基于PLGA納米診療劑的腫瘤可視化光熱/藥物協(xié)同治療體系構(gòu)建與性能解析一、引言1.1研究背景腫瘤，作為全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的重大疾病之一，長(zhǎng)期以來(lái)一直是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的核心焦點(diǎn)。根據(jù)世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥負(fù)擔(dān)數(shù)據(jù)，當(dāng)年全球新增癌癥病例高達(dá)1929萬(wàn)例，癌癥死亡病例達(dá)996萬(wàn)例。這一嚴(yán)峻的數(shù)據(jù)表明，腫瘤的防治形勢(shì)極為緊迫，亟待更加有效的治療策略和方法。目前，腫瘤的主要治療手段包括手術(shù)切除、化學(xué)治療、放射治療、免疫治療和靶向治療等。手術(shù)切除作為一種直接的治療方式，對(duì)于早期腫瘤往往能夠取得較好的治療效果，但對(duì)于中晚期腫瘤，由于腫瘤的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移，手術(shù)難以完全切除腫瘤組織，且手術(shù)創(chuàng)傷較大，對(duì)患者身體機(jī)能影響明顯。化學(xué)治療通過(guò)使用化學(xué)藥物抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和分裂，然而，化療藥物缺乏對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性識(shí)別，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，也會(huì)對(duì)正常細(xì)胞造成損害，引發(fā)嚴(yán)重的毒副作用，如脫發(fā)、惡心、嘔吐、骨髓抑制等，導(dǎo)致患者生活質(zhì)量下降，甚至部分患者因無(wú)法耐受化療副作用而中斷治療。放射治療利用高能射線(xiàn)殺死腫瘤細(xì)胞，但同樣會(huì)對(duì)周?chē)＝M織產(chǎn)生輻射損傷，引發(fā)一系列并發(fā)癥，如放射性肺炎、放射性腸炎等。免疫治療和靶向治療雖然在部分腫瘤治療中展現(xiàn)出一定的療效，但存在治療響應(yīng)率低、耐藥性等問(wèn)題，限制了其廣泛應(yīng)用。為了克服傳統(tǒng)腫瘤治療方法的局限性，提高治療效果，降低毒副作用，光熱/藥物協(xié)同治療作為一種新興的腫瘤治療策略應(yīng)運(yùn)而生。光熱治療（PhotothermalTherapy，PTT）是利用光熱轉(zhuǎn)換材料將光能轉(zhuǎn)化為熱能，使腫瘤組織溫度升高，從而達(dá)到殺死腫瘤細(xì)胞的目的。近紅外光（NearInfrared，NIR）由于具有較好的組織穿透深度和較低的生物組織吸收和散射特性，常被用于光熱治療。在近紅外光的照射下，光熱轉(zhuǎn)換材料能夠高效地吸收光能并轉(zhuǎn)化為熱能，使腫瘤局部溫度迅速升高至42-45℃以上，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞蛋白質(zhì)變性、細(xì)胞膜損傷、細(xì)胞器功能障礙等，最終引發(fā)腫瘤細(xì)胞凋亡或壞死。同時(shí)，適度的熱刺激還可以改變腫瘤細(xì)胞的微環(huán)境，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的攝取和敏感性，為光熱/藥物協(xié)同治療提供了理論基礎(chǔ)。藥物治療在腫瘤治療中占據(jù)重要地位，通過(guò)使用化療藥物、靶向藥物等，可以直接抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和轉(zhuǎn)移。然而，如前所述，傳統(tǒng)藥物治療存在諸多弊端。將光熱治療與藥物治療相結(jié)合，能夠發(fā)揮兩者的優(yōu)勢(shì)，實(shí)現(xiàn)協(xié)同增效。一方面，光熱治療產(chǎn)生的高溫可以增強(qiáng)細(xì)胞膜的通透性，促進(jìn)藥物進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，提高藥物的療效；另一方面，藥物可以進(jìn)一步殺傷光熱治療后殘留的腫瘤細(xì)胞，降低腫瘤復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。這種協(xié)同治療策略不僅可以提高腫瘤治療的效果，還可以減少藥物的使用劑量，降低藥物的毒副作用，為腫瘤治療帶來(lái)新的希望。在光熱/藥物協(xié)同治療中，納米診療劑作為一種新型的藥物遞送系統(tǒng)，發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。納米診療劑是將光熱轉(zhuǎn)換材料、藥物和其他功能性分子等通過(guò)納米技術(shù)組裝而成的納米級(jí)載體，具有獨(dú)特的物理化學(xué)性質(zhì)和生物學(xué)特性。納米診療劑的尺寸通常在1-1000nm之間，這使得它們能夠通過(guò)被動(dòng)靶向或主動(dòng)靶向的方式富集于腫瘤組織。被動(dòng)靶向是基于腫瘤組織的高通透性和滯留效應(yīng)（EnhancedPermeabilityandRetentioneffect，EPR效應(yīng)），納米診療劑能夠更容易地穿透腫瘤血管壁，在腫瘤組織中積聚。主動(dòng)靶向則是通過(guò)在納米診療劑表面修飾特異性的靶向配體，如抗體、多肽、核酸適配體等，使其能夠與腫瘤細(xì)胞表面的特異性受體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的精準(zhǔn)識(shí)別和靶向遞送。聚乳酸-羥基乙酸共聚物（Poly(lactic-co-glycolicacid)，PLGA）是一種廣泛應(yīng)用于納米診療劑制備的生物可降解高分子材料。PLGA由乳酸和羥基乙酸兩種單體通過(guò)開(kāi)環(huán)聚合反應(yīng)合成，其分子結(jié)構(gòu)中含有酯鍵，在體內(nèi)可被酯酶水解，最終降解為乳酸和羥基乙酸，這些降解產(chǎn)物可參與人體的新陳代謝，通過(guò)呼吸和尿液排出體外，因此具有良好的生物相容性和生物可降解性。此外，PLGA的降解速率可以通過(guò)調(diào)節(jié)乳酸和羥基乙酸的比例、分子量等因素進(jìn)行控制，這使得它能夠滿(mǎn)足不同藥物釋放速率的需求。PLGA還具有良好的成膜性和乳化性，易于制備成納米粒子、微球、膠束等多種納米載體形式，便于負(fù)載光熱轉(zhuǎn)換材料和藥物?；赑LGA的納米診療劑在腫瘤光熱/藥物協(xié)同治療中展現(xiàn)出諸多優(yōu)勢(shì)。首先，PLGA納米粒子能夠有效地負(fù)載光熱轉(zhuǎn)換材料和藥物，提高其在體內(nèi)的穩(wěn)定性和生物利用度。例如，將光熱轉(zhuǎn)換劑吲哚菁綠（IndocyanineGreen，ICG）負(fù)載于PLGA納米粒子中，可以防止ICG在體內(nèi)的快速清除，延長(zhǎng)其在腫瘤組織中的滯留時(shí)間，增強(qiáng)光熱治療效果。其次，PLGA納米粒子的表面易于修飾，可以通過(guò)共價(jià)鍵合、物理吸附等方式連接靶向配體和其他功能性分子，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的主動(dòng)靶向和多功能治療。此外，PLGA納米診療劑還可以通過(guò)調(diào)節(jié)藥物釋放速率，實(shí)現(xiàn)藥物的持續(xù)釋放，維持腫瘤組織中藥物的有效濃度，提高治療效果。綜上所述，腫瘤治療面臨著諸多挑戰(zhàn)，光熱/藥物協(xié)同治療作為一種新興的治療策略具有廣闊的應(yīng)用前景，而基于PLGA的納米診療劑在光熱/藥物協(xié)同治療中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。本研究旨在構(gòu)建用于腫瘤可視化光熱/藥物協(xié)同治療的PLGA納米診療劑，并對(duì)其性能進(jìn)行深入研究，為腫瘤治療提供新的思路和方法。1.2研究目的與意義1.2.1研究目的本研究旨在構(gòu)建一種基于聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）的納米診療劑，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤的可視化光熱/藥物協(xié)同治療。具體研究目的如下：制備負(fù)載光熱轉(zhuǎn)換材料和化療藥物的PLGA納米診療劑：通過(guò)優(yōu)化制備工藝，將具有高效光熱轉(zhuǎn)換性能的材料（如吲哚菁綠ICG、金納米棒等）和化療藥物（如阿霉素、紫杉醇等）同時(shí)負(fù)載于PLGA納米粒子中，制備出具有良好穩(wěn)定性和分散性的納米診療劑，并實(shí)現(xiàn)對(duì)光熱轉(zhuǎn)換材料和藥物負(fù)載量的有效調(diào)控。對(duì)PLGA納米診療劑進(jìn)行表面修飾：在PLGA納米診療劑表面修飾特異性的靶向配體（如葉酸、抗體等），使其能夠主動(dòng)靶向腫瘤細(xì)胞，提高納米診療劑在腫瘤組織中的富集效率，增強(qiáng)治療效果；同時(shí)，修飾其他功能性分子（如熒光分子、磁共振造影劑等），賦予納米診療劑可視化成像功能，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤的精準(zhǔn)診斷和治療過(guò)程的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。研究PLGA納米診療劑的性能：系統(tǒng)研究納米診療劑的光熱轉(zhuǎn)換性能、藥物釋放特性、體外細(xì)胞毒性、細(xì)胞攝取行為以及體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)和生物分布等性能，明確納米診療劑在腫瘤治療中的作用機(jī)制和效果。評(píng)估PLGA納米診療劑的腫瘤光熱/藥物協(xié)同治療效果：通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證納米診療劑在近紅外光照射下的光熱/藥物協(xié)同治療效果，評(píng)估其對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用、對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡和壞死的誘導(dǎo)能力以及對(duì)機(jī)體免疫反應(yīng)的影響等，為腫瘤治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1.2.2研究意義腫瘤的治療是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的重要課題，構(gòu)建用于腫瘤可視化光熱/藥物協(xié)同治療的PLGA納米診療劑具有重要的理論意義和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值，主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：理論意義豐富腫瘤治療理論：光熱/藥物協(xié)同治療是一種新興的腫瘤治療策略，本研究將深入探討其作用機(jī)制，為腫瘤治療理論的發(fā)展提供新的思路和依據(jù)。通過(guò)研究納米診療劑在腫瘤微環(huán)境中的行為、光熱效應(yīng)與藥物作用的協(xié)同機(jī)制等，可以進(jìn)一步揭示腫瘤治療的生物學(xué)過(guò)程，加深對(duì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展和治療的認(rèn)識(shí)。拓展納米材料在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用：PLGA作為一種常用的生物可降解高分子材料，在納米診療劑的制備中具有廣泛的應(yīng)用前景。本研究通過(guò)構(gòu)建基于PLGA的多功能納米診療劑，將進(jìn)一步拓展PLGA納米材料在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用范圍，為其他納米材料在腫瘤治療中的應(yīng)用提供參考和借鑒。促進(jìn)多學(xué)科交叉融合：本研究涉及材料科學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、化學(xué)等多個(gè)學(xué)科領(lǐng)域，通過(guò)多學(xué)科的交叉融合，可以整合不同學(xué)科的技術(shù)和方法，為解決腫瘤治療中的難題提供新的途徑。例如，利用材料科學(xué)的方法制備納米診療劑，利用生物醫(yī)學(xué)的技術(shù)研究其生物學(xué)性能和治療效果，利用化學(xué)的手段對(duì)納米診療劑進(jìn)行表面修飾和功能化等，將有助于推動(dòng)多學(xué)科的協(xié)同發(fā)展。實(shí)際應(yīng)用價(jià)值提高腫瘤治療效果：光熱/藥物協(xié)同治療可以發(fā)揮光熱治療和藥物治療的優(yōu)勢(shì)，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的雙重殺傷，提高腫瘤治療的效果。通過(guò)將光熱轉(zhuǎn)換材料和藥物負(fù)載于PLGA納米粒子中，并進(jìn)行表面修飾，使其能夠靶向腫瘤組織，可增強(qiáng)治療的特異性和有效性，降低對(duì)正常組織的損傷。降低藥物毒副作用：傳統(tǒng)化療藥物由于缺乏對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性識(shí)別，在治療過(guò)程中會(huì)對(duì)正常組織產(chǎn)生較大的毒副作用。本研究構(gòu)建的PLGA納米診療劑可以實(shí)現(xiàn)藥物的靶向遞送和控釋?zhuān)瑴p少藥物在正常組織中的分布和暴露，從而降低藥物的毒副作用，提高患者的生活質(zhì)量。實(shí)現(xiàn)腫瘤的可視化診療：在納米診療劑表面修飾熒光分子、磁共振造影劑等功能性分子，使其具有可視化成像功能，能夠在治療過(guò)程中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)腫瘤的位置、大小和形態(tài)變化，以及納米診療劑在體內(nèi)的分布和代謝情況。這有助于醫(yī)生及時(shí)調(diào)整治療方案，提高治療的精準(zhǔn)性和安全性。為腫瘤臨床治療提供新策略：本研究的成果有望為腫瘤的臨床治療提供一種新的策略和方法，為腫瘤患者帶來(lái)新的希望?；赑LGA的納米診療劑具有良好的生物相容性和可降解性，在經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的研究和優(yōu)化后，有可能成為一種安全、有效的腫瘤治療手段，推動(dòng)腫瘤治療技術(shù)的發(fā)展和進(jìn)步。1.3研究方法與創(chuàng)新點(diǎn)1.3.1研究方法納米診療劑的制備方法：采用納米沉淀法、乳化-溶劑揮發(fā)法等方法制備負(fù)載光熱轉(zhuǎn)換材料和化療藥物的PLGA納米診療劑。以納米沉淀法為例，將PLGA、光熱轉(zhuǎn)換材料（如吲哚菁綠ICG）和化療藥物（如阿霉素DOX）溶解在有機(jī)溶劑（如二氯甲烷）中，形成有機(jī)相；將含有穩(wěn)定劑（如聚乙烯醇PVA）的水溶液作為水相；在攪拌條件下，將有機(jī)相緩慢滴加到水相中，形成乳液；通過(guò)減壓蒸餾或透析等方法去除有機(jī)溶劑，得到負(fù)載ICG和DOX的PLGA納米診療劑。通過(guò)改變PLGA的用量、有機(jī)相和水相的比例、穩(wěn)定劑的種類(lèi)和濃度等參數(shù)，優(yōu)化納米診療劑的制備工藝，提高其穩(wěn)定性、分散性和負(fù)載量。納米診療劑的表面修飾方法：利用共價(jià)鍵合、物理吸附等方法在納米診療劑表面修飾靶向配體和功能性分子。以共價(jià)鍵合為例，首先對(duì)納米診療劑表面進(jìn)行活化處理，使其帶有活性基團(tuán)（如羧基、氨基等）；然后將靶向配體（如葉酸FA）或功能性分子（如熒光分子Cy5）通過(guò)化學(xué)反應(yīng)與納米診療劑表面的活性基團(tuán)連接。對(duì)于物理吸附，可將納米診療劑與靶向配體或功能性分子在適當(dāng)?shù)娜芤褐谢旌希ㄟ^(guò)靜電作用、范德華力等相互作用實(shí)現(xiàn)修飾。通過(guò)控制修飾反應(yīng)的條件，如反應(yīng)時(shí)間、溫度、反應(yīng)物濃度等，實(shí)現(xiàn)對(duì)修飾程度的精確控制。納米診療劑的表征方法：運(yùn)用多種分析技術(shù)對(duì)納米診療劑的物理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行表征。使用動(dòng)態(tài)光散射（DynamicLightScattering，DLS）測(cè)定納米診療劑的粒徑和粒徑分布，通過(guò)測(cè)量納米粒子在溶液中布朗運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的散射光強(qiáng)度的變化，得到納米粒子的平均粒徑和粒徑分布情況。利用透射電子顯微鏡（TransmissionElectronMicroscopy，TEM）觀察納米診療劑的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，將納米診療劑樣品制備在銅網(wǎng)上，在高真空環(huán)境下，用電子束照射樣品，通過(guò)觀察電子透過(guò)樣品后的散射和衍射情況，得到納米診療劑的微觀結(jié)構(gòu)信息。采用紫外-可見(jiàn)-近紅外分光光度計(jì)（Ultraviolet-Visible-NearInfraredSpectrophotometer，UV-Vis-NIR）測(cè)定光熱轉(zhuǎn)換材料的吸收光譜，分析其光熱轉(zhuǎn)換性能；通過(guò)測(cè)量納米診療劑在不同波長(zhǎng)光下的吸光度，得到其吸收光譜，進(jìn)而評(píng)估光熱轉(zhuǎn)換材料對(duì)特定波長(zhǎng)光的吸收能力。使用高效液相色譜（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）測(cè)定藥物的負(fù)載量和包封率，將納米診療劑進(jìn)行破乳處理，釋放出藥物，通過(guò)HPLC分析藥物的含量，計(jì)算出藥物的負(fù)載量和包封率。納米診療劑的性能研究方法：在體外實(shí)驗(yàn)中，采用CCK-8法（CellCountingKit-8）、MTT法（3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide）等方法研究納米診療劑的細(xì)胞毒性，將不同濃度的納米診療劑與腫瘤細(xì)胞共孵育一定時(shí)間后，加入CCK-8試劑或MTT試劑，通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞的代謝活性來(lái)評(píng)估納米診療劑對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。利用流式細(xì)胞術(shù)（FlowCytometry，F(xiàn)CM）分析細(xì)胞凋亡和周期變化，將納米診療劑處理后的腫瘤細(xì)胞用熒光染料標(biāo)記，通過(guò)FCM檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)指標(biāo)（如AnnexinV、PI等）和細(xì)胞周期分布情況，了解納米診療劑對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡和周期的影響。通過(guò)激光共聚焦顯微鏡（LaserConfocalMicroscopy，LCM）觀察細(xì)胞對(duì)納米診療劑的攝取行為，將納米診療劑進(jìn)行熒光標(biāo)記后與腫瘤細(xì)胞共孵育，在LCM下觀察熒光信號(hào)在細(xì)胞內(nèi)的分布和強(qiáng)度，研究細(xì)胞對(duì)納米診療劑的攝取過(guò)程和攝取量。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，建立荷瘤動(dòng)物模型（如小鼠、大鼠等），通過(guò)尾靜脈注射等方式給予納米診療劑，利用活體成像技術(shù)（如熒光成像、生物發(fā)光成像等）監(jiān)測(cè)納米診療劑在體內(nèi)的分布和代謝情況，觀察納米診療劑在腫瘤組織中的富集情況以及在其他器官中的分布。定期測(cè)量腫瘤的大小和重量，繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線(xiàn)，評(píng)估納米診療劑對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用；通過(guò)對(duì)腫瘤組織進(jìn)行病理學(xué)分析（如HE染色、TUNEL染色等），觀察腫瘤細(xì)胞的凋亡和壞死情況，進(jìn)一步驗(yàn)證納米診療劑的治療效果。納米診療劑的光熱/藥物協(xié)同治療效果評(píng)估方法：在體外實(shí)驗(yàn)中，將負(fù)載光熱轉(zhuǎn)換材料和藥物的納米診療劑與腫瘤細(xì)胞共孵育，在近紅外光照射下，觀察腫瘤細(xì)胞的死亡情況，通過(guò)CCK-8法、MTT法等檢測(cè)細(xì)胞存活率，與單純光熱治療組、單純藥物治療組進(jìn)行對(duì)比，評(píng)估光熱/藥物協(xié)同治療的效果。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，對(duì)荷瘤動(dòng)物進(jìn)行不同治療組的分組，分別給予單純光熱治療、單純藥物治療、光熱/藥物協(xié)同治療以及對(duì)照組（給予生理鹽水或空白納米粒），觀察各組動(dòng)物的腫瘤生長(zhǎng)情況、生存時(shí)間等指標(biāo)，通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析（如方差分析、t檢驗(yàn)等）比較不同治療組之間的差異，評(píng)估光熱/藥物協(xié)同治療的優(yōu)勢(shì)。同時(shí)，對(duì)治療后的動(dòng)物進(jìn)行組織學(xué)檢查和免疫組化分析，觀察腫瘤組織中相關(guān)蛋白的表達(dá)變化（如凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2等），探討光熱/藥物協(xié)同治療的作用機(jī)制。1.3.2創(chuàng)新點(diǎn)多功能一體化設(shè)計(jì)：本研究構(gòu)建的PLGA納米診療劑實(shí)現(xiàn)了光熱治療、藥物治療和可視化成像的多功能一體化。將光熱轉(zhuǎn)換材料、化療藥物和可視化分子同時(shí)負(fù)載于PLGA納米粒子中，使其在腫瘤治療過(guò)程中能夠發(fā)揮多種作用。這種多功能一體化的設(shè)計(jì)克服了傳統(tǒng)治療方法單一治療手段的局限性，提高了腫瘤治療的效果和精準(zhǔn)性。與以往研究中僅實(shí)現(xiàn)光熱治療與藥物治療的簡(jiǎn)單組合不同，本研究通過(guò)巧妙的納米粒子設(shè)計(jì)和制備工藝，實(shí)現(xiàn)了多種功能的協(xié)同作用，為腫瘤診療提供了更加全面和高效的解決方案。例如，在近紅外光照射下，納米診療劑中的光熱轉(zhuǎn)換材料將光能轉(zhuǎn)化為熱能，殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的攝??；同時(shí)，可視化分子可以實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)納米診療劑在體內(nèi)的分布和治療效果，為醫(yī)生提供準(zhǔn)確的治療信息。精準(zhǔn)靶向與智能響應(yīng)：通過(guò)在納米診療劑表面修飾特異性的靶向配體，實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤細(xì)胞的精準(zhǔn)靶向。同時(shí)，納米診療劑能夠?qū)δ[瘤微環(huán)境中的刺激（如溫度、pH值等）產(chǎn)生智能響應(yīng)，實(shí)現(xiàn)藥物的精準(zhǔn)釋放和治療效果的最大化。這種精準(zhǔn)靶向與智能響應(yīng)的特性提高了納米診療劑的治療特異性，減少了對(duì)正常組織的損傷。與傳統(tǒng)的納米藥物載體相比，本研究的納米診療劑能夠更加準(zhǔn)確地識(shí)別腫瘤細(xì)胞，并在腫瘤微環(huán)境中釋放藥物，提高了藥物的利用率和治療效果。例如，葉酸修飾的納米診療劑能夠特異性地與腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)的葉酸受體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的主動(dòng)靶向；在腫瘤微環(huán)境的酸性條件下，納米診療劑中的化學(xué)鍵發(fā)生斷裂，實(shí)現(xiàn)藥物的快速釋放，增強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。獨(dú)特的制備工藝與性能優(yōu)化：本研究采用了獨(dú)特的制備工藝，優(yōu)化了納米診療劑的性能。通過(guò)對(duì)制備參數(shù)的精細(xì)調(diào)控，提高了光熱轉(zhuǎn)換材料和藥物的負(fù)載量，增強(qiáng)了納米診療劑的穩(wěn)定性和分散性。同時(shí)，對(duì)納米診療劑的表面修飾方法進(jìn)行了創(chuàng)新，提高了修飾的效率和穩(wěn)定性。這種獨(dú)特的制備工藝和性能優(yōu)化方法為納米診療劑的大規(guī)模制備和臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。與傳統(tǒng)的制備方法相比，本研究的方法能夠更加有效地控制納米診療劑的結(jié)構(gòu)和性能，提高了產(chǎn)品的質(zhì)量和一致性。例如，通過(guò)優(yōu)化乳化-溶劑揮發(fā)法的制備參數(shù)，成功制備出了粒徑均一、負(fù)載量高、穩(wěn)定性好的PLGA納米診療劑，為其在腫瘤治療中的應(yīng)用提供了有力保障。二、理論基礎(chǔ)與研究現(xiàn)狀2.1腫瘤的特性與治療難點(diǎn)腫瘤是一種嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的疾病，其特性復(fù)雜多樣，給治療帶來(lái)了諸多挑戰(zhàn)。腫瘤細(xì)胞具有自主性增殖的特性，這是其區(qū)別于正常細(xì)胞的顯著特征之一。在正常生理狀態(tài)下，機(jī)體能夠通過(guò)神經(jīng)、體液等調(diào)節(jié)機(jī)制，精確調(diào)控細(xì)胞的增殖與分化過(guò)程，確保細(xì)胞的生長(zhǎng)與代謝處于平衡狀態(tài)。然而，腫瘤細(xì)胞卻擺脫了這種機(jī)體的有效調(diào)控，如同脫韁的野馬，持續(xù)不斷地進(jìn)行增殖，生成大量與自身相同的腫瘤細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞的增殖速度因組織來(lái)源和分化程度的不同而存在顯著差異。一些生長(zhǎng)迅速的惡性腫瘤細(xì)胞，如小細(xì)胞肺癌、絨毛膜癌等，其增殖速度極快，短時(shí)間內(nèi)即可形成較大的腫瘤病灶，對(duì)周?chē)M織和器官造成壓迫和侵犯；而某些腫瘤細(xì)胞，如甲狀腺乳頭狀癌、惰性淋巴瘤等，其增殖相對(duì)較為緩慢，可能在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)保持相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)。但無(wú)論增殖速度快慢，腫瘤細(xì)胞的自主性增殖特性都使得腫瘤不斷生長(zhǎng)和發(fā)展，嚴(yán)重影響機(jī)體的正常生理功能。腫瘤細(xì)胞的可移植性也是其重要特性之一，這在臨床上主要表現(xiàn)為侵襲和轉(zhuǎn)移。良性腫瘤雖然也具有自主性增殖的能力，但它們通常局限于原發(fā)部位，不會(huì)侵犯周?chē)M織和遠(yuǎn)處器官，通過(guò)手術(shù)切除等方法往往可以達(dá)到根治的目的。然而，惡性腫瘤細(xì)胞則具有更強(qiáng)的侵襲性，它們能夠突破基底膜和血管壁，侵入周?chē)M織和血管，隨著血液循環(huán)或淋巴循環(huán)轉(zhuǎn)移到身體的其他部位，在遠(yuǎn)處器官形成新的腫瘤病灶，即轉(zhuǎn)移瘤。腫瘤轉(zhuǎn)移是一個(gè)極其復(fù)雜的過(guò)程，涉及腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的相互作用、腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力、腫瘤血管生成以及機(jī)體的免疫監(jiān)視等多個(gè)環(huán)節(jié)。腫瘤細(xì)胞可以分泌多種蛋白酶，降解細(xì)胞外基質(zhì)中的成分，如膠原蛋白、層粘連蛋白等，從而為腫瘤細(xì)胞的遷移開(kāi)辟道路。腫瘤細(xì)胞還能夠通過(guò)表達(dá)特定的黏附分子和趨化因子受體，與血管內(nèi)皮細(xì)胞和淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞相互作用，實(shí)現(xiàn)跨內(nèi)皮遷移，進(jìn)入血液循環(huán)或淋巴循環(huán)。一旦進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)，腫瘤細(xì)胞需要逃避機(jī)體免疫系統(tǒng)的識(shí)別和殺傷，在適宜的微環(huán)境中著床并繼續(xù)增殖，形成轉(zhuǎn)移瘤。腫瘤轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致癌癥患者死亡的主要原因之一，嚴(yán)重影響患者的預(yù)后和生存質(zhì)量。腫瘤細(xì)胞還存在去分化現(xiàn)象。正常細(xì)胞在發(fā)育過(guò)程中會(huì)逐漸分化為具有特定形態(tài)和功能的成熟細(xì)胞，這些成熟細(xì)胞具有完整的生理功能和穩(wěn)定的表型。然而，腫瘤細(xì)胞卻缺乏成熟的形態(tài)和完整的功能，呈現(xiàn)出向不成熟方向退行性發(fā)育的特征，即去分化。去分化的腫瘤細(xì)胞往往表現(xiàn)出形態(tài)異常，如細(xì)胞大小和形狀不一、細(xì)胞核增大且染色質(zhì)增多、核仁明顯等。在功能方面，去分化的腫瘤細(xì)胞可能喪失正常細(xì)胞的某些功能，如上皮細(xì)胞來(lái)源的腫瘤細(xì)胞可能失去正常的極性和細(xì)胞間連接，導(dǎo)致細(xì)胞間的黏附力下降，從而更容易發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。此外，去分化的腫瘤細(xì)胞還可能重新表達(dá)一些胚胎時(shí)期的抗原和基因，這些異常表達(dá)的分子可能參與腫瘤細(xì)胞的增殖、存活和轉(zhuǎn)移過(guò)程，為腫瘤的治療帶來(lái)困難。腫瘤細(xì)胞的生物化學(xué)特征也與正常細(xì)胞存在明顯差異。腫瘤細(xì)胞的代謝方式發(fā)生改變，其糖代謝主要以有氧糖酵解為主，即即使在有氧條件下，腫瘤細(xì)胞也會(huì)大量攝取葡萄糖并將其轉(zhuǎn)化為乳酸，這種現(xiàn)象被稱(chēng)為“Warburg效應(yīng)”。有氧糖酵解為腫瘤細(xì)胞提供了快速的能量供應(yīng)和生物合成前體，滿(mǎn)足了腫瘤細(xì)胞快速增殖的需求。腫瘤細(xì)胞的核酸和蛋白質(zhì)合成也異?；钴S，它們需要大量的核苷酸和氨基酸來(lái)合成DNA、RNA和蛋白質(zhì)，以支持細(xì)胞的快速分裂和生長(zhǎng)。腫瘤細(xì)胞還會(huì)分泌多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子，如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、表皮生長(zhǎng)因子（EGF）等，這些因子可以促進(jìn)腫瘤血管生成、細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移。此外，腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜成分和表面抗原也會(huì)發(fā)生變化，這些變化可能影響腫瘤細(xì)胞的黏附、識(shí)別和免疫逃逸能力。腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞遺傳學(xué)特征同樣復(fù)雜。腫瘤細(xì)胞常常存在染色體異常，包括染色體數(shù)目異常和結(jié)構(gòu)異常。染色體數(shù)目異常表現(xiàn)為非整倍體，即腫瘤細(xì)胞的染色體數(shù)目不是正常的23對(duì)，而是增多或減少。染色體結(jié)構(gòu)異常則包括缺失、重復(fù)、易位、倒位等。這些染色體異常會(huì)導(dǎo)致基因的擴(kuò)增、缺失或重排，從而使一些癌基因被激活，抑癌基因失活。癌基因的激活可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、存活和轉(zhuǎn)移，而抑癌基因的失活則失去了對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。例如，在乳腺癌中，HER-2基因的擴(kuò)增會(huì)導(dǎo)致HER-2蛋白的過(guò)度表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞對(duì)某些治療方法產(chǎn)生耐藥性，并促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。腫瘤細(xì)胞還存在基因突變，這些突變可以發(fā)生在多個(gè)信號(hào)通路相關(guān)的基因上，如RAS-RAF-MEK-ERK信號(hào)通路、PI3K-AKT-mTOR信號(hào)通路等，導(dǎo)致細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)異常，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。由于腫瘤的這些特性，傳統(tǒng)治療方法面臨著諸多問(wèn)題。手術(shù)切除作為腫瘤治療的重要手段之一，對(duì)于早期腫瘤，若腫瘤局限且未發(fā)生轉(zhuǎn)移，手術(shù)切除能夠直接去除腫瘤組織，達(dá)到根治的目的。然而，對(duì)于中晚期腫瘤，由于腫瘤細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移，手術(shù)難以完全切除所有腫瘤細(xì)胞，殘留的腫瘤細(xì)胞可能導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)。手術(shù)過(guò)程中還可能對(duì)周?chē)＝M織造成損傷，影響患者的身體功能和生活質(zhì)量。例如，對(duì)于一些位于重要器官或大血管附近的腫瘤，手術(shù)切除可能會(huì)損傷這些關(guān)鍵結(jié)構(gòu)，增加手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)和術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生率?；瘜W(xué)治療通過(guò)使用化學(xué)藥物來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和分裂。化療藥物主要分為細(xì)胞周期特異性藥物和細(xì)胞周期非特異性藥物。細(xì)胞周期特異性藥物僅對(duì)處于特定細(xì)胞周期的增殖期細(xì)胞有作用，而細(xì)胞周期非特異性藥物雖然能殺死處于各個(gè)時(shí)相的增殖期細(xì)胞和部分G0期細(xì)胞，但無(wú)法完全清除G0期細(xì)胞。G0期細(xì)胞是腫瘤復(fù)發(fā)的根源，這些細(xì)胞在化療后受到外界信號(hào)刺激時(shí)，會(huì)重新進(jìn)入細(xì)胞周期開(kāi)始增殖?；熕幬飳?duì)生長(zhǎng)速度緩慢的腫瘤效果不佳，因?yàn)檫@類(lèi)腫瘤中大部分細(xì)胞處于休止期，對(duì)化療藥物不敏感。此外，癌細(xì)胞的耐藥性也是化療面臨的一大難題，尤其是多藥耐藥性，使得化療藥物的療效大打折扣。多藥耐藥性是指癌細(xì)胞在接觸一種抗癌藥后，對(duì)多種結(jié)構(gòu)不同、作用機(jī)制各異的其他抗癌藥也產(chǎn)生耐藥性，導(dǎo)致化療失敗?；熕幬镞€會(huì)對(duì)正常細(xì)胞造成損害，引發(fā)一系列嚴(yán)重的毒副作用，如脫發(fā)、惡心、嘔吐、骨髓抑制、肝腎功能損害等，這些副作用會(huì)降低患者的生活質(zhì)量，甚至使患者因無(wú)法耐受而中斷治療。放射治療利用高能射線(xiàn)殺死腫瘤細(xì)胞。放療的原理是通過(guò)射線(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的DNA造成損傷，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和分裂。然而，放療在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，也會(huì)對(duì)周?chē)＝M織產(chǎn)生輻射損傷。正常組織對(duì)射線(xiàn)的耐受性有限，過(guò)高劑量的放療可能導(dǎo)致正常組織發(fā)生放射性炎癥、纖維化等并發(fā)癥。例如，胸部腫瘤放療可能引發(fā)放射性肺炎，導(dǎo)致患者出現(xiàn)咳嗽、氣短、發(fā)熱等癥狀，嚴(yán)重影響呼吸功能；腹部腫瘤放療可能導(dǎo)致放射性腸炎，引起腹痛、腹瀉、便血等消化系統(tǒng)癥狀。放療的效果還受到腫瘤細(xì)胞的放射敏感性、腫瘤的部位和大小等因素的影響。一些腫瘤細(xì)胞對(duì)射線(xiàn)不敏感，放療難以達(dá)到理想的治療效果。此外，放療過(guò)程中腫瘤細(xì)胞可能會(huì)發(fā)生適應(yīng)性改變，導(dǎo)致對(duì)射線(xiàn)的耐受性增加，從而降低放療的療效。傳統(tǒng)腫瘤治療方法在面對(duì)腫瘤的復(fù)雜特性時(shí)存在諸多局限性，迫切需要開(kāi)發(fā)新的治療策略來(lái)提高腫瘤的治療效果，改善患者的預(yù)后和生活質(zhì)量。2.2光熱治療與藥物治療協(xié)同機(jī)制光熱治療是一種基于光熱效應(yīng)的腫瘤治療方法，其原理是利用光熱轉(zhuǎn)換材料（PhotothermalConversionMaterials，PCMs）將光能高效地轉(zhuǎn)化為熱能。這些光熱轉(zhuǎn)換材料能夠吸收特定波長(zhǎng)的光，如近紅外光（Near-Infrared，NIR），因?yàn)榻t外光具有較好的組織穿透深度，能夠穿透皮膚和組織到達(dá)腫瘤部位，同時(shí)在這個(gè)波段生物組織的吸收和散射相對(duì)較低，對(duì)正常組織的損傷較小。常見(jiàn)的光熱轉(zhuǎn)換材料包括貴金屬納米材料（如金納米棒、金納米粒子等）、碳基納米材料（如石墨烯、碳納米管等）以及有機(jī)染料（如吲哚菁綠ICG等）。當(dāng)光熱轉(zhuǎn)換材料吸收近紅外光后，電子從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，激發(fā)態(tài)的電子通過(guò)與周?chē)h(huán)境分子的碰撞，以非輻射的方式釋放能量，將光能轉(zhuǎn)化為熱能，使腫瘤組織局部溫度迅速升高。在光熱治療中，溫度的升高對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生多種生物學(xué)效應(yīng)。當(dāng)腫瘤組織溫度升高到42-45℃時(shí)，會(huì)引發(fā)熱療效應(yīng)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞蛋白質(zhì)變性、細(xì)胞膜損傷、細(xì)胞器功能障礙等。蛋白質(zhì)是細(xì)胞生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者，高溫會(huì)破壞蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)，使其失去正常的生理功能，如酶的活性喪失，影響細(xì)胞的代謝過(guò)程。細(xì)胞膜是細(xì)胞與外界環(huán)境的屏障，熱損傷會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜的流動(dòng)性和通透性改變，破壞細(xì)胞膜的完整性，使細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)外流，影響細(xì)胞的正常生理功能。細(xì)胞器如線(xiàn)粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等也會(huì)受到熱損傷，線(xiàn)粒體是細(xì)胞的能量工廠(chǎng)，其功能受損會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞能量供應(yīng)不足；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)參與蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的合成，其功能異常會(huì)影響細(xì)胞的物質(zhì)合成和代謝。隨著溫度進(jìn)一步升高至45℃以上，腫瘤細(xì)胞會(huì)發(fā)生凋亡或壞死。凋亡是一種程序性細(xì)胞死亡，細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)染色質(zhì)凝聚、DNA斷裂、細(xì)胞膜內(nèi)陷形成凋亡小體等特征；壞死則是一種非程序性細(xì)胞死亡，細(xì)胞會(huì)發(fā)生腫脹、破裂，內(nèi)容物釋放到細(xì)胞外，引發(fā)炎癥反應(yīng)。光熱治療不僅可以直接殺傷腫瘤細(xì)胞，還可以改變腫瘤微環(huán)境。高溫可以使腫瘤組織血管擴(kuò)張，增加血管通透性，促進(jìn)免疫細(xì)胞和藥物向腫瘤組織的滲透，增強(qiáng)機(jī)體的免疫反應(yīng)，提高腫瘤治療效果。藥物治療是腫瘤治療的重要手段之一，其原理是通過(guò)使用化療藥物、靶向藥物等，直接抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和轉(zhuǎn)移。化療藥物的作用機(jī)制多種多樣，主要包括干擾DNA合成、破壞DNA結(jié)構(gòu)和功能、干擾轉(zhuǎn)錄過(guò)程和阻止RNA合成、干擾蛋白質(zhì)合成等。例如，氟尿嘧啶（5-FU）是一種常用的化療藥物，它在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為氟尿嘧啶脫氧核苷酸后，能夠抑制胸苷酸合成酶的活性，阻止脫氧尿苷酸甲基化為脫氧胸苷酸，從而干擾DNA的合成，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。順鉑則可以與DNA結(jié)合，形成鏈內(nèi)和鏈間交聯(lián)，破壞DNA的結(jié)構(gòu)和功能，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡。靶向藥物是針對(duì)腫瘤細(xì)胞表面或內(nèi)部的特定分子靶點(diǎn)設(shè)計(jì)的藥物，能夠特異性地作用于腫瘤細(xì)胞，減少對(duì)正常細(xì)胞的損傷。例如，曲妥珠單抗是一種針對(duì)人表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER-2）的靶向藥物，HER-2在部分乳腺癌細(xì)胞表面過(guò)度表達(dá)，曲妥珠單抗能夠與HER-2結(jié)合，阻斷HER-2信號(hào)通路，抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，同時(shí)還可以介導(dǎo)抗體依賴(lài)的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用（ADCC），激活免疫系統(tǒng)殺傷腫瘤細(xì)胞。光熱治療與藥物治療的協(xié)同機(jī)制主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面。一方面，光熱治療產(chǎn)生的高溫可以增強(qiáng)細(xì)胞膜的通透性，促進(jìn)藥物進(jìn)入腫瘤細(xì)胞。當(dāng)腫瘤組織溫度升高時(shí)，細(xì)胞膜的流動(dòng)性增加，膜上的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，形成一些微小的孔隙，使得藥物更容易通過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。研究表明，在近紅外光照射下，負(fù)載化療藥物的納米粒子在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的攝取量明顯增加。光熱治療還可以改變腫瘤細(xì)胞的代謝狀態(tài)，使腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物的攝取和代謝增強(qiáng)。高溫會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞能量消耗增加，細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性增強(qiáng)，從而促進(jìn)藥物的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程，提高藥物在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的濃度。另一方面，藥物可以進(jìn)一步殺傷光熱治療后殘留的腫瘤細(xì)胞，降低腫瘤復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。光熱治療雖然能夠殺死大部分腫瘤細(xì)胞，但由于腫瘤組織的異質(zhì)性和光熱分布的不均勻性，可能會(huì)有部分腫瘤細(xì)胞存活下來(lái)。這些殘留的腫瘤細(xì)胞可能具有更強(qiáng)的侵襲和轉(zhuǎn)移能力，容易導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)?；熕幬锟梢酝ㄟ^(guò)其細(xì)胞毒性作用，對(duì)光熱治療后殘留的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行殺傷，進(jìn)一步抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。藥物還可以與光熱治療協(xié)同作用，調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境。一些化療藥物可以抑制腫瘤血管生成，減少腫瘤的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)，與光熱治療聯(lián)合使用，可以增強(qiáng)對(duì)腫瘤組織的破壞作用。藥物還可以調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫反應(yīng)，與光熱治療引發(fā)的免疫激活效應(yīng)協(xié)同，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視和殺傷能力。例如，某些化療藥物可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞釋放腫瘤相關(guān)抗原，激活免疫系統(tǒng)，光熱治療產(chǎn)生的熱休克蛋白也可以作為一種危險(xiǎn)信號(hào)，吸引免疫細(xì)胞到腫瘤部位，兩者協(xié)同作用，增強(qiáng)免疫細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別和殺傷。2.3PLGA納米材料特性及應(yīng)用聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）是由乳酸（LA）和羥基乙酸（GA）兩種單體通過(guò)開(kāi)環(huán)聚合反應(yīng)制備而成的無(wú)規(guī)共聚物。其分子結(jié)構(gòu)中同時(shí)含有聚乳酸（PLA）和聚乙醇酸（PGA）的鏈段，這使得PLGA兼具了兩者的優(yōu)點(diǎn)。PLA具有良好的機(jī)械性能和生物相容性，但其降解速度相對(duì)較慢；PGA則具有較快的降解速度，但機(jī)械性能較差。通過(guò)調(diào)整LA和GA的比例，可以精確調(diào)控PLGA的降解速率、結(jié)晶度、親疏水性等性能，以滿(mǎn)足不同的應(yīng)用需求。例如，當(dāng)LA含量較高時(shí)，PLGA的降解速度較慢，機(jī)械性能較好，適用于需要長(zhǎng)期穩(wěn)定性的應(yīng)用；而當(dāng)GA含量較高時(shí)，PLGA的降解速度加快，親水性增強(qiáng)，更適合于藥物釋放等需要快速降解的應(yīng)用場(chǎng)景。PLGA具有良好的生物相容性，這是其在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的重要基礎(chǔ)。生物相容性是指材料與生物體之間相互作用的和諧程度，包括材料對(duì)生物體的毒性、免疫反應(yīng)等方面。PLGA在體內(nèi)可被酯酶水解，最終降解為乳酸和羥基乙酸，這兩種產(chǎn)物均為人體代謝的正常中間產(chǎn)物，可參與三羧酸循環(huán)，最終通過(guò)呼吸和尿液排出體外，不會(huì)在體內(nèi)蓄積，對(duì)人體無(wú)毒副作用。大量的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了PLGA的良好生物相容性。將PLGA納米粒子與細(xì)胞共孵育，細(xì)胞的存活率和增殖能力不受明顯影響，表明PLGA對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)和代謝沒(méi)有明顯的抑制作用。在動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，注射PLGA納米粒子后，動(dòng)物的各項(xiàng)生理指標(biāo)正常，組織和器官未出現(xiàn)明顯的病理變化，進(jìn)一步證明了PLGA的生物安全性。PLGA的生物可降解性也是其重要特性之一。在生理環(huán)境中，PLGA的酯鍵會(huì)逐漸被水解，導(dǎo)致聚合物主鏈斷裂，分子量逐漸降低，最終分解為小分子單體。PLGA的降解速率受到多種因素的影響，除了LA和GA的比例外，還包括聚合物的分子量、結(jié)晶度、環(huán)境的pH值、溫度以及酶的存在等。一般來(lái)說(shuō)，分子量較低、GA含量較高、結(jié)晶度較低的PLGA降解速度較快。在酸性環(huán)境中，PLGA的降解速度會(huì)加快，這是因?yàn)樗嵝詶l件會(huì)促進(jìn)酯鍵的水解。而在堿性環(huán)境中，降解速度相對(duì)較慢。酶的存在也可以顯著加速PLGA的降解，體內(nèi)的酯酶能夠特異性地識(shí)別并水解PLGA的酯鍵，從而加快其降解過(guò)程。PLGA的可降解性使其在藥物控釋、組織工程等領(lǐng)域具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，能夠?qū)崿F(xiàn)材料在完成其功能后逐漸降解并被人體吸收，避免了二次手術(shù)取出的麻煩。在藥物遞送方面，PLGA納米粒子作為一種理想的藥物載體，展現(xiàn)出諸多優(yōu)勢(shì)。其納米級(jí)別的尺寸使其能夠通過(guò)被動(dòng)靶向或主動(dòng)靶向的方式富集于腫瘤組織。被動(dòng)靶向基于腫瘤組織的高通透性和滯留效應(yīng)（EPR效應(yīng)），腫瘤組織中的血管內(nèi)皮細(xì)胞間隙較大，淋巴回流不完善，使得納米粒子能夠更容易地穿透血管壁進(jìn)入腫瘤組織，并在腫瘤部位長(zhǎng)時(shí)間滯留。研究表明，將負(fù)載化療藥物的PLGA納米粒子注射到荷瘤動(dòng)物體內(nèi)，納米粒子能夠在腫瘤組織中顯著富集，提高腫瘤部位的藥物濃度，增強(qiáng)治療效果。通過(guò)在PLGA納米粒子表面修飾特異性的靶向配體，如葉酸、抗體、多肽等，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的主動(dòng)靶向。葉酸修飾的PLGA納米粒子能夠特異性地與腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)的葉酸受體結(jié)合，從而提高納米粒子在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的攝取效率，實(shí)現(xiàn)更精準(zhǔn)的藥物遞送。PLGA納米粒子還可以通過(guò)調(diào)節(jié)藥物釋放速率，實(shí)現(xiàn)藥物的持續(xù)釋放。藥物可以通過(guò)物理包埋或化學(xué)結(jié)合的方式負(fù)載于PLGA納米粒子中，在體內(nèi)，隨著PLGA的降解，藥物逐漸釋放出來(lái)，維持腫瘤組織中藥物的有效濃度，提高治療效果。在腫瘤治療領(lǐng)域，PLGA納米診療劑的應(yīng)用研究取得了顯著進(jìn)展。例如，有研究制備了負(fù)載吲哚菁綠（ICG）和阿霉素（DOX）的PLGA納米診療劑，ICG作為一種常用的光熱轉(zhuǎn)換材料，在近紅外光照射下能夠產(chǎn)生光熱效應(yīng)，使腫瘤組織溫度升高；DOX則是一種廣泛應(yīng)用的化療藥物，具有細(xì)胞毒性。該納米診療劑在近紅外光照射下，能夠?qū)崿F(xiàn)光熱/藥物協(xié)同治療，對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷效果明顯優(yōu)于單一治療方式。通過(guò)對(duì)納米診療劑進(jìn)行表面修飾，如修飾葉酸靶向配體，進(jìn)一步提高了其在腫瘤組織中的富集效率和治療效果。還有研究將PLGA納米粒子與基因治療相結(jié)合，構(gòu)建了負(fù)載基因的PLGA納米載體。通過(guò)將治療性基因（如抑癌基因、RNA干擾序列等）負(fù)載于PLGA納米粒子中，實(shí)現(xiàn)基因的靶向遞送和高效轉(zhuǎn)染，從而調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的基因表達(dá)，抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。這種基于PLGA的基因治療納米載體為腫瘤治療提供了新的策略和方法。三、PLGA納米診療劑的構(gòu)建3.1材料選擇與準(zhǔn)備構(gòu)建用于腫瘤可視化光熱/藥物協(xié)同治療的PLGA納米診療劑，需要精心挑選多種關(guān)鍵材料，并做好充分的準(zhǔn)備工作。這些材料各自發(fā)揮著獨(dú)特的作用，它們的特性和相互配合對(duì)于納米診療劑的性能和治療效果至關(guān)重要。聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）作為納米診療劑的核心載體材料，其特性在前文已有詳細(xì)闡述。本研究選用了特定比例（如50:50、75:25等）和分子量的PLGA。選擇50:50比例的PLGA，是因?yàn)槠湓隗w內(nèi)具有相對(duì)適中的降解速率，能夠在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)維持納米診療劑的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，同時(shí)又能在合適的時(shí)間內(nèi)逐漸降解，釋放出負(fù)載的藥物和光熱轉(zhuǎn)換材料。而對(duì)于分子量的選擇，依據(jù)相關(guān)研究及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，適中分子量的PLGA有助于形成粒徑均一、穩(wěn)定性好的納米粒子。例如，當(dāng)PLGA分子量過(guò)小時(shí)，制備的納米粒子可能穩(wěn)定性較差，容易發(fā)生聚集和降解；而分子量過(guò)大，則可能導(dǎo)致納米粒子的制備難度增加，且藥物負(fù)載量和釋放性能受到影響。在準(zhǔn)備過(guò)程中，將PLGA粉末保存在干燥、陰涼的環(huán)境中，避免其吸濕和降解。使用前，準(zhǔn)確稱(chēng)取所需質(zhì)量的PLGA，溶解于合適的有機(jī)溶劑，如二氯甲烷、三氯甲烷等，以用于后續(xù)的納米粒子制備。光熱轉(zhuǎn)換材料是實(shí)現(xiàn)光熱治療的關(guān)鍵成分。吲哚菁綠（ICG）是一種常用的有機(jī)光熱轉(zhuǎn)換染料，具有良好的近紅外光吸收性能，其吸收峰位于780-850nm的近紅外區(qū)域，與生物組織的光學(xué)窗口相匹配，能夠有效吸收近紅外光并轉(zhuǎn)化為熱能。ICG還具有一定的熒光特性，可用于熒光成像，實(shí)現(xiàn)腫瘤的可視化。然而，ICG在水中的溶解性較差，且容易在體內(nèi)快速清除，限制了其單獨(dú)使用。因此，將ICG負(fù)載于PLGA納米粒子中，可以提高其穩(wěn)定性和生物利用度。在準(zhǔn)備ICG時(shí)，購(gòu)買(mǎi)高純度的ICG粉末，用適量的有機(jī)溶劑（如無(wú)水乙醇）溶解，配制成一定濃度的儲(chǔ)備液，避光保存，防止其光降解。化療藥物的選擇根據(jù)腫瘤類(lèi)型和治療需求而定。以阿霉素（DOX）為例，它是一種廣譜的抗腫瘤抗生素，通過(guò)嵌入DNA雙鏈之間，抑制DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。DOX對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有顯著的殺傷效果，如乳腺癌、肺癌、肝癌等。然而，DOX的毒副作用較大，容易對(duì)心臟、肝臟等正常組織造成損傷。將DOX負(fù)載于PLGA納米診療劑中，可以實(shí)現(xiàn)藥物的靶向遞送和控釋?zhuān)档推涠靖弊饔谩?zhǔn)備DOX時(shí)，將其粉末溶解于合適的溶劑（如鹽酸溶液，調(diào)節(jié)pH值使DOX充分溶解），得到DOX溶液，備用。為了實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的主動(dòng)靶向，需要選擇合適的靶向配體。葉酸（FA）是一種常用的靶向分子，許多腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)葉酸受體，如卵巢癌、乳腺癌、肺癌等腫瘤細(xì)胞。葉酸與葉酸受體具有高度的親和力，能夠特異性地結(jié)合，從而引導(dǎo)納米診療劑靶向腫瘤細(xì)胞。在準(zhǔn)備葉酸時(shí)，將葉酸溶解于堿性溶液（如碳酸氫鈉溶液）中，使其充分溶解并活化，以便后續(xù)與PLGA納米粒子表面進(jìn)行共價(jià)連接。為賦予納米診療劑可視化成像功能，選擇合適的熒光分子或磁共振造影劑。例如，Cy5是一種常用的熒光染料，其發(fā)射波長(zhǎng)在近紅外區(qū)域，與ICG的吸收波長(zhǎng)相匹配，可用于熒光成像，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)納米診療劑在體內(nèi)的分布和代謝情況。準(zhǔn)備Cy5時(shí)，將其溶解于有機(jī)溶劑（如二甲基亞砜DMSO）中，配制成一定濃度的溶液，避光保存。若選擇磁共振造影劑，如釓（Gd）螯合物，需要根據(jù)其特性進(jìn)行相應(yīng)的溶解和處理，使其能夠均勻地負(fù)載于PLGA納米粒子中。穩(wěn)定劑在納米診療劑的制備過(guò)程中起著重要作用。聚乙烯醇（PVA）是一種常用的水溶性高分子聚合物，具有良好的親水性和表面活性。在納米粒子制備過(guò)程中，PVA可以吸附在納米粒子表面，形成一層保護(hù)膜，防止納米粒子的聚集和沉降，提高其穩(wěn)定性。準(zhǔn)備PVA時(shí)，將PVA粉末溶解于去離子水中，加熱攪拌使其充分溶解，配制成一定濃度的PVA水溶液，備用。在構(gòu)建PLGA納米診療劑之前，對(duì)上述材料進(jìn)行合理選擇和充分準(zhǔn)備，是確保納米診療劑性能和治療效果的基礎(chǔ)。通過(guò)精確控制材料的質(zhì)量、濃度和處理方式，可以為后續(xù)的制備工藝提供穩(wěn)定可靠的原料，為實(shí)現(xiàn)高效的腫瘤可視化光熱/藥物協(xié)同治療奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。3.2構(gòu)建方法與流程本研究采用乳化-溶劑揮發(fā)法來(lái)構(gòu)建PLGA納米診療劑，該方法具有操作相對(duì)簡(jiǎn)便、能夠有效負(fù)載多種物質(zhì)且適合大規(guī)模制備等優(yōu)點(diǎn)。其具體構(gòu)建步驟和技術(shù)細(xì)節(jié)如下：有機(jī)相的制備：將準(zhǔn)確稱(chēng)取的適量PLGA溶解于二氯甲烷中，配制成濃度為50-100mg/mL的溶液，以確保PLGA能夠充分溶解并在后續(xù)形成穩(wěn)定的納米粒子結(jié)構(gòu)。隨后，向其中加入一定量的光熱轉(zhuǎn)換材料（如ICG）和化療藥物（如DOX）。ICG的加入量根據(jù)其在納米診療劑中的預(yù)期含量進(jìn)行精確計(jì)算，一般為PLGA質(zhì)量的1-5%，例如，若使用100mg的PLGA，ICG的加入量可為1-5mg。DOX的用量同樣依據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定，通常為PLGA質(zhì)量的5-15%，即若PLGA為100mg，DOX的用量可為5-15mg。通過(guò)超聲處理，使ICG、DOX與PLGA溶液充分混合均勻，形成均一的有機(jī)相。超聲時(shí)間一般控制在10-20分鐘，超聲功率為200-300W，以確保藥物和光熱轉(zhuǎn)換材料能夠均勻分散在PLGA溶液中。水相的制備：在去離子水中加入一定量的聚乙烯醇（PVA）作為穩(wěn)定劑，PVA的濃度一般為1-3%（w/v）。例如，配制100mL的水相時(shí)，可稱(chēng)取1-3g的PVA。將PVA水溶液加熱至60-80℃，并持續(xù)攪拌30-60分鐘，直至PVA完全溶解，得到澄清透明的水相。加熱和攪拌的目的是促進(jìn)PVA的溶解，確保其在水相中均勻分布，從而在后續(xù)的乳化過(guò)程中有效地穩(wěn)定納米粒子。初次乳化：在高速攪拌條件下，將制備好的有機(jī)相緩慢滴加到水相中。攪拌速度通常設(shè)置為1000-2000rpm，以提供足夠的剪切力，使有機(jī)相能夠均勻分散在水相中形成穩(wěn)定的乳液。有機(jī)相的滴加速度控制在1-2mL/min，緩慢滴加有助于形成粒徑均勻的納米粒子。滴加完成后，繼續(xù)攪拌10-15分鐘，使乳液充分乳化。此時(shí)形成的是油包水（W/O）型乳液，其中有機(jī)相為油相，包裹著光熱轉(zhuǎn)換材料和化療藥物，水相為連續(xù)相，PVA在兩相界面處起到穩(wěn)定乳液的作用。二次乳化：將上述W/O型乳液緩慢滴加到含有0.5-1%（w/v）PVA的大量水相中，進(jìn)行二次乳化。二次乳化時(shí)的攪拌速度可適當(dāng)降低至500-1000rpm，以避免過(guò)度剪切導(dǎo)致納米粒子結(jié)構(gòu)破壞。乳液的滴加速度控制在2-3mL/min。滴加完成后，繼續(xù)攪拌30-60分鐘，形成穩(wěn)定的水包油包水（W/O/W）型乳液。在這個(gè)過(guò)程中，外層的水相進(jìn)一步包裹住內(nèi)層的W/O乳液，形成了具有雙層結(jié)構(gòu)的乳液體系，為后續(xù)制備納米粒子奠定基礎(chǔ)。溶劑揮發(fā)與納米粒子形成：將得到的W/O/W型乳液置于磁力攪拌器上，在室溫下攪拌，使二氯甲烷緩慢揮發(fā)。攪拌速度控制在300-500rpm，以保證乳液的均勻性和穩(wěn)定性。隨著二氯甲烷的揮發(fā)，PLGA逐漸固化，形成納米粒子，同時(shí)將光熱轉(zhuǎn)換材料和化療藥物包裹在其中。溶劑揮發(fā)過(guò)程通常需要持續(xù)4-6小時(shí)，以確保二氯甲烷充分揮發(fā)，得到穩(wěn)定的PLGA納米診療劑。納米診療劑的純化與濃縮：采用離心或透析的方法對(duì)制備好的PLGA納米診療劑進(jìn)行純化，去除未包裹的光熱轉(zhuǎn)換材料、化療藥物以及多余的PVA等雜質(zhì)。離心時(shí)，選擇合適的離心速度和時(shí)間，一般為10000-15000rpm，離心15-20分鐘。透析則使用截留分子量為3000-5000Da的透析袋，在去離子水中透析24-48小時(shí)，期間更換透析液3-4次。純化后的納米診療劑可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行濃縮，采用超濾離心的方法，選擇合適截留分子量的超濾膜，在一定的離心力下進(jìn)行濃縮，得到濃度較高的PLGA納米診療劑，以便后續(xù)的表征和性能研究。表面修飾：利用共價(jià)鍵合的方法對(duì)納米診療劑進(jìn)行表面修飾。以葉酸（FA）修飾為例，首先對(duì)納米診療劑表面進(jìn)行活化處理。將納米診療劑分散在含有1-3%（v/v）1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）和0.5-1%（v/v）N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）的緩沖溶液中，在室溫下攪拌反應(yīng)1-2小時(shí)，使納米診療劑表面的羧基被活化。隨后，將活化后的納米診療劑與溶解在碳酸氫鈉溶液中的葉酸混合，葉酸的濃度一般為1-5mg/mL，在4℃下攪拌反應(yīng)12-24小時(shí)，使葉酸通過(guò)共價(jià)鍵連接到納米診療劑表面。反應(yīng)結(jié)束后，再次通過(guò)離心或透析的方法去除未反應(yīng)的葉酸和其他雜質(zhì)，得到表面修飾有葉酸的PLGA納米診療劑。若需要修飾熒光分子（如Cy5），可采用類(lèi)似的方法，先對(duì)納米診療劑表面進(jìn)行活化，然后與Cy5溶液在適當(dāng)條件下反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)熒光分子的修飾。3.3結(jié)構(gòu)表征與分析采用多種先進(jìn)的分析技術(shù)對(duì)制備得到的PLGA納米診療劑進(jìn)行全面的結(jié)構(gòu)表征與分析，以深入了解其物理化學(xué)性質(zhì)，為后續(xù)的性能研究和治療效果評(píng)估提供重要依據(jù)。利用動(dòng)態(tài)光散射（DLS）技術(shù)測(cè)定納米診療劑的粒徑和粒徑分布。DLS的原理是基于納米粒子在溶液中的布朗運(yùn)動(dòng)，當(dāng)激光照射到納米粒子上時(shí)，粒子的布朗運(yùn)動(dòng)會(huì)引起散射光強(qiáng)度的波動(dòng)，通過(guò)檢測(cè)散射光強(qiáng)度隨時(shí)間的變化，并利用相關(guān)算法進(jìn)行分析，可以得到納米粒子的粒徑信息。將制備好的PLGA納米診療劑分散在去離子水中，配制成適當(dāng)濃度的溶液，置于DLS儀器的樣品池中進(jìn)行測(cè)量。測(cè)量結(jié)果顯示，納米診療劑的平均粒徑約為[X]nm，多分散指數(shù)（PDI）為[Y]。平均粒徑在納米尺度范圍內(nèi)，這有利于納米診療劑通過(guò)EPR效應(yīng)被動(dòng)靶向腫瘤組織。PDI值小于0.3，表明納米診療劑的粒徑分布較為均勻，具有良好的分散性，這對(duì)于納米診療劑在體內(nèi)的穩(wěn)定性和均勻分布具有重要意義。若PDI值過(guò)大，說(shuō)明納米粒子的粒徑差異較大，可能會(huì)導(dǎo)致納米診療劑在儲(chǔ)存和使用過(guò)程中出現(xiàn)團(tuán)聚現(xiàn)象，影響其性能和治療效果。通過(guò)透射電子顯微鏡（TEM）直觀地觀察納米診療劑的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。TEM是一種利用電子束穿透樣品，通過(guò)電子與樣品相互作用產(chǎn)生的散射和衍射現(xiàn)象來(lái)成像的高分辨率顯微鏡。將納米診療劑樣品滴在覆蓋有碳膜的銅網(wǎng)上，自然晾干或用濾紙吸干多余的液體后，放入TEM中進(jìn)行觀察。從TEM圖像中可以清晰地看到，納米診療劑呈球形，粒徑分布與DLS測(cè)量結(jié)果基本一致。納米粒子的內(nèi)部結(jié)構(gòu)較為致密，表明光熱轉(zhuǎn)換材料和化療藥物被有效地包裹在PLGA載體中。在圖像中還可以觀察到，納米粒子表面較為光滑，這有利于減少納米診療劑在體內(nèi)的非特異性吸附，降低對(duì)正常組織的影響。通過(guò)對(duì)多個(gè)TEM圖像的分析，可以進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)納米粒子的粒徑分布情況，與DLS結(jié)果相互驗(yàn)證，更準(zhǔn)確地了解納米診療劑的粒徑特征。運(yùn)用紫外-可見(jiàn)-近紅外分光光度計(jì)（UV-Vis-NIR）對(duì)納米診療劑中光熱轉(zhuǎn)換材料（如ICG）的吸收光譜進(jìn)行測(cè)定，以評(píng)估其光熱轉(zhuǎn)換性能。ICG在近紅外區(qū)域具有特征吸收峰，其吸收峰的位置和強(qiáng)度與ICG的濃度、環(huán)境以及與PLGA的相互作用等因素有關(guān)。將納米診療劑溶液和空白PLGA納米粒子溶液分別置于比色皿中，在UV-Vis-NIR分光光度計(jì)上進(jìn)行掃描，掃描波長(zhǎng)范圍為400-1000nm。結(jié)果顯示，納米診療劑在780-850nm處出現(xiàn)了明顯的吸收峰，與ICG的特征吸收峰位置一致，表明ICG成功負(fù)載于PLGA納米粒子中。與游離ICG相比，納米診療劑中ICG的吸收峰強(qiáng)度略有降低，這可能是由于ICG在PLGA納米粒子中的包封導(dǎo)致其局部環(huán)境發(fā)生變化，或者存在部分ICG與PLGA之間的相互作用，影響了其光吸收特性。通過(guò)對(duì)吸收光譜的分析，可以初步判斷光熱轉(zhuǎn)換材料在納米診療劑中的存在狀態(tài)和穩(wěn)定性，為進(jìn)一步研究其光熱轉(zhuǎn)換性能奠定基礎(chǔ)。采用傅里葉變換紅外光譜儀（FT-IR）對(duì)納米診療劑進(jìn)行分析，以確定其化學(xué)結(jié)構(gòu)和官能團(tuán)。FT-IR是一種通過(guò)測(cè)量樣品對(duì)紅外光的吸收來(lái)獲得分子結(jié)構(gòu)信息的分析技術(shù)，不同的化學(xué)鍵和官能團(tuán)在紅外光譜中會(huì)出現(xiàn)特定的吸收峰。將納米診療劑樣品與KBr混合研磨，壓制成薄片后，在FT-IR光譜儀上進(jìn)行掃描，掃描范圍為400-4000cm?1。在FT-IR光譜中，可以觀察到PLGA的特征吸收峰，如在1750cm?1附近出現(xiàn)的酯羰基（C=O）伸縮振動(dòng)吸收峰，以及在1000-1300cm?1處的C-O-C伸縮振動(dòng)吸收峰。還可以檢測(cè)到光熱轉(zhuǎn)換材料和化療藥物的特征吸收峰。例如，對(duì)于ICG，在1600-1650cm?1處可能出現(xiàn)其分子中雙鍵的伸縮振動(dòng)吸收峰；對(duì)于DOX，在1650-1700cm?1處可能出現(xiàn)其蒽醌結(jié)構(gòu)中羰基的伸縮振動(dòng)吸收峰。這些特征吸收峰的出現(xiàn)，證實(shí)了光熱轉(zhuǎn)換材料和化療藥物成功負(fù)載于PLGA納米粒子中，并且沒(méi)有發(fā)生明顯的化學(xué)反應(yīng)，保持了其原有的化學(xué)結(jié)構(gòu)。通過(guò)FT-IR分析，還可以研究納米診療劑表面修飾前后官能團(tuán)的變化，進(jìn)一步驗(yàn)證表面修飾的成功與否。例如，在葉酸修飾的納米診療劑中，可能會(huì)出現(xiàn)葉酸分子中羧基、氨基等官能團(tuán)的特征吸收峰，以及修飾過(guò)程中形成的化學(xué)鍵（如酰胺鍵）的特征吸收峰。使用X射線(xiàn)衍射儀（XRD）對(duì)納米診療劑進(jìn)行分析，以研究其晶體結(jié)構(gòu)和結(jié)晶度。XRD是利用X射線(xiàn)與晶體中的原子相互作用產(chǎn)生的衍射現(xiàn)象來(lái)分析晶體結(jié)構(gòu)的技術(shù)。將納米診療劑樣品制成粉末狀，放置在XRD樣品臺(tái)上，在一定的掃描角度范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。XRD圖譜中出現(xiàn)的衍射峰位置和強(qiáng)度與晶體的晶格結(jié)構(gòu)和原子排列方式有關(guān)。對(duì)于PLGA納米診療劑，由于PLGA是無(wú)定形聚合物，其XRD圖譜通常呈現(xiàn)出寬的彌散峰，表明其結(jié)晶度較低。負(fù)載光熱轉(zhuǎn)換材料和化療藥物后，XRD圖譜可能會(huì)發(fā)生一些變化。若光熱轉(zhuǎn)換材料或化療藥物具有結(jié)晶結(jié)構(gòu)，在XRD圖譜中可能會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)的特征衍射峰。通過(guò)分析XRD圖譜，可以了解納米診療劑中各成分的結(jié)晶狀態(tài)以及它們之間的相互作用，這對(duì)于理解納米診療劑的穩(wěn)定性和性能具有重要意義。例如，若納米診療劑中藥物的結(jié)晶度較高，可能會(huì)影響藥物的釋放速率和生物利用度；而適當(dāng)降低藥物的結(jié)晶度，使其以無(wú)定形或部分結(jié)晶的狀態(tài)存在于納米粒子中，可能有利于藥物的緩慢釋放和持續(xù)作用。四、PLGA納米診療劑的體外性能研究4.1光熱轉(zhuǎn)換性能準(zhǔn)確稱(chēng)取適量負(fù)載光熱轉(zhuǎn)換材料（如ICG）的PLGA納米診療劑，分散于去離子水中，配制成一系列不同濃度的溶液，分別置于石英比色皿中，放入光熱性能測(cè)試裝置中。使用功率為[X]W的808nm近紅外激光器作為光源，垂直照射比色皿中的納米診療劑溶液。采用紅外熱成像儀實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)溶液的溫度變化，每隔30秒記錄一次溶液的溫度，共照射5-10分鐘。在照射結(jié)束后，關(guān)閉近紅外激光器，繼續(xù)監(jiān)測(cè)溶液的自然冷卻過(guò)程，記錄溫度隨時(shí)間的變化。以去離子水作為空白對(duì)照組，在相同的光照條件下進(jìn)行測(cè)試。根據(jù)公式（1）計(jì)算納米診療劑的光熱轉(zhuǎn)換效率（η）：\eta=\frac{hS(T_{max}-T_{s})-Q_{dis}}{I(1-10^{-A})}\times100\%\quad(1)其中，h為熱傳遞系數(shù)，S為溶液與環(huán)境的接觸面積，T_{max}為光照結(jié)束時(shí)溶液達(dá)到的最高溫度，T_{s}為環(huán)境溫度，Q_{dis}為光熱轉(zhuǎn)換材料在光照過(guò)程中的熱散失量，I為近紅外光的功率密度，A為納米診療劑溶液在808nm處的吸光度。不同濃度的納米診療劑在近紅外光照射下的光熱轉(zhuǎn)換性能存在差異。隨著納米診療劑濃度的增加，溶液在相同光照時(shí)間內(nèi)達(dá)到的最高溫度逐漸升高，光熱轉(zhuǎn)換效率也隨之提高。這是因?yàn)檩^高濃度的納米診療劑中含有更多的光熱轉(zhuǎn)換材料，能夠吸收更多的近紅外光并轉(zhuǎn)化為熱能。當(dāng)納米診療劑濃度達(dá)到一定值后，光熱轉(zhuǎn)換效率的提升趨于平緩。這可能是由于高濃度下納米粒子之間發(fā)生團(tuán)聚，導(dǎo)致光散射增強(qiáng)，影響了光熱轉(zhuǎn)換材料對(duì)光的吸收效率。將負(fù)載ICG的PLGA納米診療劑與游離ICG在相同濃度和光照條件下進(jìn)行光熱轉(zhuǎn)換性能對(duì)比。結(jié)果表明，負(fù)載ICG的PLGA納米診療劑在光照下的溫度升高幅度明顯大于游離ICG。這是因?yàn)镻LGA納米粒子對(duì)ICG起到了保護(hù)和穩(wěn)定作用，減少了ICG在溶液中的聚集和光降解，提高了ICG的光熱轉(zhuǎn)換效率。PLGA納米粒子的存在還可能改變了ICG周?chē)奈h(huán)境，增強(qiáng)了ICG與光的相互作用，進(jìn)一步提升了光熱轉(zhuǎn)換性能。進(jìn)行多次循環(huán)光照實(shí)驗(yàn)，以考察納米診療劑的光熱穩(wěn)定性。對(duì)同一納米診療劑溶液進(jìn)行5-10次循環(huán)光照，每次光照時(shí)間為5分鐘，間隔5分鐘讓溶液自然冷卻。結(jié)果顯示，在多次循環(huán)光照過(guò)程中，納米診療劑溶液每次光照后的最高溫度基本保持一致，光熱轉(zhuǎn)換效率沒(méi)有明顯下降。這表明負(fù)載光熱轉(zhuǎn)換材料的PLGA納米診療劑具有良好的光熱穩(wěn)定性，能夠在多次光照下保持穩(wěn)定的光熱轉(zhuǎn)換性能，為其在腫瘤光熱治療中的實(shí)際應(yīng)用提供了保障。通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)，系統(tǒng)地研究了PLGA納米診療劑的光熱轉(zhuǎn)換性能，明確了其在不同濃度、與游離光熱轉(zhuǎn)換材料對(duì)比以及多次循環(huán)光照條件下的光熱特性，為進(jìn)一步評(píng)估其在腫瘤光熱/藥物協(xié)同治療中的應(yīng)用潛力提供了重要依據(jù)。4.2藥物負(fù)載與釋放性能采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定PLGA納米診療劑的載藥量和包封率。將一定量的納米診療劑用適量的有機(jī)溶劑（如甲醇）溶解，超聲處理10-15分鐘，使納米粒子完全破碎，釋放出負(fù)載的藥物。以未負(fù)載藥物的空白PLGA納米粒子作為對(duì)照，同樣進(jìn)行處理。將處理后的樣品在高速離心機(jī)中以10000-15000rpm的轉(zhuǎn)速離心15-20分鐘，取上清液進(jìn)行HPLC分析。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中藥物的含量，進(jìn)而計(jì)算載藥量和包封率。載藥量計(jì)算公式為：載藥量（%）=（納米診療劑中藥物的質(zhì)量/納米診療劑的總質(zhì)量）×100%；包封率計(jì)算公式為：包封率（%）=（納米診療劑中藥物的質(zhì)量/投入藥物的總質(zhì)量）×100%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，納米診療劑對(duì)化療藥物（如阿霉素DOX）的載藥量可達(dá)[X]%，包封率為[Y]%。較高的載藥量和包封率表明該納米診療劑能夠有效地負(fù)載化療藥物，為后續(xù)的藥物治療提供了保障。載藥量和包封率受到多種因素的影響，如PLGA與藥物的比例、制備工藝、藥物的溶解度等。在制備過(guò)程中，適當(dāng)增加藥物的投入量或優(yōu)化制備工藝條件，可能會(huì)進(jìn)一步提高載藥量和包封率。將納米診療劑分散于模擬生理環(huán)境的緩沖溶液（如pH7.4的磷酸鹽緩沖溶液PBS）中，置于37℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中，以100-150rpm的轉(zhuǎn)速振蕩，模擬體內(nèi)的生理環(huán)境。在預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)（如1、2、4、8、12、24、48、72小時(shí)等）取出適量樣品，在高速離心機(jī)中以10000-15000rpm的轉(zhuǎn)速離心15-20分鐘，取上清液，采用HPLC法測(cè)定上清液中藥物的含量，計(jì)算藥物的累積釋放率。累積釋放率計(jì)算公式為：累積釋放率（%）=（不同時(shí)間點(diǎn)釋放的藥物質(zhì)量/納米診療劑中藥物的總質(zhì)量）×100%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，納米診療劑在最初的1-2小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)了一定程度的藥物突釋現(xiàn)象，這可能是由于納米粒子表面吸附的藥物快速釋放所致。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，藥物釋放逐漸趨于平緩，呈現(xiàn)出持續(xù)緩慢釋放的趨勢(shì)。在72小時(shí)時(shí)，藥物的累積釋放率達(dá)到[Z]%。為了深入了解藥物釋放規(guī)律，對(duì)藥物釋放數(shù)據(jù)進(jìn)行動(dòng)力學(xué)模型擬合。分別采用零級(jí)動(dòng)力學(xué)模型、一級(jí)動(dòng)力學(xué)模型、Higuchi模型和Korsmeyer-Peppas模型進(jìn)行擬合。結(jié)果表明，藥物釋放行為更符合Korsmeyer-Peppas模型，說(shuō)明藥物釋放過(guò)程是擴(kuò)散和溶蝕共同作用的結(jié)果。通過(guò)對(duì)藥物釋放性能的研究，明確了納米診療劑在模擬生理環(huán)境中的藥物釋放特性，為其在體內(nèi)的藥物釋放行為和治療效果的預(yù)測(cè)提供了重要依據(jù)。4.3細(xì)胞攝取與毒性采用激光共聚焦顯微鏡（LCM）觀察腫瘤細(xì)胞對(duì)納米診療劑的攝取情況。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的腫瘤細(xì)胞（如乳腺癌細(xì)胞MCF-7）接種于激光共聚焦專(zhuān)用培養(yǎng)皿中，每皿接種[X]個(gè)細(xì)胞，置于37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，使細(xì)胞貼壁。然后，向培養(yǎng)皿中加入一定濃度的用熒光染料標(biāo)記的納米診療劑（如Cy5標(biāo)記的PLGA納米診療劑），繼續(xù)培養(yǎng)1、2、4、6小時(shí)。在預(yù)定時(shí)間點(diǎn)，吸出培養(yǎng)液，用PBS緩沖液沖洗細(xì)胞3次，以去除未被細(xì)胞攝取的納米診療劑。加入4%多聚甲醛固定細(xì)胞15-20分鐘，再用PBS緩沖液沖洗3次。最后，加入適量的DAPI染液對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色5-10分鐘，用PBS緩沖液沖洗后，在激光共聚焦顯微鏡下觀察。結(jié)果顯示，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞內(nèi)的熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，表明腫瘤細(xì)胞對(duì)納米診療劑的攝取量逐漸增加。在培養(yǎng)6小時(shí)后，細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)明顯的熒光信號(hào)，且主要分布在細(xì)胞質(zhì)中，說(shuō)明納米診療劑能夠有效地被腫瘤細(xì)胞攝取，并進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部發(fā)揮作用。利用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）進(jìn)一步定量分析腫瘤細(xì)胞對(duì)納米診療劑的攝取效率。將腫瘤細(xì)胞以每管[X]個(gè)的數(shù)量接種于6孔板中，培養(yǎng)24小時(shí)后，加入不同濃度的納米診療劑，分別培養(yǎng)2、4、6小時(shí)。培養(yǎng)結(jié)束后，用胰蛋白酶消化細(xì)胞，收集細(xì)胞懸液于離心管中，以1000-1500rpm的轉(zhuǎn)速離心5-10分鐘，棄上清液。用PBS緩沖液洗滌細(xì)胞2-3次，再加入適量的PBS緩沖液重懸細(xì)胞。將細(xì)胞懸液通過(guò)300-400目尼龍網(wǎng)過(guò)濾，去除細(xì)胞團(tuán)塊，然后進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。以未加入納米診療劑的細(xì)胞作為空白對(duì)照組，以加入游離熒光染料的細(xì)胞作為陽(yáng)性對(duì)照組。結(jié)果表明，隨著納米診療劑濃度的增加和培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度逐漸增大，即細(xì)胞對(duì)納米診療劑的攝取效率逐漸提高。當(dāng)納米診療劑濃度達(dá)到一定值后，攝取效率的提升趨于平緩，可能是由于細(xì)胞表面的攝取位點(diǎn)達(dá)到飽和所致。采用CCK-8法研究納米診療劑對(duì)腫瘤細(xì)胞的毒性作用。將腫瘤細(xì)胞以每孔[X]個(gè)的數(shù)量接種于96孔板中，培養(yǎng)24小時(shí)后，分別加入不同濃度的納米診療劑（包括空白PLGA納米粒子、負(fù)載光熱轉(zhuǎn)換材料的PLGA納米粒子、負(fù)載化療藥物的PLGA納米粒子以及負(fù)載光熱轉(zhuǎn)換材料和化療藥物的納米診療劑），每個(gè)濃度設(shè)置5-6個(gè)復(fù)孔。同時(shí)，設(shè)置不加納米診療劑的細(xì)胞對(duì)照組和只加培養(yǎng)液的空白對(duì)照組。將96孔板置于37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24、48、72小時(shí)。在預(yù)定時(shí)間點(diǎn)，向每孔中加入10-20μL的CCK-8試劑，繼續(xù)培養(yǎng)1-4小時(shí)，使CCK-8試劑與細(xì)胞充分反應(yīng)。然后，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度值。根據(jù)公式計(jì)算細(xì)胞存活率：細(xì)胞存活率（%）=（實(shí)驗(yàn)組吸光度值-空白對(duì)照組吸光度值）/（細(xì)胞對(duì)照組吸光度值-空白對(duì)照組吸光度值）×100%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，空白PLGA納米粒子在各濃度和時(shí)間點(diǎn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的存活率影響較小，表明其生物相容性良好，對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性。負(fù)載光熱轉(zhuǎn)換材料的PLGA納米粒子在較高濃度時(shí)，對(duì)細(xì)胞存活率有一定的影響，但影響程度相對(duì)較小。負(fù)載化療藥物的PLGA納米粒子對(duì)腫瘤細(xì)胞的毒性作用明顯，隨著藥物濃度的增加和培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞存活率逐漸降低。負(fù)載光熱轉(zhuǎn)換材料和化療藥物的納米診療劑在光熱/藥物協(xié)同作用下，對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷效果最為顯著，細(xì)胞存活率明顯低于單一治療組。當(dāng)納米診療劑濃度為[X]μg/mL，培養(yǎng)72小時(shí)后，細(xì)胞存活率僅為[Y]%，表明納米診療劑在光熱/藥物協(xié)同作用下，能夠有效地抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，具有良好的抗腫瘤活性。4.4協(xié)同治療效果評(píng)估通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)評(píng)估光熱/藥物協(xié)同治療對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制效果。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的腫瘤細(xì)胞（如人乳腺癌細(xì)胞MCF-7）以每孔[X]個(gè)的密度接種于96孔板中，在37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，使細(xì)胞貼壁。實(shí)驗(yàn)分為多個(gè)組，包括對(duì)照組（僅加入細(xì)胞培養(yǎng)液）、光熱治療組（加入負(fù)載光熱轉(zhuǎn)換材料的PLGA納米粒子并進(jìn)行近紅外光照射）、藥物治療組（加入負(fù)載化療藥物的PLGA納米粒子）以及光熱/藥物協(xié)同治療組（加入負(fù)載光熱轉(zhuǎn)換材料和化療藥物的納米診療劑并進(jìn)行近紅外光照射）。在光熱治療組和光熱/藥物協(xié)同治療組中，使用功率為[X]W的808nm近紅外激光器照射10-15分鐘。照射結(jié)束后，繼續(xù)培養(yǎng)24、48、72小時(shí)。在預(yù)定時(shí)間點(diǎn)，采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞存活率。向每孔中加入10-20μL的CCK-8試劑，在培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育1-4小時(shí)。使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度值，根據(jù)公式計(jì)算細(xì)胞存活率：細(xì)胞存活率（%）=（實(shí)驗(yàn)組吸光度值-空白對(duì)照組吸光度值）/（細(xì)胞對(duì)照組吸光度值-空白對(duì)照組吸光度值）×100%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)正常，細(xì)胞存活率較高。光熱治療組在近紅外光照射后，細(xì)胞存活率有所下降，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，下降趨勢(shì)逐漸明顯。這是因?yàn)楣鉄徂D(zhuǎn)換材料吸收近紅外光后產(chǎn)生的熱能直接殺傷了部分腫瘤細(xì)胞。藥物治療組中，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加和藥物濃度的升高，細(xì)胞存活率逐漸降低，說(shuō)明化療藥物能夠抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。光熱/藥物協(xié)同治療組的細(xì)胞存活率明顯低于光熱治療組和藥物治療組。在培養(yǎng)72小時(shí)后，光熱/藥物協(xié)同治療組的細(xì)胞存活率僅為[Y]%，而光熱治療組為[Z1]%，藥物治療組為[Z2]%。這表明光熱/藥物協(xié)同治療具有顯著的協(xié)同增效作用，能夠更有效地抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。進(jìn)一步通過(guò)熒光染色法觀察細(xì)胞凋亡情況。在上述實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)48小時(shí)后，向各孔中加入適量的AO/EB熒光染料，孵育15-20分鐘。用PBS緩沖液沖洗細(xì)胞3次后，在熒光顯微鏡下觀察。AO能夠進(jìn)入活細(xì)胞，使其發(fā)出綠色熒光；EB只能進(jìn)入死細(xì)胞和凋亡細(xì)胞，使其發(fā)出紅色熒光。觀察結(jié)果顯示，對(duì)照組細(xì)胞主要呈現(xiàn)綠色熒光，表明細(xì)胞存活狀態(tài)良好。光熱治療組和藥物治療組均可見(jiàn)部分細(xì)胞發(fā)出紅色熒光，說(shuō)明有一定數(shù)量的細(xì)胞發(fā)生凋亡或死亡。而光熱/藥物協(xié)同治療組中，發(fā)出紅色熒光的細(xì)胞數(shù)量明顯增多，細(xì)胞凋亡和死亡現(xiàn)象更為顯著。這進(jìn)一步驗(yàn)證了光熱/藥物協(xié)同治療能夠增強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。五、PLGA納米診療劑的體內(nèi)性能研究5.1動(dòng)物模型建立選擇6-8周齡、體重為18-22g的雌性BALB/c小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，共30只。小鼠購(gòu)自正規(guī)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供應(yīng)商，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心的屏障環(huán)境中飼養(yǎng)，溫度控制在22-25℃，相對(duì)濕度為40-60%，12小時(shí)光照/12小時(shí)黑暗循環(huán)，自由攝食和飲水。在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，讓小鼠適應(yīng)環(huán)境1周。選用人乳腺癌細(xì)胞MCF-7作為腫瘤細(xì)胞株，該細(xì)胞株具有典型的乳腺癌細(xì)胞特征，廣泛應(yīng)用于乳腺癌相關(guān)研究。從液氮罐中取出凍存的MCF-7細(xì)胞，迅速放入37℃水浴鍋中解凍，然后將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含有完全培養(yǎng)基（RPMI-1640培養(yǎng)基，添加10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素雙抗）的離心管中，以1000rpm的轉(zhuǎn)速離心5分鐘，棄上清液，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，且細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)，進(jìn)行細(xì)胞傳代或收集用于荷瘤模型構(gòu)建。在無(wú)菌條件下，用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液消化培養(yǎng)瓶中的MCF-7細(xì)胞，待細(xì)胞變圓脫落后，加入含有血清的培養(yǎng)基終止消化。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，以1000rpm的轉(zhuǎn)速離心5分鐘，棄上清液，用無(wú)菌PBS緩沖液洗滌細(xì)胞2次，再用PBS緩沖液重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×10?個(gè)/mL。用體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇對(duì)小鼠右側(cè)腋下皮膚進(jìn)行消毒，使用1mL無(wú)菌注射器抽取適量的細(xì)胞懸液，在小鼠右側(cè)腋下皮下緩慢注射0.1mL細(xì)胞懸液，即每只小鼠接種1×10?個(gè)MCF-7細(xì)胞。注射過(guò)程中要注意避免損傷小鼠的血管和神經(jīng)，確保細(xì)胞均勻地注射到皮下組織中。接種腫瘤細(xì)胞后，每天觀察小鼠的一般狀態(tài)，包括精神狀態(tài)、飲食、活動(dòng)等情況，記錄小鼠的體重變化。每隔2-3天用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤的長(zhǎng)徑（a）和短徑（b），根據(jù)公式V=1/2×a×b2計(jì)算腫瘤體積。當(dāng)腫瘤體積長(zhǎng)至約100-150mm3時(shí)，認(rèn)為荷瘤模型構(gòu)建成功，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。此時(shí)，將荷瘤小鼠隨機(jī)分為5組，每組6只，分別為對(duì)照組、光熱治療組、藥物治療組、光熱/藥物協(xié)同治療組以及空白納米粒組。對(duì)照組給予生理鹽水，光熱治療組給予負(fù)載光熱轉(zhuǎn)換材料的PLGA納米粒子，藥物治療組給予負(fù)載化療藥物的PLGA納米粒子，光熱/藥物協(xié)同治療組給予負(fù)載光熱轉(zhuǎn)換材料和化療藥物的納米診療劑，空白納米粒組給予空白PLGA納米粒子。各組均通過(guò)尾靜脈注射給藥，給藥劑量根據(jù)前期預(yù)實(shí)驗(yàn)和相關(guān)文獻(xiàn)確定。5.2體內(nèi)分布與代謝為研究PLGA納米診療劑在動(dòng)物體內(nèi)的分布和代謝情況，將荷瘤小鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組6只。實(shí)驗(yàn)組通過(guò)尾靜脈注射負(fù)載熒光染料（如Cy5）標(biāo)記的PLGA納米診療劑，對(duì)照組注射等量的生理鹽水。在注射后的不同時(shí)間點(diǎn)（0.5、1、2、4、8、12、24小時(shí)），使用活體成像系統(tǒng)對(duì)小鼠進(jìn)行成像，觀察納米診療劑在小鼠體內(nèi)的分布情況。成像結(jié)果顯示，注射后0.5小時(shí)，納米診療劑主要分布在小鼠的血液循環(huán)系統(tǒng)中，在肝臟、脾臟等器官也有一定的攝取。隨著時(shí)間的推移，納米診療劑逐漸在腫瘤組織中富集。在注射后4小時(shí)，腫瘤部位的熒光信號(hào)明顯增強(qiáng)，表明納米診療劑能夠通過(guò)EPR效應(yīng)被動(dòng)靶向腫瘤組織。到注射后12-24小時(shí)，腫瘤組織中的熒光信號(hào)達(dá)到最強(qiáng)，且持續(xù)保持較高水平。這是因?yàn)榧{米診療劑的納米尺寸使其能夠通過(guò)腫瘤組織中通透性