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文檔簡介

1、1 超敏反應(yīng)及其檢測 2概念超敏反應(yīng)(Hypersensitivity)即變態(tài)反應(yīng)(allergy):是已致敏的機體再次受到相同抗原刺激后發(fā)生的一種以生理功能紊亂或組織細胞損傷為主的異常免疫應(yīng)答。由此引起的疾病為超敏反應(yīng)性疾病。引起超敏反應(yīng)的抗原物質(zhì)稱為變應(yīng)原(Allergens)3分型I型 速發(fā)型超敏反應(yīng)型 細胞溶解型或細胞毒型超敏反應(yīng)型 免疫復(fù)合物型或血管炎型超敏反應(yīng)型 遲發(fā)型超敏反應(yīng)4Type hypersensitivity特點發(fā)生機制臨床常見疾病免疫學(xué)檢驗5特點發(fā)作快、消退也快常引起生理功能紊亂,但無嚴重組織損傷由特異性IgE介導(dǎo),無補體參與有明顯個體差異和遺傳素質(zhì)主要病變?yōu)槊氀?/p>

2、擴張、通透性增加、平滑肌收縮6發(fā)生機制 7肥大細胞脫顆粒 8臨床常見疾病過敏性休克 藥物過敏性休克、血清過敏性休克皮膚變態(tài)反應(yīng) 皮膚尋麻疹、濕疹、血管性水腫消化道變態(tài)反應(yīng) 惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉呼吸道變態(tài)反應(yīng) 支氣管哮喘和變應(yīng)性鼻炎9免疫學(xué)檢驗體內(nèi)試驗 皮膚試驗(皮內(nèi)、挑刺) 肥大細胞活性+IgE(肥大細胞結(jié)合的)體外試驗 IgE測定(總IgE、特異性IgE)、吸入物變應(yīng)原過篩試驗 、相關(guān)細胞及其它因素測定 沒有一種單一的試驗?zāi)鼙WC其結(jié)果的準確,體內(nèi)和體外試驗互為補充,以得到準確的特異性診斷。10皮膚試驗皮內(nèi)試驗(intracutaneous test): 是我國目前應(yīng)用最廣泛的一種試驗方法。

3、將試驗用變應(yīng)原提取液和對照液各0.02ml分別用皮試針頭注入皮內(nèi),使局部形成直徑23mm的圓形皮丘。反應(yīng)須觀察1520分鐘,根據(jù)風(fēng)團、紅暈大小判定結(jié)果。11皮膚點刺試驗 將變應(yīng)原和對照液分別滴于試驗部位皮膚(前臂掌側(cè))用點刺針垂直刺入皮膚表層,以刺破皮膚而不出血為度。15分鐘后觀察結(jié)果。安全、易于操作、臨床相關(guān)性好,推薦為最佳皮膚試驗方法陽性反應(yīng):紅暈 12I型超敏反應(yīng)皮膚試驗結(jié)果的判定標準反應(yīng)程度 皮內(nèi)試驗 挑刺試驗 無反應(yīng)或小于對照 無反應(yīng)或小于對照 + 風(fēng)團35mm,紅暈對照,20mm,無風(fēng)團 + 風(fēng)團1015mm,伴紅暈 紅暈伴風(fēng)團 + 風(fēng)團15mm,紅暈伴偽足 紅暈伴偽足和風(fēng)團 13

4、皮試應(yīng)用:尋找變應(yīng)原預(yù)防藥物或疫苗過敏評價:屬于活體內(nèi)試驗,能反映機體各種因素綜合作用的實際免疫狀況。操作簡便,結(jié)果可信度大注意:若已知對某種物質(zhì)高度過敏,則不宜再做皮試;身體虛弱、哮喘發(fā)作期及不合作的兒童也不宜做皮試。皮試時應(yīng)配備常規(guī)的搶救藥品和設(shè)施。14血清IgE的檢測總IgE測定方法:雙抗體夾心法( ELISA、化學(xué)發(fā)光法等)影響總IgE水平的因素:年齡、性別、種族、寄生蟲感染等總IgE水平高不一定是過敏過敏者總IgE水平不一定高15特異性IgE測定 特異性IgE(Specific IgE,sIgE)是指能與某種變應(yīng)原特異性結(jié)合的IgE。需用純化的變應(yīng)原去檢測相應(yīng)的IgE抗體,是體外確定

5、變應(yīng)原的重要方法。16方法放射性變應(yīng)原吸附試驗(radioallegosorbent test,RAST) 酶聯(lián)免疫測定法 免疫印跡測定法CAP變應(yīng)原檢測系統(tǒng)(CAP system) 17RAST: 載體-過敏原+待檢血清 Ag-IgE+同位素標記的抗人IgE固相放射性計數(shù)與標本IgE含量成正比 特異性強、敏感性高、影響因素少、對患者安全、與皮試和支氣管激發(fā)試驗的符合率高、有助于尋找過敏原ELISA:原理同RAST,標記物改為酶標記的抗人IgE。國內(nèi)應(yīng)用較多。18CAP system瑞典Pharmacia公司推出的一種根據(jù)RAST原理設(shè)計的新型全自動檢測血清特異性IgE的熒光固相免疫檢測系統(tǒng)。

6、 CAP是一個很小的塑料帽狀物,內(nèi)置纖維素粒(具有多孔性、彈性和親水性 )單價變應(yīng)原CAP:只結(jié)合一種變應(yīng)原多價變應(yīng)原CAP:同時結(jié)合幾種變應(yīng)原19ImmunoCAP圖28-3 CAP的外形20 變應(yīng)原CAP+待測血清和IgE標準品 -半乳糖苷酶標記的抗人IgE 4-甲基傘形酮-半乳糖苷 熒光分光光度計讀取吸光 值 熒光強度與sIgE呈線形關(guān)系 整個檢測步驟,簡便、快速,敏感性高,可信性強。 21嗜酸粒細胞陽離子蛋白(ECP)的測定方法同CAP system測定sIgE,不同的是CAP中包被的不是變應(yīng)原,而是抗ECP抗體 ECP反映了嗜酸粒細胞激活的程度及其分泌毒性蛋白的能力,可作為監(jiān)測氣道炎

7、癥、指導(dǎo)哮喘抗炎治療的指標 22Type hypersensitivity &特點&發(fā)生機制&臨床常見疾病&免疫學(xué)檢驗23特點抗體(主要為IgG或IgM類)與靶細胞表面抗原結(jié)合,在補體、吞噬細胞和NK細胞參與下,導(dǎo)致靶細胞損傷或破壞。 靶細胞表面抗原:同種異型抗原、共同抗原、變性的自身抗原、外來抗原。24發(fā)生機制 細胞膜固有抗原或吸附的抗原半抗原刺激機體產(chǎn)生抗體IgG或IgM抗體結(jié)合細胞表面抗原激活補體調(diào)理吞噬ADCC刺激或阻斷作用溶解破壞靶細胞靶細胞功能紊亂2526臨床常見疾病輸血反應(yīng)溶血性輸血反應(yīng) ABO血型不符的輸血非溶血性輸血反應(yīng) 反復(fù)輸入含異型HLA血液 新生兒溶血癥母胎Rh血型不符

8、 母胎ABO血型不符 免疫性血細胞減少癥 藥物過敏性血細胞減少癥 自身免疫性溶血性貧血 抗腎小球基底膜型腎小球腎炎和風(fēng)濕性心肌炎 自身免疫性甲亢 2728 2930II型超敏反應(yīng)的免疫學(xué)檢測Rh抗體的檢測:酶介質(zhì)法抗球蛋白檢測: 直接Coombs試驗:直接檢測紅細胞表面不完全抗體(檢測紅細胞是否已致敏) 間接Coombs試驗:用已知不完全抗體檢測紅細胞上相應(yīng)的抗原,或用已知抗原的紅細胞檢測受檢血清中相應(yīng)的不完全抗體.31 直接法Coombs試驗RBC為Rh+7S的IgG體內(nèi)發(fā)生+抗IgG體外測試抽血作用:檢測紅細胞表面結(jié)合的不完全抗體。臨床意義:新生兒溶血癥和自身免疫性溶血性貧血的診斷。32間

9、接法Coombs試驗RBC為Rh+ 受檢血清(不完全抗體?)+抗IgG作用:檢測游離在血清中的不完全抗體。臨床意義:輸血前的交叉配血、不相溶輸血后的抗體檢測。檢測母體 Rh(D)抗體有助于及早發(fā)現(xiàn)及避免新生兒溶血癥。33Type hypersensitivity 特點發(fā)生機制臨床常見疾病 免疫學(xué)檢驗34特點致敏誘發(fā)的抗體與細胞外游離抗原結(jié)合后,形成中等分子可溶性免疫復(fù)合物(immune complex,IC)沉積于全身或局部血管壁基底膜,激活補體,引起以中性粒細胞浸潤為主的炎癥反應(yīng)和組織損傷。故此型又稱為免疫復(fù)合物型或血管炎型超敏反應(yīng)35發(fā)生機制 中性粒細胞浸潤釋放生物活性介質(zhì)激活凝血系統(tǒng)釋放

10、血管活性胺類中分子可溶性IC沉積于組織激活補體系統(tǒng)產(chǎn)生C3a、C5a、C3b嗜堿粒細胞、肥大細胞脫顆?;罨“逖軆?nèi)皮細胞間隙增大吞噬免疫復(fù)合物、釋放溶酶體酶形成微血栓血管內(nèi)皮細胞間隙增大血管通透性增加水腫組織炎性損傷局部缺血、出血水腫局部或全身免疫復(fù)合物病36臨床常見疾病局部免疫復(fù)合物病 Arthus反應(yīng) 人類局部過敏反應(yīng) 全身免疫復(fù)合物病 血清?。╯erum sickness) 急性免疫復(fù)合物型腎小球腎炎 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 系統(tǒng)性紅斑狼瘡 37免疫學(xué)檢驗循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測 組織固定免疫復(fù)合物的檢測 免疫復(fù)合物檢測的意義及應(yīng)用 38循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測循環(huán)免疫復(fù)合物是指存在于血液中的IC 抗

11、原特異性檢測技術(shù):檢測已知抗原與相應(yīng)抗體形成的IC難以常規(guī)應(yīng)用非抗原特異性檢測技術(shù):檢測血清中IC的總量,并不考慮形成IC的抗原性質(zhì) 39物理測定法(PEG比濁法 )補體相關(guān)測定法(C1q固相法 )抗球蛋白測定法(mRF固相抑制試驗 )細胞技術(shù)測定法(Raji細胞試驗 )40 41PEG法簡便易行,敏感度20mg/LHAHG。但不能反映小分子IC的情況,結(jié)果易受多種大分子蛋白質(zhì)的干擾及溫度影響,故特異性和重復(fù)性較差;低密度脂蛋白高球蛋白血癥和標本反復(fù)凍融也可引起濁度增加,應(yīng)予注意。42C1q固相法 43C1q固相法敏感性高,達0.1 mg/LHAHG,重復(fù)性好C1q制品不易精制,且純品不穩(wěn)定尚

12、需注意的是,待檢血清需先5630min處理,以滅活其中的補體和破壞已與CIC結(jié)合的C1q,空出補體結(jié)合點。44mRF固相抑制試驗 固相mRF + 血清標本 同位素標記的熱聚合IgG 固相中放射性與CIC的含量呈負相關(guān)本法敏感性較高,但mRF來源困難,操作費時,難于常規(guī)應(yīng)用 45Raji細胞試驗固相Raji細胞 + 標本 離心沉淀熒光標記抗人IgG或同位素標記抗人IgG 測沉淀細胞的放射活性方法簡單、敏感性高、特異性強,但易受血清游離IgG影響,且Raji細胞 培養(yǎng)較困難。46Type hypersensitivity 特點 發(fā)生機制 臨床常見疾病 免疫學(xué)檢驗47特點由致敏T細胞再次接觸相應(yīng)抗原后所致的以單個核細胞浸潤為主的炎癥反應(yīng)。反應(yīng)發(fā)生遲緩,一般在4872小時反應(yīng)才達高峰,無抗體、補體參與,過程同細胞免疫應(yīng)答。細胞免疫缺陷者或無胸腺的裸鼠不會發(fā)生該型變態(tài)反應(yīng)。48發(fā)生機制抗原機體致敏淋巴細胞TDTHCTL單個核細胞浸潤為主的炎癥反應(yīng)清除抗原損傷自身細胞免疫遲發(fā)型超敏反應(yīng)

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