1、.常用貯液與溶液 1mol/L 亞精胺( Spermidine ): 溶解 2.55g 亞精胺于足量的水中，使終體 積為 10ml 。分裝成小份貯存于 -20。1mol/L 精胺(Spermine )：溶解 3.48g 精胺于足量的水中， 使終體積為 10ml 。 分裝成小份貯存于 -20 。10mol/L 乙酸胺( ammonium acetate )：將 77.1g 乙酸胺溶解于水中，加 水定容至 1L 后，用 0.22um 孔徑的濾膜過濾除菌。10mg/ml 牛血清蛋白 (BSA)：加 100mg 的牛血清蛋白 (組分 V 或分子生物 學(xué)試劑級(jí)，無 DNA 酶)于 9.5ml 水中(為減

2、少變性， 須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白) ，蓋好蓋后，輕輕搖動(dòng)，直至 牛血清蛋白完全溶解為止。 不要渦旋混合。 加水定容到 10ml ，然后分裝成 小份貯存于 -20 。1mol/L 二硫蘇糖醇( DTT)：在二硫蘇糖醇 5g 的原裝瓶中加 32.4ml 水， 分成小份貯存于 -20 ?；蜣D(zhuǎn)移 100mg 的二硫蘇糖醇至微量離心管，加 0.65ml 的水配制成 1mol/L 二硫蘇糖醇溶液。8mol/L 乙酸鉀( potassium acetate )：溶解 78.5g 乙酸鉀于足量的水中， 加水定容到 100ml 。1mol/L 氯化鉀(KCl)：溶解 7.46g 氯化鉀于足量的水中

3、， 加水定容到 100ml 。3mol/L 乙酸鈉( sodium acetate )：溶解 40.8g 的三水乙酸鈉于約 90ml 水 中，用冰乙酸調(diào)溶液的 pH 至 5.2 ，再加水定容到 100ml 。0.5mol/L EDTA: 配制等摩爾的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液( 0.5mol/L )，混合 后形成 EDTA的三鈉鹽?；蚍Q取 186.1g 的Na2EDTA?2H2O和20g 的NaOH，并溶于水中，定容至 1L 1mol/L HEPES：將 23.8gHEPES 溶于約 90ml 的水中，用 NaOH 調(diào) pH （6.8-8.2 ），然后用水定容至 100ml 。1mo

4、l/L HCl ：加 8.6ml 的濃鹽酸至 91.4ml 的水中。25mg/ml IPGT ：溶解 250mg 的 IPGT（異丙基硫代 -D- 半乳糖苷）于 10ml 水中，分成小份貯存于 -20 。1mol/LMgCl2: 溶解 20.3g MgCl2 ?6H2O 于足量的水中，定容到 100ml 。 100mmol/L PMSF ：溶解 174mg 的 PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的異丙 醇中，定容到 10ml 。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹 或貯存于 -20 。20mg/ml 蛋白酶 K（proteinase K）：將 200mg 的蛋白酶 L 加入到 9.5ml 水中，輕輕搖動(dòng)，

5、直至蛋白酶 K 完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到 10ml， 然后分裝成小份貯存于 -20 。10mg/mlRnase （無 DNase）（DNasefree RNase ）：溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L 的乙酸鈉水溶液中（ pH 5.0 ）。溶解后于水浴 中煮沸 15min ，使 DNA 酶失活。用 1mol/L 的 Tris HCl調(diào) pH 至 7.5，于 -20貯存。（配制過程中要戴手套）5mol/L 氯化鈉（ NaCl）：溶解 29.2g 氯化鈉于足量的水中，定容至 100ml 。 10N 氫氧化鈉（ NaOH）：溶解 400g 氫氧化鈉顆粒于

6、約 0.9L 水的燒杯中（磁 力攪拌器攪拌） ，氫氧化鈉完全溶解后用水定容至 1L。10 SDS（十二烷基硫酸鈉） ：稱取 100gSDS 慢慢轉(zhuǎn)移到約含 0.9L 的水的 燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L 山梨（糖）醇（ Sorbitol ）：溶解 36.4g 山梨（糖）醇于足量水中使 終體積為 100ml 。100 三氯乙酸 （TCA）:在裝有 500gTCA 的試劑瓶中加入 100ml 水，用磁 力攪拌器攪拌直至完全溶解。 （稀釋液應(yīng)在臨用前配制）2.5 X gal（ 5-溴-4-氯-3-吲哚 -半乳糖苷）：溶解 25mg 的 Xgal 于 1ml 的二

7、甲基甲酰胺（ DMF）,用鋁箔包裹裝液管，貯存于 -20 。100 ×Denhardt 試劑（ Denhardt's regent ） 成分及終濃度 配制 100ml 溶液各成分的用量 2% 聚蔗糖（ Ficoll ， 400 型） 2% 聚乙烯吡咯烷酮（ PVP-40） 2%BSA （組分 V） 水 2g 2g 2g 加水至總體積為 100ml 依照上表稱取各組分，溶于水中定容。過濾除菌及雜質(zhì)，分裝成小份于 -20 貯存。10 ×標(biāo)準(zhǔn) DNA 連接酶緩沖液（ standard DNA ligase buffer ）（粘端、平端 連接）成分及終濃度 配制 10ml

8、溶液各成分的用量 0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT 2mmol/L ATP5mmol/L 鹽酸亞精胺（可選）0.5mg/ml BSA （組分 V）（可選）水 5ml 1mol/L 貯液1ml 1mol/L 貯液1ml 1mol/L 貯液200ul 100 mmol/L 貯液50ul 1 mmol/L 貯液0.5ml 10 mg/mL 貯液2.25ml將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于 -20 。100 mmol/L dNTP 溶液（ dNTP solutions ）可以購(gòu)買到 100mmol/L 純 dNTPs 貯液， -80 可貯存至

9、少 6 個(gè)月。10mmol/L dNTP 混合液成分及終濃度 配制 20ul 溶液各成分的用量10mmol/L dATP10mmol/L dCTP10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP 水 2ul 100 mmol/L dATP 貯液2ul 100 mmol/L dCTP 貯液2ul 100 mmol/L dGTP 貯液2ul 100 mmol/L dTTP 貯液12ul20 PEG 8000/2.5M NaCl成分及終濃度 配制 10ml 溶液各成分的用量質(zhì)量濃度為 20聚乙二醇2.5mol/L 氯化鈉水 20g50ml 5 mol/L 氯化鈉 或 14.6g 固體氯化鈉補(bǔ)足

10、100ml加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積100ml ，用磁力攪拌器攪拌溶解。20 ×SSC成分及終濃度 配制 1L 溶液各成分的用量300mmol/L 檸檬酸三鈉（二水）3mol/L 氯化鈉水 88.2g175.3g補(bǔ)足 1L溶解檸檬酸三鈉（二水）和氯化鈉于約 0.9L 水中，加幾滴 10N NaOH 溶 液調(diào) pH 為 7.0，用水補(bǔ)足體積至 1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水加 100ul DEPC 于 100ml 水中，使 DEPC 的體積分?jǐn)?shù)為 0.1 。在 37 溫浴至少 12h ，然后在 15 psi 條件下高壓滅菌 20min ，以使殘余的 DEPC 失

11、活。 DEPC會(huì)與胺起反應(yīng)，不可用 DEPC處理 Tris 緩沖液。甲酰胺（ deionized formamide ）直接購(gòu)買或加 Dowex XG8 混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力 攪拌器輕輕攪拌 1h，可去除甲酰胺中的離子。經(jīng) Whatman 1 號(hào)濾紙過濾 除去樹脂后分成小份，充氮?dú)庥?-80 貯存（防止氧化） 。磷酸緩沖液（ phosphate buffer ）按照下表所給定的體積， 混合 1 mol/L 的磷酸二氫鈉 （單堿） 和 1mol/L 磷 酸氫二鈉（雙堿）貯液，獲得所需 pH 的磷酸緩沖液。配制 1 mol/L 的磷 酸二氫鈉（ NaH2PO4?H2O）貯液：溶

12、解 138g 于足量水中，使終體積為 1L;1mol/L 磷酸氫二鈉 （ Na2HPO4 ）貯液 :溶解 142g 于足量水中使終體積 為 1L 。1mol/L 磷酸二氫鈉（ ml） 1mol/L 磷酸氫二鈉（ ml ） 最終 pH 值8778508157757351236.06856255655104503903302801501852252653153754354905506106707206.16.26.3 6.46.56.66.76.86.97.07.17.2TE（用于懸浮和貯存 DNA）成分及終濃度 配制 100ml 溶液各成分的用量10mmol/L Tris HCl1mmol/L

13、EDTA水 1ml 1mol/L Tris-HCl （pH7.4-8.0 ， 25）200ul 0.5 mol/L EDTA （pH 8.0 ）98.8mlTris 緩沖液（ Tris-HCl buffer ）將 121g 的 Tris 堿溶解于約 0.9L 水中，再根據(jù)所要求的 pH（25 下）加 一定量的濃鹽酸（ 11.6N ），用水調(diào)整終體積至 1L。濃鹽酸的體積（ ml ） pH 8.614 2128.53846566671.376 9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2二. 電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液電泳緩沖液50×Tris- 乙酸（ TAE）緩沖液

14、 成分及終濃度 配制 1L 溶液各成分的用量2mol/L Tris 堿1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水 242g57.1 ml 的冰乙酸( 17.4 mol/L )200ml 的 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0 )補(bǔ)足 1L5× Tris-硼酸( TBE)緩沖液成分及終濃度 配制 1L 溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 堿445 mmol/L 硼酸鹽10 mmol/L EDTA水 54g27.5g 硼酸20 ml 的 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0 )補(bǔ)足 1L染料1溴酚藍(lán)( bromophenol blue )加 1g

15、水溶性鈉型溴酚藍(lán)于 100ml 水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解1二甲苯青 FF(xylene cyanole FF )溶解 1g 二甲苯青 FF于足量水中，定容到 100ml 。10mg/ml 的溴化乙錠( ethidium bromide )小心稱取 1g 溴化乙錠，轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，加 100ml 水，用磁力攪拌器攪 拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于4貯存。凝膠上樣液（ gel loading solutions ）6×堿性凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度 配制 10ml 溶液各成分用量0.3 N 氫氧化鈉6 mmol/L EDTA18 聚蔗糖（ 400 型）0.15 溴甲

16、酚綠0.25 二甲苯青 FF水 300ul 10N 氫氧化鈉120ul 0.5mol/L EDTA （ pH8.0 ）1.8g15mg25mg補(bǔ)足到 10ml6×聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度 配制 10ml 溶液各成分用量0.15 溴酚藍(lán)0.15 二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA 15 聚蔗糖（ 400 型）水 1.5ml 1 溴酚藍(lán) 1.5ml 1 二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA （ pH8.0 ）1.5g補(bǔ)足到 10ml6×溴酚藍(lán) /二甲苯青 / 聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存） 成分及終濃度 配制 10ml 溶液各成分用量0.25

17、 溴酚藍(lán)0.25 二甲苯青 FF15 聚蔗糖（ 400 型）水 2.5ml 1 溴酚藍(lán)2.5ml 1 二甲苯青 FF1.5g補(bǔ)足到 10ml6×甘油凝膠上樣液（ 4貯存）成分及終濃度 配制 10ml 溶液各成分用量0.15 溴酚藍(lán)0.15 二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA50甘油水 1.5ml 1 溴酚藍(lán) 1.5ml 1 二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA （ pH8.0 ）3ml3.9ml6×蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度 配制 10ml 溶液各成分用量0.15 溴酚藍(lán)0.15 二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA40聚蔗糖水 1.5

18、ml 1 溴酚藍(lán)1.5ml 1 二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA （ pH8.0 ）4g補(bǔ)足到 10ml10 ×十二烷基硫酸鈉 / 甘油凝膠上樣液（室溫貯存） 成分及終濃度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.2溴酚藍(lán)0.2 二甲苯青 FF200 mmol/L EDTA0.1 SDS 50甘油水 20mg20mg 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10 SDS5ml補(bǔ)足到 10ml三. 常用培養(yǎng)基LB 培養(yǎng)基將下列組分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨 10g酵母提取物 5g氯化鈉 10g如果需要用 1N NaOH( 1ml )調(diào)整 pH 至

19、 7.0，再補(bǔ)足水至 1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉 12g/L, 上層瓊脂平板添加瓊脂粉 7g/L 。SOB 培養(yǎng)基將下列組分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨 20g酵母提取物 5g氯化鈉 0.5g1 mol/L 氯化鉀 2.5ml用水補(bǔ)足體積到 1L。分成 100ml 的小份，高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫 后，再在每 100ml 的小份中加 1ml 滅過菌的 1mol/L 氯化鎂。SOC 培養(yǎng)基成分、方法同 SOB 培養(yǎng)基的配制， 只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后， 除了在每 100ml 的小份中加 1ml 滅過菌的 1mol/L 氯化鎂外，再加 2ml 滅菌的 1mol/L 葡萄糖（ 18g 葡萄糖

20、溶于足夠水中，再用水補(bǔ)足到 100ml ，用 0.22um 的 濾膜過濾除菌） 。TB 培養(yǎng)基將下列組分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨 12g酵母提取物 24g甘油 4ml各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60 ，再加 100ml 滅菌的 170mmol/LKH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4 的溶液（2.31g 的 KH2PO4 和 12.54gK2HPO4 溶在足量的水中，使終體積為 100ml 。高壓滅菌或用 0.22um 的濾膜過濾 除菌）。2×YT 培養(yǎng)基將下列組分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨 16g酵母提取物 10g氯化鈉 4ml如果需要用 1N NaOH（ 1m

21、l ）調(diào)整 pH 至 7.0，再補(bǔ)足水至 1L。注：瓊 脂平板需添加瓊脂粉 12g/L, 上層瓊脂平板添加瓊脂粉 7g/L 。YPD培養(yǎng)基將下列組分溶解在 0.9L 水中： 蛋白胨 20g酵母提取物 10g葡萄糖 20g用水補(bǔ)足體積為 1L 后，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前，對(duì)色氨酸營(yíng)養(yǎng) 缺陷型每升培養(yǎng)基添加 1.6g 色氨酸，因?yàn)?YPD 培養(yǎng)基是色氨酸限制型培 養(yǎng)基。為了配制平板，需要在高壓滅菌前加入 20g 瓊脂粉。四. 常用抗生素氨芐青霉素( ampicillin )( 100mg/ml )溶解 1g 氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中，最后定容至 10ml 。分裝成小份于-20 貯存。常以 25ug/ml 50ug/ml 的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。 羧芐青霉素( carbenicillin )(50mg/ml )溶解 0.5g 羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml 。分裝成小份于-20 貯存。常以 25ug/ml