2025年生物制藥技能測試題及答案一、單項選擇題（每題2分，共40分）1.下列哪種細胞系常用于生物制藥生產(chǎn)重組蛋白？A.293T細胞B.原代小鼠肝細胞C.果蠅S2細胞D.以上都是答案：D。293T細胞是常用的哺乳動物細胞系，易于轉(zhuǎn)染和培養(yǎng)，可高效表達重組蛋白；原代小鼠肝細胞可用于一些特定藥物代謝和肝相關(guān)蛋白的研究與生產(chǎn)；果蠅S2細胞是昆蟲細胞系，在表達一些具有特定修飾需求的重組蛋白方面有應(yīng)用，所以以上細胞系都可用于生物制藥生產(chǎn)重組蛋白。2.用于蛋白質(zhì)分離純化的離子交換色譜，其分離原理主要基于蛋白質(zhì)的：A.分子大小B.等電點C.溶解度D.疏水性答案：B。離子交換色譜是根據(jù)蛋白質(zhì)等電點的不同，在特定pH條件下，蛋白質(zhì)所帶電荷不同，與離子交換樹脂上的相反電荷基團結(jié)合能力不同，從而實現(xiàn)分離。分子大小是凝膠過濾色譜的分離依據(jù)；溶解度常用于鹽析等分離方法；疏水性是疏水相互作用色譜的分離基礎(chǔ)。3.以下哪種方法可用于檢測生物制品中的內(nèi)毒素？A.鱟試劑法B.酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）C.熒光定量PCRD.質(zhì)譜分析答案：A。鱟試劑法是經(jīng)典的檢測內(nèi)毒素的方法，鱟試劑中的凝固蛋白原可被內(nèi)毒素激活而發(fā)生凝固反應(yīng)。ELISA主要用于檢測抗原或抗體；熒光定量PCR用于核酸的定量檢測；質(zhì)譜分析用于蛋白質(zhì)等生物分子的鑒定和結(jié)構(gòu)分析。4.基因治療中，常用的病毒載體不包括：A.腺病毒載體B.逆轉(zhuǎn)錄病毒載體C.流感病毒載體D.腺相關(guān)病毒載體答案：C。腺病毒載體具有感染效率高、可容納較大外源基因等優(yōu)點；逆轉(zhuǎn)錄病毒載體能將外源基因整合到宿主細胞基因組中；腺相關(guān)病毒載體安全性高、免疫原性低。而流感病毒載體由于其較強的致病性和難以改造等原因，一般不用于基因治療。5.在細胞培養(yǎng)過程中，為防止微生物污染，通常會在培養(yǎng)基中添加：A.抗生素B.生長因子C.血清D.緩沖劑答案：A?？股厝缜嗝顾亍㈡溍顾氐瓤梢种萍毦任⑸锏纳L，防止細胞培養(yǎng)過程中的污染。生長因子用于促進細胞的生長和增殖；血清為細胞提供營養(yǎng)和生長因子等；緩沖劑用于維持培養(yǎng)基的pH穩(wěn)定。6.單克隆抗體的制備過程中，細胞融合使用的細胞是：A.脾細胞和骨髓瘤細胞B.淋巴細胞和巨噬細胞C.成纖維細胞和上皮細胞D.干細胞和神經(jīng)細胞答案：A。單克隆抗體制備時，將免疫小鼠的脾細胞（含產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞）與骨髓瘤細胞進行融合，形成既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞。淋巴細胞和巨噬細胞、成纖維細胞和上皮細胞、干細胞和神經(jīng)細胞的組合均不符合單克隆抗體制備的細胞融合要求。7.以下關(guān)于生物反應(yīng)器的說法，錯誤的是：A.攪拌式生物反應(yīng)器適用于大規(guī)模細胞培養(yǎng)B.氣升式生物反應(yīng)器剪切力較小C.固定床生物反應(yīng)器不利于細胞附著生長D.中空纖維生物反應(yīng)器可模擬體內(nèi)微環(huán)境答案：C。固定床生物反應(yīng)器為細胞提供了較大的表面積，有利于細胞附著生長，常用于貼壁依賴性細胞的培養(yǎng)。攪拌式生物反應(yīng)器可通過攪拌使營養(yǎng)物質(zhì)和氣體均勻分布，適用于大規(guī)模細胞培養(yǎng)；氣升式生物反應(yīng)器通過氣體流動提供混合動力，剪切力較?。恢锌绽w維生物反應(yīng)器的中空纖維可模擬體內(nèi)毛細血管，為細胞提供類似體內(nèi)的微環(huán)境。8.蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)不包括：A.α-螺旋B.β-折疊C.無規(guī)卷曲D.結(jié)構(gòu)域答案：D。蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)主要包括α-螺旋、β-折疊和無規(guī)卷曲。結(jié)構(gòu)域是蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)中相對獨立的折疊單元，不屬于二級結(jié)構(gòu)。9.用于生物制藥的基因工程菌構(gòu)建過程中，常用的載體是：A.質(zhì)粒B.噬菌體C.酵母人工染色體D.以上都是答案：D。質(zhì)粒是最常用的基因工程載體，具有自主復(fù)制能力、多個限制性內(nèi)切酶位點等優(yōu)點；噬菌體可作為載體將外源基因?qū)胨拗骷毎唤湍溉斯と旧w可容納大片段的外源DNA，用于構(gòu)建基因文庫等。所以以上都可作為生物制藥基因工程菌構(gòu)建的載體。10.在生物制品的質(zhì)量控制中，以下哪個指標不屬于安全性指標？A.熱原質(zhì)B.純度C.異常毒性D.過敏反應(yīng)答案：B。純度是衡量生物制品中目標成分含量的指標，屬于有效性指標。熱原質(zhì)、異常毒性和過敏反應(yīng)都與生物制品的安全性相關(guān)，是安全性指標。11.以下哪種技術(shù)可用于分析蛋白質(zhì)的相互作用？A.酵母雙雜交技術(shù)B.基因敲除技術(shù)C.轉(zhuǎn)基因技術(shù)D.RNA干擾技術(shù)答案：A。酵母雙雜交技術(shù)是基于轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)特點，用于檢測蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)之間相互作用的技術(shù)?；蚯贸夹g(shù)用于研究基因的功能；轉(zhuǎn)基因技術(shù)是將外源基因?qū)肷矬w的技術(shù)；RNA干擾技術(shù)用于沉默特定基因的表達。12.生物制藥中，用于發(fā)酵的培養(yǎng)基成分不包括：A.碳源B.氮源C.激素D.無機鹽答案：C。發(fā)酵培養(yǎng)基通常包含碳源（如葡萄糖等）、氮源（如蛋白胨等）和無機鹽（如磷酸鹽、硫酸鹽等）。激素一般不直接作為發(fā)酵培養(yǎng)基的常規(guī)成分，發(fā)酵過程主要通過營養(yǎng)物質(zhì)和培養(yǎng)條件來調(diào)控微生物或細胞的生長和代謝。13.以下關(guān)于疫苗的說法，正確的是：A.減毒活疫苗的安全性高于滅活疫苗B.亞單位疫苗的免疫原性強于全病原體疫苗C.核酸疫苗可同時激發(fā)體液免疫和細胞免疫D.多糖疫苗主要激發(fā)細胞免疫答案：C。核酸疫苗包括DNA疫苗和RNA疫苗，它們可在體內(nèi)表達抗原，既能刺激機體產(chǎn)生抗體（體液免疫），又能激活細胞毒性T淋巴細胞（細胞免疫）。減毒活疫苗由于含有活的病原體，有一定的毒力回復(fù)風險，安全性相對滅活疫苗低；亞單位疫苗只含有病原體的部分成分，免疫原性一般弱于全病原體疫苗；多糖疫苗主要激發(fā)體液免疫。14.細胞培養(yǎng)中，常用的pH緩沖系統(tǒng)是：A.HEPES緩沖系統(tǒng)B.檸檬酸鹽緩沖系統(tǒng)C.碳酸鹽緩沖系統(tǒng)D.以上都是答案：D。HEPES緩沖系統(tǒng)具有良好的緩沖能力，能在較寬的溫度和離子強度范圍內(nèi)保持pH穩(wěn)定；檸檬酸鹽緩沖系統(tǒng)常用于一些特定的細胞培養(yǎng)條件；碳酸鹽緩沖系統(tǒng)與細胞培養(yǎng)環(huán)境中的二氧化碳平衡相關(guān)，可維持細胞培養(yǎng)所需的生理pH。所以以上緩沖系統(tǒng)都可用于細胞培養(yǎng)。15.生物制藥中，蛋白質(zhì)的分離純化步驟一般不包括：A.細胞破碎B.粗分離C.精純化D.基因克隆答案：D。蛋白質(zhì)分離純化的一般步驟包括細胞破碎（釋放目標蛋白質(zhì)）、粗分離（如沉淀、離心等初步分離）和精純化（如色譜分離等進一步純化）。基因克隆是獲取目標基因的過程，不屬于蛋白質(zhì)分離純化步驟。16.以下哪種方法可用于檢測生物制品中的病毒污染？A.電子顯微鏡觀察B.細胞病變效應(yīng)觀察C.病毒核酸檢測D.以上都是答案：D。電子顯微鏡觀察可直接觀察到病毒的形態(tài)；細胞病變效應(yīng)觀察是通過觀察病毒感染細胞后引起的細胞形態(tài)變化來檢測病毒；病毒核酸檢測如PCR等方法可特異性地檢測病毒的核酸。所以以上方法都可用于檢測生物制品中的病毒污染。17.單克隆抗體的親和力測定方法不包括：A.平衡透析法B.酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）C.表面等離子體共振技術(shù)（SPR）D.熒光定量PCR答案：D。平衡透析法是經(jīng)典的測定抗體親和力的方法；ELISA可通過競爭結(jié)合等方式測定抗體的親和力；SPR技術(shù)可實時監(jiān)測抗體與抗原的結(jié)合和解離過程，從而測定親和力。熒光定量PCR用于核酸的定量檢測，不用于單克隆抗體親和力的測定。18.在基因工程中，限制性內(nèi)切酶的作用是：A.切割DNA分子B.連接DNA分子C.擴增DNA分子D.修飾DNA分子答案：A。限制性內(nèi)切酶能識別特定的DNA序列，并在特定部位切割DNA分子。連接DNA分子是DNA連接酶的作用；擴增DNA分子常用PCR技術(shù)；修飾DNA分子有多種酶參與，如甲基化酶等。19.生物制藥中的下游加工過程主要是指：A.細胞培養(yǎng)B.基因工程菌構(gòu)建C.蛋白質(zhì)分離純化和制劑D.疫苗研發(fā)答案：C。生物制藥的下游加工過程是指從培養(yǎng)物中分離、純化目標生物分子，并將其制成合適的制劑的過程，主要包括蛋白質(zhì)分離純化和制劑。細胞培養(yǎng)屬于上游過程；基因工程菌構(gòu)建是獲取表達目標產(chǎn)物的工程菌的過程；疫苗研發(fā)包含上游和下游等多個環(huán)節(jié)。20.以下關(guān)于生物制藥的發(fā)展趨勢，錯誤的是：A.向個性化醫(yī)療方向發(fā)展B.更加注重天然藥物的提取C.基因治療和細胞治療將成為重要領(lǐng)域D.生物制藥與信息技術(shù)的融合將加強答案：B。生物制藥的發(fā)展趨勢包括向個性化醫(yī)療方向發(fā)展，根據(jù)患者的基因信息等制定個性化的治療方案；基因治療和細胞治療作為新興的治療手段，將成為重要領(lǐng)域；生物制藥與信息技術(shù)的融合，如利用大數(shù)據(jù)分析指導(dǎo)藥物研發(fā)等也將加強。而生物制藥更側(cè)重于通過基因工程、細胞工程等現(xiàn)代生物技術(shù)來生產(chǎn)藥物，并非更加注重天然藥物的提取。二、多項選擇題（每題3分，共30分）1.以下屬于生物制藥產(chǎn)品的有：A.重組蛋白藥物B.單克隆抗體藥物C.疫苗D.基因治療藥物答案：ABCD。重組蛋白藥物是通過基因工程技術(shù)生產(chǎn)的具有治療作用的蛋白質(zhì)；單克隆抗體藥物具有高度特異性，可用于多種疾病的治療；疫苗可預(yù)防傳染病等疾??；基因治療藥物通過導(dǎo)入外源基因來治療疾病。它們都屬于生物制藥產(chǎn)品。2.細胞培養(yǎng)過程中，影響細胞生長的因素有：A.溫度B.pHC.溶解氧D.營養(yǎng)物質(zhì)答案：ABCD。溫度會影響細胞內(nèi)酶的活性，從而影響細胞的代謝和生長；pH需維持在適宜范圍，過高或過低都會影響細胞的生理功能；溶解氧是細胞呼吸和代謝所必需的；營養(yǎng)物質(zhì)如氨基酸、葡萄糖等為細胞提供能量和合成物質(zhì)的原料，缺乏會影響細胞生長。3.蛋白質(zhì)的分離純化方法有：A.離子交換色譜B.凝膠過濾色譜C.親和色譜D.疏水相互作用色譜答案：ABCD。離子交換色譜根據(jù)蛋白質(zhì)電荷差異分離；凝膠過濾色譜根據(jù)分子大小分離；親和色譜利用蛋白質(zhì)與配體的特異性結(jié)合分離；疏水相互作用色譜基于蛋白質(zhì)的疏水性差異分離。這些都是常用的蛋白質(zhì)分離純化方法。4.基因治療的策略包括：A.基因替代B.基因修正C.基因添加D.基因沉默答案：ABCD?；蛱娲怯谜；蛱鎿Q有缺陷的基因；基因修正是對有缺陷的基因進行修復(fù)；基因添加是將正?；?qū)爰毎?，不改變原有基因；基因沉默是抑制特定基因的表達。這些都是基因治療的策略。5.生物制藥中常用的宿主細胞有：A.大腸桿菌B.酵母C.哺乳動物細胞D.昆蟲細胞答案：ABCD。大腸桿菌生長迅速、易于培養(yǎng)，常用于表達簡單的重組蛋白；酵母具有真核生物的特點，可進行蛋白質(zhì)的糖基化等修飾；哺乳動物細胞能表達具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)和功能的蛋白質(zhì)；昆蟲細胞可用于表達一些特定的重組蛋白。它們都是生物制藥中常用的宿主細胞。6.疫苗的種類包括：A.減毒活疫苗B.滅活疫苗C.亞單位疫苗D.核酸疫苗答案：ABCD。減毒活疫苗是通過減弱病原體的毒力制成；滅活疫苗是將病原體滅活后制成；亞單位疫苗是提取病原體的部分成分制成；核酸疫苗包括DNA疫苗和RNA疫苗。這些都是常見的疫苗種類。7.生物制品的質(zhì)量控制要點包括：A.安全性B.有效性C.穩(wěn)定性D.純度答案：ABCD。生物制品的質(zhì)量控制需要確保其安全性，避免對人體造成危害；具有有效的治療或預(yù)防效果；在儲存和運輸過程中保持穩(wěn)定；以及達到一定的純度，減少雜質(zhì)的影響。8.以下哪些技術(shù)可用于基因編輯？A.CRISPR/Cas9技術(shù)B.TALEN技術(shù)C.ZFN技術(shù)D.RNA干擾技術(shù)答案：ABC。CRISPR/Cas9技術(shù)、TALEN技術(shù)和ZFN技術(shù)都可對特定的基因序列進行編輯，實現(xiàn)基因的敲除、插入等操作。RNA干擾技術(shù)主要用于抑制基因的表達，不屬于基因編輯技術(shù)。9.單克隆抗體的應(yīng)用領(lǐng)域包括：A.疾病診斷B.疾病治療C.蛋白質(zhì)純化D.藥物研發(fā)答案：ABCD。單克隆抗體可用于疾病的診斷，如免疫檢測等；在疾病治療方面有廣泛應(yīng)用，如癌癥治療等；可作為親和配體用于蛋白質(zhì)的純化；也可用于藥物研發(fā)，如篩選新的藥物靶點等。10.生物制藥生產(chǎn)過程中的質(zhì)量保證體系包括：A.人員培訓(xùn)B.文件管理C.生產(chǎn)過程監(jiān)控D.質(zhì)量檢驗答案：ABCD。人員培訓(xùn)可確保員工具備相應(yīng)的技能和知識；文件管理保證生產(chǎn)過程的記錄和規(guī)范的有效執(zhí)行；生產(chǎn)過程監(jiān)控可及時發(fā)現(xiàn)和解決生產(chǎn)中的問題；質(zhì)量檢驗可保證產(chǎn)品符合質(zhì)量標準。這些都是生物制藥生產(chǎn)過程中質(zhì)量保證體系的重要組成部分。三、簡答題（每題10分，共30分）1.簡述生物制藥中細胞培養(yǎng)的基本條件和操作要點。細胞培養(yǎng)的基本條件包括：-合適的培養(yǎng)基：提供細胞生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)，如氨基酸、維生素、糖類、無機鹽等，同時根據(jù)細胞類型添加血清、生長因子等。-適宜的溫度：一般哺乳動物細胞培養(yǎng)溫度為37℃，昆蟲細胞培養(yǎng)溫度可能為27℃左右。-合適的pH：多數(shù)細胞適宜的pH范圍在7.2-7.4。-氣體環(huán)境：通常需要5%CO?與空氣混合，以維持培養(yǎng)基的pH穩(wěn)定，同時保證充足的氧氣供應(yīng)。-無菌環(huán)境：防止微生物污染。操作要點如下：-細胞復(fù)蘇：從液氮中取出凍存的細胞，迅速放入37℃水浴中解凍，然后接種到含培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中。-細胞傳代：當細胞生長到一定密度時，需要進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞，需用胰蛋白酶等消化后再接種到新的培養(yǎng)瓶中；懸浮細胞可直接進行傳代。-細胞凍存：在細胞生長狀態(tài)良好時，用凍存液（如含10%DMSO的培養(yǎng)基）將細胞制成細胞懸液，緩慢降溫至-80℃，再轉(zhuǎn)移到液氮中保存。-無菌操作：在超凈工作臺中進行操作，所用器械和培養(yǎng)基等都需經(jīng)過嚴格的滅菌處理。2.請說明單克隆抗體的制備原理和主要步驟。制備原理：單克隆抗體是由單一B淋巴細胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。其制備基于B淋巴細胞能產(chǎn)生抗體，但不能在體外無限增殖，而骨髓瘤細胞能在體外無限增殖但不能產(chǎn)生抗體。通過細胞融合技術(shù)將免疫小鼠的脾細胞（含產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞）與骨髓瘤細胞融合，形成雜交瘤細胞，該細胞既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體。主要步驟：-免疫動物：用特定抗原免疫小鼠，使小鼠體內(nèi)產(chǎn)生針對該抗原的B淋巴細胞。-細胞融合：取免疫小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞在聚乙二醇等融合劑的作用下進行融合。-篩選雜交瘤細胞：將融合后的細胞接種到選擇性培養(yǎng)基（如HAT培養(yǎng)基）中，未融合的脾細胞和骨髓瘤細胞不能存活，只有雜交瘤細胞能生長。-篩選分泌特異性抗體的雜交瘤細胞：采用ELISA等方法篩選出能分泌針對目標抗原的特異性抗體的雜交瘤細胞。