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免疫印跡法檢測ENA抗體實驗?zāi)康恼莆彰庖哂≯E方法的基本原理、檢測ENA抗體的基本操作方法;自身抗體的其它檢測方法和相關(guān)的臨 床意義;實驗原理酶免疫印跡 抗原SDS電泳/轉(zhuǎn)膜 (點膜) 免疫反應(yīng)(加一抗/二抗) 顯色試劑和器材1.待測標本;2.檢測用膜載體;3.濃縮液;4.酶標二抗;5.顯色底物A/B;6.終止液;實驗步驟1. 配制工作液:按1:10的比例稀釋濃縮液.(10 ml );2. 向每一反應(yīng)槽孔加入0.5ml工作液和1份測試條, 溫 育12分鐘;3. 向每一反應(yīng)槽孔加入待測血清10l,充分混勻, 溫育30分鐘;4. 棄去槽內(nèi)液體,加入1ml工作液,洗滌1分鐘, 重 復(fù)洗滌4次;5. 加入0.5ml工作液,酶標二抗20l,充分 混勻, 溫 育30分鐘;6. 同3步洗滌;7. 加入顯色液A/B 各0.5ml, 室溫反應(yīng)10分鐘;8. 每槽加入終止液0.5 ml, 混允, 1分鐘后棄去槽內(nèi) 液體,用蒸餾水洗滌3次; 9. 取出測試條,自然干燥后進行結(jié)果判定。結(jié)果判斷1. 測試條藍線與標準譜帶“0”線對齊;2. 測試條藍線下方的第一條區(qū)帶為質(zhì)控線;3. 帶型分析;注意事項1. 標本溶血,高血脂,RF;2. 試劑盒放置至室溫;3. 取測試條時防止損壞膜上抗原;4. 溫育反應(yīng)時間要準確;
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