1、 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法熱力滅菌 濕熱滅菌 高壓蒸汽滅菌法 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法熱力滅菌 濕熱滅菌 高壓蒸汽滅菌法 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法熱力滅菌 濕熱滅菌 高壓蒸汽滅菌法 當開始加熱滅菌時，先關閉排氣閥，當壓力升到5kPa左右時，打開排氣閥，集中排出空氣，讓壓力降到零，然后關閉排氣閥進行升壓滅菌。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法熱力滅菌 濕熱滅菌 高壓蒸

2、汽滅菌法 在高壓滅菌過程中，其壓力、溫度、時間對營養(yǎng)成分有影響，可采用提高溫度、壓力和縮短滅菌時間的辦法減少對營養(yǎng)成分的破壞。雖然溫度升高了，破壞增加，但受熱時間縮短，則總的破壞量減少。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法熱力滅菌 濕熱滅菌 常壓蒸汽滅菌法 采用自然壓力的蒸汽進行滅菌的方法。有蒸籠滅菌、流通蒸汽滅菌灶等。常見的是用鋼筋水泥砌成大型的流通蒸汽滅菌灶，一般流通蒸汽溫度為1OO，殺菌時間為6-8H。其滅菌容量大，可充分殺死微生物，有的一次可滅菌幾千瓶菌種。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅

3、菌方法熱力滅菌 濕熱滅菌 常壓蒸汽滅菌法 滅菌灶結(jié)構(gòu)簡單，成本低廉，可自行建造，使用普遍，但是滅菌時間長，儲耗大且常有滅菌不徹底的現(xiàn)象。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法熱力滅菌 濕熱滅菌 間歇滅菌法 指間歇一定時間，連續(xù)消毒幾次而滅菌的方法，適合于不耐高溫的培養(yǎng)基的滅菌，此法是在常壓下加熱到100，保持20-30分鐘，以殺死其中的營養(yǎng)體細胞，然后將培養(yǎng)基在常溫下或保溫箱中(2837)培養(yǎng)，使芽孢發(fā)芽長成營養(yǎng)體，再用同法殺死新長成的營養(yǎng)體細胞，如此反復三次，即可殺死培養(yǎng)基中的全部芽孢和營養(yǎng)體，達到滅菌的目的。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、

4、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法熱力滅菌 濕熱滅菌 煮沸消毒法 將物品放入水中煮沸一定時間進行消毒的方法?？蓺⑺牢⑸锏臓I養(yǎng)體，但對細菌的芽孢、真菌休眠體效果差。若在水中加入25的石炭酸或1的碳酸氫鈉，可提高消毒效果。此法適于制種及栽培過程中所需的一些物品、器具、器材的消毒。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法熱力滅菌 濕熱滅菌 巴氏消毒法 將物品在60-70度的溫度下經(jīng)一定時間消毒，殺死有害微生物的方法。適合于不耐高溫的培養(yǎng)基以及一些食品如牛奶、酒類、飲料的消毒，既可殺死有害微生物，又不破壞營養(yǎng)成分。如在蘑菇培養(yǎng)的發(fā)酵期間

5、，通常采用60-62度的巴氏消毒法，消毒47h，可殺死培養(yǎng)料中的病蟲雜菌。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法輻射滅菌 利用輻射所產(chǎn)生的能量進行殺菌的方法，稱為輻射滅菌。它可分為電離輻射和非電離輻射。a射線、b射線、r射線、X射線等屬電離輻射；紫外線等為非電離輻射。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法輻射滅菌 紫外線輻射 在200300nm范圍內(nèi)紫外線的殺菌作用最好。紫外線的殺菌作用是因為它可以被蛋白質(zhì)(約280nm)和核酸(約260nm)吸收，造成變性失活,引起致死。紫外線的另一殺菌機制是因輻

6、射空氣產(chǎn)生臭氧，臭氧遇水又化合成雙氧水，這兩種物質(zhì)都能殺菌。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法輻射滅菌 紫外線輻射 無菌室、接種箱、超凈工作臺內(nèi)安裝的紫外線燈管，一般照射20-30min，可殺死空氣中的微生物。但紫外線穿透力很弱，一層普通玻璃或水均能濾去大量的紫外線，它也不能穿過衣物、紙張等大多數(shù)物體。因此，紫外線只適用于空氣和物體表面的消毒。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法輻射滅菌 紫外線輻射 我國蘑菇生產(chǎn)中使用的覆土，在日光下曝曬，就是利用日光及其中的紫外線進行殺菌。但必須注意，經(jīng)紫外

7、線照射致死或損傷的微生物，通過自然光照又能復活，稱為光復活作用。因此，經(jīng)紫外線殺菌后，不要立即開啟日光燈。如白天滅菌，無菌室、接種室需用黑窗簾或黑布套遮光半小時，以防止光復活作用，提高滅菌效果。紫外線對人體有害，特別對眼睛有損傷，因此，不能在開啟的紫外燈下工作 。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法輻射滅菌 將被照射物質(zhì)的原子核周圍的電子擊出，使其變?yōu)殛栯x子，擊出的電子可附著在其它原子上，使其變成陰離子，也可以再沖擊其它原子，引起繼發(fā)電離。在液體中，射線使水電離成H+和OH一 ，可直接作用于微生物細胞本身而致死。 電離輻射 第四章 食用菌菌種的

8、生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法藥劑消毒 利用化學藥劑進行殺菌或抑菌的方法稱為藥劑消毒 重金屬鹽類 微生物浸在O1-05硝酸銀、升汞溶液中，幾分鐘就會死亡。食用菌組織分離及菇木分離菌種時，常用01升汞溶液進行表面消毒。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法藥劑消毒 利用化學藥劑進行殺菌或抑菌的方法稱為藥劑消毒 氧化劑 常用于消毒的氧化劑有：1高錳酸鉀、1過氧化氫、02-05過氧乙酸、051漂白粉等。其殺菌機制是通過強烈的氧化作用，破壞微生物的原生質(zhì)或酶蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消

9、毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法藥劑消毒 利用化學藥劑進行殺菌或抑菌的方法稱為藥劑消毒 還原劑 甲醛是常用的殺菌還原劑。市售的福爾馬林含37一40的甲醛溶液。5的甲醛溶液常用于防腐。培養(yǎng)室、無菌室消毒常以lOmLm3福爾馬林原液加5g高錳酸鉀氧化熏蒸。甲醛能與微生物細胞蛋白質(zhì)的氨基結(jié)合，引起蛋白質(zhì)變性，使原生質(zhì)失去正?；顒幽芰?。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法藥劑消毒 利用化學藥劑進行殺菌或抑菌的方法稱為藥劑消毒 還原劑 噴霧消毒時甲醛溶液體積分數(shù)為5。甲醛還有防腐作用，以1：9稀釋液可浸制食用菌標本。但甲醛有毒，對人的眼睛、呼吸道、皮膚

10、等有強烈刺激，應注意防護。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法藥劑消毒 利用化學藥劑進行殺菌或抑菌的方法稱為藥劑消毒 表面活性劑 表面活性劑主要破壞菌體細胞膜結(jié)構(gòu)，造成胞內(nèi)物質(zhì)泄漏；蛋白變性，菌體死亡。025肥皂溶液是一種陰離于表面活性劑，它對鏈球菌作用比01升汞或07來蘇爾還要強。常用的025新潔爾滅液用于皮膚消毒，它是人工合成的季胺鹽陽離子表面活性劑。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法藥劑消毒 利用化學藥劑進行殺菌或抑菌的方法稱為藥劑消毒 酚 類 常用的苯酚又稱石炭酸，其0.5可用于皮膚消

11、毒，25%可用于器皿消毒，5可用于空氣噴霧消毒。來蘇爾是甲酚與肥皂的混合液，常用其35%消毒皮膚、用具；接種箱表面以及器皿。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法藥劑消毒 利用化學藥劑進行殺菌或抑菌的方法稱為藥劑消毒 醇 類 醇類可使膜受傷，同時能使蛋白質(zhì)變性：通常使用乙醇。無水乙醇與菌體接觸后使細胞迅速脫水、表面蛋白凝固，在菌體表面形成保護膜，阻止乙醇分子進一步滲入，影響殺菌力。在實際工作中常使用75的乙醇，殺菌效果最好。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法過濾除菌 對含有加熱不穩(wěn)定物質(zhì)的培養(yǎng)基

12、，如含有維生素、酶、抗菌素及某些化學藥品的培養(yǎng)液進行除菌時，通常采用過濾除菌。膜濾器采用微孔濾膜作材料，當含有微生物的液體通過微孔濾膜時，大于濾膜孔徑的微生物不能穿過濾膜而被阻攔在膜上，與通過的濾液分離開來；微孔濾膜具有孔徑小、價格低、可高壓滅菌、不易阻塞、濾速快及可處理大容量的液體等優(yōu)點。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法過濾除菌 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 一 、菌種的制作 6、消毒與滅菌 (2)常用消毒和滅菌方法滲透壓消毒 利用高滲透壓殺菌或抑菌的方法，稱為滲透壓消毒。在高滲溶液中，水從細胞中流出使細胞脫水，也因脫水發(fā)生質(zhì)壁分離，微生物不

13、能進行正常新陳代謝而死亡。鹽水菇就是利用高滲透壓的食鹽溶液來殺菌。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 將子實體的局部組織或孢子移接在斜面試管培養(yǎng)基上，獲得純培養(yǎng)菌絲的操作稱為菌種分離，菌種分離主要指一級種(母種)的分離。 有些與高等植物共生的菌根菌，如紅菇、松菇以及有些要在動物（如白蟻）存在下才產(chǎn)生子實體的菌類，因營養(yǎng)條件復雜，在目前實驗條件下，較難在簡單的培養(yǎng)基上獲得純菌種。 菌 種 分 離孢子分離法 組織分離法 菇木分離法 孢子彈射分離法 整菇插種法 鉤懸法 貼附法 菌褶上涂抹法 孢子印分離法 單孢子分離法 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 平板稀釋法 連續(xù)稀釋法 子實

14、體組織分離法 菌核組織分離法 菌索分離法 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 1、孢子分離法 在無菌操作條件下使孢子在適宜的培養(yǎng)基上萌發(fā)，長成菌絲體而獲得純菌種的方法稱為 孢子分離法。 特 點 菌絲菌齡短，因是有性繁殖產(chǎn)物，其菌絲生命力強。 侵染病毒的菌類可用孢子分離法脫毒。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 1、孢子分離法 種菇的選擇 在生產(chǎn)中必須選擇優(yōu)良品系中的優(yōu)良個體作分離材料。 選取八、九分成熟的，健壯無雜的第一或第二茬的子實體。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 1、孢子分離法 (1)孢子彈射分離法 孢子彈射分離法 它是利用孢子能自動彈射出子實體層的特性來

15、收集孢子。 整菇插種法 孢子收集器來收集孢子 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 1、孢子分離法 (1)孢子彈射分離法 整菇插種法 將鐘罩上的孔加上棉塞或包上6-8層紗布，放在墊有46層紗布(浸過01升汞液)的塘瓷盤上，紗布上放一培養(yǎng)器，內(nèi)放一個不銹鋼支架。 把收集器包裝好，滅菌備用。 將菌幕未破裂的成熟子實體洗干凈，用01升汞溶液或025的新沽爾滅浸泡2-3min，以殺死表面的雜菌。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 1、孢子分離法 (1)孢子彈射分離法 整菇插種法 對于菌幕破裂、子實層已外露的子實體或無菌幕包裹的子實體，可用棉花蘸75酒精涂擦子實體表面消毒。 按無菌操作要

16、求移人孢子收集器，插在支架上，在適宜的溫度中培養(yǎng)。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 1、孢子分離法 (1)孢子彈射分離法 整菇插種法 2-3天后孢子散落在培養(yǎng)皿中，加入無菌水，用針筒吸取孢子液，接種在斜面培養(yǎng)基中央，置于22-26恒溫箱中培養(yǎng)即可。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 1、孢子分離法 (1)孢子彈射分離法 鉤 懸 法 在生產(chǎn)上，采集木耳、銀耳孢子常用此法，傘菌也可采用此法。 先將新鮮成熟的耳片用無菌水沖洗，然后用無菌紗布將水吸干，取一小片掛在滅菌的鉤子上(傘菌則消毒后掛上，鉤子的另一端掛在三角瓶口。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 1、孢子分離法

17、 (1)孢子彈射分離法 瓶內(nèi)裝有培養(yǎng)基，在25下，培養(yǎng)24H。孢子落到培養(yǎng)基上后，取出耳片，塞上棉塞繼續(xù)培養(yǎng)，然后再轉(zhuǎn)入試管中培養(yǎng)。 鉤 懸 法 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 1、孢子分離法 (1)孢子彈射分離法 取一小塊成熟的菌褶或小塊菌蓋，用溶化的瓊脂或膠水、漿糊(需先滅菌)貼附在試管斜面的上方或培養(yǎng)皿皿蓋上，經(jīng)612h，待孢子落下后，立即將試管或培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基移到另一消毒過的空試管或培養(yǎng)皿中進行培養(yǎng)。 貼 附 法 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 1、孢子分離法 (2)菌褶上涂抹法 將傘菌子實體用75酒精表面消毒，按無菌操作用接種環(huán)直接插入兩片菌褶之間，輕輕地抹

18、過褶片表面，然后用劃線法涂抹于試管培養(yǎng)基上。 (3)孢子印分離法 取成熱子實體經(jīng)表面消毒后，切去菌柄，將菌褶向下放置于滅過菌的有色紙上，在20-24靜置一天，大量孢子落下形成孢子印，然后移少量孢子在試管培養(yǎng)基上培養(yǎng)。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 1、孢子分離法 (4)單孢子分離法 進行單孢子分離后，在人工控制的條件下，使兩個優(yōu)良品系的單孢于進行雜交，從而培育出新品種。 挑取少許孢子在無菌水中形成孢子懸浮液，取幾滴涂于培養(yǎng)基上，用無菌玻璃三角架推平。經(jīng)48-72h后，鏡檢孢子萌發(fā)情況。在單個孢子旁做好標記，然后將其轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，待菌落長到lcm左右時進行鏡檢，觀察有無鎖狀聯(lián)

19、合；初步確定是否是單核菌絲。 平 板 稀 釋 法 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 1、孢子分離法 (4)單孢子分離法 挑取一定量孢子，經(jīng)連續(xù)稀釋后，直到每滴稀釋液中只有一個孢子，然后滴人試管中保溫培養(yǎng)。當發(fā)現(xiàn)單個菌落時，轉(zhuǎn)到新試管中繼續(xù)培養(yǎng)，并通過鏡檢以確定是否為單孢菌落。 連續(xù)稀釋法 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 2、 組織分離法 組織分離法 是利用子實體內(nèi)部菌肉組織來獲得菌種的一種最簡便的方法，是生產(chǎn)上常用的一種分離菌種的方法。 組織分離是一種無性繁殖過程，所得到的菌種是營養(yǎng)后代，后代不易變異，菌株可保持原品種的優(yōu)良品質(zhì)。但如采用感染病毒的子實體進行組織分離時，常

20、得到帶病毒的菌絲體。 （1）子實體組織分離法 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 2、 組織分離法 選擇優(yōu)良的種菇作為分離材料，用無菌水沖洗后，用75%的酒精溶液表面消毒。取消毒過的刀片從菌柄或菌蓋中部縱切、撕開，挑取菌蓋與菌柄交界處的一小塊組織(火柴頭大小)，接種到PDA培養(yǎng)基上3-5天后，接種塊上產(chǎn)生白色絨毛狀菌絲。 （1）子實體組織分離法 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 2、 組織分離法 （2）菌核組織分離法 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 2、 組織分離法 茯苓、豬苓等的子實體不易采集，而它們的菌核卻易獲得，利用菌核分離，能得到該菌的純菌種。 將菌核表面

21、洗凈，用75酒精溶液消毒，切開菌核，取中間一小塊組織接種在PDA斜面培養(yǎng)基上，塞上棉塞，在25下培養(yǎng)。 在挑取組織塊時，應取大一點，因菌核是貯藏器官，其大 部分是由貯藏物質(zhì)一多糖物質(zhì)構(gòu)成，僅有少量菌絲。若挑得過小，只挑到貯藏物質(zhì)而沒有挑到菌絲，分離就不成功。 （3）菌索分離法 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 2、 組織分離法 蜜環(huán)菌、假蜜環(huán)菌等子實體難得，也無菌核，可用菌索來分離獲得其菌種。 操作方 法為： 用沾有75酒精溶液的棉花將菌索表面黑色皮層輕輕揩擦23次，在無菌操作條件下去掉黑色外皮層(菌鞘)，抽出其中白色菌髓部分，用無菌剪刀將菌髓剪下一小段，移植在培養(yǎng)基上，保溫培養(yǎng)，即

22、可獲得菌種。 菌索比較細小，在分離時極易污染，因此在培養(yǎng)基中應加入適量的抑菌的青霉素或鏈霉素。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 3、菇木分離法 利用菇木中菌絲的分離而獲得純菌種的方法。 這種方法污染較大 菇木分離法 能用孢子分離或組織分離的菌類，一般不用這種方法。 在自然界，銀耳菌絲與香灰菌絲在一起才能產(chǎn)生銀耳子實體，而用長有菌絲的段木來分離，能同時得到銀耳菌絲及香灰菌絲，因此，生產(chǎn)上用的銀耳菌種常采取菇木分離法，香菇、木耳等菌類也可采用菇木分離 法 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 3、菇木分離法 （ l）菇木的選擇與處理 菇木應在子實體發(fā)生季節(jié)采集，由于菇木含有很多水

23、分，細菌繁殖較快，分離易受污染，需將分離材料風干，則分離成功率較高。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 3、菇木分離法 （ l）菇木的選擇與處理 分離時僅需取1cm厚的一片或一塊菇木，一般選取菇木的中間部位，不取兩端，因兩端裸露在外，污染率高。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 3、菇木分離法 （ 2）菇木表面消毒 將菇木切成2-2.5cm3的小塊，用01的升汞水浸泡0.25lmin，然后用無菌水沖洗，無菌紗布吸干?；蛴?5的酒精溶液揩擦表面進行消毒。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 3、菇木分離法 （ 3）接種塊的選擇 取米粒大小一塊接入PDA試管培養(yǎng)基上，接

24、種塊小，污染的機會小。接種后把試管放到25下培養(yǎng),長出白色菌絲后，挑其尖端部位轉(zhuǎn)接到新培養(yǎng)基上，即得到純化的菌種。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 二 、菌種的分離 3、菇木分離法 菇 木 分 離 法 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 三 、菌種的接種培養(yǎng) 將試管中的菌種移接至另外的試管培養(yǎng)基上稱為轉(zhuǎn)管 。1、一級種的擴大培養(yǎng)步 驟 將待接的斜面試管以及一級種接種針等放人已消毒的接種箱內(nèi)。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 三 、菌種的接種培養(yǎng) 1、一級種的擴大培養(yǎng)步 驟 用75的酒精溶液棉球擦雙手消毒。 左手持住空白斜面試管和一級種，右手夾持棉塞，火焰封口。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 三 、菌種的接種培養(yǎng) 1、一

25、級種的擴大培養(yǎng)步 驟 將接種針頂端燒紅，并將整支接種棒在火焰上過火。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 三 、菌種的接種培養(yǎng) 1、一級種的擴大培養(yǎng)步 驟 挑取黃豆大小的菌絲瓊脂塊，迅速移接到空白斜面中央，將棉塞塞回試管。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 三 、菌種的接種培養(yǎng) 1、一級種的擴大培養(yǎng)步 驟 將已接種好的試管放人恒溫培養(yǎng)箱，在2428下培養(yǎng)，長滿試管即可使用。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 三 、菌種的接種培養(yǎng) 1、一級種的擴大培養(yǎng) 改進擴接法（左手拿一支試管） 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 三 、菌種的接種培養(yǎng) 2二級種的擴大培養(yǎng) 二級種培養(yǎng)基滅菌后應及時送人接種室(箱)或超凈工作臺內(nèi)；待冷卻至30以下

26、后，按無菌接種操作要求接種，每瓶接入一塊稍帶培養(yǎng)基的母種(如蠶豆大小)，接入瓶中的小洞口，并塞好棉塞，操作步驟與轉(zhuǎn)管相似 。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 三 、菌種的接種培養(yǎng) 2二級種的擴大培養(yǎng) 每支斜面母種一般可接原種6-8瓶。滅菌的原種培養(yǎng)基不宜久放，最遲在第二天必須接種完畢。接種后的菌種瓶應移人溫度適宜的培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，待菌絲長滿即成原種。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 三 、菌種的接種培養(yǎng) 2二級種的擴大培養(yǎng) 菌種瓶口先向上直立放于培養(yǎng)架，待菌絲已吃料后可重疊臥放。培養(yǎng)過程中應經(jīng)常檢查，如有污染應及時去除污染瓶。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 三 、菌種的接種培養(yǎng) 3三級種的擴大培養(yǎng) 二級種進一步

27、擴大培養(yǎng)即成三級種 三級種培養(yǎng)料常用耐高溫的聚丙烯塑料袋裝；也可用瓶裝。滅菌的接種培養(yǎng)料應移人接種室接種。只需幾粒玉米(或麥粒)原種，接人一袋栽培種培養(yǎng)料的洞中或料面上。一瓶原種可接30-50瓶(袋)栽培種，已接種的袋(瓶)放在適宜溫度下培養(yǎng)至菌絲長滿瓶即可用于生產(chǎn)。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 四、食用菌菌種的質(zhì)量鑒定 1、母種質(zhì)量鑒定 母種分離后菌種是否優(yōu)良，早期判斷困難，要經(jīng)過全面的鑒定，符合標準的母種才能擴大繁殖，制備原種和栽培種用于生產(chǎn)。其鑒定的主要項目：母種菌絲的形態(tài) 菌絲耐干耐濕試驗 菌絲生長速度 菌絲的高溫鍛煉 菌絲吃料能力 出菇試驗 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 四、食用菌菌種的質(zhì)

28、量鑒定 1、母種質(zhì)量鑒定 母種菌絲的形態(tài) 挑取少許菌絲在載片上，蓋片后在顯微鏡下觀察菌絲形態(tài)是否屬于所要培養(yǎng)的菌類。有鎖狀聯(lián)合的菌類還應看到鎖狀聯(lián)合。 菌絲耐干耐濕試驗 將母種移接到不同含水量(如50、60、70)的原種培養(yǎng)料中，觀察菌絲吃料及生長情況。如蘑菇含水量以60為宜，若它在較低及較高含水量的培養(yǎng)料中仍能正常生長，則說明其對干、濕度的適應性較強，可以用做擴大繁殖。 將母種菌絲接人干、濕度適宜的斜面培養(yǎng)基上，在適宜溫度下培養(yǎng)。若菌絲生長快，且整齊、濃密、健壯的則是優(yōu)良母種；若菌絲生長慢或特別快，且不整齊、凌亂的則不是好菌種。 菌絲生長速度 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 四、食用菌菌種的質(zhì)量鑒

29、定 1、母種質(zhì)量鑒定 菌絲的高溫鍛煉 將母種在適宜溫度20-25下培養(yǎng)1周后，置于35下進行24h高溫鍛煉，再回到適宜的溫度下培養(yǎng)。如恢復萌發(fā)快，菌絲不發(fā)黃、不倒伏，仍然旺盛生長的，說明該母種耐高溫性強，可用來擴大培養(yǎng)。 菌絲吃料能力 將母種接人培養(yǎng)料上，若吃料快，則可用于擴大繁殖。 出菇試驗 將菌種接入木屑或其它培養(yǎng)料上，培養(yǎng)至菌絲長滿，然后降溫，提供散射光等出菇條件讓其出菇，出菇又快又多又大的是優(yōu)良菌種，可擴大培育。 通常分離的母種應控制轉(zhuǎn)管次數(shù)，次數(shù)過多會引起菌種老化或變異，一般應控制在2-3次為宜，最多不超過4次。平菇等生活力強的可以多轉(zhuǎn)1-2次。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 四、食用菌

30、菌種的質(zhì)量鑒定 2、原種和栽培種的質(zhì)量鑒定 原種和栽培種的質(zhì)量鑒定 （1）菌種傳代和菌齡應在規(guī)定的范圍內(nèi) （2）原種及栽培種的外觀要求 （3）生理生化指標 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 四、食用菌菌種的質(zhì)量鑒定 2、原種和栽培種的質(zhì)量鑒定 原種和栽培種的質(zhì)量鑒定 （1）菌種傳代和菌齡應在規(guī)定范圍內(nèi) （2）原種及栽培種外觀要求 （3）生理生化指標 用轉(zhuǎn)管在45次以內(nèi)的母種生產(chǎn)的原種和栽培種。 一般菌類原種和栽培種在常溫下的菌齡(指菌絲長滿瓶后存放的時間)在3個月內(nèi)有效。草菇等繁殖快的菌類1個月內(nèi)有效。超過上述期限的菌種，即使外觀健壯，生產(chǎn)上也不使用。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 四、食用菌菌種的質(zhì)量鑒

31、定 2、原種和栽培種的質(zhì)量鑒定 原種和栽培種的質(zhì)量鑒定 （1）菌種傳代和菌齡應在規(guī)定范圍內(nèi) （2）原種及栽培種外觀要求 （3）生理生化指標 菌絲已長滿培養(yǎng)基。 菌絲生長健壯。 菌絲色澤潔白或符合該菌類菌絲特有的色澤。銀耳菌種除有白色的銀耳菌絲外，還應有煙灰色的香灰菌絲。 菌種內(nèi)無雜菌污染，無其它雜色。 若種瓶底部出現(xiàn)黃色分泌液，則表明菌種老化。 若瓶內(nèi)菌絲柱和瓶壁脫離，說明菌種老化或培養(yǎng)基偏于。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 四、食用菌菌種的質(zhì)量鑒定 2、原種和栽培種的質(zhì)量鑒定 原種和栽培種的質(zhì)量鑒定 （1）菌種傳代和菌齡應在規(guī)定范圍內(nèi) （2）原種及栽培種外觀要求 （3）生理生化指標 王振福（19

32、97)用液體菌種栽培香菇的試驗表明，香菇液體菌種的脫氫酶含量與固體培養(yǎng)料栽培的子實體產(chǎn)量成正相關，因此，菌種脫氫酶含量可作為鑒定菌種質(zhì)量優(yōu)劣的生理生化指標。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 四、食用菌菌種的質(zhì)量鑒定 3、菌種的選購方法 很多栽培者常直接購買二級種或三級種用于擴接三級種或生產(chǎn)栽培之用。在選購這些菌種時應掌握一些基本方法： 提 用手抓住棉塞輕提起來，看棉塞松緊是否適度。過松過緊均達不到過濾空氣的目的，從而 無法保證能得到優(yōu)質(zhì)的菌種。手提還可以通過手測重量判斷失水情況和菌齡。 聞 看 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 四、食用菌菌種的質(zhì)量鑒定 3、菌種的選購方法 很多栽培者常直接購買二級種或三級種

33、用于擴接三級種或生產(chǎn)栽培之用。在選購這些菌種時應掌握一些基本方法： 提 聞 從一批菌種中隨機抽取一些菌種，把棉塞拔起，將瓶(袋)口或管口靠近鼻子嗅菌種的氣味，若聞到一種不愉快的霉、臭、酸等異味，則說明菌種有雜菌污染，培養(yǎng)的不是純菌絲或已有變質(zhì)腐敗的菌種。正常菌種具有特殊的香味。 看 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 四、食用菌菌種的質(zhì)量鑒定 3、菌種的選購方法 很多栽培者常直接購買二級種或三級種用于擴接三級種或生產(chǎn)栽培之用。在選購這些菌種時應掌握一些基本方法： 提 聞 看菌種外形是否破管、破瓶或破袋。 看 看菌種是否“純、正、壯、闊”，即菌種純度應高，不能感染雜菌； 菌絲色澤要純正，通常為純白，原種栽

34、培種菌絲應連結(jié)成塊，無老化、變色、吐黃水、長子實體原基等現(xiàn)象； 菌絲要粗壯，長勢強，分枝多而密(可借助放大鏡或顯微鏡觀察)； 培養(yǎng)基質(zhì)要濕潤，含水適宜，不干縮脫壁。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 五、食用菌菌種的退化、復壯和保藏 在食用菌生產(chǎn)和科研中，選育出一個優(yōu)良的菌株是很不容易的，而要保持其菌種的遺傳穩(wěn)定性更是困難。菌種的退化、老化以及保藏方法是影響食用菌生產(chǎn)的重要因素。 1、菌種退化 指菌種突然或逐漸喪失原有的 生命力和生產(chǎn)性能的現(xiàn)象。 菌種退化 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 五、食用菌菌種的退化、復壯和保藏 1、菌種退化 菌種退化 （1）菌絲生長速度減緩，在培養(yǎng)基上出現(xiàn)白色、濃密的扇形菌落。

35、（2）對不良的外界條件(如溫度、酸堿度、二氧化碳、雜菌等)的抵抗力變?nèi)酰?（3）子實體形成期提前或推遲，出菇潮次不分明，菌蓋、菌柄呈畸形，產(chǎn)量明顯下降，品質(zhì)變劣等。 注意經(jīng)常選種育種，減少轉(zhuǎn)接次數(shù)，改善保藏條件，可以有效地防止菌種的退化。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 五、食用菌菌種的退化、復壯和保藏 2、菌種復壯 菌種復壯 是使生活力和豐產(chǎn)性能降低的菌種，恢復或提高到原有健壯程度。在退化的菌種中仍有一些保持原有菌種特性的細胞，可采取一些手段，使這些細胞生長繁殖，以更新退化的菌株。 對已退化的菌株進行單細胞分離純化； 以高劑量的紫外線和低劑量的(NTG)聯(lián)合對退化菌株進行處理； 采取改善栽培條件(

36、如更換培養(yǎng)基)等措施；恢復和提高菌種的種性。 無性繁殖和有性繁殖交替使用也是菌種復壯的一種手段。 菌種復壯方法 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 五、食用菌菌種的退化、復壯和保藏 3、菌種保藏 菌種保藏 是根據(jù)菌種的遺傳性能和生理、生化特性，人為地創(chuàng)造環(huán)境條件，使優(yōu)良菌株穩(wěn)定地保存。 保持優(yōu)良菌株原有特性，使其不死亡，不受污染，能長期在生產(chǎn)上應用，這是菌種保藏的主要任務。 菌種保藏 的基本原理是采用低溫、缺氧及干燥等技術，使菌體生長繁殖受到抑制，延緩代謝速度，使生命活動處于休眠狀態(tài)；以減少變異的發(fā)生，從而達到既保持菌種的純正，又延長保藏時間，防止死亡和衰退的目的。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 五、食用菌

37、菌種的退化、復壯和保藏 3、菌種保藏 （1）斜面冰箱保藏法 （2）礦油保藏法 （3）濾紙(孢子)保藏法 （4）菌絲球保藏法（5）自然基質(zhì)保藏法 （6）載體保藏法 （7）液氮超低溫保藏法 菌種保藏常用方法 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 五、食用菌菌種的退化、復壯和保藏 3、菌種保藏 斜面冰箱保藏法 將需要保藏的長滿菌絲的斜面菌種放在4的冰箱中保藏。用于保藏的斜面菌種棉塞要用硫酸紙包扎，防止霉菌污染。 斜面試管冰箱保藏菌種一般2-3個月轉(zhuǎn)管一次。 此法適應于大多數(shù)食用菌的保藏，但草菇菌種不耐低溫，不能在冰箱中保藏，應在10-15下保藏。 保藏時間較短，一般為3-6個月，轉(zhuǎn)管次數(shù)增多，變異的可能性也就增大，不適宜長期保藏菌種。 用斜面冰箱保藏法保藏的菌種在使用時應提前12-24h從冰箱中取出，經(jīng)適溫培養(yǎng)、恢復活力后才能用于轉(zhuǎn)管接種。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 五、食用菌菌種的退化、復壯和保藏 3、菌種保藏 礦 油 保 藏 法 即采用礦油覆蓋斜面試管保藏菌種的方法。 其方法是：先將礦油于110kPa壓力下滅菌30min，置40溫箱中數(shù)日，以排除水分，取適量礦油注入斜面菌種試管，使其淹沒并高出斜面頂端lcm，再用無菌橡皮塞封口，在室溫條件下垂直保藏(不宜在冰箱中保存)，有效期可達1年以上。 第四章 食用菌菌種的生產(chǎn) 五、食用菌菌種的退化、復壯和