1、 唾液淀粉酶活性的觀察實驗二1上節(jié)回顧1.實驗目的及原理2.實驗試劑及儀器3.實驗步驟及注意事項4.2上節(jié)回顧課后實驗器材歸位出勤，有要緊事或生病提前請假安排補課移液槍及移液管的使用1233A 保持微量移液器垂直，將按鈕壓至第一段；B 微量移液器頭尖端浸入溶液，緩慢釋放按鈕；C 保持微量移液器垂直，將微量移液器頭與容器壁接觸， 慢慢壓下按鈕至第一段；D 壓至第二段把溶液完全釋放出；E 釋放按鈕回原狀,調(diào)最大量程，歸位。45成績分布1.考勤、紀律、操作 30%2.實驗報告 30%3.理論考試 40%6實驗目的本實驗用唾液淀粉酶為材料來觀察酶活性受各種因素影響的情況。7實驗原理酶是一類由活細胞產(chǎn)生

2、的，對其特異底物具有高效催化作用的生物大分子。大多數(shù)酶的化學本質(zhì)是蛋白質(zhì)（少數(shù)為RNA）。酶的活性是指酶催化化學反應的能力，其衡量的標準是酶促反應速度。酶活性的測定，通常是在最適條件下，通過測定酶促化學反應的底物或產(chǎn)物量的變化來進行觀察。酶的活性是受到多種因素影響的：包括溫度、pH、激活劑及抑制劑等。8雙重影響溫度升高，酶促反應速度升高；由于酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì)，溫度升高，可引起酶的變性，從而反應速度降低 。 最適溫度 (optimum temperature)：酶促反應速度最快時的環(huán)境溫度。* 低溫的應用酶活性0.51.02.01.50 10 20 30 40 50 60 溫度 C 溫度對淀粉酶

3、活性的影響 溫度對酶活性的影響9pH對酶活性的影響最適pH (optimum pH)：酶催化活性最大時的環(huán)境pH。0酶活性 pH pH對某些酶活性的影響 胃蛋白酶 淀粉酶 膽堿酯酶 24681010抑制劑對酶活性的影響酶的抑制劑(inhibitor)凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白變性的物質(zhì)稱為酶的抑制劑。Cu2+為唾液淀粉酶的抑制劑。 區(qū)別于酶的變性 抑制劑對酶有一定選擇性 引起變性的因素對酶沒有選擇性（凡能夠引起蛋白質(zhì)變性的因素，都可以使酶喪失活性）11 激活劑對酶活性的影響激活劑(activator)使酶由無活性變?yōu)橛谢钚曰蚴姑富钚栽黾拥奈镔|(zhì)。大部分是無機離子或簡單的有機小分子。Cl

4、-為唾液淀粉酶的激活劑。12酶的特異性酶對催化的反應和反應物有嚴格的選擇性。 唾液淀粉酶將淀粉水解成的麥芽糖則具有還原性,能夠使斐林試劑還原,生成磚紅色的沉淀。 蔗糖水解產(chǎn)生的葡萄糖和果糖都具有還原性,但唾液淀粉酶不能將蔗糖水解。13唾液淀粉酶檢測原理酶的活性通常是以測定酶作用的底物在酶作用前后的變化來進行觀察。本實驗用唾液淀粉酶作用的底物-淀粉，被唾液淀粉酶水解成各種糊精、麥芽糖等產(chǎn)物的變化來觀察該酶在各種環(huán)境下的活性。淀粉藍色糊精紫色糊精紅色糊精無色糊精麥芽糖 葡萄糖 藍色 藍色 紫色 紅色 無色 無色碘與淀粉及其水解產(chǎn)物的呈色反應：14唾液淀粉酶檢測原理本實驗中唾液淀粉酶的最適溫度是37

5、、最適pH值是6.8、激活劑是0.5%的NaCl溶液、抑制劑是1%CuSO4溶液。注意：唾液淀粉酶的最適pH約為6.8，最適pH受緩沖液性質(zhì)的影響，在磷酸緩沖液中最適pH為6.4-6.6，在醋酸緩沖液中則為5.6。 15試 劑1234不同pH溶液：pH5.0緩沖液pH6.6緩沖液pH8.0緩沖液0.5%蔗糖溶液0.5%淀粉溶液稀碘溶液165斑氏溶液60.5% NaCl溶液71% CuSO4溶液17儀器白瓷板電磁爐恒溫水浴鍋18實驗內(nèi)容1唾液淀粉酶應用液的制備2溫度對酶活性的影響3pH對酶活性的影響4酶反應的特異性5激活劑與抑制劑對酶活性的影響191、唾液淀粉酶應用液的制備1每組取一個小燒杯，裝

6、上蒸餾水。2先用蒸餾水瀨口12次，將口腔內(nèi)的食物殘渣清除干凈。3口含約20ml蒸餾水，做咀嚼動作12min，以分泌較多的唾液。然后將口腔中的唾液吐入一個干凈的小燒杯中。用紗布過濾。20取三支試管（做好標記），試劑加好后混勻，然后及時在上述溫度下分別進行處理。在干凈的比色板上，于各孔穴中分別滴加2滴碘液。每隔1min從第2支試管中取反應液1滴，與比色板孔穴中的碘液混合，觀察顏色的變化。待第2支試管中反應液與比色板孔穴中的碘液混合顏色不再變化時，取出試管，并將在沸水浴中處理的試管用冷水冷卻，然后向各試管中滴加碘液13滴。搖勻后觀察并記錄各管顏色，比較各管中淀粉水解的程度，說明溫度對酶活性的影響。試

7、管號0.5%淀粉溶液稀釋唾液溫度1235ml5ml5ml1ml1ml1ml0水浴37 水浴沸水?。ɡ鋮s）2、溫度對酶活性的影響213、pH對酶活性的影響取三支試管做好標記，先向各管中加淀粉溶液和緩沖液，最后加稀釋唾液，搖勻后，將各管置于37水浴中處理。每隔1min從第2支試管中取反應液1滴，與比色板孔穴中的碘液混合，觀察顏色的變化。待第2支試管中反應液與比色板孔穴中的碘液混合顏色不再變化時，取出試管，向各試管中滴加碘液13滴。觀察各管顏色，比較各管中淀粉水解的程度，解釋pH對酶活性的影響。取用不同試劑時，應及時沖洗吸管，以防造成污染。試管號0.5%淀粉溶液pH5.0緩沖液pH6.6緩沖液pH8

8、.0緩沖液稀釋唾液溫度1232.5ml2.5ml2.5ml1ml0001ml0001ml1ml1ml1ml37373722試管號0.5%淀粉溶液0.5%蔗糖溶液稀釋唾液122ml002ml1ml1ml4、酶反應的特異性取兩支試管，加入相應試劑，搖勻后，將各管置于37水浴中處理10min。取出試管，分別加入斑氏試劑2ml，混勻。將各管置于沸水浴中煮沸1-2min。觀察并解釋結(jié)果。23試管號0.5%淀粉溶液1% CuSO4溶液0.5% NaCl溶液蒸餾水稀釋唾液1232ml2ml2ml1ml0001ml0001ml1ml1ml1ml5、激活劑與抑制劑對酶活性的影響取三支試管，加入相應試劑，將各管混

9、勻后，一起放入37水浴中保溫。每隔30秒，從第2支試管中取出1滴反應液滴于白瓷板上，隨后滴加稀碘液1滴于此滴反應液中，觀察其顏色變化。待加碘不變色（或顏色變化很淺時）時，取出3支試管，分別加入稀碘液13滴。觀察、比較各管顏色的深淺，并解釋。241. 洗滌儀器用蒸餾水（因自來水含Cl-）。2. 試管做好標記。3. 試劑要混勻。4. 觀察要及時。5. 不要吸取斑氏試劑沉淀。6. 各人唾液淀粉酶活力不同，如按上法制得 的唾液消化太快或太慢，可稀釋唾液或向反應系統(tǒng)中多加一些唾液。7.試劑量少，不需潤洗。注意事項25環(huán)境的pH顯著影響酶活性，pH既影響酶蛋白本身也影響底物的離解程度，從而改變酶與底物的結(jié)合和催化活性。在某一pH時，酶活性達最大值，這一pH稱酶的最適pH。不同的酶，最適pH不盡相同。淀粉酶該酶最適pH為pH6.9，高于或低于酶的最適pH值，都將引起酶活性的降低，過酸或過堿的反應條件可使酶活性喪失。判斷pH對酶活性的影響，可用不同PH值條件下淀粉水解的快慢來衡量酶活性的高低，淀粉的水解程度可用與碘的呈色反應來判斷。26 溫