學(xué)克氏原螯蝦研究基地飼養(yǎng)孵化出來(lái)的蝦。隨機(jī)選取2月齡大的克氏原螯蝦,平均體質(zhì)量(0.518±0.009)g,體形相近,肢體健全,健康活潑。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1實(shí)驗(yàn)蝦及飼料將三個(gè)因子(維生素A、C、E添加量)各設(shè)3個(gè)水平,維生素A(V將各因子按照各水平分別添加到基礎(chǔ)飼料中,安排了18種飼料配方,具體配方見(jiàn)表2,糊精用來(lái)補(bǔ)平差額部分。飼料混合均勻后,用壓面機(jī)壓制成長(zhǎng)條,再切成2mm左右長(zhǎng)的顆粒,于烘箱內(nèi)60℃烘干8h,然后密封貯存在4℃冰箱內(nèi)備用。飼料在實(shí)驗(yàn)用水中3h內(nèi)不散。將實(shí)驗(yàn)蝦分為18組,每組25只。實(shí)驗(yàn)時(shí)每日喂食兩次,分別為8:00—9:00,17:00—18:00,喂食量以第二次喂食時(shí)略有剩余為準(zhǔn)。每日吸去水族箱內(nèi)殘餌與排泄物,并換水。充氧泵持續(xù)充氧,水溫19℃左右。50d后測(cè)定生長(zhǎng)指標(biāo)(成活率、增重率)、免疫相關(guān)指標(biāo)及免疫相關(guān)基因的表達(dá)量。其中,各組相同的飼料成分為:小麥粉,15%;玉米粉,15%;魚(yú)粉,20%;黃豆粉,40%;魚(yú)油,2%;礦物質(zhì),1.5%。礦物質(zhì)的組成(質(zhì)量百分比)如下:KCl,2.8%;NaH1.2.2幼蝦存活率的計(jì)算實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),用電子天平測(cè)量克氏原螯蝦幼蝦的體質(zhì)量(精確到0.001g)?？耸显r幼蝦的成活率、增重率按公式計(jì)算:存活率(%)=100×(實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)幼蝦的數(shù)量/實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前幼蝦的數(shù)量);增重率(%)=100×(實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)幼蝦體質(zhì)量-實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前幼蝦體質(zhì)量)/實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前幼蝦體質(zhì)量。1.2.3抗氧化酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,取蝦肝胰腺和鰓放入400μL的雙蒸水中,冰上勻漿,4℃8,000g離心15min,取上清,放入-80℃冰箱中備用。蛋白濃度的測(cè)定參照南京建成試劑盒說(shuō)明書(shū),先測(cè)定各樣品的蛋白濃度、然后根據(jù)其濃度加水稀釋,使不同樣品的濃度大致一致,且濃度在試劑盒說(shuō)明書(shū)中規(guī)定的范圍,最后再測(cè)各樣品的蛋白濃度。丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性的測(cè)定參照南京建成試劑盒說(shuō)明書(shū)。酚氧化酶(PO)活性測(cè)定方法見(jiàn)參考文獻(xiàn)1.2.4與免疫相關(guān)的基因發(fā)現(xiàn)的測(cè)定RNA提取和基因表達(dá)分析參考本研究組前期的方法2結(jié)果2.1維生素a、c、e的添加量對(duì)克氏原螯蝦幼蝦成活率和增重率的影響不同維生素添加量組合下,克氏原螯蝦幼蝦的成活率不同。根據(jù)表4的極差分析可以發(fā)現(xiàn),在實(shí)驗(yàn)所設(shè)計(jì)的三個(gè)因子中,C因子(維生素E的添加量)的極差值(12.7)最大,說(shuō)明其對(duì)克氏原螯蝦幼蝦的成活率的影響最大,其次是B因子(維生素C添加量),而A因子(維生素A添加量)的極差值(4)最小,且小于空列的極差值(5.4),說(shuō)明其對(duì)克氏原螯蝦幼蝦的成活率沒(méi)有實(shí)質(zhì)性的影響。由表4分析可以發(fā)現(xiàn),因子水平組合為A克氏原螯蝦幼蝦增重率的極差分析結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可知,C因子(維生素E的添加量)的極差最大,說(shuō)明其對(duì)克氏原螯蝦幼蝦的增重率的影響最大,其次是A因子,而B(niǎo)因子的極差值(5.6)小于空列的極差值(11.8),說(shuō)明其對(duì)克氏原螯蝦幼蝦增重率的影響沒(méi)有重要影響。由表4分析可以發(fā)現(xiàn),因子水平組合為A2.2維生素a、c、e的添加量對(duì)克氏原螯蝦mda和sod活性的影響丙二醛(MDA)是脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的最主要的產(chǎn)物之一,其在體內(nèi)過(guò)多積累會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒害,因此其在體內(nèi)含量越低,說(shuō)明機(jī)體免疫力越高,清除這些毒害物質(zhì)的能力越強(qiáng)。由表5可知,三個(gè)因子都對(duì)克氏原螯蝦幼蝦肝胰腺中MDA含量有實(shí)質(zhì)性影響,其中B因子影響最大,A因子影響最小。由表5分析可以發(fā)現(xiàn),因子水平組合為A超氧化物歧化酶(SOD)是生物體內(nèi)重要的抗氧化酶,能夠清除體內(nèi)自由基,對(duì)抗與阻斷氧自由基對(duì)細(xì)胞造成的損害?，F(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn),在蝦、蟹等甲殼動(dòng)物中,飼料中添加適當(dāng)?shù)木S生素提高了機(jī)體的抗氧化能力,使得機(jī)體內(nèi)過(guò)氧化產(chǎn)物較少,而較低水平的過(guò)氧化產(chǎn)物(如MDA)不能刺激SOD活性,所以免疫力增高時(shí)會(huì)出現(xiàn)MDA含量和SOD活性都比較低的現(xiàn)象酚氧化酶(PO)是在氧分子存在下,能把酚類氧化成醌的酶,進(jìn)而形成黑色素,在機(jī)體免疫過(guò)程中起重要作用。已有研究表明,克氏原螯蝦肝胰腺中PO活性較低,而鰓組織中PO活性較強(qiáng)2.3sod基因相對(duì)表達(dá)量的影響SOD基因編碼超氧化物歧化酶,如前所述這是清除自由基的主要酶,負(fù)責(zé)抵抗氧化脅迫。由表6可知,三個(gè)因子都對(duì)克氏原螯蝦幼蝦肝胰腺中SOD基因相對(duì)表達(dá)量有實(shí)質(zhì)性影響,其中B因子影響最大,A因子影響最小。如上所述,甲殼動(dòng)物的免疫力提高時(shí),會(huì)出現(xiàn)MDA含量和SOD活性都很低的現(xiàn)象GPx基因編碼谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GPx),這是包括甲殼動(dòng)物在內(nèi)的許多生物抗氧化系統(tǒng)中的一個(gè)關(guān)鍵酶。本課題組前期的工作表明,GPx在克氏原螯蝦的免疫過(guò)程中起重要作用3維生素c添加量對(duì)克氏原螯蝦幼蝦生長(zhǎng)和免疫的影響研究中發(fā)現(xiàn),在所設(shè)計(jì)的三個(gè)因子中,維生素E添加量對(duì)克氏原螯蝦幼蝦的成活、生長(zhǎng)和免疫的影響最大。在成活率和增重率這兩個(gè)指標(biāo)中,維生素E是最重要的影響因子。維生素E對(duì)MDA含量、PO活性以及SOD和GPx基因表達(dá)水平也有實(shí)質(zhì)性的影響。這與其他水生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的研究結(jié)果一致我們的研究還表明,維生素C在克氏原螯蝦幼蝦的成活和免疫中發(fā)揮了重要作用。特別說(shuō)明的是,在該研究中使用的所有免疫相關(guān)指標(biāo)中,除PO活性外,都與維生素C的添加量有實(shí)質(zhì)性的關(guān)聯(lián),這進(jìn)一步說(shuō)明,維生素C在動(dòng)物免疫過(guò)程中起重要作用。對(duì)羅氏沼蝦(Macrobrachiumrosenbergii)來(lái)說(shuō),與未添加維生素C的飼料組相比,投喂添加了維生素C的飼料組的蝦增重率顯著升高在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的三個(gè)因子中,維生素A添加量對(duì)克氏原螯蝦幼蝦的存活、生長(zhǎng)和免疫的影響相對(duì)較小,但對(duì)增重率、MDA含量、以及SOD和GPx基因的表達(dá)水平有實(shí)質(zhì)性的影響。當(dāng)飼料中維生素A添加量為水平3(0.006%)時(shí),增重率最大,GPx基因的表達(dá)水平最低,而飼料中維生素A添加量為水平2(0.0054%)時(shí),MDA含量和SOD基因表達(dá)水平最低。這些結(jié)果表明,飼料中添加一定量的維生素A可以促進(jìn)生長(zhǎng),降低MDA含量和SOD、GPx基因的表達(dá)水平,增強(qiáng)免疫力。需要注意的是,不同發(fā)育階段的生物對(duì)維生素A的需求量不同,幼體階段可能比成體階段需要更多的維生素A,