1、非小細胞肺癌血管內(nèi)皮生長因子的表達及其意義摘要：目的研究血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在非小細胞肺癌(NSCLC)中的表達及其臨床意義。方法應用鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化物酶(SP)法染色技術測定65例NSCLC組織標本的VEGF蛋白的表達水平，并分析其與病理類型、區(qū)域性淋巴結轉移、腫瘤大小及病理分期之間的關系。結果VEGF在NSCLC組織中表達的陽性率為78.5%，顯著高于癌旁組織(3.1%)；VEGF的表達與腫瘤大小有關，5cm和3.05.0cm組的陽性率均顯著高于3.0cm組(P0.05)，但與病理類型、區(qū)域性淋巴結轉移及病理分期無關(P0.05)。結論檢測VEGF的表達，有可能為判斷NSC

2、LC病變的發(fā)展以及評估預后提供依據(jù)。關鍵詞：血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)；免疫組化；肺腫瘤中分類號：R730.45；R734.2文獻標識碼：A文章編號：1000-8578(2000)05-0361-03 Studies on the Expression of VEGF in Human Non-Small-Cell Lung CancerCHU Xiao-yuan(Department of Oncology,Nanjing General Hospital of PLA,NanJing 210002,China)CHEN Long-bang(Department of Oncology,N

3、anjing General Hospital of PLA,NanJing 210002,China)WANG Jing-hua,et al(Department of Oncology,Nanjing General Hospital of PLA,NanJing 210002,China)Abstract:Objective To study the clinical significance of expression of VEGF in non-small-cell lung cancer (NSCLC).Methods By using SP immunohistochemica

4、l method with anti-VEGF multiclonal antibody,we detected the expression of VEGF in 65 cases NSCLC and studied the correlation between expression of VEGF and pathological types,lymph node metastases,the size of tumor mass and clinical stages.Results The total positive rate (78.5%)of VEGF expression i

5、n NSCLC was much higher than that(3.1%)in the nomal tissues nearby.VEGF expression was associated with the size of tumor mass (P0.05),but had no association with pathological types,lymph node metastases or the desease staging.Conclusion The data demonstrated that expression of VEGF might be used as

6、an objective indicator of the extent of invation and the prognosis in NSCLC.Key words:VEGF;Immunohistochemistry;Lung neoplasms血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是典型的外分泌蛋白，能夠增加腫瘤血管通透性并促進腫瘤血管的形成；此外，VEGF還可干擾樹突細胞的成熟而影響腫瘤免疫，使腫瘤細胞逃避免疫監(jiān)視1，在腫瘤的侵襲和轉移過程中具有重要作用。我們采用鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化物酶(SP)法染色技術，對存檔的NSCLC石蠟組織的VEGF進行檢測，并探討其臨床意義。1材料與方法1.1標

7、本全部選自經(jīng)病理證實的NSCLC標本65例，男性50例，女性15例；年齡3875歲，平均年齡58.8歲。按WHO肺腫瘤組織學分型(1981)標準包括肺鱗癌32例，肺腺癌33例，組織學分級為級10例、級23例、級32例。根據(jù)1986年UICC的TNM分期標準分期為期11例、期22例、A期28例、B期3例、期伴有腦轉移1例。有肺門及縱隔淋巴結轉移36例，無淋巴結轉移29例。標本均經(jīng)中性福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，4um切片。1.2抗體VEGF多克隆抗體及鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組織染色試劑盒購自福州邁新生物技術公司。1.3免疫組織化學染色步驟如下：切片常規(guī)脫蠟水化，切片放入0.01mol

8、/L，pH6.0的檸檬酸緩沖液內(nèi)，于微波爐中，檔(工率220W)，加熱10min，室溫冷卻30min后，蒸餾水沖洗，再用PBS沖洗35min。每張切片加1滴過氧化物酶阻斷液，室溫下孵育10min。PBS液沖洗(35min)。每張切片加1滴非免疫性動物血清，室溫下孵育20min。每張切片加1滴第一抗體，4C下孵育過夜。PBS液沖洗(35min)。每張切片加1滴生物素標記的第二抗體，室溫下孵育20min。PBS液沖洗(35min)。每張切片加1滴鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶溶液，室溫下孵育20分鐘。PBS液沖洗(35min)。每張切片加2滴新鮮配制的DAB溶液，顯微鏡下觀察10min。自來水沖洗

9、，蘇木素襯染，0.1%鹽酸水溶液分化?；厮{后，切片常規(guī)脫水， 二甲苯透明， 中性樹酯封片。對照：用已知的陽性肺癌組織切片同時同一條件下染色作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。1.4結果判斷VEGF陽性染色標準主要為細胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。采用雙評分半定量法進行評分2，375%3分；顯色度按切片中細胞顯色有無及深淺計分，細胞無顯色0分，淺棕黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；將兩分相加，12分判+，34分判+，56分判+。1.5統(tǒng)計分析陽性率的比較采用2檢驗2結果2.1VEGF表達的定位VEGF陽性染色定位于癌細胞漿中，不同區(qū)域的染色程度差異不明顯，陽性產(chǎn)物呈彌漫或散在的棕黃色顆粒。2.2

10、VEGF在NSCLC組織的表達情況同一癌巢細胞VEGF表達強度各異，陽性表達以“+”至“+”多見，陽性染色呈灶狀或片狀分布(1、2)。癌旁正常肺組織呈陰性或弱陽性表達。VEGF的表達與NSCLC臨床生物學的關系如表1所示：VEGF在NSCLC組織有較高水平表達(78.5%)，明顯高于癌旁組織(3.1%)，經(jīng)統(tǒng)計學處理，具有顯著統(tǒng)計學意義(P0.05)。VEGF在NSCLC表達陽性率與臨床病理分期無關，、期(81.3%)與、期(75.8%)相差不明顯(P0.05)；但VEGF與腫瘤大小有關，腫瘤越大陽性率越高，5cm和3.05.0cm組的陽性率均顯著高于3.0cm組，且經(jīng)統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意

11、義(P0.05)。1肺腺癌VEGF蛋白表達陽性SP2002肺鱗癌VEGF蛋白表達陽性SP100表1VEGF表達與NSCLC臨床生物學的關系例數(shù)陽性例數(shù)陰性例數(shù)陽性率(%)P值組織類型癌組織65511478.50.05腫瘤大小(cm)3.01810855.60.053.00.05+期3226681.3淋巴結轉移有3629780.60.05無2922775.93討論 VEGF(vascular endothelial growthfactor)又稱血管內(nèi)皮生長因子，分子量為3.41044.5104，是一種糖蛋白二聚體。其基因位于染色體6P21.3，該基因編碼產(chǎn)物以VEGF165為主。VEGF能夠增

12、加血管通透性，導致血漿蛋白、纖維蛋白及液體經(jīng)血管外滲，引起細胞外基質改變，促進血管形成和新基質形成，從而為腫瘤生長、侵龔和轉移提供基礎4。Abu等5發(fā)現(xiàn)，正常卵巢組織無VEGF蛋白表達，良性、交界性卵巢囊腺瘤的VEGF表達陽性比例呈遞增的趨勢，交界性腫瘤中，更易惡變的漿液性囊腺瘤比粘液性囊腺瘤明顯增高。人結腸癌伴肝轉移的VEGF蛋白表達比不轉移的要高6。研究提示，VEGF有可能成為區(qū)別腫瘤良惡性、惡性程度、預測侵襲轉移能力及判斷預后的指標。有關VEGF與NSCLC之間關系的報道較少。有作者7對94例肺癌組織檢測中發(fā)現(xiàn)肺癌組織VEGF的陽性表達率為70.2%，明顯高于正常組織，且微血管計數(shù)值均高

13、于陰性組，鱗癌中有淋巴結轉移的VEGF陽性率明顯高于無淋巴結轉移者。本研究發(fā)現(xiàn)，VEGF在NSCLC組織的陽性表達率明顯高于癌旁組織，且VEGF蛋白的陽性表達與NSCLC的病理類型無關。但本實驗發(fā)現(xiàn)VEGF蛋白表達與腫瘤大小有關(P0.05)，腫瘤直徑大于3cm和大于5cm的NSCLC組織的陽性表達率明顯高于小于3cm的肺癌組織，這說明VEGF在侵襲生長過程中具有促進腫瘤血管生長的潛在功能，與NSCLC病變的進展有關。區(qū)域性淋巴結轉移組及、期病例的VEGF表達陽性率分別高于無淋巴結轉移組及、期病例，但統(tǒng)計學無顯著差異，可能與病例數(shù)有限有關。VEGF與NSCLC區(qū)域性淋巴結轉移的內(nèi)在聯(lián)系有待于進

14、一步研究。作者單位：褚曉源（210002南京軍區(qū)南京總醫(yī)院腫瘤內(nèi)科）陳龍邦（210002南京軍區(qū)南京總醫(yī)院腫瘤內(nèi)科）王靖華（210002南京軍區(qū)南京總醫(yī)院腫瘤內(nèi)科）龔涌靈（210002南京軍區(qū)南京總醫(yī)院腫瘤內(nèi)科）張群（210002南京軍區(qū)南京總醫(yī)院腫瘤內(nèi)科）參考文獻：1Gabrilovich DJ,Chen HL,Girgis KR,et al.Production of vascular endothelial growth factor by human tumors inhibits the functional maturation of dendritic cellsJNat Med

15、,1996,2(10):1096-1103.2趙春華，唐衛(wèi)華，汪筱娟，等.NDPK/nm23-H在膀胱癌、肺癌、大腸癌中的表達及意義J.腫瘤防治研究，1999，26(1)：24-25.3陳壽松，赫麗，許冬生，等.C-erbB-2，P53和PCNA蛋白在肺癌中的表達特點及意義J.腫瘤防治研究，1998，25(1)：31-32.4Dvork HF.Tumors:Wounds that do not heal.Similarties between tumor stroma generation and wound healingJ.N Engl J Med,1986,315:1650.5Abu Jawdeh GM,Faix JD,Niloff J,et al.Strong expression of vasular permeability factor and its receptors in ovarian borderline and maglignant neoplasmsJLab Invest,1996,74:1105.6Tanigawa N,Amaya H,Matsumura M,et al.Correlatio