化學(xué)品急性吸入毒性試驗(yàn)方法2025-12-01實(shí)施2025-12-01實(shí)施本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件代替GB/T21605—2008《化學(xué)品急性吸入毒性試驗(yàn)方法》,與GB/T21605—2008相——更改了“范圍”一章(見第1章，2008年版的第1章);——更改了“術(shù)語(yǔ)和定義”(見第3章，2008年版的第2章);——增加了評(píng)價(jià)受試物可否經(jīng)呼吸道吸收(見第4章);——增加了試驗(yàn)前受試物資料收集及分析、傳統(tǒng)LC??法和濃度-時(shí)間法的試驗(yàn)原則(見第5章);——增加了暴露條件監(jiān)測(cè)(見6.6),刪除了靜式染毒法(見2008年版的5.3.1),將動(dòng)式染毒法更改為傳統(tǒng)LC??法和濃度-時(shí)間法(見6.7,2008年版的5.3.2),增加了臨床觀察、體重監(jiān)測(cè)、病理學(xué)檢查(見6.8);——更改了“試驗(yàn)數(shù)據(jù)與報(bào)告”(見第7章，2008年版的5.5、第6章、第7章);請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由全國(guó)危險(xiǎn)化學(xué)品管理標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC251)提出并歸口。本文件起草單位：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心職業(yè)衛(wèi)生與中毒控制所、廣東省職業(yè)病防治院、福建寧佳竣檢測(cè)技術(shù)服務(wù)有限公司。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：——2008年首次發(fā)布為GB/T21605—2008;——本次為第一次修訂。工本文件描述了化學(xué)品急性吸入毒性試驗(yàn)方法。本文件適用于化學(xué)品的急性吸入毒性試驗(yàn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB14925實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境及設(shè)施3術(shù)語(yǔ)和定義下列定義和術(shù)語(yǔ)適用于本文件。急性吸入毒性acuteinhalati實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在短時(shí)間內(nèi)(指24h或24h之內(nèi))一次連續(xù)吸入一定濃度的受試物(氣體、蒸氣、氣溶膠或顆粒狀物)出現(xiàn)的健康損害效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物單位體重所吸入受試物的量。在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)，經(jīng)呼吸道一次連續(xù)吸入受試物后，引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物總體中半數(shù)死亡的毒物的統(tǒng)計(jì)學(xué)濃度。由空氣動(dòng)力學(xué)直徑大小不一的顆粒組成的氣溶膠樣品中，小于或等于某一空氣動(dòng)力學(xué)直徑的顆粒占?xì)馊苣z樣品總質(zhì)量或總重量50%時(shí)的氣溶膠顆?？諝鈩?dòng)力學(xué)直徑。用以描述氣溶膠顆粒粒徑范圍的無(wú)量綱數(shù)。劑量與特定效應(yīng)的發(fā)生率間的關(guān)系。2最小致死濃度minimallethalconcentration;LCo?一組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中，僅引起個(gè)別動(dòng)物死亡的最小濃度。絕對(duì)致死濃度absolutelethalconcentration引起一組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物全部死亡的最低濃度。4試驗(yàn)?zāi)康脑u(píng)價(jià)可吸入受試物，如氣體、揮發(fā)性物質(zhì)、氣溶膠或顆粒物可否經(jīng)呼吸道吸收及試物危險(xiǎn)性評(píng)估，并可按全球化學(xué)品統(tǒng)一分類和標(biāo)簽制度(GHS)對(duì)受試物進(jìn)行毒性分類，同時(shí)還可為該物質(zhì)急性毒性強(qiáng)度及亞急性毒性、蓄積毒性和特殊毒性試驗(yàn)劑量選擇提供依據(jù)。5試驗(yàn)基本原則5.1試驗(yàn)前收集受試物所有相關(guān)的可用信息。如已有相關(guān)試驗(yàn)數(shù)據(jù)，則不再開展新的試驗(yàn)，以盡量減少動(dòng)物的使用。受試物的有用信息包括受試物的特性(如純度),化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)；體外或體內(nèi)毒性試驗(yàn)結(jié)果；預(yù)期用途和人體暴露的可能性；結(jié)構(gòu)類似物的構(gòu)效關(guān)系數(shù)據(jù)和毒理學(xué)數(shù)據(jù)等。5.2綜合所有數(shù)據(jù)評(píng)估受試物是否具有腐蝕性/刺激性，如受試物導(dǎo)致嚴(yán)重疼痛和/或痛苦，分析是否可以免除進(jìn)一步的試驗(yàn)。5.3本文件提供兩種試驗(yàn)方法。第一種方法是傳統(tǒng)的LC?o法，將動(dòng)物暴露于一個(gè)限定濃度(限度試驗(yàn))或按梯度設(shè)置的一系列濃度，暴露時(shí)間為4h。第二種方法是濃度-時(shí)間法(C×t),將動(dòng)物暴露于一個(gè)(限定濃度)或多個(gè)濃度的多種暴露時(shí)間。染毒結(jié)束后，將動(dòng)物移出染毒柜，觀察染毒期間及終止染毒后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中毒體征與嚴(yán)重程度。在試驗(yàn)中死亡的動(dòng)物和觀察期結(jié)束后處死的動(dòng)物，及時(shí)作大體解剖和病理學(xué)檢查。瀕死、疼痛劇烈或表現(xiàn)嚴(yán)重且持久痛苦跡象的動(dòng)物予以安樂(lè)死，并等同于在試驗(yàn)中死亡的6試驗(yàn)方法使用健康成年的動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)室常用品系。首選大鼠，如需選用其他品系需說(shuō)明理由。在試驗(yàn)開始時(shí)，動(dòng)物為8周齡～12周齡，體重差異不超過(guò)同性別平均體重的±20%。雌性動(dòng)物是未妊娠和未生產(chǎn)的。動(dòng)物隨機(jī)分組，并具有唯一性標(biāo)識(shí)。開始試驗(yàn)前動(dòng)物至少在實(shí)驗(yàn)設(shè)施內(nèi)適應(yīng)和檢疫觀察5d。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)條件按照GB14925要求，動(dòng)物房的室溫控制在23℃±3℃,相對(duì)濕度30%~70%。試驗(yàn)前后每個(gè)濃度組動(dòng)物按性別和濃度分籠飼養(yǎng)，每籠動(dòng)物數(shù)以不干擾動(dòng)物個(gè)體活動(dòng)及觀察反應(yīng)為宜。當(dāng)動(dòng)物通過(guò)口鼻部暴露染毒時(shí)，需適應(yīng)染毒裝置一段時(shí)間?？诒潜┞堆b置不能對(duì)動(dòng)物造成不適當(dāng)?shù)膲毫?，如體溫變化和/或呼吸頻率的改變等。如有數(shù)據(jù)表明不引起以上改變，則不需要適應(yīng)。全身暴露于氣溶膠的動(dòng)物在染毒期間單籠飼養(yǎng)，以避免動(dòng)物從同伴的毛發(fā)誤食受試物氣溶膠。喂飼常規(guī)3動(dòng)物飼料，自由飲水(暴露期間除外)。采用人工照明，光照周期為晝12h～14h,夜12h～10h。6.4受試物準(zhǔn)備6.4.1受試物的形態(tài)可以是氣體、蒸氣、氣溶膠或它們的混合物，主要取決于受試物的物理化學(xué)性質(zhì)、選定的濃度，以及在處理和使用受試物時(shí)最可能存在的物理形態(tài)。吸濕性和化學(xué)反應(yīng)性受試物應(yīng)在干燥空氣條件下進(jìn)行試驗(yàn)。注意避免造成爆炸的濃度。6.4.2染毒時(shí)，受試物應(yīng)在空氣中保持一定濃度，必要時(shí)加入適當(dāng)?shù)馁x形劑(首選水)。賦形劑本身無(wú)6.4.3需經(jīng)過(guò)機(jī)械處理才能達(dá)到所需粒徑分布的受試物，在處理過(guò)程中不能分解或改變受試物成分。如機(jī)械處理改變了受試物的組成，應(yīng)該通過(guò)適當(dāng)?shù)姆治龇椒ㄟM(jìn)行驗(yàn)證。同時(shí)需采用適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施避免受試物受到污染。6.4.4試驗(yàn)前，如無(wú)受試物相關(guān)信息，應(yīng)對(duì)受試物進(jìn)行理化分析，包括其純度，已識(shí)別的污染物和雜質(zhì)的特性和濃度。試驗(yàn)中應(yīng)使用同一批次受試物。受試物樣本在能保持其純度、同質(zhì)性、穩(wěn)定性的條件下6.5對(duì)照組動(dòng)物設(shè)置原則當(dāng)使用除水以外的賦形劑時(shí)，如果沒(méi)有其吸入毒性試驗(yàn)的歷史數(shù)據(jù)，需設(shè)置賦形劑對(duì)照組。如果已有毒性試驗(yàn)顯示在測(cè)試濃度下賦形劑是無(wú)毒的，則不設(shè)賦形劑對(duì)照組。6.6暴露條件監(jiān)測(cè)根據(jù)受試物的物理特性和試驗(yàn)?zāi)康倪x擇染毒裝置。首選經(jīng)口鼻部暴露，特別是在測(cè)試液體、固體氣溶膠或可凝結(jié)成為氣溶膠的蒸氣時(shí)。如采用全身暴露方式染毒，需在試驗(yàn)報(bào)告中說(shuō)明。采用全身暴露時(shí)，要保證染毒柜中氣流的穩(wěn)定性，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的總體積不超過(guò)染毒柜容積的5%。連續(xù)監(jiān)測(cè)染毒柜中氣流，暴露期間至少每小時(shí)記錄一次。O?濃度不低于19%,CO?濃度不高于1%。如無(wú)法達(dá)到該標(biāo)準(zhǔn)，需說(shuō)明理由，并監(jiān)測(cè)O?和CO?的6.6.3染毒柜溫度和相對(duì)濕度染毒柜內(nèi)溫度保持在23℃±3℃。無(wú)論是經(jīng)口鼻部暴露還是全身暴露，每小時(shí)記錄一次動(dòng)物呼吸區(qū)域的相對(duì)濕度。相對(duì)濕度應(yīng)保持在30%～70%的范圍內(nèi)，無(wú)法實(shí)現(xiàn)時(shí)需說(shuō)明理由。計(jì)算并記錄染毒柜中受試物的理論濃度。理論濃度是送入染毒柜中受試物的總量除以通過(guò)的空氣總體積。理論濃度不用于描述動(dòng)物的暴露情況，但是比較理論濃度與實(shí)際濃度可以得出試驗(yàn)系統(tǒng)的生成效率，從而發(fā)現(xiàn)生成過(guò)程中存在的問(wèn)題。6.6.5.1實(shí)際濃度是指染毒柜中動(dòng)物呼吸區(qū)域受試物的濃度。實(shí)際濃度可以通過(guò)特定方法(例如直接采樣、吸附或化學(xué)反應(yīng)方法、后續(xù)表征分析)或非特定方法(如重量分析法)獲得。重量分析法僅限于有4適當(dāng)?shù)念A(yù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)支持，且成分單一的粉末氣溶膠或低揮發(fā)性的液體氣溶膠。如有數(shù)據(jù)證明空氣中物質(zhì)的組成與起始物質(zhì)相似，多組分粉末氣溶膠的濃度也可以通過(guò)重量分析法來(lái)確定。如無(wú)可用信息，在試驗(yàn)過(guò)程中定期對(duì)受試物(理想情況下是其在空氣中的狀態(tài))進(jìn)行再分析。對(duì)于可能蒸發(fā)或升華的氣溶膠物質(zhì)，要通過(guò)所選方法證明已收集所有相。6.6.5.2染毒期間盡可能使受試物濃度維持恒定，并根據(jù)分析方法進(jìn)行連續(xù)和/或間歇監(jiān)測(cè)。當(dāng)使用間歇采樣時(shí)，暴露時(shí)間為4h時(shí)，至少采集兩次染毒柜氣體樣本。如果由于空氣流速有限或濃度低而無(wú)法實(shí)現(xiàn)，可以在整個(gè)暴露期間收集一個(gè)樣本。如果樣本間波動(dòng)明顯，下一步試驗(yàn)的濃度每次暴露采集4個(gè)樣本。單個(gè)染毒柜內(nèi)樣本的濃度不超過(guò)平均濃度的±10%(氣體和蒸氣)或±20%(液體或固體氣溶膠)。盡可能計(jì)算并記錄染毒柜受試物濃度達(dá)到平衡的時(shí)間(t?5)。暴露持續(xù)時(shí)間應(yīng)包括受試物生成的6.6.5.3對(duì)于由氣體/蒸氣和氣溶膠組成的非常復(fù)雜的混合物，每個(gè)相在染毒柜中可能表現(xiàn)不同，因此至少選擇每個(gè)相(氣體/蒸氣和氣溶膠)的一個(gè)指示物質(zhì)(分析物),首選受試物組成中的主要活性物質(zhì)。當(dāng)受試物是混合物時(shí)，需報(bào)告混合物的分析濃度，而不僅僅是活性成分或組分(分析物)的濃度。6.6.6.1對(duì)所有氣溶膠以及可能凝結(jié)成氣溶膠的蒸氣進(jìn)行粒徑分析。在4h的暴露期間，使用級(jí)聯(lián)撞擊器或達(dá)到同等效果的儀器(如空氣動(dòng)力學(xué)粒徑分析儀),至少兩次測(cè)定氣溶膠的粒徑分布。6.6.6.2為了使呼吸道的所有相通區(qū)域均有受試物，推薦使用MMAD在1μm～4μm、GSD在1.5~3.0的氣溶膠。無(wú)法實(shí)現(xiàn)時(shí)需說(shuō)明理由。6.7試驗(yàn)程序6.7.1.1傳統(tǒng)的LC?o法包括預(yù)試驗(yàn)、主試驗(yàn)和/或限度試驗(yàn)。動(dòng)物暴露在一個(gè)限定濃度(限度試驗(yàn))或至少3個(gè)不同的濃度(主試驗(yàn)),暴露時(shí)間為4h。如需采用其他暴露時(shí)間，需說(shuō)明理由。除已知的受試6.7.1.2預(yù)試驗(yàn)用來(lái)估計(jì)受試物的毒性效應(yīng)，識(shí)別敏感性別，并為限度試驗(yàn)或主試驗(yàn)的濃度選擇提供依據(jù)。綜合受試物的所有信息選擇預(yù)試驗(yàn)的濃度水平。試驗(yàn)中，每個(gè)濃度水平的每種性別的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不超過(guò)3只。一般使用一個(gè)濃度水平。但如果需要，也可以測(cè)試更多濃度。已經(jīng)進(jìn)行過(guò)的其他試驗(yàn)可以用來(lái)替代預(yù)試驗(yàn)。6.7.1.3當(dāng)受試物已知或預(yù)期基本無(wú)毒時(shí)，可采用限度試驗(yàn)。在限度試驗(yàn)中，雌雄性各3只動(dòng)物暴露在限定濃度中。按照GHS的分類，氣體、蒸氣、氣溶膠的限定濃度分別為體積分?jǐn)?shù)2×10-2、質(zhì)量濃度20mg/L和5mg/L。如果在限定濃度發(fā)現(xiàn)動(dòng)物死亡或?yàn)l死，則限度試驗(yàn)的結(jié)果可作為其他濃度試驗(yàn)(如主試驗(yàn))的預(yù)試驗(yàn)。如果受試物的理化性質(zhì)決定其不可能達(dá)到限定濃度，則需測(cè)試其最大可及濃度。如果最大可及濃度的死亡率小于50%,則無(wú)需下一步試驗(yàn)。6.7.1.4主試驗(yàn)一般每個(gè)濃度組10只動(dòng)物(雌雄各半),或5只敏感性別的動(dòng)物，至少3個(gè)濃度組。濃度組的數(shù)量應(yīng)足以繪制出濃度死亡曲線，并求出LC?值。各濃度組之間的時(shí)間間隔取決于中毒體征的出現(xiàn)、持續(xù)時(shí)間與嚴(yán)重程度。是否需要對(duì)下一濃度水平進(jìn)行試驗(yàn)，取決于先前的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是否能夠6.7.2.1濃度-時(shí)間法(C×t)包括預(yù)試驗(yàn)、主試驗(yàn)和/或在限定濃度下進(jìn)行試驗(yàn)。采用經(jīng)口鼻部暴露的方式，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物暴露在不同濃度的受試物水平，不同的暴露時(shí)間，具體方法按附錄A。當(dāng)采用C×t5進(jìn)行4個(gè)濃度水平和5種暴露時(shí)間的主試驗(yàn)時(shí)，每個(gè)濃度/暴露時(shí)間只需使用2只動(dòng)物(雌雄各半或僅敏感性別),為減少參數(shù)估計(jì)的誤差和變異性，增加成功率，提高置信區(qū)間的覆蓋范圍，每個(gè)濃度/暴露時(shí)間也可以使用4只動(dòng)物(雌雄各半)。當(dāng)用來(lái)參數(shù)估計(jì)的數(shù)據(jù)擬合不好時(shí)，需增加第5個(gè)濃度水平。6.7.2.2預(yù)試驗(yàn)中每個(gè)濃度水平采用雌雄性各3只動(dòng)物，暴露時(shí)間為4h。如果能從其他試驗(yàn)中得到死亡數(shù)據(jù)，那么可以不進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。在選擇試驗(yàn)的初始濃度時(shí)，應(yīng)該考慮在其他試驗(yàn)中觀察到的各性別和各濃度的死亡率。6.7.2.3主試驗(yàn)的初始濃度(第一步暴露)可能是限定濃度，也可能是根據(jù)預(yù)試驗(yàn)選擇的濃度。每組雌雄性各1只動(dòng)物暴露于此濃度下，持續(xù)時(shí)間不同，如15min、30min、60min、120min和240min,總共用到10只動(dòng)物，具體操作按附錄A。限定濃度可根據(jù)監(jiān)管要求選擇，按照GHS分類，氣體、蒸氣、氣溶膠的限定濃度分別為體積分?jǐn)?shù)2×10?2、質(zhì)量濃度20mg/L和5mg/L(或?yàn)樽畲罂杉皾舛?。如果在第一步暴露中發(fā)現(xiàn)死亡，則引起死亡的最小暴露濃度將為下一步試驗(yàn)的濃度選擇提供指導(dǎo)。每一個(gè)后續(xù)的試驗(yàn)都取決于先前的試驗(yàn)結(jié)果。如果暴露時(shí)間間隔適當(dāng)，4個(gè)濃度水平得到的結(jié)果，就足以繪制濃度-時(shí)間-死亡曲線。試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析方法按附錄A。6.8.1.1動(dòng)物在暴露期內(nèi)應(yīng)頻繁進(jìn)行臨床觀察。在暴露當(dāng)天至少進(jìn)行兩次臨床觀察，以后每天至少進(jìn)行一次觀察，或者根據(jù)動(dòng)物反應(yīng)進(jìn)行更頻繁的觀察。觀察期限最少為14d。特別注意中毒體征出現(xiàn)和消失的時(shí)間，觀察期限長(zhǎng)短可依據(jù)臨床表現(xiàn)的性質(zhì)和出現(xiàn)時(shí)間以及恢復(fù)期的長(zhǎng)短來(lái)確定。瀕死、疼痛劇烈或表現(xiàn)嚴(yán)重且持久痛苦跡象的動(dòng)物應(yīng)予以安樂(lè)死。當(dāng)動(dòng)物被安樂(lè)死，或者發(fā)現(xiàn)死亡時(shí)，盡可能地準(zhǔn)確記錄死亡時(shí)間。系統(tǒng)地記錄所有的觀察內(nèi)容，每一只動(dòng)物單獨(dú)記錄。在適應(yīng)期至少記錄一次每只動(dòng)物的體重，在暴露當(dāng)天(第0天)以及至少在第1天、第3天和第7天(之后每周一次)記錄動(dòng)物體重。如果在第1天之后死亡或被實(shí)施安樂(lè)死，則在死亡或安樂(lè)死時(shí)記錄體重。與試驗(yàn)前相比，體重持續(xù)減少超過(guò)20%的動(dòng)物，進(jìn)行密切監(jiān)測(cè)。暴露結(jié)束后，記錄存活動(dòng)物的體6.8.3.1所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，包括在試驗(yàn)中死亡的，或者出于動(dòng)物福利原因被安樂(lè)死以及從試驗(yàn)中移除的動(dòng)物，都應(yīng)及時(shí)進(jìn)行大體解剖。記錄每只動(dòng)物的大體病理變化，并特別注意呼吸道的改變。6.8.3.2為獲取更多的有關(guān)毒性作用的信息，可增加其他的檢查，如測(cè)量動(dòng)物的肺重量、檢查受試物對(duì)呼吸道的刺激性、對(duì)有大體病理改變的器官以及已知或預(yù)期受到影響的器官進(jìn)行組織病理學(xué)檢查等。7試驗(yàn)數(shù)據(jù)與報(bào)告整理每只動(dòng)物的體重和大體解剖的個(gè)體數(shù)據(jù)。臨床觀察數(shù)據(jù)以表格的形式進(jìn)行總結(jié)，統(tǒng)計(jì)出各組使用的動(dòng)物數(shù)量，出現(xiàn)特殊中毒特征的動(dòng)物數(shù)量，試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)死亡或安樂(lè)死的動(dòng)物數(shù)量，動(dòng)物死亡時(shí)67.2試驗(yàn)報(bào)告試驗(yàn)報(bào)告包括以下內(nèi)容。a)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和飼養(yǎng)條件：——?jiǎng)游锏姆N屬和品系，使用大鼠外其他種屬的理由；——?jiǎng)游锏臄?shù)量、年齡和性別；——隨機(jī)分組的方法；——詳細(xì)的飼料質(zhì)量和水質(zhì)(包括飼料類型/來(lái)源、水源);b)受試物：——物理性質(zhì)、純度以及相關(guān)的物理化學(xué)性質(zhì)；——使用除水以外的賦形劑和選擇賦形劑的理由；——顯示賦形劑不影響試驗(yàn)結(jié)果的以往或者同期數(shù)據(jù)。d)染毒柜：——染毒柜的描述，包括規(guī)格和體積；——用于動(dòng)物暴露的設(shè)備和產(chǎn)生氣流的設(shè)備的來(lái)源和描述；——為保證氣流均一性，采用了校正儀器和方法；——壓力差(正和負(fù));——每個(gè)吸入裝置的暴露端口(口鼻部暴露時(shí));動(dòng)物在染毒裝置中的位置(全身暴露時(shí));——即時(shí)的氣流均一性/穩(wěn)定性；——溫度和濕度傳感器的位置，以及染毒柜中氣體采樣位置；——暴露端口的空氣流速(口鼻部暴露),或吸入裝置的動(dòng)物負(fù)荷(全身暴露);——用來(lái)測(cè)量O?和CO?的設(shè)備信息；——染毒柜中濃度達(dá)到平衡所需要的時(shí)間(t95);——每小時(shí)的體積改變；——測(cè)量設(shè)備?！谥髟囼?yàn)中，濃度選擇的理由；——理論濃度(送入染毒柜中受試物的總量除以通過(guò)的空氣總體積);——從動(dòng)物呼吸帶區(qū)域收集的受試物實(shí)際濃度；產(chǎn)生多種物理形態(tài)(氣體、蒸氣、氣溶膠)的混——所有空氣濃度以質(zhì)量濃度為單位(如mg/L、mg/m3等)進(jìn)行報(bào)告，也可附帶以體積分?jǐn)?shù)為單位(如10-?、10?等);——粒徑分布、MMAD、GSD及其計(jì)算方法，并報(bào)告?zhèn)€體的粒徑分析結(jié)果。f)試驗(yàn)條件：——準(zhǔn)備受試物的詳細(xì)資料，包括降低固體材料顆粒大小的過(guò)程的詳細(xì)資料，或者準(zhǔn)備受試物溶液的詳細(xì)資料，如機(jī)械加工過(guò)程可能改變受試物的構(gòu)成，需包括確認(rèn)受試物構(gòu)成的分析7——染毒裝置的描述(包括圖表);——詳細(xì)的化學(xué)分析方法以及方法的有效性(包括采樣設(shè)備分離受試物的效率)?！径竟裰械臏囟取穸群蜌饬鲾?shù)據(jù)；——染毒柜的理論、實(shí)際濃度數(shù)據(jù)；——每只動(dòng)物的反應(yīng)數(shù)據(jù)和濃度水平的表格(動(dòng)物表現(xiàn)出的毒性效應(yīng)，包括死亡率、嚴(yán)重程度、效應(yīng)發(fā)生和持續(xù)的時(shí)間);——在試驗(yàn)期間，每只動(dòng)物的體重，安樂(lè)死的日期和時(shí)間，毒性效應(yīng)開始和持對(duì)于每個(gè)動(dòng)物是否可逆；——每只動(dòng)物的解剖發(fā)現(xiàn)和組織病理學(xué)報(bào)告；——死亡參數(shù)(可包括LC?o、LCo?,及其95%置信區(qū)間和斜率);——統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)，包括濃度-時(shí)間法中指數(shù)n的估計(jì)及使用的統(tǒng)計(jì)軟件名稱。h)結(jié)果的討論與解釋：——所用方法是否滿足試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，例如限定濃度或者粒徑；——根據(jù)整體結(jié)果討論顆粒的呼吸性，尤其是在粒徑標(biāo)準(zhǔn)不能被滿足時(shí)；——對(duì)動(dòng)物實(shí)施安樂(lè)死的理由；——按本文件進(jìn)行試驗(yàn)的理由；——確定理論濃度與實(shí)際濃度的方法，以及兩者之間的關(guān)系；——?jiǎng)游锼劳龅目赡茉蛞约罢贾鲗?dǎo)的反應(yīng)(全身和局部)。8濃度-時(shí)間法(C×t)A.1濃度-時(shí)間法一般先在限定濃度進(jìn)行試驗(yàn)(暴露I),有5個(gè)不同的暴露持續(xù)時(shí)間，如15min、30min、60min、120min和240min。根據(jù)GHS分類，氣體、蒸氣和氣溶膠的限定濃度分別為體積分?jǐn)?shù)2×10?2質(zhì)量濃度20mg/L和5mg/L。A.2受試物的毒性資料缺乏或較少時(shí)，可能需要進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)：每個(gè)濃度水平雌雄性動(dòng)物不超過(guò)3只，暴露時(shí)間為240min。A.3如果在暴露I中，限定濃度動(dòng)物的死亡率小于50%,則不需要進(jìn)行下一步的試驗(yàn)。如有特定的需求，下一步可使用更高的濃度進(jìn)行試驗(yàn)，如2倍限定濃度。A.4如果在限定濃度發(fā)現(xiàn)毒性效應(yīng)，需要進(jìn)行下一步試驗(yàn)(主試驗(yàn))。主試驗(yàn)可在更低濃度調(diào)整的暴露時(shí)間進(jìn)行試驗(yàn)，見圖A.1中的暴露Ⅱ、Ⅲ、IV′,或在更高濃度較短的暴露時(shí)間進(jìn)行試驗(yàn)，見圖A.1中的暴A.5試驗(yàn)各濃度/暴露時(shí)間需雌雄性動(dòng)物各1只或2只敏感性別的動(dòng)物。在某些情況下，為減少參數(shù)估計(jì)的偏倚和變異性，增加參數(shù)估計(jì)的成功率和置信區(qū)間的覆蓋范圍，也可在各濃度/暴露時(shí)間用雌雄性動(dòng)物各2只或4只敏感性別的動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)。進(jìn)行每步暴露試驗(yàn)時(shí)，先選擇最長(zhǎng)的暴露時(shí)間，如先240min,再120min。如果在240min的組發(fā)現(xiàn)動(dòng)物在90min后出現(xiàn)死亡或嚴(yán)重的毒性效應(yīng)，則不需要進(jìn)行120min的試驗(yàn)，因?yàn)樗劳雎士赡苁?00%。在該濃度下，應(yīng)該選擇更短的暴露時(shí)間，如90min、65min、45min、33min和25min。A.7定期測(cè)量每段暴露時(shí)間染毒柜中的時(shí)間加權(quán)平均濃度。采用每只動(dòng)物死亡前的暴露時(shí)間進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，而不是整個(gè)暴露持續(xù)時(shí)間。A.8仔細(xì)檢查前4步暴露的結(jié)果，確認(rèn)有無(wú)數(shù)據(jù)缺陷。當(dāng)擬合不好時(shí)，可能需要第5步暴露，以填補(bǔ)數(shù)據(jù)缺陷。A.9所有數(shù)據(jù)均用于統(tǒng)計(jì)分析濃度-時(shí)間-反應(yīng)關(guān)系。盡可能地根據(jù)時(shí)間加權(quán)平均濃度和死亡前的暴露時(shí)間(如果在暴露中出現(xiàn)死亡)確定每個(gè)濃度的時(shí)間間隔。9GB/T21605—2025L-O△IⅡⅢ暴露時(shí)間/min標(biāo)引符號(hào)說(shuō)明：o——存活動(dòng)物；實(shí)線——雄性大鼠的LC?0值(暴露時(shí)間7.5min～240min)(n=1);虛線——雌性大鼠的LCs值(暴露時(shí)間7.5min～240min)(n=1);點(diǎn)線——雌性和雄性大鼠的LC?值(n=2)。圖A.1大鼠假定的濃度-時(shí)間-死亡關(guān)系圖或“如果沒(méi)有關(guān)于性別敏感性的信息，需要對(duì)兩種性別動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)，比如每濃度/暴露時(shí)間雌雄性各1只動(dòng)物。根據(jù)現(xiàn)有信息，或者在本次試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)某一性別更敏感，則在后續(xù)的試驗(yàn)中每個(gè)濃度將使用10只敏感性別的動(dòng)物(每濃度/暴露