1、霍亂弧菌 實驗活動風(fēng)險評估報告一、生物學(xué)特性（一）種類和細(xì)菌分型霍亂弧菌（Vibrio cholerae）是人類霍亂的病原體，它可引起一種古老且流行廣泛的烈性 傳染病，曾在世界上引起多次大流行。霍亂主要表現(xiàn)為劇烈的嘔吐、腹瀉、失水，死亡率甚 高，屬于國際檢疫傳染病?；魜y弧菌有耐熱的 O抗原和不耐熱的 H抗原。根據(jù)O抗原的不同，現(xiàn)已有155個血清群， 其中01群、O139群引起霍亂，其余的血清群分布于地面水中，可引起人類胃腸炎等疾病， 但從未引起霍亂的流行。H抗原無特異性，棉衣擴(kuò)散試驗表明所有霍亂弧菌擁有相同的H抗原。01群霍亂弧菌根基其菌體抗原由3種抗原因子A、B、C組成，又可分為3個血清型：

2、小川型（Ogawa）、稻葉型（Inaba）和彥島型（Hikojima ）。根據(jù)表型差異， 01群霍亂弧菌的 每一個血清型還可分為 2個生物型，即古典生物型（ Classical biotype）和曰Tor生物型（日 Tor biotype ）（因在埃及西奈半島 曰Tor檢疫站首次被分離出而命名）。古典生物型不溶解羊 紅細(xì)胞，不凝集雞紅細(xì)胞，對 50IU的多粘菌素敏感，可被第 IV群噬菌體裂解，而 日Tor 弧菌則完全相反。這兩種型別除個別生物學(xué)性狀稍有不同外，形態(tài)和免疫學(xué)性基本相同，在臨床病理及流行病學(xué)特征是沒有本質(zhì)的差別。自 1817年以來，全球共發(fā)生了七次世界性大 流行，前六次的病原是古典

3、型霍亂弧菌，第七次的病原是日Tor生物型。O139群在抗原性方面與 O1群之前無交叉，序列分析發(fā)現(xiàn)0139群失去了 O1群的O抗原基因，出現(xiàn)了一個約 36kb的新基因。該基因編碼與O1群不同的脂多糖抗原和莢膜多糖抗原，但該抗原與 O22和O155等群可產(chǎn)生抗原性交叉。在遺傳性方面，如核糖型、限制性酶 切電泳圖譜、外膜蛋白、毒性基因等則與O1群的古典型和 曰Tor生物型的流行株相似（二）來源1883年，德國人科赫首次分離出霍亂弧菌。1892年，國家衛(wèi)生會議將霍亂弧菌納入國際衛(wèi)生檢疫疾病。1992年，一個新的流行株 O139 （Bengal）在沿孟加拉灣的印度和孟加拉的 一些城市出現(xiàn)，并很快遍及亞

4、洲，這是首次由非O1群霍亂弧菌引起的流行。（三）傳染性病人和帶菌者是霍亂的主要傳染源，其中的輕型和隱形感染者不易被確診，但往往不能及時隔離和治療，在疾病傳播上起著重要作用。（四）傳播途徑人類在自然情況下是霍亂弧菌的唯一易感者，霍亂是經(jīng)糞一口感染的腸道傳染病，主要經(jīng)水、食物及生活密切的接觸傳播。病人及帶菌者的糞便或排泄物污染水源或通過食物傳染，引起霍亂或霍亂暴發(fā)流行。霍亂弧菌能通過傳染魚、蝦等水產(chǎn)品引起傳播，日常生活接觸和蒼蠅亦起傳播作用。（五）易感性人群對霍亂弧菌普遍易感，本病隱形感染較多。 病后可獲得一定免疫力，能產(chǎn)生抗菌抗體和抗病毒素抗體，但亦有再感染的報告。（六）潛伏期霍亂的潛伏期較短，

5、一般數(shù)小時至5d左右，多數(shù)12d。在潛伏期末，常能從病人的糞便中查出霍亂弧菌，有時在腹瀉出現(xiàn)前數(shù)日即能查出。（七）劑量一效應(yīng)關(guān)系在正常胃酸的條件下，需要進(jìn)入大量細(xì)菌（10A8個）方能引起霍亂感染，但當(dāng)胃酸低時，感染劑量可減少到 10A370A5個細(xì)菌。（八）致病性在一定條件下，霍亂弧菌進(jìn)入小腸后，依靠鞭毛的運動，穿過粘膜表面的黏液層，可能借菌毛作用黏附于腸壁上皮細(xì)胞上，在腸黏膜表面迅速繁殖，經(jīng)過短暫的潛伏期后便迅速發(fā)病。該菌不侵入腸上皮細(xì)胞和腸腺， 也不侵入血流，僅在局部繁殖和產(chǎn)生霍亂腸毒素。 此毒素作 用于腸黏膜上皮細(xì)胞和腸腺，使腸液過度分泌，從而導(dǎo)致患者出現(xiàn)上吐下瀉的癥狀， 瀉出物 呈“米

6、沿水樣”并含大量弧菌，此為本病典型的特征。.致病物質(zhì) 霍亂弧菌的致病物質(zhì)涉及染色體上多個基因，它們主要包括由ToxR蛋白調(diào)控的ctxA、ctxB、tcp、zot、ace等基因。另外，還有兩個不受ToxR蛋白調(diào)控的毒力因子基因hlyA和hap。（1）霍亂腸毒素霍亂腸毒素是目前已知的致瀉毒素中最為強(qiáng)烈的毒素，是腸毒素的典型代表。它由一個 A亞單位（分子量為 27.2kDa）和5個形同的B亞單位（每個亞單位分子量為11.7kDa）構(gòu)成的一個熱不穩(wěn)定性多聚體蛋白，分別由結(jié)構(gòu)基因ctxA和ctxB編碼。ctxAB操縱子位于染色體上稱作核心區(qū)的部位，核心區(qū)的兩端為重復(fù)序列（ RS1）?；魜y弧菌古典生物型染

7、色體上廣泛散布著以2拷貝ctx為一組的ctx單元，曰Tor生物型染色體上CTX則為多拷貝隨機(jī)分布。B亞單位可與小腸粘膜上皮細(xì)胞GM1神經(jīng)節(jié)昔脂受體結(jié)合，介導(dǎo) A亞單位進(jìn)入細(xì)胞，A亞單位在發(fā)揮毒性作用前需經(jīng)蛋白酶作用裂解為 A1和A2兩條肽鏈。A1作為腺甘二磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶，可使 NAD （輔酶I）上的腺昔二 磷酸核糖轉(zhuǎn)移到 G蛋白上，形成 GS。GS的活化可使細(xì)胞內(nèi)cAMP水平升高，主動分泌 NA+、K+、HCO3-和水，導(dǎo)致嚴(yán)重的腹瀉與嘔吐。此外，在ctx操縱子上游還存在兩個編碼毒性相關(guān)的zot、ace基因。在實驗兔中，其編碼產(chǎn)物Zot能增加腸黏膜的通透性；Ace使結(jié)扎的回腸段中液體聚積。志

8、愿者口服ctxAB缺失的基因工程變異株產(chǎn)生的輕度腹瀉，可能與這兩個毒性基因有關(guān)。（2）鞭毛、菌毛及其他毒力因子霍亂弧菌活潑的鞭毛運動有助于細(xì)菌穿過腸黏膜表面黏液層而接近腸壁上皮細(xì)胞。細(xì)菌的普通菌毛是細(xì)菌定居于小腸所必需的因子。只有黏附定居后方可致病。與此相關(guān)基因由 acf和tcpA ： acf(Accessory colonization factor)編碼黏附素；tcpA (Toxin coregulated pilus A )編碼菌毛蛋白中有一個分子量為20.5kDa的重要亞單位。實驗發(fā)現(xiàn)，使 tcp失活后，變異株即失去定居功能和致瀉特性。其他毒力因子還有hlyA(Hemolytic-cy

9、tolytic A )基因編碼的具有溶血一溶細(xì)胞的蛋白；hap (Hemagglutinin/protease )基因編碼有助于細(xì)菌從死亡細(xì)胞上解離的血凝素/蛋白酶。O139群除具有上述O1群的致病物質(zhì)和相關(guān)基因外，還存在多糖莢膜和特殊LPS毒性決定簇，其功能是抵抗血清中殺菌物質(zhì)和能黏附到小腸黏膜上。不表達(dá)LPS決定簇和莢膜的TnphoA突變株則對血清易感。2.所致疾病 其引起烈性腸道傳染病霍亂，為我國的甲類法定傳染病。在自然情況下，人 類是霍亂弧菌的唯一易感者。在地方性流行區(qū)，除病人外，無癥狀感染者也是重要傳染源。病菌到達(dá)小腸后，黏附于腸粘膜表面并迅速繁殖，不侵入腸上皮細(xì)胞和腸腺，細(xì)菌在繁殖

10、過程中產(chǎn)生腸毒素而致病。O1群霍亂弧菌感染可從無癥狀或輕型腹瀉到嚴(yán)重的致死性腹瀉，霍亂弧菌古典生物型所致疾病較曰Tor生物型嚴(yán)重。典型病例的情況是一般在吞食細(xì)菌后23d突然出現(xiàn)劇烈腹瀉和嘔吐，在疾病最嚴(yán)重時，每小時失水量可高達(dá) 1L,排出如米沿水樣腹瀉物。大量水分和電解質(zhì)喪失會導(dǎo)致失水、代謝性酸中毒、低堿血癥、低容量性休克、心力不齊和腎衰竭。如未經(jīng)治療處理，病人死亡率高達(dá)60%,但若及時給病人補(bǔ)充液體和電解質(zhì)，死亡率可小于 1%。O139群霍亂弧菌感染比 O1群嚴(yán)重，表現(xiàn)為嚴(yán)重脫水和高死亡 率，承認(rèn)病例所占比例較高，但其 70% ,而O1群霍亂弧菌流行高峰期， 兒童病例約占60%。病愈后一些患

11、者可短期帶菌，一般不超過兩周，個別 日Tor型病人可帶菌長達(dá)數(shù)月，甚 至數(shù)年之久。病菌主要存在于膽囊腫。(九)變異性霍亂弧菌在環(huán)境、宿主、培養(yǎng)條件和抗生素等多種選擇性壓力的作用下可發(fā)生多種變異。其主要有形態(tài)變異、 S-R變異、L型變異、活的非培養(yǎng)狀態(tài)( Viable but non-culture,VBNC )。 在環(huán)境生長條件不利的情況下， 霍亂弧菌可以進(jìn)入 VBNC、溶血性變異的狀態(tài)。 有的變異伴 隨毒力的減弱或者喪失，如 S-R變異、有動力變?yōu)闊o動力。(十)環(huán)境中的穩(wěn)定性對酸敏感，在胃酸中僅能存活4min?；魜y弧菌古典生物型在外界環(huán)境中生存能力不強(qiáng)，而日-Tor生物型和其他非 O1群霍亂

12、弧菌在外環(huán)境中的生存力較古典型為強(qiáng)。在水果、蔬菜中可存活7d左右；在河水、井水、池塘水和海水中可存活13周，甚至更長，有時在局部自然水中也能越冬。(十一)藥物敏感性霍亂弧菌對鏈霉素、氯霉素、四環(huán)素、多西環(huán)素、復(fù)方 SMZ-TMP等抗生素敏感。(十二)消毒劑敏感性霍亂弧菌對一般消毒劑均很敏感，在水中家0.5ppm氯，15min可被殺死，0.1%高鎰酸鉀浸泡蔬菜、水果可達(dá)到消毒目的。接觸1:500000高鎰酸鉀數(shù)分鐘即被殺死，在0.1%漂白粉中10min內(nèi)即死亡。濃度高于 4%的氯化鈉或蔗糖濃度高于5%以上的食物、香料、醋及酒等，均不利于霍亂弧菌存在。以 1:4比例加漂白粉處理病人排泄物或嘔吐物，

13、經(jīng) 1h可達(dá)到 消毒目的。（十三）物理滅活霍亂弧菌對熱、干燥、日光很敏感，耐低溫，耐堿。經(jīng)干燥 2h或加熱55C 10min即可死 亡，煮沸立即死亡；霍亂弧菌在 55c濕熱15min, 100c煮沸12min,日光照射下1小時死 亡。（十四）在宿主體外存活霍亂弧菌是需氧菌，營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好?；魜y弧菌具有耐堿性，所以可在PH8.49.2培養(yǎng)基上選擇性分離培養(yǎng)。在堿性瓊脂平板生長后，它呈水滴樣光滑菌落， 可在堿性蛋白月東水液體培養(yǎng)基中，生長迅速，68h可產(chǎn)生莢膜。（十五）與其他生物和環(huán)境的交叉作用霍亂弧菌在未經(jīng)處理的糞便中，可存活數(shù)天；在冰箱內(nèi)的牛奶、鮮肉和魚蝦水產(chǎn)品中存活時間

14、分別為24周、1周和13周；在室溫下存放的新鮮蔬菜中，可存活 15d;在砧板和 布上可存活相當(dāng)長時間；在玻璃、瓷器、塑料盒金屬上存活時間不超過2d。（十六） 預(yù)防和治療方案.霍亂弧菌的預(yù)防控制改善社區(qū)環(huán)境，加強(qiáng)水源管理，培養(yǎng)良好的個人衛(wèi)生習(xí)慣，不生食貝殼類海產(chǎn)品等是預(yù)防霍亂弧菌感染和流行的重要措施。疫苗預(yù)防長期以來使用 O1群霍亂弧菌死菌苗肌肉注射，雖可增強(qiáng)人群的特異性免疫力， 但保護(hù)力僅為50%左右，且血清抗體持續(xù)時間較短，僅為 36個月。目前，霍亂疫苗預(yù)防 的重點已轉(zhuǎn)至研制口服菌苗的方向上，包括B亞單位一全菌滅火口服疫苗、基因工程減毒活菌苗（用基因工程技術(shù)去除 O1群霍亂弧菌野生株 DNA

15、中大部分毒力基因的活疫苗）、帶 有霍亂弧菌幾個主要保護(hù)性抗原的基因工程疫苗等。其中，前兩種疫苗已進(jìn)行大規(guī)模人群試驗，對其有效保護(hù)率和保護(hù)時間正在進(jìn)行評估，且在某些國家已獲批準(zhǔn)使用。O139尚無預(yù)防性疫苗，候選菌苗正在研制中。.霍亂弧菌的治療及時補(bǔ)充液體和電解質(zhì)，預(yù)防大量失水導(dǎo)致的低血容量性休克和酸中毒是治療霍亂的關(guān)鍵；抗生素的使用可減少外毒素的產(chǎn)生，加速細(xì)菌的清除。用于霍亂的抗菌藥物由四環(huán)素、多西環(huán)素、味喃吵酮、氯霉素和復(fù)方SMZ-TMP等。但帶有多重耐藥質(zhì)粒的菌株正在增加，且 O139群的耐藥性強(qiáng)于 O1群，給治療帶來一定困難。二、實驗室相關(guān)活動風(fēng)險評估與控制（一）實驗室感染性因子的種類、來

16、源和危害.感染性因子的種類霍亂弧菌最主要的致病因子包括霍亂腸毒素（ Cholera enterotoxin,CT）和毒素共調(diào)菌毛（Toxin coregulated, TCP）等。CT是霍亂弧菌的主要毒力因子，也是目前已知的致瀉毒素中最強(qiáng)烈的毒素。TCP是霍亂弧菌的重要定局因子之一，其主要亞單位為TcpA,其他定居因子包括血凝素、脂多糖、外膜蛋白，以及其他一些菌毛等。根據(jù) 其生物學(xué)特性和本院實驗室檢測能力范圍，本實驗室可能的感染因子為霍亂弧菌病原體本 身。.感染性因子的來源(1)食物中毒事件中采集的食物、糞便等可疑標(biāo)本，日常檢測的視屏、水等樣品。(2)樣本采集和檢測過程中涉及的所有試驗場所。(

17、3)實驗室檢驗過程操作中可能產(chǎn)生的含病原體的氣溶膠。(4)實驗相關(guān)廢棄物。3.感染性因子可能造成的危害(1)被污染的實驗器材、器皿等對實驗室環(huán)境造成污染。(2)實驗室廢棄物對環(huán)境造成污染。(3)實驗人員暴露后感染。(4)實驗室含病原菌的氣溶膠對實驗室環(huán)境造成的污染?；魜y的傳播途徑主要是通過污染的水源或食物經(jīng)口攝入感染，日常生活接觸和蒼蠅亦起傳播作用。在實驗室工作中，各種原因?qū)е碌囊后w飛濺或微滴濺出，從而污染器物表面或地面等。通過手的接觸，造成意外食入感染是較可能的實驗室獲得性感染方式。(二)實驗活動風(fēng)險識別與風(fēng)險控制.實驗方法(1)主要風(fēng)險點識別未采用國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測；使用新的或變更

18、過的國家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)前，未經(jīng)技術(shù)確認(rèn)，可能存在安全風(fēng)險。(2)風(fēng)險控制措施 盡量采用國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測，或使用經(jīng)過充分驗證的實 驗方法；在使用新的或變更過的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)前，必須經(jīng)過嚴(yán)格的技術(shù)確認(rèn)。.樣品采集(1)食品和水樣等樣品采集主要實驗設(shè)備和器材采樣剪刀或鐐子、密閉盛樣容器等。主要風(fēng)險點識別食品和水樣等樣品中可能存在感染性病原體，采樣人員采樣不規(guī)范、盛裝容器密合不嚴(yán)、 玻璃容器意外破損等， 可導(dǎo)致樣品濺灑、溢出、滲漏而污染環(huán)境；同時, 玻璃容器意外破損和剪刀、鐐子的使用不當(dāng)，存在意外刺傷或劃傷采樣人員的風(fēng)險。風(fēng)險控制措施食品和水樣等樣品采集容器必須防水、防漏，容器外面要包裹

19、足量的吸收性材料，以便容器被打破或泄漏時，能吸收溢出的所有液體。在使用剪刀、鐐子、玻璃容 器等銳器時必須進(jìn)行規(guī)范操作，做好防護(hù)，防止刺傷或劃傷。(2)糞便、蒼蠅、嘔吐物、食品加工環(huán)節(jié)涂抹物等樣品采集主要實驗設(shè)備和器材PV螺旋蓋采便盒(管)、玻璃試管或培養(yǎng)皿、采樣棉簽等。主要風(fēng)險點識別類便、嘔吐物、食品加工環(huán)節(jié)涂抹物等樣品中可能存在感染性病原體，采集放程存在樣本濺出并形成小顆粒氣溶膠；工作人員采樣不規(guī)范、個人防護(hù)不到位，導(dǎo)致環(huán)境污染和人員感染；破碎玻璃試管或培養(yǎng)皿存在刺傷或劃傷采樣人員的隱患。風(fēng)險控制措施 采集糞便、嘔吐物等樣品時，采樣人員應(yīng)戴手套、口罩，必要時戴防護(hù) 眼鏡；采樣時動作輕柔，采樣

20、容器盡量使用外螺旋蓋塑料管；發(fā)生污染時，應(yīng)立即對污染區(qū)域?qū)嵤┫咎幚怼?3)血液的采集重要所用器材一次性采血針和真空采血管、消毒棉簽和一次性利器盒。主要風(fēng)險點識別 血液樣品可能存在感染性病原體，采血管密封蓋意外脫落或注射器內(nèi) 殘留血滴落，造成血樣濺灑從而污染人員或環(huán)境； 采血針頭存在意外刺傷或劃傷采樣人員的 風(fēng)險。風(fēng)險控制措施使用一次性采血針和真空采血管，采樣人員經(jīng)過正規(guī)采血培訓(xùn)，并熟練掌握采血技巧。采血前做好個人防護(hù)(防護(hù)服、乳膠手套、口罩) ；認(rèn)真、仔細(xì)、謹(jǐn)慎操作， 抽血后的針頭直接放入利器盒內(nèi)，禁止用手直接接觸使用后的針頭或?qū)⑹褂煤蟮尼橆^重新套 上針頭套；采好血后直立于試管架中， 防止倒

21、翻；消毒棉簽等污染物放入醫(yī)療廢棄物專用袋 中，統(tǒng)一進(jìn)行消毒處理。.樣品的包裝和運送主要實驗設(shè)備和器材真空密封采血管、外螺旋蓋玻璃瓶、PV螺旋蓋采樣罐(管)主容器、95千帕樣品運輸罐(UN2814運輸罐)、A類標(biāo)本運輸箱(UN2814冷藏 箱)、運送車輛。主要風(fēng)險點識別盛樣容器不堅固、密合不嚴(yán)，有可能發(fā)生樣品濺灑、溢出、滲漏；使用不合格運輸包裝進(jìn)行樣品運送，存在玻璃容器或包裝容器意外破損、刺 傷或劃傷采送樣品人員的隱患。風(fēng)險控制措施 盛裝樣品容器必須堅固， 不易破碎，盡可能選用塑料制品， 采樣后 必須檢查容器的密合性。樣品嚴(yán)格按照規(guī)范的3層包裝，由樣品人員專車運回實驗室。.樣品接收和前處理(1)

22、主要實驗設(shè)備和器材 剪刀、鐐子、振蕩器、均質(zhì)器、均質(zhì)袋、離心機(jī)、生物安全 柜、潔凈工作臺。(2)主要風(fēng)險點識別樣品管理員未按實驗室樣品管理程序要求接受樣品；采樣前處理時，打開糞便或嘔吐物等感染性楊平包裝的動作過猛，會造成樣品側(cè)翻；對食品等 固形物樣品進(jìn)行剪切時，操作不慎而發(fā)生手剪傷；均質(zhì)器均質(zhì)樣本時，發(fā)生均質(zhì)袋破裂； 離心操作時離心管破裂等意外情況。(3)風(fēng)險控制措施樣品接收必須在專用的區(qū)域進(jìn)行，合同評審人員和收樣人員嚴(yán)格按照樣品管理程序要求交接樣品，不得擅自打開樣品包裝，收樣后應(yīng)及時洗手。開始檢測前，對盛裝感染性材料的容器，必須在生物安全柜中緩慢打開，食品和水樣 必須在潔凈工作室內(nèi)打開，開啟

23、容器時管口不能對著操作者。對食品等固體物樣品進(jìn)行取樣時，要小心使用剪刀和鐐子，以防止樣品均質(zhì)時堅硬物 質(zhì)刺破均質(zhì)袋，從而造成樣液濺灑。對含有感染性樣品離心振蕩時，必須將離心蓋封嚴(yán) 實，并關(guān)上離心機(jī)機(jī)蓋。實驗室應(yīng)配備應(yīng)急藥箱，發(fā)生手剪傷等意外事件時，應(yīng)立即進(jìn)行消毒包扎處理。當(dāng)發(fā)生離心管或均質(zhì)袋意外破裂、濺出時，及時對所有涉及污染的部位進(jìn)行消毒處理， 同時，按二級生物安全實驗室建設(shè)與管理中的“實驗室意外事故的處置”章節(jié)處置。.樣本檢測過程(1)主要實驗設(shè)備和器材培養(yǎng)箱、水浴箱、細(xì)菌鑒定和藥敏測試儀(ATB儀)、全自動快速致病菌檢測儀(miniVIDAS )、PCR儀、凝膠成像儀、生物安全柜、金屬浴

24、、振蕩 器、離心機(jī)及離心管、吸管和試管、移液器及吸頭、接種環(huán)、培養(yǎng)皿、無水乙醇，澳化 乙咤等。(2)主要風(fēng)險點識別對食品、水樣、糞便、嘔吐物、食品加工環(huán)節(jié)涂抹物等樣品進(jìn)行霍亂弧菌菌株分離鑒 定、生化試驗、血清分型、藥敏試驗、核酸提取等實驗活動均涉及活菌操作。在檢測過 程中移液、混勻振蕩、劃線分離、涂片染色、離心等操作都可產(chǎn)生氣溶膠，雖然霍亂不 通過呼吸道感染，但由于樣品可能含有其他未知的病原體，因此也不應(yīng)忽視。實驗過程中玻璃器材意外破碎或滲漏、離心操作時離心管意外破裂等事故，可造成液 體濺出污染設(shè)備表面或工作臺面等環(huán)境，間接污染操作者皮膚、黏膜，通過糞一口途徑 食人一定量的霍亂弧菌導(dǎo)致實驗室人

25、員感染。提取核酸時使用的無水乙醇屬易燃易爆物質(zhì)，澳化乙咤具有強(qiáng)烈致癌性。(3)風(fēng)險控制措施開展檢測時檢測人員應(yīng)按照n級生物安全防護(hù)要求做好自身防護(hù)措施，若接觸可疑程度較大的上述感染性標(biāo)本，則工作人員應(yīng)戴雙層(兩副)手套以增加保護(hù)。進(jìn)行食品、水樣等樣品制備、均質(zhì)等操作應(yīng)在潔凈實驗室內(nèi)進(jìn)行；糞便、嘔吐物等所 有具有感染性材料的操作必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，必須保證潔凈實驗室和生物安全柜 處于正常運行狀態(tài)。進(jìn)行活菌操作時，應(yīng)在安全柜工作臺面上放置一塊浸有消毒液的紗 布或吸有消毒液的紙，避免感染性物質(zhì)的擴(kuò)散。涉及高濃度或大體積的感染性的材料離心操作時，應(yīng)選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心 機(jī)離心。若有意外污染

26、，則應(yīng)及時進(jìn)行消毒、沖洗并擦干飛濺出的液體。實驗結(jié)束后， 必須對桌面、臺面及時進(jìn)行消毒處理。嚴(yán)禁用嘴吸液，必須使用移液器或吸球移取樣液，使用吸管和移液器操作時，動作要 輕緩，所有吸管應(yīng)用棉塞，移液頭盡可能使用帶濾芯的，以減少對移液器或吸球的污染。 旋蓋及使用移液器操作時，動作要輕緩。為避免接種液從接種環(huán)上滴落，接種環(huán)的直徑應(yīng)為23mm并完全封閉，手柄的長度應(yīng)小于6cm,以最大限度減少振動。 盡可能使用封閉式微型電加熱器消毒接種環(huán)，避免在酒精燈的明火上加熱從而引起感染性物質(zhì)爆濺。盡可能避免使用注射器及其他鏡利的器具，嚴(yán)禁用帶有注射針頭的注射器吸液。更不 可把注射器當(dāng)吸管用。用過的銳器應(yīng)直接放入利

27、器盒。針頭經(jīng)消毒后廢棄，禁止將使用 后的針頭重新套上針頭套。盡可能以塑料器皿代替玻璃器皿，若必須使用玻璃器皿，只 能用實驗室級玻璃（硼硅酸鹽）。任何破碎或有裂紋的器皿都應(yīng)被丟棄。禁止用手直接接 觸使用后的針頭、刀片、玻璃碎片等銳器。分子生物學(xué)檢測試驗中使用的無水乙醇屬易燃易爆物質(zhì)，應(yīng)防置在通風(fēng)柜中從而遠(yuǎn)離 熱源；澳化乙咤屬有毒物質(zhì)，需專人專管。在任何可能導(dǎo)致潛在的傳染性物質(zhì)濺出的操作過程中，應(yīng)保護(hù)好面部、眼鏡和嘴；發(fā) 生液體濺出、溢出等事故，或明顯暴露于傳染源時，應(yīng)立即向科室負(fù)責(zé)人報告，及時處 理并對事物的發(fā)生與處理作記錄，必要時進(jìn)行的醫(yī)學(xué)評估、觀察和治療，并保留書面記 錄。.菌株的使用、保存

28、和運輸（1）主要實驗設(shè)備和器材接種針（環(huán)）、菌株保存管、生物安全柜、95千帕樣品運輸罐（UN2814運輸罐）、A類標(biāo)本運輸箱（UN2814冷藏箱）和運送車輛。（2）主要風(fēng)險點識別工作人員陽性菌株保菌操作不規(guī)范、個人防護(hù)不到位、磁珠管等保存容器意外破損、 磁珠掉落等會導(dǎo)致病原菌污染實驗室環(huán)境和實驗人員?；魜y弧菌使用和保存未按照菌（毒）種管理規(guī)程（XJK/CX37 ）要求實施管理，存在菌株被惡意使用及污染環(huán)境等生物安全隱患?；魜y弧菌陽性菌株上送等運輸過程中，若使用不合格包裝進(jìn)行運輸、容器密封不嚴(yán)， 或運輸工具無安全保障，則可能導(dǎo)致運輸過程中包裝容器意外破損，從而產(chǎn)生病原體的 擴(kuò)散。（4） 風(fēng)險控制

29、措施霍亂弧菌分離純化操作應(yīng)該生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。若發(fā)生半固體菌株管破損等意外情 況，應(yīng)立刻對所涉及的器物及時進(jìn)行消毒處理，并按照二級生物安全實驗室建設(shè)與 管理中“實驗室意外事故的處置”章節(jié)規(guī)范處置?；魜y弧菌陽性菌株臨時實驗室保存，應(yīng)嚴(yán)格按照菌（毒）種管理規(guī)程（XJK/CX37 ）要求進(jìn)行操作，嚴(yán)格實行雙人雙鎖保管，嚴(yán)格菌株被惡意使用而造成的生物危害?；魜y弧菌陽性菌株上送應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行A類運輸包裝(同樣品采集)，攜帶“可感染人類的高致病性病原微生物菌(毒)種或樣品運輸許可證”，由專車運送，并由專業(yè)人員全程護(hù)送。.實驗室的清潔和消毒(1)主要實驗設(shè)備和器材70%75%的酒精、84消毒液等。(2)主要風(fēng)險

30、點識別工作完畢后，若不及時對工作臺面，生物安全柜進(jìn)行消毒，則有可能會對下次操作人員造成污染或感染。(3)風(fēng)險控制措施工作完畢后，及時對檢測所涉及的工作臺面、地面和生物安全柜進(jìn)行消毒，使用稀釋100倍的84消毒液擦拭，用消毒液清潔后要干燥20min以上。生物安全柜用70%75%的酒精擦拭消毒。待實驗和消毒完畢后，先脫去手套，在脫去防護(hù)服， 并正確用肥皂和流水洗手。.廢棄物處理(1)主要實驗設(shè)備和器材醫(yī)療廢棄物專用袋、硬質(zhì)耐高壓且防滲漏的垃圾桶、高壓滅菌器。(2)主要風(fēng)險點識別樣品采集和試驗檢測過程產(chǎn)生的感染性廢棄物，如食品、水樣等樣品；食品加工環(huán)節(jié) 涂抹物、糞便、嘔吐物等標(biāo)本、病原菌的培養(yǎng)基、陽

31、性菌株等所有實驗過程涉及的用品， 釋放前未按照更規(guī)范要求處理，導(dǎo)致病原體外泄從而污染環(huán)境或人員。樣品采集和實驗檢測過程產(chǎn)生的被病原微生物污染的損傷性廢奔物，如一次性使用采 血用具、載玻片、玻璃試管、玻璃安甑、培養(yǎng)皿等未按照規(guī)范要求處理，存在意外刺傷 或劃傷工作人員的隱患。(3)風(fēng)險控制措施實驗室廢棄物處理應(yīng)遵循醫(yī)療廢棄物管理條例)醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療廢棄物管理辦法醫(yī)療廢物專用包裝袋、容器和警示標(biāo)志標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)法規(guī)要求， 分類收集，規(guī)范處置。所有損傷性廢棄物必須放置于有警示標(biāo)識的硬質(zhì)、防漏、防銳器 刺破的專用利器盒中：所有感染性廢棄物必須放置于有警示標(biāo)識的醫(yī)療廢物專用包裝袋 中；使用高效消毒液浸泡或高

32、溫高壓滅菌后集中處理后，集中存放至我院指定的醫(yī)療廢 棄室，由有資質(zhì)的醫(yī)療廢棄物處理單位上門收集并集中處置。同時，做好廢棄物處置交 接記錄，所有相關(guān)記錄應(yīng)定期整理歸檔。(三)實驗過程中其他風(fēng)險識別和控制.電力(1)主要風(fēng)險點識別霍亂弧菌的分離和鑒定對溫度有明確要求，實驗過程中突然間隙斷電或電力供應(yīng)不穩(wěn)定會對檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性帶來一定的影響。實驗室沒有布置雙路供 電或者相關(guān)儀器未配備不間斷電源，一旦電力供應(yīng)發(fā)生故障，就會導(dǎo)致設(shè)備突然停止工 作，存在實驗活動被迫終止等所帶來的相關(guān)安全風(fēng)險。(2)預(yù)防控制措施盡可能在實驗室布置雙路供電，若客觀條件受限制，則對霍亂弧菌檢測所用的關(guān)鍵一起需配備應(yīng)急電源(UP

33、S).電氣操作(1)主要風(fēng)險點識別實驗室活動涉及的電氣操作，包括實驗室工作區(qū)內(nèi)電氣設(shè)備的啟動、關(guān)用、安裝和維修；設(shè)備層內(nèi) UPS、空調(diào)機(jī)組等電氣設(shè)備的啟動、關(guān)閉和維修等。這些電氣操作的過程可能存在觸電、電擊、造成電氣故障等風(fēng)險。(2)預(yù)防控制措施電氣設(shè)備的設(shè)計及制造符合相關(guān)安全標(biāo)準(zhǔn)的要求。實驗室工作區(qū)內(nèi)若有 380V電源插座,則需明確標(biāo)識，并由有資質(zhì)的專業(yè)人員進(jìn)行操作。新的改裝過的或修理過的電氣設(shè)備在未經(jīng)專業(yè)人員(如有資質(zhì)的電工)完成電氣安全測試和設(shè)備符合安全使用要求之前，不允許使用。電氣設(shè)備使用人員接受正確操作的培訓(xùn)，操作方式不降低電氣安全性。電器設(shè)備使用 人員要定期檢查設(shè)備中可能引起電氣故

34、障的破損。只有專業(yè)人員可從事電氣設(shè)備和電路 工作。禁止未經(jīng)授權(quán)的工作。采取措施對設(shè)備去污染，以降低維護(hù)人員感染的風(fēng)險。.實驗室給排水設(shè)施設(shè)備(1)主要風(fēng)險點識別實驗室含有給排水的設(shè)施設(shè)備，包括位于工作區(qū)和洗消區(qū)的高壓滅菌器和洗滌池。當(dāng)水管道意外破裂、排水管道阻塞時，可抗導(dǎo)致感染性材料溢出，有 污染實驗人員和環(huán)境的風(fēng)險。(2)預(yù)防控制措施實驗室產(chǎn)生所有染菌物及器具，必須先經(jīng)高壓滅菌或含氯消毒劑浸泡消毒后洗滌，洗消產(chǎn)生的污水集中排入我院污水池進(jìn)行消毒處理，嚴(yán)禁直接排放。按 照GB18466要求，檢測總余氯、糞大腸菌群和其他致病菌。.實驗室設(shè)施設(shè)備管道(1)主要風(fēng)險點識別實驗室設(shè)施設(shè)備管道穿越維護(hù)結(jié)

35、構(gòu)的部位可能存在密封不嚴(yán)的問題，當(dāng)感染性材料溢出時，有污染環(huán)境的風(fēng)險。(2)預(yù)防控制措施所有管道穿越維護(hù)結(jié)構(gòu)的部位應(yīng)嚴(yán)格密封，定期進(jìn)行檢查檢測，避免感染性材料外溢從而污染環(huán)境。.主要檢測儀器設(shè)備(1)細(xì)菌鑒定和藥敏測試儀(ATB儀)、PCR儀、核酸提取儀、凝膠成像儀等設(shè)備主要風(fēng)險點識別 對可疑霍亂弧菌鑒定時， 會使用到ATB儀進(jìn)行生化鑒定及藥敏試驗， 進(jìn)行毒力基因檢測時需要使用核酸提取儀和 PCR儀。對這些設(shè)備使用時，如果不按操作 規(guī)程進(jìn)行，則會導(dǎo)致病原體濺出、滲漏和污染實驗環(huán)境。預(yù)防控制措施嚴(yán)格按ATB儀、PCR儀、核酸提取儀、凝膠成像儀等設(shè)備操作規(guī)程操作和維護(hù)，每次使用完畢后對設(shè)備箱體及可

36、能污染的實驗環(huán)境進(jìn)行消毒。(2)離心機(jī)主要風(fēng)險點識別在分離血清、濃縮菌液、核酸提取過程中會使用到離心機(jī)，離心過程中可能存在離心管破裂、離心管蓋脫落、離心轉(zhuǎn)子和離心腔被污染的風(fēng)險。預(yù)防控制措施離心式配備耐離心壓力的且?guī)菪苌w的離心管，離心前做好平衡，選擇正確的離心速度和離心力。規(guī)范正確操作，定期維護(hù)，確保離心機(jī)性能正常，每次 做好使用記錄，定期進(jìn)行功能檢查。.生物安全設(shè)施設(shè)備(1)生物安全柜主要風(fēng)險點識別沒有按照設(shè)備操作規(guī)程或使用說明書進(jìn)行操作和維護(hù)，使生物安全柜的氣溶膠防護(hù)效果明顯降低，甚至消失，失去安全防護(hù)效果。設(shè)備長時間使用而未及 時更換HEPA過濾膜，可出現(xiàn)工作窗口氣流速度降低或流向紊

37、亂等功能失常狀況。生物 安全柜使用后未進(jìn)行徹底消毒處理，對于清潔、維護(hù)人員將會產(chǎn)生污染。設(shè)備長期關(guān)停， 將會使部分電器元件老化從而失去正常功能。對于設(shè)備以為、碰撞受損等沒有及時進(jìn)行 性能檢測。預(yù)防控制措施正確選配生物安全柜，操作人員應(yīng)接受相關(guān)的操作、維護(hù)培訓(xùn)，日常操作和維護(hù)嚴(yán)格按照設(shè)備操作規(guī)程或使用說明書進(jìn)行。每年請有檢測資質(zhì)的服務(wù)機(jī)構(gòu)對 生物安全柜進(jìn)行風(fēng)速、氣流、塵埃粒子、紫外線強(qiáng)度等關(guān)鍵要素進(jìn)行檢測，確保其性能 正常。對于生物安全柜使用，一旦造成污染，應(yīng)及時進(jìn)行消毒。(2)高壓滅菌器主要風(fēng)險點識別霍亂弧菌檢測過程中，對被病原菌污染的玻璃、耐高壓的實驗器材及實驗廢棄物要進(jìn)行高壓滅菌消毒才可移

38、出實驗室。在高壓消毒時，如果沒有按照高壓 鍋的操作規(guī)程進(jìn)行操作和維護(hù)，可能會是高壓滅菌器效果明顯降低，甚至失效，失去去 污染與無害化的作用。若長時間使用又不定期檢測溫度和滅菌效果，對其滅菌效果無從 考證，可能產(chǎn)生功能缺損，存在滅菌不徹底從而引起污染的隱患；在長期關(guān)停期間，若 內(nèi)部水分不及時排干，將會使內(nèi)部器件老化從而失去正常功能。預(yù)防控制措施采用下排式高壓滅菌器，防止氣溶膠污染，操作人員持證上崗，規(guī)范操作，做好使用記錄。定期進(jìn)行維護(hù)、檢定和核查，確保高壓滅菌器正常性能。日常進(jìn) 行滅菌效果檢測，以保證滅菌質(zhì)量。(3)個人防護(hù)用品主要風(fēng)險點識別實驗室不提供足夠數(shù)量的、符合質(zhì)量要求的防護(hù)服、防護(hù)眼罩

39、、一次性乳膠手套、口罩和覆蓋足背的防滑鞋等，使用大小不合適的個人防護(hù)用品，個人防 護(hù)用品穿戴、脫卸的程序、方法不符合要求，均可能存在人員感染或污染環(huán)境的風(fēng)險。預(yù)防控制措施選擇正規(guī)、符合質(zhì)量要求的防護(hù)用品，使用前進(jìn)行必要的培訓(xùn)，按照 規(guī)定的程序正確使用、脫卸，穿戴時相互檢查確認(rèn)，及時更換受污染的和破損的防護(hù)裝 備，避免使用破損、缺陷、過期的產(chǎn)品。(4)應(yīng)急救治設(shè)施和用品主要風(fēng)險點識別實驗室若沒有配備洗眼器、應(yīng)急藥箱等必要的應(yīng)急設(shè)施和物品，或配備的急救用品種類不全、不合適或過期，則導(dǎo)致急用時無法發(fā)揮作用。預(yù)防控制措施 在實驗室內(nèi)正確配備洗眼器，確保其功能正常。配備的75%乙醇、碘附或其他消毒劑、創(chuàng)

40、可貼等急救物品與實驗活動相適應(yīng)并在有效期內(nèi)使用，由專人負(fù) 責(zé)管理，定期進(jìn)行維護(hù)、清理和更新。(5)消毒滅菌劑主要風(fēng)險點識別消毒劑產(chǎn)品無生產(chǎn)許可證、過期、配制方法或濃度不正確、種類選擇不合理，將會導(dǎo)致消毒效果降低、生物滅活能力降低或?qū)ξ锲犯g性增加、對皮膚 造成刺激等問題。預(yù)防控制措施 選擇符合國家標(biāo)準(zhǔn)的正規(guī)廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品，選擇合適的消毒劑，按 照規(guī)定的消毒方法、消毒時間、消毒濃度(劑量)進(jìn)行消毒，避免使用過期產(chǎn)品；消毒 過程中消毒人員應(yīng)做好必要的個體防護(hù)，防止發(fā)生意外。根據(jù)霍亂弧菌特點，選用 70%75%酒精和稀釋84消毒液(主要成分為次氯酸鈉)作為實驗室常用消毒劑。.管理體系的風(fēng)險(1)主要

41、風(fēng)險點識別管理體系(包括應(yīng)急預(yù)案)是否健全和完善，是否符合實際管理要求，程序文件、作業(yè)指導(dǎo)書和操作規(guī)程是否科學(xué)和具有可操作性，是能否確保生物安 全的主要因素。如果組織結(jié)構(gòu)不健全、設(shè)置不合理，體系文件與實際工作不匹配，以及 部門職責(zé)不清或銜接不當(dāng)?shù)?，則都可能帶來安全風(fēng)險。(2)預(yù)防輕制措施定期開展對管理體系的評審，發(fā)現(xiàn)問題及時修訂并完善，以確保生物安全管理體系持續(xù)有效運行。(四)工作人員的風(fēng)險評估與預(yù)防控制措施1.人員數(shù)量和素質(zhì)(1)人員數(shù)量主要風(fēng)險點識別人員過少會因缺少相互提示監(jiān)督或因工作量增大而導(dǎo)致操作過程中工作失誤增加，風(fēng)險增加。預(yù)防控制措施 采樣和檢測人員的數(shù)量應(yīng)與工作量相匹配，盡量有

42、2名工作人員同 時進(jìn)行采樣和檢測工作，質(zhì)量監(jiān)督員應(yīng)加強(qiáng)對實驗活動關(guān)鍵步驟的監(jiān)督。(2)人員結(jié)構(gòu)主要風(fēng)險點識別新進(jìn)人員沒有高資歷人員帶教操作，不能很好應(yīng)對意外事件，風(fēng)險增加。預(yù)防控制措施 實驗室檢測人員的年齡和資歷結(jié)構(gòu)應(yīng)配備合理，新進(jìn)人員應(yīng)由高資 歷人員帶教或監(jiān)督操作。(3)職業(yè)操守主要風(fēng)險點識別若責(zé)任心不強(qiáng)的人員參加該項工作，則產(chǎn)生生物危害而危及人員安全、環(huán)境安全與社會安定的可能性較大。預(yù)防控制措施 加強(qiáng)職業(yè)道德駕馭，培養(yǎng)工作責(zé)任心。.健康管理(1)主要風(fēng)險點識別健康狀況主要包括生理、心理素質(zhì)與免疫狀態(tài)。若實驗室檢測相關(guān)人員出現(xiàn)呼吸道或消化道感染癥狀、機(jī)體免疫力低下等其他不適合工作的狀況，則職

43、 業(yè)暴露風(fēng)險增加。(2)預(yù)防控制措施建立健康申報制度，遇到呼吸道或消化道感染及其他不適合工作的情況，則及時向科室負(fù)責(zé)人報告并暫停工作；若遇接觸物的傳染性大，應(yīng)加強(qiáng)感染防護(hù)。.人員資質(zhì)(1)主要風(fēng)險點識別檢測人員不具備衛(wèi)生檢測相關(guān)學(xué)歷教育背景，不熟悉檢測方法及操作規(guī)范，未執(zhí)行相關(guān)的專業(yè)知識培訓(xùn)和考核，并沒有獲得上崗證，就無法保證工作質(zhì) 量和安全。(2)預(yù)防控制措施檢測人員必須由檢驗或相關(guān)專業(yè)畢業(yè)，經(jīng)過上崗培訓(xùn)和考核合格，持證上崗。上崗培訓(xùn)內(nèi)容至少應(yīng)包括病原菌檢測相關(guān)基礎(chǔ)理論、相關(guān)檢測技術(shù)及管理要 求、實驗操作步驟、檢測質(zhì)量保證與質(zhì)量控制，以及生物安全。要求掌握相關(guān)專業(yè)知識 和技能，能獨立熟練地操

44、作，了解相關(guān)技術(shù)和質(zhì)量控制。.生物安全培訓(xùn)要求(1)主要風(fēng)險點識別檢測人員、輔助人員、后勤保障人員、進(jìn)修實習(xí)人員上崗前沒有接受嚴(yán)格的生物安全，以及相關(guān)生物安全設(shè)備操作的技術(shù)培訓(xùn)，易造成生物安全事故的 發(fā)生。(2)預(yù)防控制措施檢測人員、輔助人員、后勤保障人員每年參加本院組織的生物安全知識或生物安全操作技術(shù)培訓(xùn)、考核。上崗前，熟練掌握生物安全儀器設(shè)備、設(shè)施操作 技術(shù)，具備相關(guān)的安全防護(hù)能力。進(jìn)修實習(xí)人員參與實驗活動前必須進(jìn)行生物安全知識 的培訓(xùn)，在帶教老師的監(jiān)督下工作。.應(yīng)急事件處理能力(1)主要風(fēng)險點識別實驗人員上崗前沒有接受實驗室意外事故處理、職業(yè)暴露后預(yù)防等突發(fā)事件處置的培訓(xùn)，一旦發(fā)生意外事

45、件，就不能有效地進(jìn)行早期處理和控制生物安 全事件。(2)預(yù)防控制措施實驗室工作人員必須嚴(yán)格按照實驗室意外事故和職業(yè)是疾病報告制度和病原微生物生物安全應(yīng)急處置技術(shù)方案中規(guī)定的要求進(jìn)行應(yīng)急事件的處置， 強(qiáng)化職業(yè)暴露的應(yīng)急處理能力，規(guī)范工作中職業(yè)暴露后現(xiàn)場急救處理的預(yù)防辦法。(五)實驗室非常規(guī)活動中的風(fēng)險評估與預(yù)防控制措施.主要實驗室非常規(guī)活動(1)實驗室外專業(yè)人員對實驗室設(shè)施設(shè)備的維護(hù)、維修、檢定/校準(zhǔn)、檢測驗證(如主要設(shè)施設(shè)備的檢測驗證)和更換(如高效過濾器等的更換)等。(2)實驗室后勤保障人員對實驗室及公共環(huán)境的保潔、實驗器材的清洗消毒。(3)實驗室外人員參觀實驗室和上級部門對實驗室的檢查。(

46、4)任何其他人員需要進(jìn)入實驗室從事實驗活動以外的行為。.主要風(fēng)險點識別(1)上述人員進(jìn)入實驗室從事相關(guān)活動，特別是不慎打翻、打破標(biāo)本管或損壞儀器零部 件等情況，可能會引起實驗室感染。(2)實驗室運行過程中某些人員需要進(jìn)人實驗室參觀，存在影響實驗活動正常運行或者導(dǎo)致相關(guān)或不相關(guān)的設(shè)施設(shè)備損壞的風(fēng)險。.預(yù)防控制措施(1)實行人員準(zhǔn)入、登記制度。進(jìn)修實習(xí)人員進(jìn)入實驗室從事檢測活動前，必須先進(jìn)行 生物安全和實驗室規(guī)章制度的培訓(xùn)。若我院實驗室外專業(yè)人員和實驗室后勤保障人員確 實需要進(jìn)入實驗室進(jìn)行相關(guān)活動，或上級部門需要進(jìn)入實驗室進(jìn)行檢查，應(yīng)有我院實驗 室人員協(xié)助和陪同。(2)實驗室外專業(yè)人員和實驗室后勤

47、保障人員必須要有相應(yīng)的專業(yè)知識，應(yīng)對其進(jìn)行生 物安全培訓(xùn)，提供安全指南，實驗室人員應(yīng)協(xié)助、指導(dǎo)和規(guī)范進(jìn)入人員在實驗室內(nèi)的活 動并對其安全行為進(jìn)行監(jiān)督，進(jìn)入人員必須遵守實驗室的各項管理規(guī)定，以確保人員和 環(huán)境安全。(3)進(jìn)入人員未經(jīng)許可絕對不能私自動用實驗室內(nèi)有標(biāo)志的危險品，絕不能將未經(jīng)消毒 處理的物品拿出實驗區(qū)。(4)在二級生物安全實驗室進(jìn)行設(shè)施、設(shè)備維護(hù)維修過程中，若發(fā)生意外事件，則應(yīng)立 即報告實驗室負(fù)責(zé)人。實驗室負(fù)責(zé)人根據(jù)造成的事故進(jìn)行風(fēng)險評估，并采取應(yīng)對措施。(5)當(dāng)需要更換HEPA過濾膜或高效過濾器時，應(yīng)先對高效過濾器、HEPA過濾膜等作原位消毒后，專業(yè)人員才能進(jìn)行更換。(6)為確保自

48、己和他人的安全，禁止未穿防護(hù)服的人員隨意進(jìn)出實驗室的防護(hù)區(qū)域。同 時，也禁止穿防護(hù)服的人員走出實驗室的防護(hù)區(qū)域。(7)對實驗室的設(shè)施、設(shè)備進(jìn)行維護(hù)工作時，動作輕柔，避免產(chǎn)生氣溶膠。(8)離開實驗室前，必須正確洗手。(六)被誤用和惡意使用的風(fēng)險與預(yù)防控制措施.主要風(fēng)險點識別陽性標(biāo)本未明確標(biāo)識，未嚴(yán)格實行雙人雙鎖管理，實驗活動結(jié)束后不及時對操作場所進(jìn)行消毒，工作人員在不知情的情況下可能誤用標(biāo)本、實驗材料和設(shè)施 設(shè)備等，導(dǎo)致人員感染和實驗室環(huán)境污染、人員受傷或設(shè)施設(shè)備損壞等事故。.預(yù)防控制措施(1)實行嚴(yán)格的人員準(zhǔn)入和持證上崗制度(2)所有獲得批準(zhǔn)進(jìn)入實驗室工作的人員，必須嚴(yán)格按規(guī)程操作實驗材料和設(shè)

49、施設(shè)備， 以及從事其他一切實驗活動，不得私自動用實驗室內(nèi)任何不熟悉物品。(3)發(fā)生事故時補(bǔ)習(xí)及時報告并作必要的的處理和記錄。(4)實驗所用材料和試劑等必須有明確的標(biāo)識。(5)陽性標(biāo)本實施嚴(yán)格雙人雙鎖管理，上送的陽性樣本必須經(jīng)我院蓋章批準(zhǔn)，攜帶“可 感染人類的高致病性病原微生物菌(毒)種或樣本運輸許可證”，由專車運送，并由專業(yè)人員全程護(hù)送。(七)相關(guān)實驗室已發(fā)生的事故分析和從中得到的啟示已有霍亂弧菌檢測導(dǎo)致實驗室人員感染的相關(guān)報道，主要原因時實驗室人員在進(jìn)行采 樣、檢驗、廢棄物處置等工作過程中，個人防護(hù)不到位而導(dǎo)致感染。因此，嚴(yán)格遵守實 驗室相關(guān)規(guī)定，按照風(fēng)險評估報告制訂的要求規(guī)范執(zhí)行，可降低和

50、規(guī)避職業(yè)暴露風(fēng)險。三、實驗室理化因素風(fēng)險評估及安全防護(hù)措施(一) 紫外線.主要風(fēng)險點識別二級生物安全實驗室、潔凈實驗室內(nèi)傳遞窗和生物安全柜均使用紫外線燈進(jìn)行物體表面消毒。紫外線波長為250280nm,主要影響眼鏡和皮膚，引起急性角膜炎和結(jié)膜炎、慢性白內(nèi)障等眼疾病，還可誘發(fā)皮膚癌。紫外線燈開啟時，人員在不 知情的情況下進(jìn)入可受到傷害。.安全防護(hù)措施 在實驗室工作時應(yīng)避免紫外線直接照射人體，特別是眼部。生物安全柜表面應(yīng)張貼紫外線危害的標(biāo)識，提醒實驗人員小心紫外線危害。在進(jìn)行紫外線消毒時， 實驗人員應(yīng)盡量遠(yuǎn)離消毒區(qū)域。(二)輻射.主要風(fēng)險點識別實驗室籌建選址時未對周圍輻射源進(jìn)行排查，使用含輻射的一起

51、未進(jìn)行嚴(yán)格管理，存在輻射源或輻射事故間接導(dǎo)致病原微生物屏障系統(tǒng)破壞的隱患。.安全防護(hù)措施 實驗室籌建選址時，對周邊建筑群的輻射源進(jìn)行嚴(yán)格排查，實驗室不使用有輻射源的儀器設(shè)備，輻射造成的風(fēng)險基本不予考慮。84消毒液.主要風(fēng)險點識別84消毒液屬于含氯消毒劑， 有效氯的含量為 4.55%5.55% ,次氯酸鈉為主要殺菌因子。含氯的消毒液會殘留在空氣中不會發(fā)，長期使用會是人感到頭疼、 惡心，刺激黏膜，對于有體質(zhì)過敏的人，還容易已發(fā)過敏、哮喘疾病等。高濃度的含氯 消毒劑對人的呼吸道黏膜和皮膚有明顯的刺激作用，使人流淚、咳嗽，并刺激皮膚和黏 膜，嚴(yán)重者可發(fā)生氯氣中毒。急性中毒這出現(xiàn)躁動、惡心、嘔吐、呼吸困

52、難等癥狀，甚 至因窒息而死。避免使用.安全防護(hù)措施 按照使用說明，根據(jù)消毒對象不同而配制不同的稀釋倍數(shù),不必要的高濃度的消毒液，稀釋和使用時戴好手套，消毒后可及時開窗通風(fēng)，基本可規(guī)避消毒液對人體的危害。其他.主要風(fēng)險點識別實驗室內(nèi)的照明和聲音(生物安全柜等)有可能因強(qiáng)光和噪聲對人員造成損害。.安全防護(hù)措施 對實驗室的照明和聲音等參數(shù)進(jìn)行檢測，確保合格，避免強(qiáng)光和噪聲 對人員的損害。四、實驗意火災(zāi)風(fēng)險評估與預(yù)防控制措施.主要風(fēng)險點識別(1)超負(fù)荷用電，電線過長。(2)電器和電源老化、電器保養(yǎng)不良，例如電線的絕緣層破舊或損壞。(3)用火不當(dāng)?shù)纫l(fā)火災(zāi)。(4)儀器設(shè)備在不使用時未關(guān)閉電源。(5)使用

53、的儀器設(shè)備不是專為實驗室環(huán)境設(shè)計。(6)易燃、易爆品處理、保存不當(dāng)。(7)不相容化學(xué)品沒有正確隔離。(8)在易燃物品和蒸汽附近有能產(chǎn)生火花的設(shè)備。(9)通風(fēng)系統(tǒng)不當(dāng)或不充分。.預(yù)防控制措施實驗室采取以下預(yù)防控制措施避免火災(zāi)發(fā)生，保證發(fā)生火災(zāi)后能夠安全撤離實驗室。(1)定期檢查電器插座、電線絕緣層是否完好，保證用電負(fù)荷，對易燃、易爆等危險品進(jìn) 行有效區(qū)域隔離。(2)實驗室配備滅火器。放置在易取的地點，擺放部位張貼滅火器標(biāo)識。該滅火器用于撲 滅可控制的火災(zāi)，幫助人員撤離火場；對滅火器進(jìn)行定期檢查和維護(hù)，確保其有效(3)實驗室需裝設(shè)應(yīng)急燈，所有出口都有黑暗中可見的“緊急出口”標(biāo)識；當(dāng)出現(xiàn)緊急狀 況時

54、，實驗室所有出口的鎖必須處于開啟狀態(tài)，出口設(shè)計應(yīng)保證不經(jīng)過高危險區(qū)域就能逃脫，所有出口都能通向一個開放空間。(4)走廊、流通區(qū)域不得放置障礙物，以不受人員流動和滅火設(shè)備移動的影響。(5)在實驗室工作區(qū)顯著位置張貼火警電話標(biāo)識。實驗室每年對工作人員進(jìn)行消防知識培訓(xùn)，包括消防器材的使用、火災(zāi)發(fā)生時的應(yīng)急行動等。五、自然災(zāi)害風(fēng)險評估與安全防護(hù)措施自然災(zāi)害可能導(dǎo)致的實驗室緊急狀況主要包括水災(zāi)和地震等。(一)水災(zāi).風(fēng)險點識別 水災(zāi)可能導(dǎo)致實驗室維護(hù)結(jié)構(gòu)和設(shè)施損壞，實驗室內(nèi)感染性材料隨水外溢。.安全防護(hù)措施（1）在安全手冊中制訂實驗室緊急事件應(yīng)急預(yù)案，并對所有實驗查人員進(jìn)行培訓(xùn)。（2）實驗查一旦發(fā)生水災(zāi)報

55、警時，應(yīng)立刻停上工作。首先，考慮實驗室內(nèi)感染性物質(zhì)和人 員的轉(zhuǎn)移。實驗室負(fù)責(zé)人、院長根據(jù)條件及時采取對策，第一時間聯(lián)系相關(guān)消防人員。消防人員應(yīng)有防護(hù)措施，并在收到訓(xùn)練的實驗室工作人員的陪同下，進(jìn)入實驗室完成菌毒種和人員的安全轉(zhuǎn)移工作（二）地震1主要風(fēng)險點識別 發(fā)生地震等自然災(zāi)害會導(dǎo)致實驗室維護(hù)結(jié)構(gòu)和設(shè)施損壞，存在人員傷害和實驗室感染性材料外溢的風(fēng)險。2.安全防護(hù)措施 實驗室應(yīng)采取措施降低自然災(zāi)害帶來的風(fēng)險，保證災(zāi)害發(fā)生后能夠安全撤離實驗室，減少對人員和環(huán)境的影響。發(fā)生地震后，首先，設(shè)立距實驗室維護(hù)結(jié)構(gòu)20m范圍內(nèi)的封鎖區(qū)。其次，對封鎖區(qū)進(jìn)行消毒，然后由專業(yè)人員在做好個人防護(hù)的前提下對實驗 內(nèi)部

56、環(huán)境邊消毒邊清理，清理到樣品保存地點。如果保藏樣品的容器沒有被破壞，可把他安全轉(zhuǎn)移到其他安全的實驗室存放。如果保藏樣品的容器已被破壞和發(fā)生外溢，應(yīng)立即用可靠方法進(jìn)行徹底消毒滅菌。六、生物安全及其他緊急事件（事故）處理預(yù)案（一）實驗室生物安全事件（事故）處理措施（1）當(dāng)生物安全柜或潔凈實驗室出現(xiàn)持續(xù)正壓時，室內(nèi)人員應(yīng)立即停止操作，通知運行保 障人員采取措施恢復(fù)負(fù)壓。則如果不能及時恢復(fù)和保持負(fù)壓，則應(yīng)停止實驗，按規(guī)程退出。發(fā)生此類事故或發(fā)生意外停電，造成具有傳染性物質(zhì)暴露潛在危險的事故和污染時，工作人員除了采取緊急措施外，立即報告實驗室安全負(fù)責(zé)人，組織對實驗室進(jìn)行終末消毒。（2）對于離心過程中離心

57、管破裂，應(yīng)馬上關(guān)閉電源，讓離心機(jī)停止工作，并靜止30min,然后緩慢打開離心機(jī)蓋，將離心杯平穩(wěn)地拿到生物安全柜中。如果發(fā)生泄漏，用1%的次氯酸鈉消毒液灌入離心杯腔體重消毒30min,然后棄去消毒液和離心管碎片，將離心被清洗后擦干。（3）發(fā)生污染物潑濺或溢出時，立即用清潔布或吸水紙覆蓋污染出，并倒上1025倍稀釋的84消毒液，作用至少 30min,方可清理全部污染物，用消毒劑擦拭污染區(qū)域。所有這些 操作過程中都應(yīng)戴手套。如發(fā)生大范圍污染物擴(kuò)散事故時，應(yīng)立即通知實驗室主管領(lǐng)導(dǎo)和安全負(fù)責(zé)人到達(dá)事故現(xiàn)場。待其查清情況，確定消毒方案，組織對實驗室進(jìn)行終末消毒。（二）其他緊急事件（事故）處理措施在制訂的應(yīng)

58、急預(yù)案中應(yīng)包括消防人員和其他緊急救助人員。應(yīng)事先告知他們哪些實驗室有潛在的感染性物質(zhì)，讓他們熟悉實驗室的布局和設(shè)備。實驗室人員要熟悉緊急撤離的情況及緊急撤離的路線標(biāo)識。在實驗室發(fā)生不可控制的火災(zāi)、水災(zāi)、爆炸或其他危險情況時，為確保工作人員的安全，要進(jìn)行緊急撤離。所有實驗室人員須了解緊急撤離的行動計劃、撤離路線和緊急撤離的集合地點。每年至少參加一次緊急撤離演習(xí)，包括急救設(shè)備使用和采取相應(yīng)急救措施。（三）生物安全及其他緊急事件（事故）報告和記錄（1）發(fā)生生物安全及其他緊急事件時，在緊急處理的同時必須向我院主管領(lǐng)導(dǎo)和生物安全委員會報告。（2）對于生物安全事件必須進(jìn)行登記，記錄發(fā)生的時間、地點、詳細(xì)經(jīng)

59、過及處理方法等。七、生物安全和生物安全保障風(fēng)險管理（一）生物安全風(fēng)險評估依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)險評估所依據(jù)的數(shù)據(jù)及擬采取的風(fēng)險控制措施、安全操作規(guī)程等均應(yīng)以國家衛(wèi)生和計劃生育委員會、世界衛(wèi)生組織、國際標(biāo)準(zhǔn)化組織等機(jī)構(gòu)或行業(yè)權(quán)威機(jī)構(gòu)發(fā)布的指南、標(biāo)準(zhǔn)等為依據(jù)。（二）危險發(fā)生的概率評估（見表1）表1霍亂弧菌實驗危險發(fā)生的概率評估序號潛在危險因素危害程度發(fā)生概率固后風(fēng)險措施合理性殘留風(fēng)險風(fēng)險可控程度1樣品運輸過程中容器意外側(cè)翻、泄漏、破裂造成污染中度可能中度合理低風(fēng)險可控2樣品的接受、開啟及加樣等常規(guī)實驗活動中產(chǎn)生的氣溶膠中度較大可能中度合理低風(fēng)險可控3離心、加樣等實驗活動中意外事 故造成盛裝標(biāo)本容器破裂、溢出 瞬間產(chǎn)生的氣溶膠中度可能中度合理低風(fēng)險可控4檢測未經(jīng)滅火的樣品對儀器與環(huán)境造成的污染中度較大可能中度合理低風(fēng)險可控5標(biāo)本、實驗材料、設(shè)施設(shè)備等被誤用的風(fēng)險中度可能中度合理低風(fēng)險可控6陽性標(biāo)本被惡意使用的風(fēng)險高度較小可能高度合理低風(fēng)險可控7實驗器材未經(jīng)規(guī)范消毒造成污染中度可能中度合理低風(fēng)險可控8廢棄物處理不當(dāng)造成病原微生物擴(kuò)散中度較大可能中度合理低風(fēng)險可控9滅菌裝置小符0