PBL（艾滋病實(shí)驗(yàn)診斷）HIV的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)HIV抗體檢測(cè)

HIV抗原檢測(cè)

病毒學(xué)檢測(cè)何為抗體？何為抗原？抗體（antibody）：指機(jī)體的免疫系統(tǒng)在抗原刺激下，由B淋巴細(xì)胞或記憶細(xì)胞增殖分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。主要分布在血清中，也分布于組織液及外分泌液中?？乖╝ntigen

）：是指能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，并能與抗體在體內(nèi)外結(jié)合，發(fā)生免疫效應(yīng)的物質(zhì)。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

--基本原理第一步：

酶+HIV抗原=酶標(biāo)記抗原

標(biāo)記酶：辣根過(guò)氧化物酶（HRP）堿性磷酸酶葡萄糖氧化酶等第二步：酶標(biāo)記抗原與吸附在固相載體上的HIV抗體（來(lái)自血清樣品電泳分離）特異性結(jié)合形成酶-抗原-抗體復(fù)合物固相載體：聚苯乙烯微量板，即我們通常所指的ELISA

硝酸纖維膜，稱為斑點(diǎn)ELISA（Dot-ELISA）疏水性聚脂布，稱為布ELISA（C－ELISA）。第三步：滴加底物溶液，底物可在酶-抗原-抗體復(fù)合物作用下使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型變成有色的氧化型，出現(xiàn)顏色反應(yīng)，通過(guò)ELISA檢測(cè)儀進(jìn)行定量測(cè)定

通過(guò)底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定有無(wú)相應(yīng)的免疫反應(yīng)，顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。免疫印跡試驗(yàn)

--基本原理第一步：HIV全病毒抗原經(jīng)過(guò)電泳,將分子量大小不等的蛋白帶分離開(kāi)來(lái)，把這些已經(jīng)分離的不同蛋白帶電轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。將此膜切割成條狀,每一條硝酸纖維素膜上均含有HIV病毒抗原。膠體金免疫層析法

---基本原理將HIV抗原固定于硝酸纖維素膜的某一區(qū)帶，將硝酸纖維素膜一端浸入血清樣品后，由于毛細(xì)管作用，樣品將沿著該膜向前移動(dòng)，當(dāng)移動(dòng)至固定有抗體的區(qū)域時(shí)，樣品中相應(yīng)的抗原即與該抗體發(fā)生特異性結(jié)合用免疫膠體金或免疫酶染色可使該區(qū)域顯示一定的顏色，從而實(shí)現(xiàn)特異性的免疫診斷。HIV抗原（P24)的檢測(cè)HIV抗原檢測(cè)指的是檢測(cè)HIV的核心蛋白P24。P24抗原出現(xiàn)于感染的早期，此時(shí)感染者具有高度的傳染性。P24抗原的檢測(cè)有助于多數(shù)急性感染者血清抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)之前的診斷，大約可以使抗體窗口期縮短1周病毒學(xué)檢測(cè)方法1.定量PCR2.HIVRNA的RT-PCR檢測(cè)法3.DNA芯片15PCR技術(shù)的工作原理5`3`3`5`5`3`3`5`++5`5`變性、退火引物5`3`3`5`+5`5`dNTPsTaqDNA聚合酶不同長(zhǎng)度新鏈DNA循環(huán)1+引物變性、退火1625～30次循環(huán)后，模板DNA得到擴(kuò)增5`3`3`5`+5`3`3`5`++5`3`3`5`+5`3`3`5`++dNTP TaqDNA聚合酶均一長(zhǎng)度新鏈DNA循環(huán)2定量PCR在PCR擴(kuò)增的同時(shí)摻入一熒光物質(zhì)（SYBRGreen法），產(chǎn)物擴(kuò)增后，在每個(gè)反應(yīng)管上的熒光探測(cè)器就可以實(shí)時(shí)的檢測(cè)出熒光強(qiáng)度的變化，根據(jù)循環(huán)次數(shù)與產(chǎn)物的關(guān)系曲線就可以算出目標(biāo)核算的量。

反轉(zhuǎn)錄-PCR以RNA為模版反轉(zhuǎn)錄合成cDNA、再以cDNA為模版進(jìn)行特異性擴(kuò)增通過(guò)含有HIV特異的寡腺苷酸探針和OS的寡腺苷酸探針包被酶標(biāo)板，與連續(xù)稀釋的擴(kuò)增產(chǎn)物雜交，用生物素辣根過(guò)氧化物酶顯色系統(tǒng)顯色，用450nm波長(zhǎng)比色，結(jié)合HIV稀釋度和定量OS而測(cè)出每mI所含HIVRNA的拷貝數(shù)

那么HIV有哪些藥物治療呢？HIV治療藥物一.抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物二.免疫調(diào)節(jié)藥物三.抗機(jī)會(huì)性感染藥四.抗ＡＩＤＳ中藥五.

“雞尾酒”療法1.核苷類

核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑作為“雞尾酒”藥物的基礎(chǔ)藥物，是仿造構(gòu)成脫氧核糖核酸基本物質(zhì)的一種，藉此抑制逆轉(zhuǎn)錄病毒復(fù)制所需的逆轉(zhuǎn)錄酶的工作。2.非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制藥非核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，直接阻礙逆轉(zhuǎn)錄酶。3.蛋白酶抑制藥該類藥物與核苷類聯(lián)用可有效地抑制ＨＩＶ復(fù)制,并減少不良反應(yīng)。4.侵入抑制藥侵入抑制藥是一種新的實(shí)驗(yàn)性抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物。本類藥物以干擾ＨＩＶ與宿主細(xì)胞的融合而達(dá)到抗病毒的作用。二.免疫調(diào)節(jié)藥物干擾素、白細(xì)胞介素2和丙種球蛋白等,都具有抗病毒、抗細(xì)菌感染和增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)的作用。其中白細(xì)胞介素2還可使患者淋巴細(xì)胞數(shù)增加,改善人體免疫功能。機(jī)會(huì)性感染是指一些致病力較弱的病原體，在人體免疫功能正常時(shí)不能致病，但當(dāng)人體免疫功能降低時(shí)，它們乘虛而入，侵入人體內(nèi)，導(dǎo)致各種疾病。正常菌群在機(jī)體免疫功能低下，寄居部位改變或菌群失調(diào)等特定條件下引起的感染稱為機(jī)會(huì)性感染。四.抗ＡＩＤＳ中藥經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)有些中藥能直接殺死ＨＩＶ,有些中藥能間接地增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬能力,并能促進(jìn)抗體的生成。中藥毒副作用相對(duì)較小,價(jià)格便宜,有較好的臨床應(yīng)用前景。五、“雞尾酒”療法提到雞尾酒療法，我們就不得不提及一個(gè)人很久很久以前啊，有這么一個(gè)人，他叫——何大一大家可能對(duì)雞尾酒并不陌生，這是西方人非常推崇的一種飲酒方式，將幾種不同風(fēng)格的酒調(diào)在一起，品嘗起來(lái)則有別一番特別的感受。何大一教授將他的這種治療方法形象地命名為“雞尾酒”療法與此也有相似的含意：就是同時(shí)使用3—4種藥物，每一種藥物針對(duì)艾滋病毒繁殖周期中的不同環(huán)節(jié)，從而達(dá)到抑制或殺滅艾滋病毒，治愈艾滋病的目的。艾滋病的治療之所以困難，一個(gè)重要的原因就在于艾滋病毒并非一成不變，在傳播和繁殖的過(guò)程中它常常發(fā)生一些結(jié)構(gòu)和功能的變化，這時(shí)即使使用原先可能很有效的藥，此時(shí)也不管用了，導(dǎo)致病毒可以繼續(xù)在體內(nèi)大量繁殖。而采用3—4種藥物進(jìn)行組合治療的“雞尾酒”療法，由于作用于艾滋病毒感染的各個(gè)環(huán)節(jié)，其療效大大提高了。臨床治療的效果也非常鼓舞人心：治療幾星期后，10名病人中的7人身體狀況明顯好轉(zhuǎn)，持久低熱沒(méi)有了，身上的潰瘍消失了，精力充沛起來(lái)，更神奇的是血液中竟已查不出艾滋病毒的蹤跡！因此在遭受了十幾年的恐懼和絕望后，人們總算看到了一線求治的希望。似乎雞尾酒療法給我們帶來(lái)了福音。但是。。。。。長(zhǎng)期服藥副作用1、脂質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良2、背腹部脂肪異常堆積3、血脂濃度異常升高4、脂肪流失……最嚴(yán)重的可導(dǎo)致：肝功能衰竭和糖尿病

對(duì)早期艾滋病病人相當(dāng)有效，但對(duì)中晚期患者的幫助不大因?yàn)檫@些病人的免疫系統(tǒng)已被艾滋病毒不可逆性地破壞了；此外此療法的花費(fèi)也甚高，并非一般人所能承受。此外，“雞尾酒”療法雖然能夠消滅人體內(nèi)的大部分艾滋病病毒，但是，仍有很少的病毒隱藏在淋巴結(jié)內(nèi)。費(fèi)用從前用外國(guó)雞尾酒療法，費(fèi)用非常昂貴，達(dá)到1萬(wàn)元/月，到了2002年，通過(guò)艾滋病醫(yī)學(xué)專家們的不斷改進(jìn)，把費(fèi)用降到了3000元/月，到了2009年，中國(guó)生產(chǎn)出國(guó)產(chǎn)藥，費(fèi)用大為降低，大約每月只需480多元。這使得更多的艾滋病人有能力承擔(dān)起這個(gè)醫(yī)療費(fèi)用。（祖國(guó)生產(chǎn)的（此處省去一千字））艾滋病現(xiàn)狀?。?/p>

近年來(lái)，艾滋病正由男同性戀者、吸毒者、有償獻(xiàn)血者、賣淫婦女等高危行為人群向一般人群擴(kuò)散。據(jù)統(tǒng)計(jì)，從1981年美國(guó)發(fā)現(xiàn)首例艾滋病病例至今，每年全球有200萬(wàn)人死于艾滋病，年均新增艾滋病病毒感染者270萬(wàn)，目前全世界有3340萬(wàn)名艾滋病病毒感染者。艾滋病能治愈嗎？如果能治這個(gè)，世界就亂了…（此處省去一千字）

自1981年發(fā)現(xiàn)世界首例AIDS病例后不久，研究人員便開(kāi)始探討治愈的可能性，但在長(zhǎng)達(dá)幾十年時(shí)間里，他們也只是在“談?wù)劇倍选＜词棺罾硐氲腍IV治療手段在遏制病毒方面也收效甚微。1999年，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)于接受抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物治療的患者來(lái)說(shuō)，即使血液中的病毒水平達(dá)到無(wú)法檢測(cè)的程度，但他們的體內(nèi)仍存在大約100萬(wàn)個(gè)潛伏著病毒的被感染細(xì)胞。那么

愛(ài)之病為什么這么難治呢？原因有幾個(gè)一.艾滋病病毒是一種RNA病毒它會(huì)使用逆轉(zhuǎn)錄酶把RNA整合到細(xì)胞的DNA中。它有大量突變的機(jī)會(huì)。因此，病毒很快會(huì)對(duì)療法產(chǎn)生抵抗力。

二.通常，滋病病毒都會(huì)在人體存活數(shù)年，在病人不知情的情況下透過(guò)性行為或血液交換進(jìn)行傳播。艾滋病病毒甚至在藥物殺死了血液中所有的細(xì)胞后仍能幸存。它把自己整合在寄主細(xì)胞的DNA中，保持?jǐn)?shù)年的休眠狀態(tài)，免疫系統(tǒng)不會(huì)對(duì)其作出反應(yīng)，