.前言結(jié)腸癌是全球常見的惡性腫瘤之一，常發(fā)生于結(jié)腸部位的消化道或發(fā)于直腸與乙狀結(jié)腸交界處。結(jié)腸癌的發(fā)病率較高，尤其是在40～50歲年齡段發(fā)病率最高[1]，通常男女之比為2～3：1[2]，結(jié)腸癌發(fā)病率占胃腸道腫瘤的第3位[3]。結(jié)腸癌主要分為腺癌、粘液癌、未分化癌，大體形態(tài)腫塊狀（菜花型）、浸潤(rùn)型（縮窄型）、潰瘍型等[4]。結(jié)腸癌可沿腸壁環(huán)行發(fā)展轉(zhuǎn)移，沿腸管縱徑上下蔓延伸展或向腸壁深層浸潤(rùn)等，除經(jīng)淋巴管、血液轉(zhuǎn)移和局部侵犯外，還可向腹腔內(nèi)種植或沿縫線、切口面擴(kuò)散轉(zhuǎn)移[5]。據(jù)研究，結(jié)腸癌發(fā)病主要與人們?nèi)粘Ｉ钕嚓P(guān)，如高脂肪和低纖維素飲食等。研究發(fā)現(xiàn)有結(jié)腸息肉患者，其結(jié)腸癌發(fā)生率是無結(jié)直腸息肉患者的5倍[6]。另外，結(jié)腸癌的發(fā)病與遺傳因素有很大關(guān)聯(lián)。結(jié)腸癌患者早期可以沒有任何癥狀，中晚期?？杀憩F(xiàn)為腹脹、消化不良，而后出現(xiàn)排便習(xí)慣改變，腹痛，黏液便或黏血便等[7]癥狀。如果腫瘤潰爛、失血、毒素吸收后，常出現(xiàn)貧血、低熱、乏力、消瘦、下肢水腫等癥狀[8]。而出現(xiàn)腹脹、腹痛、便秘或不能排便[9]，或者體檢見腹部膨隆、腸型、局部有壓痛，聽診聞及腸鳴音等狀況，提示可能出現(xiàn)不全性或完全性腸梗阻。若腫瘤與網(wǎng)膜、周圍組織浸潤(rùn)粘連，形成不規(guī)則包塊[10]。晚期可出現(xiàn)黃疸、腹腔積液、水腫等肝、肺轉(zhuǎn)移征象，惡病質(zhì)，鎖骨上淋巴結(jié)腫大等腫瘤遠(yuǎn)處擴(kuò)散轉(zhuǎn)移的表現(xiàn)[11]。根據(jù)臨床結(jié)果，結(jié)腸癌發(fā)病的部位不同，患者臨床表現(xiàn)狀況也不同。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Fibroblastgrowthfactors，F(xiàn)GFs)家族目前至少由22個(gè)成員組成[12],而成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體（FGFR）家族成員有FGFRL1(FGFR5)、FGFR1、FGFR2、FGFR3以及FGF4這5個(gè)成員組成，共同構(gòu)成FGF/FGFR信號(hào)通路[13]。人們發(fā)現(xiàn)該通路在類型廣泛的各種細(xì)胞中調(diào)控著一些基礎(chǔ)性的細(xì)胞活動(dòng)。如細(xì)胞增殖、分化、創(chuàng)傷修復(fù)和血管生成[14]等。諸多研究證實(shí)FGF的擴(kuò)增或過表達(dá)、多態(tài)性、異位表達(dá)及其受體被阻斷等情況與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，如白血病、膀胱癌、乳腺癌、肉瘤、結(jié)腸癌、胰腺癌和前列腺癌等。而且很多也已被報(bào)道，如膀胱癌、乳腺癌、宮頸癌、結(jié)腸癌、骨髓瘤和胃癌等[15],成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子樣受體1(Fibroblastgrowthfactorreceptor-like1，F(xiàn)GFRL1)是FGFR家族新成員，F(xiàn)GFR家族的其他成員功能已經(jīng)比較明確了。研究報(bào)道，miR-210能通過抑制FGFRL1表達(dá)從而抑制食道癌細(xì)胞增殖[16]。此外，F(xiàn)GFRL1能夠與Hedgehog信號(hào)通路相互作用促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞增殖。上述證據(jù)顯示，F(xiàn)GFRL1可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖，從而促進(jìn)腫瘤發(fā)生[17]。但是FGFRL1調(diào)控腫瘤發(fā)生的生物學(xué)功能及其具體的作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步的研究和驗(yàn)證。本論文中，首先利用公共數(shù)據(jù)庫(kù)中的蛋白質(zhì)芯片或DNA芯片數(shù)據(jù)，從人類全蛋白總集中抽取與FGFRL1在蛋白定位、表達(dá)、相互結(jié)合、上下游調(diào)控關(guān)系這幾個(gè)方面存在潛在關(guān)聯(lián)的蛋白，形成FGFRL1潛在關(guān)聯(lián)蛋白總網(wǎng)絡(luò)。結(jié)果顯示，F(xiàn)GFRL1與增殖相關(guān)蛋白、遷移相關(guān)蛋白、代謝相關(guān)蛋白具有較強(qiáng)關(guān)聯(lián)性，提示FGFRL1可能調(diào)控細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)移或代謝。因此，我們以結(jié)腸癌細(xì)胞SW480為模型，進(jìn)一步驗(yàn)證FGFRL1是否具有調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移的功能。2.實(shí)驗(yàn)器材及配制溶液2.1主要材料結(jié)腸癌細(xì)胞SW480（中科院上海細(xì)胞庫(kù)）2.2試劑（1）DMEM/HIGHGLUCOSE(HyClone)（2）PageRulerPrestainedProteinLadder(Thermo)(3)SFM無血清培養(yǎng)基（4）shRNA轉(zhuǎn)染試劑2.3主要配制溶液(1)磷酸鹽緩沖溶液（PBS）稱取7.90gNaCl粉末，0.21gKCl粉末，0.24gKH2PO4粉末和1.80gK2HPO4粉末，溶于800mL蒸餾水中，用鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4，最后加蒸餾水定容至1L。保存于4℃冰箱中。(2)0.25%胰酶溶液稱取0.25g胰蛋白酶粉末，溶于100mLPBS溶液中，在生物安全柜內(nèi)混勻后，使用0.22μm濾嘴過濾除菌，4℃冰箱保存。(3)細(xì)胞凍存液取50mL離心管加入10%DMSO和90%配制好的新鮮的DMEM培養(yǎng)基，使用0.22μm濾嘴過濾除菌，4℃冰箱保存。(4)雙抗配制（商品化）鏈霉素（四川制藥制劑有限分公司）、青霉素（四川制藥制劑有限分公司）稀釋至100萬個(gè)單位，使用0.22μm濾嘴過濾除菌，在-20℃冰箱保存。2.4主要儀器設(shè)備（1）程序降溫盒（Nalgene）（2）普通離心機(jī)（Thermo）、冷凍離心機(jī)（Thermo）（3）電子天平（METTLERTOLEDO）（4）超凈工作臺(tái)（蘇州安泰）、生物安全柜(Thermo)（5）液氮罐（成都金鳳液氮罐）（6）制冰機(jī)（CastelMAC）（7）恒溫?fù)u床（QILINBETER）（8）pH計(jì)（phs-320，成都試劑方舟科技有限公司）（9）CO2恒溫培養(yǎng)箱（Thermo）（10）冷凍離心機(jī)（Thermo）（11）正置顯微鏡（Nikon）（12）熒光倒置相差顯微鏡（Olympus）（13）純水儀（SARTORIUS）（14）干燥箱（上海齊欣科學(xué)儀器廠）（15）-20℃冰箱、-80℃冰箱（榮事達(dá)BCD-265;美菱BCD-238）（16）電熱恒溫水浴鍋（S.HH.W21-600-II）（18）滅菌鍋（上海申安醫(yī)療器械廠）2.5相關(guān)應(yīng)用軟件（1）DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)(/)（2）geneontology工具(GOTERMCCALL)（3）Kyotoencyclopediaofgenesandgenomes(KEGG)數(shù)據(jù)庫(kù)3.實(shí)驗(yàn)方法3.1生物信息學(xué)3.1.1構(gòu)建蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)首先利用公共數(shù)據(jù)庫(kù)中的蛋白質(zhì)芯片或DNA芯片數(shù)據(jù)，尋找FGFRL1潛在相關(guān)蛋白，構(gòu)建FGFRL1的潛在相關(guān)蛋白網(wǎng)絡(luò)。將蛋白的定位具有相關(guān)性，表達(dá)具有相關(guān)性，存在相互結(jié)合，存在上下游調(diào)控關(guān)系等的相關(guān)蛋白，通過不同權(quán)重進(jìn)行整合，從人類全蛋白總集中抽取與FGFRL1存在潛在關(guān)聯(lián)的蛋白，形成FGFRL1潛在關(guān)聯(lián)蛋白總網(wǎng)絡(luò)。（在關(guān)聯(lián)蛋白與FGFRL1連線的長(zhǎng)度代表關(guān)聯(lián)性的強(qiáng)弱）3.1.2蛋白功能聚類與信號(hào)通路分析利用DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)(/)對(duì)FGFRL1潛在關(guān)聯(lián)蛋白進(jìn)行功能分類。使用geneontology工具(GOTERMCCALL)整合上述信息進(jìn)行信號(hào)通路分析。首先，從Kyotoencyclopediaofgenesandgenomes(KEGG)數(shù)據(jù)庫(kù)獲取蛋白質(zhì)的GO（geneontology）功能注釋，所在生理過程分類以及所在信號(hào)通路分類等信息進(jìn)行分析。將所有關(guān)聯(lián)蛋白都使用在UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)中的登陸號(hào)作為唯一標(biāo)識(shí)。使用Fisher檢驗(yàn)確認(rèn)分類結(jié)果的可信度。只有當(dāng)P<0.05時(shí)，我們認(rèn)為分類結(jié)果可信。將隸屬于同一功能的FGFRL1潛在關(guān)聯(lián)蛋白整合為一個(gè)子網(wǎng)絡(luò)，潛在關(guān)聯(lián)蛋白與FGFRL1連線的長(zhǎng)度代表關(guān)聯(lián)性的強(qiáng)弱。最后，只選取蛋白數(shù)量大于35個(gè)蛋白的子網(wǎng)絡(luò)。（按照慣例，我們認(rèn)為這些子網(wǎng)絡(luò)涉及的功能是FGFRL1的主要功能；我們忽略蛋白數(shù)量小于35的子網(wǎng)絡(luò)，我們認(rèn)為小于35個(gè)蛋白的網(wǎng)絡(luò)不是FGFRL1的主要功能。）分析得到FGFRL1潛在相關(guān)蛋白的相關(guān)功能，從而推測(cè)出FGFRL1可能的功能。3.2細(xì)胞培養(yǎng)3.2.1細(xì)胞的復(fù)蘇（1）打開水浴鍋預(yù)熱溫度至37℃，然后迅速用鑷子從液氮罐中取出凍存的細(xì)胞放置于37℃的水浴鍋中快速融化[18]。（2）待細(xì)胞完全溶解后(在超凈工作臺(tái)內(nèi)操作)轉(zhuǎn)移到15mL離心管中，加入5.0mL新鮮DMEM培養(yǎng)基，輕輕吹打均勻混合，于800rpm離心5min。棄上清，加入2mL新鮮培養(yǎng)基重懸混合均勻，然后轉(zhuǎn)移至25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶，再加入3.0mL新鮮培養(yǎng)基，搖勻后放于37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。3.2.2細(xì)胞的培養(yǎng)（1）換液：根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，細(xì)胞密度未到達(dá)的80%時(shí)，則進(jìn)行換液處理，去除培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，重新加入5mL的新鮮培養(yǎng)基。放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。（2）傳代：當(dāng)細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中的生長(zhǎng)面積在80%以上時(shí)，可進(jìn)行傳代。在超凈工作臺(tái)內(nèi)，首先，倒去培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，加入2mL滅菌PBS溶液進(jìn)行洗滌，重復(fù)2次操作，以去除殘余的血清；然后，向培養(yǎng)瓶中加入2mL胰蛋白酶溶液進(jìn)行消化，待細(xì)胞消化完全后，向培養(yǎng)瓶中加入3mL新鮮培養(yǎng)基中和胰酶溶液，輕輕吹打下細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至15mL的離心管中，使用離心機(jī)800rpm離心3min，棄除上清，向離心管中再加入1mL新鮮培養(yǎng)基均勻混合，使用血球計(jì)數(shù)板統(tǒng)計(jì)細(xì)胞數(shù)量，最后根據(jù)細(xì)胞密度將細(xì)胞加入新的培養(yǎng)瓶中，取新鮮培養(yǎng)基補(bǔ)足至5mL，完成后放于37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。3.2.3細(xì)胞的凍存首先使倒去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，之后用2mL滅菌PBS溶液進(jìn)行洗滌2次，以去除殘余的血清；然后向培養(yǎng)瓶中加入2mL胰蛋白酶溶液，待細(xì)胞消化完全后轉(zhuǎn)移至15mL離心管中，使用離心機(jī)800rpm離心5min，棄上清后，使用細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，用血球計(jì)數(shù)板統(tǒng)計(jì)細(xì)胞數(shù)量，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量?jī)龃婕?xì)胞。每支凍存管加入1mL的凍存液，在凍存管上標(biāo)注細(xì)胞名稱、使用培養(yǎng)基等類型、凍存的時(shí)間等信息后，將保種管放入程序降溫盒置于溫度為-80℃冰箱，第二天再轉(zhuǎn)移至液氮罐中長(zhǎng)久保存。3.2.4細(xì)胞轉(zhuǎn)染（1）細(xì)胞鋪板：在六孔板中鋪細(xì)胞（實(shí)際：180000個(gè)/每孔）并加入2mLDMEM培養(yǎng)基，然后將六孔板放入37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（2）第二天吸掉六孔板中的培養(yǎng)基，重新加入2mL的新鮮DMEM培養(yǎng)基，并且標(biāo)記六孔板從左到右，由上至下，依次1-6號(hào)。（1、2號(hào)作為空白對(duì)照加入2mL培養(yǎng)基；3、4號(hào)加入2mLDMEM+轉(zhuǎn)染試劑稀釋液（10mL轉(zhuǎn)染試劑與100μLSFM）+片段一shRNA稀釋液（8mLshRNA與100μLSFM）；5、6號(hào)加入2mLDMEM+轉(zhuǎn)染試劑稀釋液（10mL轉(zhuǎn)染試劑與100μLSFM）+片段二shRNA稀釋液（8mLshRNA與100μLSFM））。用1.5mL離心管把10μL的轉(zhuǎn)染液用100μLSFM稀釋（每孔）4；用1.5mL離心管把2μL的shRNA用100mLSFM稀釋。轉(zhuǎn)染稀釋液與shRNA稀釋液需在shRNA稀釋后5分鐘內(nèi)與轉(zhuǎn)染稀釋液混勻，勿震蕩混勻。轉(zhuǎn)染稀釋液與shRNA稀釋液混勻后室溫（+15°—+25°）孵育15分鐘。孵育后小心的加入到每孔中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（3）適時(shí)觀察換液。轉(zhuǎn)染完成后收集細(xì)胞，保種。3.2.5細(xì)胞的觀察轉(zhuǎn)染完成后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞，達(dá)到72h，將細(xì)胞從37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱取出，放置于正置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，在合適的視野拍下細(xì)胞圖片。3.3克隆形成(1)細(xì)胞轉(zhuǎn)染48h后，將細(xì)胞用0.25%胰蛋白酶消化后，轉(zhuǎn)移到15mL離心管于離心機(jī)中800rpm離心3min，棄上清液，再向離心管中加入新鮮培養(yǎng)基吹打細(xì)胞，并把細(xì)胞懸浮在10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中備用。(2)將細(xì)胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋，每組細(xì)胞以每孔100個(gè)細(xì)胞的密度接種在六孔板中，每孔加入2mL37℃預(yù)溫培養(yǎng)液，并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，使細(xì)胞分散均勻。放置于37℃、5%CO2及飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(3)經(jīng)常觀察細(xì)胞，當(dāng)六孔板中出現(xiàn)肉眼可見的克隆時(shí)，終止培養(yǎng)。移液槍吸取棄去上清液，每孔加入1mLPBS小心浸洗2次。之后每孔加入2mL4%多聚甲醛固定細(xì)胞，固定15分鐘。然后移液槍去除固定液，加入適量GIMSA應(yīng)用染色液染色10～30分鐘，然后加入清水緩慢沖洗，去除染色液，在空氣中自行干燥。(4)用肉眼直接計(jì)數(shù)克隆，在顯微鏡（低倍鏡）觀察，并拍下圖片。3.4Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)(1)將侵襲小室放入培養(yǎng)板中，在上室加入300uL預(yù)溫的無血清培養(yǎng)基，室溫下靜置30?min，使基質(zhì)膠再水化，再吸去剩余培養(yǎng)液。(2)接種細(xì)胞轉(zhuǎn)染細(xì)胞24h后，將制取細(xì)胞懸液100μL加入Transwell小室。使用24孔板培養(yǎng)，在下室加入500μL含10%胎牛血清的培養(yǎng)基，避免下層培養(yǎng)液和小室間氣泡的產(chǎn)生。培養(yǎng)細(xì)胞48h。(3)結(jié)果觀察固定細(xì)胞：用移液槍吸出小室培養(yǎng)液并舍棄，每孔加入500uLPBS緩沖液洗細(xì)胞，重復(fù)2次。用移液槍吸盡殘余的液體，加入4%多聚甲醛，固定30分鐘。每孔加入使用0.1%結(jié)晶紫染色20min，用棉簽輕輕擦掉上層未遷移細(xì)胞，加入PBS清洗，重復(fù)3遍，在顯微鏡下觀察并拍照。4實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1生物信息學(xué)實(shí)驗(yàn)通過蛋白質(zhì)分析網(wǎng)絡(luò)尋找FGFRL1的潛在相關(guān)蛋白。首先建立與FGFRL1存在潛在關(guān)聯(lián)的蛋白的總集，然后根據(jù)蛋白功能對(duì)關(guān)聯(lián)蛋白進(jìn)行分類，最后分析潛在相關(guān)蛋白，進(jìn)而根據(jù)關(guān)聯(lián)蛋白的功能推測(cè)FGFRL1的功能。如圖（A）。圖AFGFRL1潛在蛋白功能分析過程圖PPI：protein-protein

interaction，即蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用。PPI網(wǎng)絡(luò)中的每個(gè)結(jié)點(diǎn)代表一種蛋白質(zhì)，兩個(gè)點(diǎn)之間的一條邊(一般是有向的)代表他們之間的某種關(guān)系。4.1.1利用公共數(shù)據(jù)庫(kù)中的蛋白質(zhì)芯片或DNA芯片數(shù)據(jù)，獲取蛋白的定位具有相關(guān)性，表達(dá)具有相關(guān)性，存在相互結(jié)合，存在上下游調(diào)控關(guān)系等證據(jù)，從人類全蛋白總集中抽取與FGFRL1存在潛在關(guān)聯(lián)的蛋白，形成FGFRL1潛在關(guān)聯(lián)蛋白總網(wǎng)絡(luò)。我們一共發(fā)現(xiàn)1839個(gè)潛在關(guān)聯(lián)蛋白。如圖(B)。圖BFGFRL1潛在相關(guān)蛋白網(wǎng)絡(luò)圖(不同顏色代表不同功能的蛋白質(zhì)，同一顏色為相同功能的蛋白質(zhì))得到共七類不同的蛋白質(zhì)。Regulationofcellproliferation；細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)Cellmigration:細(xì)胞轉(zhuǎn)移Cellcycle:細(xì)胞周期Celladhesion:細(xì)胞粘附Cellmaturation:細(xì)胞成熟Regulationofcellgrowth:細(xì)胞生長(zhǎng)的調(diào)節(jié)Zincmetabolism:鋅代謝4.1.2利用潛在關(guān)聯(lián)蛋白與FGFRL1連線的長(zhǎng)度代表關(guān)聯(lián)性的強(qiáng)弱。相關(guān)功能蛋白個(gè)數(shù)小于35（按照慣例，自行設(shè)定）的一類蛋白都將舍棄。所有關(guān)聯(lián)蛋白的關(guān)聯(lián)度均通過Fisher檢驗(yàn)確認(rèn)(P<0.05)，如圖(C)。圖CFisher檢驗(yàn)分析得到的FGFRL1與其潛在關(guān)聯(lián)蛋白關(guān)聯(lián)性強(qiáng)弱分析圖4.1.3接著，我們利用Kyotoencyclopediaofgenesandgenomes(KEGG)數(shù)據(jù)庫(kù)中的蛋白質(zhì)功能（GeneOntology注釋）對(duì)關(guān)聯(lián)蛋白進(jìn)行功能分類與信號(hào)通路分析。發(fā)現(xiàn)FGFRL1主要增殖相關(guān)蛋白（圖D）、遷移相關(guān)蛋白(圖E)、代謝相關(guān)蛋白(圖F)這三類蛋白具有較強(qiáng)關(guān)聯(lián)性。圖DFGFRL1與增殖相關(guān)蛋白關(guān)聯(lián)性圖（其潛在相關(guān)蛋白數(shù)量較多，關(guān)聯(lián)性較強(qiáng)）圖EFGFRL1與轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白關(guān)聯(lián)性圖（其潛在相關(guān)蛋白數(shù)量多，關(guān)聯(lián)性強(qiáng)）圖FFGFRL1與代謝相關(guān)蛋白關(guān)聯(lián)性圖（其潛在相關(guān)蛋白數(shù)量最多，關(guān)聯(lián)性強(qiáng)）上述結(jié)果顯示FGFRL1與細(xì)胞增殖遷移代謝相關(guān)蛋白關(guān)聯(lián)性強(qiáng)，故說明FGFRL1可能調(diào)控細(xì)胞增殖，遷移或代謝。4.2克隆形成實(shí)驗(yàn)為了驗(yàn)證FGFRL1是否能夠調(diào)控細(xì)胞增殖，我們以結(jié)腸癌細(xì)胞SW480為模型，通過shRNA干擾FGFRL1的表達(dá)，克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示抑制FGFRL1蛋白表達(dá)后，細(xì)胞克隆數(shù)量與對(duì)照組相比，顯著減少，如圖G。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明蛋白FGFRL1對(duì)SW480細(xì)胞增殖有一定促進(jìn)作用。圖G細(xì)胞克隆形成結(jié)果圖(Mock組為轉(zhuǎn)染空載體質(zhì)粒對(duì)照。細(xì)胞轉(zhuǎn)染后24h，將各組細(xì)胞按照100個(gè)/孔接種至6孔板)4.3細(xì)胞形態(tài)觀察干擾結(jié)腸癌細(xì)胞SW480中FGFRL1蛋白表達(dá)后，培養(yǎng)得到的SW480細(xì)胞形態(tài)與正常SW480細(xì)胞形態(tài)有顯著差異，正常SW480細(xì)胞呈梭形，shRNA處理組的細(xì)胞呈多邊形，細(xì)胞之間粘附較強(qiáng)，空隙較少（如圖H）。結(jié)果表明正常組細(xì)胞形態(tài)便于轉(zhuǎn)移，提示FGFRL1蛋白有助于細(xì)胞轉(zhuǎn)移。圖H細(xì)胞形態(tài)圖(Mock組為轉(zhuǎn)染空載體質(zhì)粒對(duì)照，轉(zhuǎn)染后72h，于顯微鏡下觀察)4.4Transwell實(shí)驗(yàn)為了進(jìn)一步驗(yàn)證FGFRL1對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響，我們干擾SW480細(xì)胞內(nèi)蛋白FGFRL1的表達(dá)，然后進(jìn)行Transwell實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示抑制FGFRL1蛋白表達(dá)后，細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力相比對(duì)照組顯示降低（如圖I）。故從另一個(gè)方面證明FGFRL1對(duì)SW480細(xì)胞的轉(zhuǎn)移有促進(jìn)作用。圖I細(xì)胞Transwell結(jié)果圖(Mock組為轉(zhuǎn)染空載體質(zhì)粒對(duì)照。細(xì)胞轉(zhuǎn)染后24h，將各組細(xì)胞接種至Transwell小室，繼續(xù)培養(yǎng)48h。)5.討論腫瘤為危害全球人類健康和生命的第二大疾病，而且腫瘤的因治療相當(dāng)困難，尤其是惡性腫瘤的治療，癌癥患者的生存率相當(dāng)?shù)?，治療費(fèi)用也非常昂貴，患者家庭負(fù)擔(dān)巨大。結(jié)腸癌是我國(guó)常見惡性腫瘤之一，近年來發(fā)病率呈上升趨勢(shì)[19]，因此，人們愈來愈重視如何預(yù)防結(jié)腸癌的發(fā)生，怎樣降低其發(fā)病率和如何早期發(fā)現(xiàn)并積極治療。結(jié)腸癌的發(fā)病原因目前尚未完全明了，不過大量研究結(jié)果表明，結(jié)腸癌的發(fā)生與人們?nèi)粘Ｉ罘绞?、飲食?xí)慣等密切相關(guān)。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGFs)通過作用于其受體(成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體，F(xiàn)GFRs)，該信號(hào)通路在許多生理過程中發(fā)揮重要作用，如胚胎形成、創(chuàng)傷修復(fù)、血管生成等[20,21]。近年來許多研究證據(jù)表明FGFRs是某些癌癥的驅(qū)動(dòng)基因，并且以“細(xì)胞自治”的方式維持腫瘤細(xì)胞的惡性特征，它們通過誘導(dǎo)促有絲分裂和生存信號(hào)、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移、促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、促進(jìn)血管生成及參與腫瘤復(fù)發(fā)耐藥作用，作為癌基因參與腫瘤發(fā)生發(fā)展進(jìn)程的多重步驟，但也有研究證實(shí)FGFR信號(hào)在某些腫瘤類型中具有抑制腫瘤的功能[21,22,23]。這些研究結(jié)果使得FGFRs成為越來越具有吸引力的癌癥治療新靶點(diǎn)。而FGFRL1是FGFR家族新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)成員，對(duì)于其在癌癥發(fā)生發(fā)展中的功能研究還比較少，但是該信號(hào)通路研究很多，有很多研究表明FGFR家族蛋白有望作為癌癥治療新靶點(diǎn)。我們對(duì)于FGFRL1的研究正是基于這些基礎(chǔ)。本次研究中，每種實(shí)驗(yàn)結(jié)果至少重復(fù)了三次以上，來確定實(shí)驗(yàn)結(jié)果的非偶然性以及減少實(shí)驗(yàn)的誤差。首先，我們利用公共數(shù)據(jù)庫(kù)中的蛋白質(zhì)芯片或DNA芯片數(shù)據(jù)，獲取蛋白的定位具有相關(guān)性，表達(dá)具有相關(guān)性，存在相互結(jié)合，存在上下游調(diào)控關(guān)系等證據(jù)，從人類全蛋白總集中抽取與FGFRL1存在潛在關(guān)聯(lián)的蛋白，形成FGFRL1潛在關(guān)聯(lián)蛋白總網(wǎng)絡(luò)。首先我們利用DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)(/)對(duì)FGFRL1潛在關(guān)聯(lián)蛋白進(jìn)行功能分類。然后使用geneontology工具(GOTERMCCALL)整合上述信息進(jìn)行信號(hào)通路分析。在之后從Kyotoencyclopediaofgenesandgenomes(KEGG)數(shù)據(jù)庫(kù)獲取蛋白質(zhì)的GO功能注釋，所在生理過程分類以及所在信號(hào)通路分類等信息。所有關(guān)聯(lián)蛋白的關(guān)聯(lián)度均通過Fisher檢驗(yàn)確認(rèn)(P<0.05)，我們利用Kyotoencyclopediaofgenesandgenomes(KEGG)數(shù)據(jù)庫(kù)中的蛋白質(zhì)功能GO注釋對(duì)關(guān)聯(lián)蛋白進(jìn)行功能分類與信號(hào)通路分析。提示FGFRL1可能調(diào)控細(xì)胞增殖，轉(zhuǎn)移或代謝[24]。最后，我們選擇結(jié)腸癌細(xì)胞SW480為模型，我們利用shRNA干擾蛋白FGFRL1在該細(xì)胞中的表達(dá)，進(jìn)行細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)，觀察干擾FGFRL1表達(dá)后細(xì)胞形態(tài)的變化，以及進(jìn)行Transwell實(shí)驗(yàn)。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明FGFRL1能夠促進(jìn)SW480細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移，但是FGFRL1調(diào)控細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移的具體作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。6.結(jié)論本次研究明確了蛋白FGFRL1對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移有重要作用，但是其中具體的分子作用機(jī)制仍然需要進(jìn)一步研究探討。參考文獻(xiàn)[1]張維燕,黃嬌,魯春梅.腹腔鏡結(jié)腸癌手術(shù)與開腹手術(shù)的護(hù)理效果對(duì)比[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2014,35(9):1389-1390.[2]吳雅春.自噬在結(jié)腸癌及胃癌細(xì)胞體外藥物干預(yù)過程中的作用研究[D].浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院,2010.[3]趙勇[1].完整結(jié)腸系膜切除術(shù)與傳統(tǒng)根治術(shù)治療結(jié)腸癌臨床療效及短期預(yù)后對(duì)比分析[J].解放軍醫(yī)藥雜志,2017.[4]李暢,杜敏,辛雪琳.結(jié)腸癌病人應(yīng)用加速康復(fù)外科護(hù)理的意義研究[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊,2017(1).[5]趙俠,楊定會(huì).結(jié)腸癌完整結(jié)腸系膜切除術(shù)與傳統(tǒng)根治術(shù)對(duì)比分析[J].數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志,2018,v.31(09):53-54.[6]孫長(zhǎng)征.結(jié)腸癌并發(fā)腸梗阻應(yīng)用手術(shù)治療的臨床效果研究[J].中外醫(yī)療,2017,36(2):73-74.[7]高鵬.結(jié)腸癌合并急性闌尾炎的臨床特點(diǎn)[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2001,11(1):65-66.[8]張曉霞,楊玲,王朝歆,etal.應(yīng)用超聲在潰瘍性結(jié)腸炎與結(jié)腸癌中的對(duì)比研究[J].中外醫(yī)療,2017(27).[9]郭曉艷.CT診斷術(shù)前結(jié)腸癌以及術(shù)后結(jié)腸癌復(fù)發(fā)的臨床價(jià)值[J].中國(guó)CT和MRI雜志,2014,12(5):81-83.[10]盧月月,謝瓊,彭洋,等.腹腔鏡根治術(shù)與傳統(tǒng)開腹手術(shù)治療結(jié)腸癌效果比較[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2015,24(12):1336-1337.[11]張麗軍,孫理.飲食不當(dāng)易誘發(fā)結(jié)腸癌[J].中國(guó)醫(yī)藥指南,2006(10):36-37.[12]ItohN，OrnitzDM．EvolutionoftheFgfandFgfrgenefamilies［J］．TrendsGenet，2004，20(11):563-569．[13]Hu’ghesSE.DIFFER’E=``NTIALEXPRESSIONOFT/EFIBROBLASTGROWTHFACTORRECEPT’OR(FGFR)MULTI’G/E`NE=FAMILYINNORM`ALHUM`ANA`DULTTISSU`ES[J].JournalofHistoc’hemistr`yandCytochem`istry,1997,45(7):1005-1019.[14]MatakidouA，ElGaltaR，RuddMF，etal．FurtherobservationsontherelationshipbetweentheFGFR4Gly388’/Argpolym’orph’smandlu’ngcan’cerprognosis［J］．BrJCancer，2007，96(12):1904-1907．[15]MiuraS，MitsuhashiN，ShimizuH，etal．Fibroblastgrowthfactor19expressioncorrelateswithtumorprogressionandpoorerprognosisofhepatocellularcarcinoma［J］．BMCCancer，2012，12:56．[16]史孟婧,趙遠(yuǎn)鵬,鄒仲敏,etal.MiR-210在缺氧中調(diào)控機(jī)制的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2013,13(16).[17]王魯平,楊善明,陳健,etal.TR6-RNA干擾技術(shù)對(duì)人SW480結(jié)腸癌細(xì)胞系惡性表型的影響[C]//中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2005年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編.2005.[18]厲菁,袁義強(qiáng),張宇,張華,張傳西,王杰明.mir-92a對(duì)H9C2心肌細(xì)胞增殖、凋亡及Wnt信號(hào)通路的影響.中國(guó)老年學(xué)雜志.2018(10).[19]李毅,莊嚴(yán).完整結(jié)腸系膜切除對(duì)結(jié)腸癌手術(shù)患者的療效[J].安徽醫(yī)學(xué),2017(07):81-83.[20]張闊,陳燕,郭延霞.靶向治療在卵巢癌中的研究進(jìn)展[J].河北聯(lián)合大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）,2014(2):173-175.[21]張靜,李曉莉,王萌,etal.成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體-癌癥治療新靶點(diǎn)[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2015,15(17):3393-3397.[22]成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體抑制劑BGJ398對(duì)腎癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[J].中華腔鏡泌尿外科雜志（電子版）,2017(4).[23]史雨晨,柳景華.成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體１在大鼠各組織中的表達(dá)[J].新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2016,33(11):945-949.[24]胡光亮,王子健,李文媛,etal.Krupple樣轉(zhuǎn)錄因子促進(jìn)軸突生長(zhǎng)的研究進(jìn)展[J].牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2017(03):129-133.致謝時(shí)光匆匆如流水，轉(zhuǎn)眼便是大學(xué)畢業(yè)時(shí)節(jié)，回首走過的點(diǎn)點(diǎn)滴滴，心中無限感慨。四年的大學(xué)生活讓我成長(zhǎng)許多，這些成長(zhǎng)離不開一直以來給予我無私幫助和關(guān)愛的老師們，離不開朝夕相處的同學(xué)們，離不開給予我鼓勵(lì)和支持的父母，親人。在這里，我首先要向李靜怡老師致以誠(chéng)摯的敬意和衷心的感謝！正是在李老師的悉心指導(dǎo)和大力支持下，我才能順利完成本次論文。從大學(xué)二年級(jí)加入李靜怡老師實(shí)驗(yàn)室，李老師就對(duì)我關(guān)懷備至，李老師學(xué)識(shí)淵博、視野開闊、思維敏銳，給了我深深的影響。而且，在畢業(yè)論文實(shí)驗(yàn)過程中我也學(xué)到了許多了生物信息學(xué)方面的知識(shí)，論文的寫作過程中，遇到了各種各樣的問題，在老師的耐心指導(dǎo)下，問題才能得以解決。這些都將成為我一生的財(cái)富。然后我將感謝成都醫(yī)學(xué)院生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院的老師們的關(guān)心和照顧，感謝你們的諄諄教誨，是你們教導(dǎo)我獲得豐富的專業(yè)知識(shí)，學(xué)會(huì)了如何與人相處，是你們的鼓勵(lì)和幫助讓我擁有一個(gè)美好的大學(xué)生活。其次，我還要真誠(chéng)地謝謝15級(jí)生物制藥班的同學(xué)們，我們攜手度過四年，你們給予了我很多幫助，我的成長(zhǎng)同樣離不開你們。感謝我們室友們-劉剛、黃侗、稅新東、李俊良，感謝你們的照顧和陪伴，我的大學(xué)生活因?yàn)橛心銈兌泳省Ｗ詈?，我要感謝我的父母及家人，是你們對(duì)我無私的關(guān)愛，讓我深深感受到了生活的美好。是你們的理解和支持帶給我前進(jìn)的動(dòng)力。王嘉寶2019年六月于成都醫(yī)學(xué)院聲明

綜述成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體（FGFR）與腫瘤發(fā)生發(fā)展及治療的關(guān)系研究摘要：成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體（FGFR）是參與正常細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和增殖的關(guān)鍵信號(hào)分子。與成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（FGF）構(gòu)成FGF/FGFR信號(hào)通路，在細(xì)胞中FGFR激活突變或過表達(dá)可導(dǎo)致FGF/FGFR信號(hào)通路的持續(xù)性和過度激活，使細(xì)胞過度增殖、凋亡逃避等致癌性的功能。在過去幾十年中，已經(jīng)有大量的研究證明個(gè)體FGFR對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用。靶向FGFR的抑制劑藥物可以抑制FGF/FGFR信號(hào)通路的異常激活，具有治療以上疾病的潛力，F(xiàn)GFR抑制劑藥物成為近年來藥物研究的熱點(diǎn)之一。關(guān)鍵詞:成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體（FGFR）；腫瘤；現(xiàn)狀；FGF/FGFR信號(hào)通路；人成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(FGFR)家族是受體酪氨酸激酶(RTKs)的一個(gè)亞家族，由FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4組成。一種缺乏FGF信號(hào)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域的密切相關(guān)的受體FGFR5(又稱FGFRL1)是最近在與FGF結(jié)合配體相互作用的基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)的，稱為成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子樣受體1[1]?？傮w而言，F(xiàn)GFR信號(hào)與多個(gè)細(xì)胞級(jí)聯(lián)的激活和細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化和存活等反應(yīng)有關(guān)[2–4]。對(duì)惡性腫瘤的研究早已經(jīng)成為熱門，很多研究表明成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（fibroblastgrowthfactor,FGF）和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體（fibroblastgrowthfactorreceptor,FGFR）信號(hào)通路在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著一定的作用[5]。目前有許多研究取得突破性進(jìn)展，市面上也出現(xiàn)了很多腫瘤治療藥物，發(fā)現(xiàn)了各種腫瘤治療新靶點(diǎn)。近年來,有許多研究都證明FGFRs是某些癌癥的驅(qū)動(dòng)基因,并且以“細(xì)胞自治”的方式維持腫瘤細(xì)胞的惡性特征,這些研究結(jié)果使得FGFRs成為越來越具有吸引力的癌癥治療新靶點(diǎn)[6]。因此，研究FGF/FGFR信號(hào)通路在腫瘤發(fā)展中的作用，有助于對(duì)FGFR靶向治療藥物的開發(fā)[7]。1.FGF/FGFR信號(hào)通路成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（Fibroblastgrowthfactors，F(xiàn)GFs）結(jié)合其受體（Fibroblastgrowthfactorreceptors，F(xiàn)GFRs），形成FGF/FGFR信號(hào)通路，該通路激活其調(diào)控的下游信號(hào)通路，在胚胎發(fā)生、生長(zhǎng)發(fā)育和神經(jīng)調(diào)節(jié)、代謝調(diào)節(jié)等生物學(xué)過程都中起著重要作用。FGF家族包括22點(diǎn)已知的配體和的FGFs與細(xì)胞外基質(zhì)以及在細(xì)胞表面相互作用通過由硫酸類肝素蛋白多糖（聚糖）穩(wěn)定。FGF家族成員在胚胎發(fā)育的早期階段和器官發(fā)生過程中發(fā)揮作用，維持祖細(xì)胞并調(diào)節(jié)它們的生長(zhǎng)、分化、存活和模式。與幾乎所有組織和器官中都存在FGF一致，該途徑的異?；钚耘c發(fā)育缺陷有關(guān)，發(fā)育缺陷會(huì)破壞器官發(fā)生、損害對(duì)損傷的反應(yīng)，并導(dǎo)致代謝紊亂和癌癥[8]。FGF在成人組織中也有作用，它們通常通過重新激活發(fā)育信號(hào)通路來調(diào)節(jié)代謝功能、組織修復(fù)和再生。FGF與HSPG的通訊已被證明對(duì)FGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)至關(guān)重要[9]。相比之下，在FGFR家族中僅鑒定出4種高度保守的跨膜酪氨酸激酶受體（FGFR1-4）[10,11,12,13]。第五相關(guān)受體，F(xiàn)GFR5（也稱為FGFRL1），可以結(jié)合的FGFs但沒有酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域和其在細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用仍不清楚[14,15]。雖然沒有具體證據(jù)，但假設(shè)FGFRL1可作為配體陷阱并結(jié)合FGF，可與其他跨膜FGFR二聚化并抑制自身磷酸化，或可增加其配體結(jié)合后，F(xiàn)GFR二聚化并觸發(fā)一系列下游信號(hào)通路，包括絲裂原活化蛋白激酶（MAPK），信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子（STAT），磷酸肌醇-3激酶（PI3K）/AKT通路和DAG–PKC通路和IP3/Ca2+信令分支經(jīng)由PLCγ活化。FGFR信號(hào)傳導(dǎo)途徑代表癌癥治療的主要靶標(biāo)，因?yàn)樵S多研究表明它在腫瘤增殖，血管生成，遷移和存活中起關(guān)鍵作用。FGFR途徑受到各種體細(xì)胞畸變的影響，導(dǎo)致致癌作用。受體過表達(dá)可能是基因擴(kuò)增或轉(zhuǎn)錄后加工變化的結(jié)果;點(diǎn)突變可能導(dǎo)致組成型受體激活或?qū)ε潴w結(jié)合的敏感性降低;易位可以產(chǎn)生具有組成性活性的融合蛋白;和同種型轉(zhuǎn)換和選擇性剪接可降低對(duì)FGF的特異性[16]。這些主要的致癌異常代表了使FGFR成為治療廣泛惡性腫瘤的理想治療靶點(diǎn)的特征。FGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)除直接促血管生成外，還間接激活VEGFR信號(hào)通路，協(xié)同VEGFR和血小板衍生生長(zhǎng)因子受體(PDGFR)通路，促進(jìn)腫瘤新生。.FGFR和VEGF通路在血管生成中的互補(bǔ)和重疊功能表明，F(xiàn)GFR信號(hào)異?？赡芙閷?dǎo)了抗VEGF治療的耐藥性。2.FGFR概述成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子最早是從牛腦和牛的腦垂體中分離純化出的，它是一種對(duì)成纖維細(xì)胞系Balb/c3T3具有促分裂增殖的多肽，它是由FGF基因家族編碼的結(jié)構(gòu)相關(guān)的蛋白質(zhì)[17]。在人類中，F(xiàn)GFR家族由4個(gè)編碼緊密相關(guān)的跨膜RTK的受體基因組成[18]。即FGFR1至FGFR4。每個(gè)FGFR單體包括一個(gè)胞外結(jié)構(gòu)域，包括配體結(jié)合位點(diǎn)、交替剪接產(chǎn)生的兩個(gè)或三個(gè)Ig環(huán)、一個(gè)酸性盒、一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域和一個(gè)分裂的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域。第一個(gè)Ig樣結(jié)構(gòu)域被假定在受體自抑制中起作用[19]。第三個(gè)Ig樣結(jié)構(gòu)域的選擇性剪接發(fā)生在FGFR1-3中，影響第三Ig樣結(jié)構(gòu)域后半部的選擇，產(chǎn)生受體的IIIB或IIIC亞型。受體的第二和第三Ig樣結(jié)構(gòu)域足以與FGF配體結(jié)合，并有助于FGFR亞型和亞型對(duì)配體選擇的多樣性。不同的FGFR剪接形式的表達(dá)可以在組織(或細(xì)胞譜系)的特定模式中觀察到。IIIC亞型通常在間充質(zhì)組織中表達(dá)，而IIIB亞型主要在上皮細(xì)胞中表達(dá)，尤其是在發(fā)育階段。FGFR參與了各種各樣的\o"LearnmoreaboutBiologicalPhenomenaandFunctionsConcerningtheEntireOrganismfromScienceDirect'sAI-generatedTopicPages"生物過程，包括\o"LearnmoreaboutCellGrowthfromScienceDirect'sAI-generatedTopicPages"細(xì)胞生長(zhǎng)，遷徙，分化，\o"LearnmoreaboutSurvivalfromScienceDirect'sAI-generatedTopicPages"生存和\o"LearnmoreaboutApoptosisfromScienceDirect'sAI-generatedTopicPages"凋亡，并且是胚胎和神經(jīng)所必需的。此外，F(xiàn)GFR和FGF在許多腫瘤中都有過表達(dá)，而且這些因子突變也可能導(dǎo)致細(xì)胞癌變。FGFRs的激活可以通過啟動(dòng)不同的\o"LearnmoreaboutIntracellularSignalingfromScienceDirect'sAI-generatedTopicPages"胞內(nèi)信號(hào)路徑。在許多情況下，激活的通路依賴于細(xì)胞的類型或分化階段，導(dǎo)致下游目標(biāo)的特定激活。FGFR家族成員在配體親和力和組織分布上存在差異。一個(gè)全長(zhǎng)的代表性蛋白由一個(gè)細(xì)胞外區(qū)組成，該區(qū)域由三個(gè)免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域、一個(gè)疏水膜跨越段和一個(gè)胞漿酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域組成。該蛋白的胞外部分與成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子相互作用，啟動(dòng)一系列下游信號(hào)，最終影響有絲分裂和分化。該基因產(chǎn)物與其他家族成員的一個(gè)顯著差異是缺乏胞質(zhì)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域。其結(jié)果是一種跨膜受體，可與其他家庭成員相互作用，并可能抑制信號(hào)傳遞。多個(gè)可選剪接的轉(zhuǎn)錄體變異，編碼相同的異構(gòu)體，已發(fā)現(xiàn)該基因。3.FGFR與腫瘤治療3.1.FGFR在癌癥中的作用3.1.1FGFR1已經(jīng)在10％的乳腺癌（主要是雌激素受體（ER）陽(yáng)性癌癥）中檢測(cè)到染色體區(qū)域8p11-12（FGFR1的基因組位置）的擴(kuò)增，這一發(fā)現(xiàn)與較高的FGFR1表達(dá)水平相關(guān)，與較差的預(yù)后相關(guān)[18]。最近，據(jù)報(bào)道FGFR1在多達(dá)19％的鱗狀非小細(xì)胞肺癌（SqCLC）中被擴(kuò)增[19]。此外，臨床前研究表明，F(xiàn)GFR1擴(kuò)增的小細(xì)胞肺癌的一個(gè)子集對(duì)PD173074（一種特異性FGFR1抑制劑）的FGFR抑制極為敏感[20]。在口腔鱗狀細(xì)胞癌[21]，卵巢癌[22]中也報(bào)道了FGFR1擴(kuò)增，膀胱癌[23]和橫紋肌肉瘤[24]。3.1.2FGFR2FGFR2中的突變涉及廣譜的惡性疾病。12％的子宮內(nèi)膜癌中存在突變，F(xiàn)GFR2突變的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系對(duì)FGFR酪氨酸激酶抑制劑高度敏感，這表明FGFR2是子宮內(nèi)膜癌的創(chuàng)新治療靶點(diǎn)[25]。此外，大約10％的胃癌病例與FGFR2擴(kuò)增和/或突變有關(guān);特別是擴(kuò)增提示預(yù)后不良和疾病更廣泛[26]。具有FGFR2擴(kuò)增的胃癌細(xì)胞系顯示出配體非依賴性信號(hào)傳導(dǎo)的證據(jù)，并且對(duì)FGFR抑制劑高度敏感[27]。在乳腺癌中，發(fā)現(xiàn)FGFR2中的單核苷酸多態(tài)性（SNP）與絕經(jīng)后疾病的證據(jù)密切相關(guān)[28]。在5％的三陰性乳腺癌中也檢測(cè)到FGFR2擴(kuò)增，當(dāng)許多其他選擇因疾病特征的性質(zhì)而不太有效時(shí)，提供特異性靶向治療的可能性[29]。最近，一些新穎FGFR2突變已在肺癌識(shí)別，無論是在腺癌和鱗狀細(xì)胞癌的情況下[30,31]。體外和體內(nèi)（異種移植小鼠模型）評(píng)估已經(jīng)證明了致癌潛力，細(xì)胞生長(zhǎng)增加被認(rèn)為是配體非依賴性二聚化導(dǎo)致組成型受體激活的結(jié)果[31]。泛FGFR激酶抑制劑的用途有人指出，可以導(dǎo)致抑制細(xì)胞生長(zhǎng)[30,31]。3.1.3FGFR3在一項(xiàng)使用基于微陣列的比較基因組雜交的研究中，對(duì)18例復(fù)發(fā)性或轉(zhuǎn)移性腺樣囊性癌（ACC）患者的樣本進(jìn)行了研究，研究人員指出，61％的腫瘤顯示出與FGF（R）基因座相關(guān)的DNA拷貝數(shù)增加。秒。特別是，在臨床侵襲性腫瘤中更頻繁地檢測(cè)到FGFR3區(qū)域的增益[32]。有趣的是，ACC的早期工作已經(jīng)通過免疫組織化學(xué)鑒定了FGFR1過度表達(dá)，其被認(rèn)為在腫瘤進(jìn)展中也起作用，盡管這在微陣列分析中未見[33]。有趣的是，32名ACC患者的標(biāo)準(zhǔn)治療臨床進(jìn)展的II期臨床試驗(yàn)使用了泛FGFR抑制劑多維尼尼（NCT01417143）并證明了適度的抗腫瘤活性[34]。在大約70％的非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌和10-20％的浸潤(rùn)性膀胱癌中發(fā)現(xiàn)了FGFR3突變[35]。FGFR3突變的存在與低度，非肌肉浸潤(rùn)性腫瘤強(qiáng)烈相關(guān)，預(yù)后較好，但FGFR3作為癌癥定向治療靶點(diǎn)的臨床活力尚不清楚，仍存在爭(zhēng)議[35]。有趣的是，在切除后非侵襲性膀胱癌患者中，在常規(guī)隨訪時(shí)從尿液分析中獲得的細(xì)胞中存在FGFR3突變可預(yù)測(cè)疾病復(fù)發(fā)[36]。FGFR3突變也已在許多其他癌癥類型中被發(fā)現(xiàn)，包括3％的鱗狀細(xì)胞肺癌，宮頸癌[37]，多發(fā)性骨髓瘤[38]，前列腺癌[39]和精母細(xì)胞瘤[40]。在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌（HNSCC）中，人乳頭瘤病毒陽(yáng)性（HPV，120個(gè)腫瘤樣本的42.5％），使用平行測(cè)序技術(shù)的基因組分析顯示，近18％的腫瘤具有FGFR2或FGFR3突變，與HPV陰性樣本顯著不同[41]。最近的研究試圖進(jìn)一步闡明FNSR3突變?cè)贖NSCC中的相關(guān)性和預(yù)后意義。有趣的是，具有FGFR3突變的HPV陰性病例對(duì)FGFR抑制的反應(yīng)不如所研究的單一HPV陽(yáng)性病例，表明進(jìn)一步需要基于HPV狀態(tài)在HNSCC中進(jìn)行研究[42]。FGFR3活化突變?cè)诒砥ゐ牒椭缧越腔。@是良性的皮膚狀況和不進(jìn)步惡性腫瘤高頻還發(fā)現(xiàn)[43,44]。與通過突變激活FGFR3相反，在癌癥中很少描述FGFR3的擴(kuò)增。3.1.4FGFR4已經(jīng)在7-8％的橫紋肌肉瘤患者中鑒定了FGFR4中的擴(kuò)增和活化突變，并且FGFR抑制劑在表達(dá)突變的FGFR4的橫紋肌肉瘤小鼠模型中可能有效[45]。各種臨床前研究表明FGFR4過度表達(dá)在前列腺癌[46]，結(jié)腸癌[47]和肝癌[48]中發(fā)揮作用。FGFR4是在成熟肝細(xì)胞中和在具有HCC的患者子集中（~30％）中表達(dá)的唯一FGFR受體，觀察到FGF19和FGFR4的過表達(dá)。在FGF19-FGFR4軸的生理功能中，通過控制從頭的負(fù)反饋系統(tǒng)在肝膽汁酸的調(diào)節(jié)中起主要作用。肝膽汁酸合成。在肝外膽汁淤積癥患者中，血漿FGF19水平升高，這與我們對(duì)該途徑的理解一致。因此假設(shè)抑制該軸導(dǎo)致膽汁酸穩(wěn)態(tài)的破壞[49]。3.1.5利用FGFR及其信號(hào)通路對(duì)腫瘤治療FGF/FGFR途徑證明了另一種與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)的機(jī)制，從而為抑制和利用細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)提供了可操作的靶標(biāo)。FGFR信號(hào)與其他致癌通路之間的顯著交叉作用可能解釋了FGFR信號(hào)在獲得性抗腫瘤治療中的作用。由于激酶結(jié)構(gòu)域的高度相似性，所有這些抑制劑都能抑制VEGFR。雖然最初它可能對(duì)抑制血管生成和增殖都有好處，但其中許多靶點(diǎn)TKI作為FGFRs抑制劑的作用可能相對(duì)較弱。這也增加了副作用，限制了藥物在抑制FGF信號(hào)所必需的劑量下的釋放能力。gp369，一種FGFR2-ib特異性抗體已被使用。離體和體內(nèi)抑制FGFR2擴(kuò)增的人乳腺癌和胃癌細(xì)胞系IIIB亞型的研究[50]。因此，該領(lǐng)域目前正在開發(fā)與FGFR高度特異的TKI。作為原理的證明，pan-fGFR抑制劑已被證明對(duì)pten空fFGFR2突變株有效。復(fù)方PD173074對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株細(xì)胞死亡和細(xì)胞周期阻滯的影響[51]。其作用與抑制FGFR1和FGFR2轉(zhuǎn)磷酸化有關(guān)。在小細(xì)胞肺癌模型中，PD173074對(duì)細(xì)胞株和異種移植瘤細(xì)胞的增殖均有抑制作用[52]。另一種治療TKI的方法是FGF配體陷阱，它充當(dāng)FGF‘海綿’，結(jié)合多個(gè)FGF，從而產(chǎn)生抗增殖和抗血管生成的作用，這證明了在各種臨床前治療中的有效性。體內(nèi)和離體模特們。另一種方法是使用FGFR阻斷抗體。由于抗體被認(rèn)為是特定的FGFRs，它們限制PAN-FGFR的抑制毒性。其中一個(gè)例子是針對(duì)FGFR3的r3mab抗體，它對(duì)膀胱癌和骨髓瘤細(xì)胞的異種移植物表現(xiàn)出抗增殖作用[53]。最后一種方法是利用FGF配體來超級(jí)刺激FGFRs。一種重組FGF7配體已用于骨髓毒性治療引起的粘液炎[54]。4.展望FGFR信號(hào)通路的激活是腫瘤發(fā)生的基礎(chǔ)事件之一。最近在癌癥研究中的努力使我們能夠識(shí)別多個(gè)與FGFR信號(hào)通路有關(guān)的多個(gè)致癌分子的改變。鑒于FGFR信號(hào)異常在腫瘤發(fā)生中的既定作用，F(xiàn)GFR靶向劑可用于抑制腫瘤生長(zhǎng)、靶向血管生成和逆轉(zhuǎn)對(duì)抗癌藥物的獲得性耐藥性。FGFR抑制劑早期開發(fā)試驗(yàn)的初步結(jié)果是很有希望的，在包括肺癌、乳腺癌、膀胱癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和膽管癌患者在內(nèi)的分子選擇人群中觀察到了可控制的毒性和顯著的抗腫瘤活性，這為癌基因成癮提供了證據(jù)。大量的報(bào)告體內(nèi)和離體人類和動(dòng)物的研究已經(jīng)證明了FGFR信號(hào)在人類癌變中的潛在作用，無論它是致癌的還是腫瘤抑制的。目前還不清楚FGFR是如何作為腫瘤抑制因子發(fā)揮作用的，在我們開始將FGFR作為人類疾病的治療靶點(diǎn)之前，必須進(jìn)一步闡明其作用機(jī)制。事實(shí)上，上調(diào)這些FGFR2的抑癌異構(gòu)體可能為藥物開發(fā)提供一種替代策略。同樣重要的是，由FGF信號(hào)的激活而“驅(qū)動(dòng)”的腫瘤與那些僅僅將FGF信號(hào)作為“乘客”的腫瘤是不同的?？傊?，可以認(rèn)為有些腫瘤在其發(fā)展和進(jìn)展過程中依賴于解除管制的FGF信號(hào)，因此FGF信號(hào)分子為治療提供了一個(gè)有吸引力的靶點(diǎn)。這是很有希望的，因?yàn)槎喾N藥物現(xiàn)在正在進(jìn)行臨床前和臨床評(píng)估。參考文獻(xiàn)[1]

TruebB.BiologyofFG,F,RL1,thefifth,fibrobla,stgrowthfac,rreceptor.

CellMolLifeSci.

2011;68(6):951–964.

[2]

ThisseB,ThisseC.Functionsand,egulationsoffibroblastgrowthfactorsignalingduringembryonicdevelopment.

DevBiol.

2005;287(2,):390–402.[3]WescheJ,HaglundK,HaugstenEM.Fibro,bl,astgrowthfactorsandtheirreceptorsincancer.

Bioche,,mJ.

2011;437(2):199–213.[4]

HaugstenEM,WiedlochaA,OlsnesS,WescheJ.Rolesoffibroblastgro,w,,thfactorreceptorsincarcinogenesis.

MolCancerRes.

2010;8,(11):1439–1452.,[5]WescheJ,HaglundK,HaugstenEM.Fi,roblastGrowthFactorsandTheirReceptorsinCancer,BiochemJ,2011,437(2):199-213.Cappel```lenD,DeO’’’liveiraC,111RicolD,…deMedinaS,Bour11111`````;;sofFG;FR3I;nhu;ma;nbl;adderandc;ervixca;rcinomas.

Nat’Genet.

1l999;23(1):18–20.

[6]Cappel```lenD,DeO’’’liveiraC,111RicolD,…deMedinaS,Bour11111`````;;sofFG;FR3I;n[7]hu;ma;nbl;adderandc;ervixca;rcinomas.

Nat’Genet.

1l999;23(1):18–20.

[8]

ChesiM,NardiniE,BrentsLA,SchrockE,RiedT,KuehlWM,BergsagelPL.Frequenttranslocationt(4;14)(p16.3;q32.3)r3.

NatGenet.

1997;16(3):260–264.

[9]Hernan--dezS,deM·ugaS,AglllllllvaR,LorenteJA//ojalS,Serr/anoS/,LloretaJ.FGFR3mutationsinprostatecancer:associationwithlow-gradetumors.

ModPathol.

2009;22(6):848–856.[10]GorielyA,HansenRM,TaylorI、B,OlesenIA,JacobsenGK,McGowanSJ,PfeiferSP,McVeanGA,Rajpert-De、、MeytsE,WilkieAO.sticulartum、、ors.

NatGenet.

2009;41(11):1247–1252.

[11]SeiwertTY,etal.Integra，tiveandco，，mparativegeno，micanalys-isofH，PV，-positiv111eandHPV-negat-am=-ouscellcar--cinomas.

ClinCancer-Res.

20-15;21(3):632–641.

[12]vonMassenhaus··enA,etl.EvaluaionofFGFR3·asaT··herapeuti‘’cTargetinHe，adandNe、、、ckSquamous、CellCarcinoma.

TargetOncol.

2016.[13]HafnerC,vanOofactivat、、ingFGFR‘’‘’3mutati。onsinhu·m·anskinc··ausesepidermalnevi.

JClinInvest.

2006;116(8):2201–2207.[14]Lo；gieA；,D；unX,ThieryJP,R=advanyiF.Activa·tingmuta-1tionsofthetyro，sin，ekin，as，erece，ptorFGFR3areassociatedwithb、enignskintumo，rsinmiceandhumans.

HumMolGenet.

2005;14(9):11。，53–1160.

[15]LiSQ,CheukAT,She‘’rnJF,So7ngYK,HurdL,Liao·H,WeiJS,KhanJ.Targetingwild-ty%peandmutation‘’allyactiv···atedF*GFR4inrhabdomyos····arcomawiththeinhibitorponatinib(AP24534)

PLoSOne.

2013;8(10):e76551.[16]WangJ,StocktonDW,IttmannM.Th`efibrobla-st‘growth’factorrec’ptor-4Arg388alleleis=-withprostatecan=-cerinitia=tio’’’nandprogressi’’’’on.

ClinCancerRes.

2004;10(18Pt1):6169–6178.

[17]

BangeJ,etal.Canc`rpro’gress;ion`nandt`umo’rcell`mo’tilitya`reassoci`atedwit`htheFGFR4Arg(3;88)all’e;le.

C;an’cerRes.

;2002;;62;(3):840–847.

[18]DesnoyersLR,PaiR,FerrandoRE,HotzelK,JLeTRoss,CaranoR,D’SouzaA,QingJ,MohtashemiI,As-hke--naziA,Fr-enchDM-.ngFGF19tstumorg``rowthi``ncol`oncancerxenograftandFGF19transg-·eniche‘’patocellu0rcarciN`nomamodels.；

Oncogene.

2008;27(1):85–97.

[19]MellorHR.Targetedinhib-itionofth,eFGF19-FGFR4pathw,ayinhepatocellularcarcinoma;trans;,lationalsafetycon·derat;’’’i1ons.

Liveri1nter~2national:o4fl’cialjo-urn-alof%theInte-rna-tionalA&o-ciationfortheStu）——-dyoftheLiver.

2014;34(6):e1–9.

[20]H.

Nord,

U.

Segersten,

J.

Sandgren,

K.

Wester,

C.

Busch,

U.

Menzel,

J.Komorowski,

J.P.

Dumanski,

P.U.

M~！alms-tr?m,

T.

D-íazdeSt?%hl，F(xiàn)ocalam……plificati@onsareass#ociatedwithhig--h-g·radeandrec--urrencesin‘’stageTabladde；rcarcino-ma，Int.J.Cancer,

126

(2009),pp.

1390-1402；[21]S.A.

Byron,

M.G.

Gartside,

C.L.

Wellens,

M.A.

Mallon,

J.B.

Keen~an,

M.A.

Powell,

P.J.

Go·od~~~fellow,

P4.M.

P·ollock，In……h(huán)ibitionofact—ivated……fibr-=obla#stgr·owthfactorreceptor2inendom~etrialc。anc·ercellsin；‘’ducescelldeathdespiteP‘’TENabroga；tion,Ca‘’ncerRes.,

68

·(2，008),p·p.

69，02-6907[22]O.E.

Pa·rdo,

J.

Lati~go,

R.E.

~Jeffe·ry,

E.

Nye,

R.

P·oulsom,

B.

Spencer-Dene,

N.R.L·emoi·ne,

G.W.

Stam·p,

E.O.

Ab-oagye,

M.J.

Seck-lThe-fibrob-lastgro-wth[23]

ChesiM,NardiniE,BrentsLA,SchrockE,RiedT,KuehlWM,BergsagelPL.Frequenttranslocationt(4;14)(p16.3;q32.3)r3.

NatGenet.

1997;16(3):260–264.

[24]Hernan--dezS,deM·ugaS,AglllllllvaR,LorenteJA//ojalS,Serr/anoS/,LloretaJ.FGFR3mutationsinprostatecancer:associationwithlow-gradetumors.

ModPathol.

2009;22(6):848–856.[25]GorielyA,HansenRM,TaylorI、B,OlesenIA,JacobsenGK,McGowanSJ,PfeiferSP,McVeanGA,Rajpert-De、、MeytsE,WilkieAO.sticulartum、、ors.

NatGenet.

2009;41(11):1247–1252.

[26]SeiwertTY,etal.Integra，tiveandco，，mparativegeno，micanalys-isofH，PV，-positiv111eandHPV-negat-am=-ouscellcar--cinomas.

ClinCancer-Res.

20-15;21(3):632–641.

[27]vonMassenhaus··enA,etl.EvaluaionofFGFR3·asaT··herapeuti‘’cTargetinHe，adandNe、、、ckSquamous、CellCarcinoma.

TargetOncol.

2016.[28]HafnerC,vanOofactivat、、ingFGFR‘’‘’3mutati。onsinhu·m·anskinc··ausesepidermalnevi.

JClinInvest.

2006;116(8):2201–2207.[29]Lo；gieA；,D；unX,ThieryJP,R=advanyiF.Activa·tingmuta-1tionsofthetyro，sin，ekin，as，erece，ptorFGFR3areassociatedwithb、enignskintumo，rsinmiceandhumans.

HumMolGenet.

2005;14(9):11。，53–1160.

[30]LiSQ,CheukAT,She‘’rnJF,So7ngYK,HurdL,Liao·H,WeiJS,KhanJ.Targetingwild-ty%peandmutation‘’allyactiv···atedF*GFR4inrhabdomyos····arcomawiththeinhibitorponatinib(AP24534)

PLoSOne.

2013;8(10):e76551.[31]WangJ,StocktonDW,IttmannM.Th`efibrobla-st‘growth’factorrec’ptor-4Arg388alleleis=-withprostatecan=-cerinitia=tio’’’nandprogressi’’’’on.

ClinCancerRes.

2004;10(18Pt1):6169–6178.

[32]

BangeJ,etal.Canc`rpro’gress;ion`nandt`umo’rcell`mo’tilitya`reassoci`atedwit`htheFGFR4Arg(3;88)all’e;le.

C;an’cerRes.

;2002;;62;(3):840–847.

[33]DesnoyersLR,PaiR,FerrandoRE,HotzelK,JLeTRoss,CaranoR,D’SouzaA,QingJ,MohtashemiI,As-hke--naziA,Fr-enchDM-.ngFGF19tstumorg``rowthi``ncol`oncancerxenograftandFGF19transg-·eniche‘’patocellu0rcarciN`nomamodels.；

Oncogene.

2008;27(1):85–97.

[34]MellorHR.Targetedinhib-itionofth,eFGF19-FGFR4pathw,ayinhepatocellularcarcinoma;trans;,lationalsafetycon·derat;’’’i1ons.

Liveri1nter~2national:o4fl’cialjo-urn-alof%theInte-rna-tionalA&o-ciationfortheStu）——-dyoftheLiver.

2014;34(6):e1–9.

[35]H.

Nord,

U.

Segersten,

J.

Sandgren,

K.

Wester,

C.

Busch,

U.

Menzel,

J.Komorowski,

J.P.

Dumanski,

P.U.

M~！alms-tr?m,

T.

D-íazdeSt?%hl，F(xiàn)ocalam……plificati@onsareass#ociatedwithhig--h-g·radeandrec--urrencesin‘’stageTabladde；rcarcino-ma，Int.J.Cancer,

126

(2009),pp.

1390-1402；[36]S.A.

Byron,

M.G.

Gartside,

C.L.

Wellens,

M.A.

Mallon,

J.B.

Keen~an,

M.A.

Powell,

P.J.

Go·od~~~fellow,

P4.M.

P·ollock，In……h(huán)ibitionofact—ivated……fibr-=obla#stgr·owthfactorreceptor2inendom~etrialc。anc·ercellsin；‘’ducescelldeathdespiteP‘’TENabroga；tion,Ca‘’ncerRes.,

68

·(2，008),p·p.

69，02-6907[52]O.E.

Pa·rdo,

J.

Lati~go,

R.E.

~Jeffe·ry,

E.

Nye,

R.

P·oulsom,

B.

Spencer-Dene,

N.R.L·emoi·ne,

G.W.

Stam·p,

E.O.

Ab-oagye,

M.J.

Seck-lThe-fibrob-lastgro-wth[37]

Cappel```lenD,DeO’’’liveiraC,111RicolD,…deMedinaS,Bour11111`````;;sofFG;FR3I;nhu;ma;nbl;adderandc;ervixca;rcinomas.

Nat’Genet.

1l999;23(1):18–20.

[38]

ChesiM,NardiniE,BrentsLA,SchrockE,RiedT,KuehlWM,BergsagelPL.Frequenttranslocationt(4;14)(p16.3;q32.3)r3.

NatGenet.

1997;16(3):260–264.

[39]Hernan--dezS,deM·ugaS,AglllllllvaR,LorenteJA//ojalS,Serr/anoS/,LloretaJ.FGFR3mutationsinprostatecancer:associationwithlow-gradetumors.

ModPathol.

2009;22(6):848–856.[40]GorielyA,HansenRM,TaylorI、B,OlesenIA,JacobsenGK,McGowanSJ,PfeiferSP,McVeanGA,Rajpert-De、、MeytsE,WilkieAO.sticulartum、、ors.

NatGenet.

2009;41(11):1247–1252.

[41]SeiwertTY,etal.Integra，tiveandco，，mparativegeno，micanalys-isofH，PV，-positiv111eandHPV-negat-am=-ouscellcar--cinomas.

ClinCancer-Res.

20-15;21(3):632–641.

[42]vonMassenhaus··enA,etl.EvaluaionofFGFR3·asaT··herapeuti‘’cTargetinHe，adandNe、、、ckSquamous、CellCarcinoma.

TargetOncol.

2016.[43]H