對(duì)蝦白斑綜合癥和肝胰腺壞死癥生態(tài)防控技術(shù)第一頁(yè)，共89頁(yè)。對(duì)蝦白斑綜合癥和肝胰腺壞死癥生態(tài)防控技術(shù)

何建國(guó)JianGuoHe中山大學(xué)SunYat-senUniversityEclogicaltechniquesforcontrollingwhitespotsyndromeandhepatopancreasnecrosissyndromeofshrimp第二頁(yè)，共89頁(yè)。對(duì)蝦是全球性水產(chǎn)養(yǎng)殖種類(lèi)，也是全球交易量最大的水產(chǎn)品（2011年，180萬(wàn)噸）其他對(duì)蝦養(yǎng)殖國(guó)家中國(guó)我國(guó)是全球?qū)ξr養(yǎng)殖產(chǎn)量第一大國(guó)，2012年產(chǎn)量為165萬(wàn)噸，占全球養(yǎng)殖產(chǎn)量的40%Twodiseases,WSSandHPNS,havecausedhugeeconomiclossintheglobalculturingshrimp第三頁(yè)，共89頁(yè)?！?/p>

自1988年WSS爆發(fā)以來(lái)，困擾全球?qū)ξr養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)對(duì)蝦白斑綜合癥（WSS）和肝胰腺壞死癥(HPNS)是制約全球?qū)ξr養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展的最主要障礙（年）（噸）●1993-1998年，我國(guó)池塘養(yǎng)殖對(duì)蝦發(fā)病率90%，發(fā)病池塘對(duì)蝦死亡率接

近100%，年直接經(jīng)濟(jì)損失30多億。我國(guó)對(duì)蝦養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)陷入了嚴(yán)重的困境，產(chǎn)量由世界第1跌至第6●2008年，農(nóng)業(yè)部新修訂的《一、二、三類(lèi)動(dòng)物疫病病種名錄》將白斑

綜合癥列為一類(lèi)動(dòng)物疫病●因病導(dǎo)致的對(duì)蝦原初產(chǎn)品質(zhì)量安全問(wèn)題突出，如氯霉素事件第四頁(yè)，共89頁(yè)?！獓?guó)際上稱(chēng)為早期死亡綜合癥（EMS）/急性肝胰腺壞死癥（AHPNS），我國(guó)對(duì)蝦養(yǎng)殖者稱(chēng)為“偷死病”，我們稱(chēng)為肝胰腺壞死癥（HPNS）?！?013年全球養(yǎng)殖對(duì)蝦減產(chǎn)23%，泰國(guó)減產(chǎn)54%，我國(guó)減產(chǎn)17%，廣東減產(chǎn)30%?！B(yǎng)殖時(shí)間超過(guò)80天池塘的對(duì)蝦HPNS發(fā)生率超過(guò)了80%，前中期發(fā)生HPNS單造養(yǎng)殖產(chǎn)量只有300斤/畝。——年直接經(jīng)濟(jì)損失超過(guò)50億元。肝胰腺壞死癥（hepatopancreasnecrosissyndrome,HPNS）第五頁(yè)，共89頁(yè)。一、WSS生態(tài)防控技術(shù)（EcologicaltechniquesforcontrollingWSS）（一）WSS環(huán)境調(diào)控防控技術(shù)（EnvironmtentalfactorsregulatingtechniquesforcontrollingWSS）1、理化脅迫的影響2、對(duì)蝦先天性免疫對(duì)WSS發(fā)生的影響3、環(huán)境調(diào)控防控技術(shù)（二）WSS生物防控技術(shù)(BiologicalcontroltechniquesforWSS)

第六頁(yè)，共89頁(yè)。病毒潛伏感染對(duì)蝦個(gè)體個(gè)體發(fā)生階段：環(huán)境脅迫誘發(fā)潛伏感染轉(zhuǎn)為急性感染群體爆發(fā)流行階段：攝食死蝦導(dǎo)致疾病傳播與爆發(fā)關(guān)鍵控制點(diǎn)1：調(diào)控環(huán)境阻止病毒潛伏感染轉(zhuǎn)為急性感染關(guān)鍵控制點(diǎn)2：消除健康對(duì)蝦攝食死亡對(duì)蝦的生態(tài)位，切斷疾病的傳播途徑不攜帶WSSV對(duì)蝦個(gè)體WSSV致死對(duì)蝦個(gè)體對(duì)蝦種群崩潰

一、WSS流行病學(xué)及防控的二個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)WSSepidemiologyconcludethatWSSVlatentinfectionturntoacuteinfectionbyenvironmentalstressinshrimpindividualandtransmitinshrimppopulationbyhealthyshrimpeatdeadshrimpwithWSSV第七頁(yè)，共89頁(yè)。

WSS導(dǎo)致養(yǎng)殖對(duì)蝦種群崩潰的主要原因：TherootreasonsofWSSoutbreakinshrimppopulation——養(yǎng)殖生態(tài)系統(tǒng)種群?jiǎn)我?，缺乏與健康對(duì)蝦攝食死蝦的優(yōu)勢(shì)競(jìng)爭(zhēng)者；(onlyshrimppopulation,withoutcompetitorwithhealthyshrimp)——誘發(fā)WSSV潛伏感染轉(zhuǎn)為急性感染的環(huán)境因子。(WeneedtounderstandingenvironmentalfactorsthatinduceWSSVlatentInfectionturningtoacuteinfectioninindividualshrimp)第八頁(yè)，共89頁(yè)。

（一）WSS在養(yǎng)殖對(duì)蝦個(gè)體中發(fā)生的環(huán)境基礎(chǔ)與防控技術(shù)1、理化脅迫的影響

2、對(duì)蝦先天性免疫對(duì)WSS發(fā)生的影響

3、環(huán)境調(diào)控防控技術(shù)

第九頁(yè)，共89頁(yè)。Y=421.894-28.448X1-1.086X2-1.44×10-3X3-1.965X4式中Y為凡納濱對(duì)蝦的平均存活時(shí)間（h），X1為pH，X2為NO2--N的濃度（mg·L-1），X3為WSSV的量（copies），X4為NH4+-N的濃度（mg·L-1）。多種水體理化因子對(duì)感染W(wǎng)SSV凡納濱對(duì)蝦影響斑節(jié)對(duì)蝦桿狀病毒(MBV)數(shù)量與主要水體理化因子的關(guān)系Y=-12.089X1+1.216X2+2.734X3+0.258X4式中Y=MBV在斑節(jié)對(duì)蝦體內(nèi)的相對(duì)數(shù)量;X1=抵抗力;X2=對(duì)蝦養(yǎng)殖水體的鹽度(0/00);X3=對(duì)蝦養(yǎng)殖水體氨態(tài)氮濃度(ug/L);X4=對(duì)蝦養(yǎng)殖水體亞硝酸氮濃度(ug/L)養(yǎng)殖水體理化因子與病毒數(shù)量和對(duì)蝦存活時(shí)間的關(guān)系第十頁(yè)，共89頁(yè)。——對(duì)蝦TOLL和IMD途徑調(diào)控白斑綜合癥病毒（WSSV）復(fù)制

LvDorsalandLvLvRelishregulateWSSVreplication

——內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脅迫的非折疊蛋白反應(yīng)途徑與白斑綜合癥復(fù)制的關(guān)系

Unfoldedproteinresponse(UPR)regulateWSSVreplication——對(duì)蝦抗WSSV途徑

L.vannameianti-WSSVpathway第十一頁(yè)，共89頁(yè)。（1）對(duì)蝦TLR和IMD途徑調(diào)控AMP表達(dá)LvTLR1-3LvSPZ1-3InfectionMyD88TubeLvPelleLvTRAF6降解LvDorsalCactusAMPsPGRP-LCLvIMDFADDLvIKKsAMPs降解LvRelish鑒定了對(duì)蝦TLR和IMD信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)鍵基因；闡明了TLR和IMD途徑調(diào)控抗菌肽表達(dá)。1、在對(duì)蝦先天性免疫途徑調(diào)控WSSV復(fù)制第十二頁(yè)，共89頁(yè)。——WSSV利用TLR途徑促進(jìn)病毒基因表達(dá)

WSSVutilizingNF-κBactivationtofavoritsreplications

WSSVInfectionMyD88TubeLvPelleLvTRAF6LvDorsalWSSV449:TubelikeproteinViralgeneincludingWSSV069WSSV303andWSSV371發(fā)現(xiàn)對(duì)蝦TLR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑可以促進(jìn)病毒基因表達(dá)

WangPH，etc.DevCompImmunol.2011Jan;35(1):105-14.HuangXD,etc.DevCompImmunol.2010Feb;34(2):107-13.HuangXD,etc.FishShellfishImmunol.2009Aug;27(2):230-8.WangPH,etc.MolImmunol.2009May;46(8-9):1897-904YangLS,etc.MolImmunol.2007Mar;44(8):1999-2008.第十三頁(yè)，共89頁(yè)。WSSV抑制了cactus-dorsal負(fù)調(diào)控途徑第十四頁(yè)，共89頁(yè)。WSSV的復(fù)制依賴(lài)對(duì)蝦NF-kB活性LitopenaeusvannameiNF-κBisrequiredforWSSVreplication第十五頁(yè)，共89頁(yè)。RandalJ.etal.20022、UPRpathwaysregulatedWSSVreplication第十六頁(yè)，共89頁(yè)。Fig.1凡納濱XBP1mRNA特征分析。(A)XBP1mRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu).(B)DTT刺激和熱激引起XBP1mRNA的切割.(C)XBP1mRNA切割位點(diǎn)分析.方框之內(nèi)的序列為預(yù)測(cè)切割位點(diǎn)，AS1和AS2為兩種實(shí)際切割位點(diǎn).(D)切割之后XBP1（XBP1s）的編碼區(qū)的變化。（1）UPRXBP1途徑及其對(duì)WSSV基因表達(dá)的調(diào)控第十七頁(yè)，共89頁(yè)。Fig.3LvXBP1s對(duì)非折疊蛋白反應(yīng)效應(yīng)基因Bip的激活作用。（A）報(bào)告基因結(jié)構(gòu)示意圖。（B）LvXBP1上調(diào)LvBip的表達(dá)。Fig.2環(huán)境脅迫對(duì)IRE1-XBP1通路的影響。（A）熱激引起的LvXBP1mRNA切割。（B）WSSV感染引起的LvXBP1

mRNA切割。Yi-HongChen，

2012，DevelopmentalandComparativeImmunologyLvXBP1s以UPRE序列依賴(lài)的方式激活wsv083（1）UPRXBP1途徑及其對(duì)WSSV基因表達(dá)的調(diào)控第十八頁(yè)，共89頁(yè)。LvATF4以ATF/CRE序列依賴(lài)的方式激活wsv023

（2）UPRATF4途徑及其調(diào)控WSSV基因表達(dá)第十九頁(yè)，共89頁(yè)。通過(guò)RNAi分別敲低LvATF4和LvXBP1后進(jìn)行WSSV攻毒實(shí)驗(yàn)。與對(duì)照組相比，dsLvATF4或是dsLvXBP1干擾組死亡率明顯降低。DsLvATF4treatmentedDsLvXBP1treatmentedWSSV與宿主相互作用——UPRBRLZ轉(zhuǎn)錄因子參與WSSV基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控Yi-HongChen，DevelopmentalandComparativeImmunology.2012第二十頁(yè)，共89頁(yè)。GFPPBSATF424h48h72h第二十一頁(yè)，共89頁(yè)。（A）wsv02348小時(shí)干擾效果（B）wsv023RNAi攻毒死亡率統(tǒng)計(jì)第二十二頁(yè)，共89頁(yè)。（1）宿主-病毒LvCTL1(lectin)-WSSV

Far-WesternLvCTL1NC點(diǎn)雜交Pull-Dwon經(jīng)鑒定的囊膜蛋白Fig9.

WSSV感染試驗(yàn)中，重組LvCTL1對(duì)L.vannamei具有保護(hù)作用Fig8.鑒定若干與LvCTL1與相互作用的WSSV囊膜蛋白Zhi-YingZhao,FishandShellfishImmunology.2007Zhi-YingZhao,

JournalofVirology.20093、對(duì)蝦抗WSSV途徑第二十三頁(yè)，共89頁(yè)。2、免疫信號(hào)通路-RNAiFig6.L.vannamei

體內(nèi)的RNAi有效且具有特異性Fig7.WSSV攻毒實(shí)驗(yàn)中，針對(duì)病毒的基因的siRNA對(duì)凡納濱蝦具有保護(hù)作用YueWu，Aquaculture.2007第二十四頁(yè)，共89頁(yè)。LvPashaLvSVCs啟動(dòng)子LvArs2LvTRBP1LvAgo2LvDicer2miRNAsiRNAsiRISC/siRLCLvArs2與LvPasha、LvDicer2相互作用

L。vannameisiRISC復(fù)合物亞基間相互作用Yi-HongChen，

2011，DevelopmentalandComparativeImmunologyYi-HongChen，

2012，F(xiàn)ishandShellfishImmunityLvDicer2上調(diào)LvSVCs的表達(dá)第二十五頁(yè)，共89頁(yè)。

3、對(duì)蝦核酸誘導(dǎo)抗病毒免疫對(duì)蝦可能具有類(lèi)似脊椎動(dòng)物的干擾素誘導(dǎo)抗病毒途徑第二十六頁(yè)，共89頁(yè)。測(cè)定指標(biāo)正常范圍必須采取措施的閾值測(cè)定周期pH8.2-8.8﹤8或﹥9或日波動(dòng)0.52次/天DO3-6﹤32次/天NH4+-N0-0.1﹥0.151次/天NO2-N0-0.1﹥0.21次/天H2S0-0.01﹥0.0151次/天余氯0﹥0.11次/5天鹽度按蝦種和季節(jié)定1次/5天透明度30-50﹥60或﹤201次/3天總堿度80-160﹤601次/7天總硬度80-120﹤601次/7天弧菌0-500﹥

3000個(gè)/ml1次/5天總菌0-1000﹥10000個(gè)/ml1次/5天總氮1次/5天總磷100-300ppm﹥300或﹤501次/5天可溶性鈣20-50﹥100或﹤101次/5天白班病毒0﹥100個(gè)/mg組織1次/10天4、理化因子調(diào)控防控對(duì)蝦病毒病個(gè)體發(fā)生

建立了測(cè)水調(diào)水理化因子指標(biāo)體系

第二十七頁(yè)，共89頁(yè)。1）高位池對(duì)蝦養(yǎng)殖模式中的應(yīng)用凡納濱對(duì)蝦每造平均單產(chǎn)達(dá)9噸/公頃，最高達(dá)75噸/公頃；斑節(jié)對(duì)蝦每造平均單產(chǎn)達(dá)6噸/公頃，最高達(dá)10.7噸/公頃。高位蝦池病害控制技術(shù)水質(zhì)調(diào)控技術(shù)高效環(huán)保飼料高位池對(duì)蝦養(yǎng)殖模式集成第二十八頁(yè)，共89頁(yè)。

●傳統(tǒng)蝦池改造●管理方便2）地膜對(duì)蝦養(yǎng)殖模式凡納濱對(duì)蝦每造平均單產(chǎn)達(dá)8噸/公頃，最高達(dá)30噸/公頃；斑節(jié)對(duì)蝦每造平均單產(chǎn)達(dá)6噸/公頃，最高達(dá)10噸/公頃。地膜蝦池病害控制技術(shù)水質(zhì)調(diào)控技術(shù)高效環(huán)保飼料地膜池對(duì)蝦養(yǎng)殖模式集成第二十九頁(yè)，共89頁(yè)。

——利用了對(duì)蝦廣鹽性——切斷WSSV部分的水平傳播途徑——減少了病毒病暴發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)

3）低鹽度對(duì)蝦養(yǎng)殖模式低鹽度蝦池病害控制技術(shù)水質(zhì)調(diào)控技術(shù)高效環(huán)保飼料低鹽度對(duì)蝦養(yǎng)殖模式集成第三十頁(yè)，共89頁(yè)。

（二）對(duì)蝦WSS生物防控基礎(chǔ)與技術(shù)（1）健康對(duì)蝦攝食死亡對(duì)蝦是WSS傳播的主要途徑

1、對(duì)蝦WSS生物防控基礎(chǔ)（2）在對(duì)蝦養(yǎng)殖生態(tài)系統(tǒng)中，引入魚(yú)類(lèi)作為攝食死亡對(duì)蝦優(yōu)勢(shì)競(jìng)爭(zhēng)者，阻斷健康對(duì)蝦攝食死亡對(duì)蝦，切斷WSS的傳播途徑（3）根據(jù)攝食能力、攝食方式、活動(dòng)能力和生態(tài)適應(yīng)性，篩選出18種魚(yú)類(lèi)，開(kāi)展魚(yú)類(lèi)對(duì)健康對(duì)蝦、患病對(duì)蝦和死亡對(duì)蝦攝食能力、攝食選擇性等生物防控關(guān)鍵參數(shù)的研究第三十一頁(yè)，共89頁(yè)。（4）揭示了凡納濱對(duì)蝦規(guī)格與感染W(wǎng)SSV死亡的時(shí)間關(guān)系（5）揭示了WSS在養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦種群中的傳播速度（6）建立了對(duì)蝦WSS生物防控?cái)?shù)學(xué)模型確定了用于生物防控的魚(yú)類(lèi)及規(guī)格、數(shù)量等技術(shù)參數(shù)

MathematicalmodelsforWSStransmissionandthebiocontrolofWSSinashrimppopulationinapond第三十二頁(yè)，共89頁(yè)。2、建立了7套適合不同鹽度和地區(qū)的生物防控技術(shù)（1）對(duì)蝦WSS草魚(yú)生物防控技術(shù)(鹽度8以下)BiologicalcontrolofWSSbygrasscarp（2）對(duì)蝦WSS革胡子鯰生物防控技術(shù)(鹽度6以下)BiocontrolofWSSbyclariscatfish（3）對(duì)蝦WSS草魚(yú)和革胡子鯰聯(lián)合生物防控技術(shù)(鹽度6以下)CombinedbiologicaltreatmentofWSSbygrasscarpandclariscatfish

（4）對(duì)蝦WSS美國(guó)紅魚(yú)生物防控技術(shù)(所有鹽度)BiocontrolofWSSbyreddrum（5）對(duì)蝦WSS軍曹魚(yú)生物防控技術(shù)(鹽度15以上)BiocontrolofWSSVbycobia

（6）日本囊對(duì)蝦WSS石斑魚(yú)防控技術(shù)(鹽度13以上)Biocontrolofbygroupers（7）對(duì)蝦WSS羅非魚(yú)生物防控技術(shù)(鹽度20以下)BiocontrolofWSSVbytilapia傳統(tǒng)養(yǎng)殖模式生態(tài)防控模式舉例：對(duì)蝦WSS革胡子鯰生物防控技術(shù)，在一個(gè)有110口池塘的養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)用，養(yǎng)殖成功率100%，產(chǎn)量提高2-5倍第三十三頁(yè)，共89頁(yè)。

對(duì)蝦病毒病草魚(yú)生物防控技術(shù)①適合鹽度6以下養(yǎng)殖區(qū)；②適合對(duì)蝦苗種密度低于10萬(wàn)尾/畝；③對(duì)蝦苗種養(yǎng)殖20～30天，每畝投放30～60尾，每尾1kg左右的草魚(yú)。④比照對(duì)蝦養(yǎng)殖的正常管理方法，培好水后，投放1.0cm左右的蝦苗，每畝10萬(wàn)尾以下。由于草魚(yú)在鹽度大于6的水體中攝食能力較弱，所以選用草魚(yú)的養(yǎng)殖水體的鹽度在6以下范圍內(nèi)。如果養(yǎng)殖水體的鹽度大于7.5，可用添加淡水的方法降低鹽度，將鹽度控制在上述范圍內(nèi)。適時(shí)投放草魚(yú)。對(duì)蝦養(yǎng)殖到20～30日左右，對(duì)蝦病害暴發(fā)前投放草魚(yú)。投放的草魚(yú)數(shù)量不能少于30尾/畝，每尾1kg以上，并可根據(jù)放養(yǎng)蝦苗的密度適當(dāng)增加，但不能超過(guò)60尾/畝。

第三十四頁(yè)，共89頁(yè)。

TodeterminethecapacityoffishincontrollingWSS,weperformedtheexperimentsinfoursizesofshrimps(1.3g,2.5g,5.0g,7.8g).Wereleasedone1-kggrasscarpwith750healthyshrimpsin10m2tank.Inthissetting,wereleaseddifferentnumberofinfectedshrimps(seeExp.Table4).Stars(*)representthenumberofinfectedshrimpssuccessfullycontrolledbyone1-kggrasscarpwhileclearcircles(o)representthenumberofinfectedshrimpsthatfailedtobecontrolledbyone1-kggrasscarp.Basedonthemodel3,wesimulatedtodeterminethethreshold(redline)ofthenumberofinfectedshrimpscontrolledbyone1-kggrasscarp.Theredlineissimulatedhighestvalueofone1-kgfishthatcancontrolthenumberofinfectedshrimpswithdifferentweightsofshrimps.

第三十五頁(yè)，共89頁(yè)。爆發(fā)流行期環(huán)境調(diào)控防控技術(shù)應(yīng)用期環(huán)境調(diào)控防控與生物防控集成技術(shù)應(yīng)用期白斑綜合癥在我國(guó)養(yǎng)殖對(duì)蝦發(fā)病率由90%下降到5%以下，基本消除了對(duì)蝦白斑綜合癥對(duì)我國(guó)對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)的威脅。中國(guó)對(duì)蝦養(yǎng)殖產(chǎn)量（1991-2012）第三十六頁(yè)，共89頁(yè)。（一）肝胰腺壞死癥病因（二）肝胰腺壞死癥生態(tài)防控技術(shù)（三）對(duì)蝦養(yǎng)殖容納量探討二、肝胰腺壞死癥病因分析與生態(tài)防控技術(shù)Ecologicalcontroltechniquesforhepatopancreasnecrosissydrome第三十七頁(yè)，共89頁(yè)。正常肝胰腺肝胰腺壞死癥（1）對(duì)蝦肝胰腺壞死癥組織病理分析第三十八頁(yè)，共89頁(yè)。（2）對(duì)蝦樣品采集和細(xì)菌分離

分別在中國(guó)廣東省番禺、珠海、中山、江門(mén)、陽(yáng)江、茂名、湛江、惠州、汕尾、河北省唐山、廣西省、海南省等地采樣，取“空腸空胃”等癥狀的

172尾病蝦的肝胰腺、腸道、血淋巴和患病仔蝦進(jìn)行細(xì)菌分離，分別涂布LB、TCBS、BHI等培養(yǎng)基并進(jìn)行純化，共收集1435株細(xì)菌。第三十九頁(yè)，共89頁(yè)。采用傳統(tǒng)微生物學(xué)鑒定方法、16SrDNA基因擴(kuò)增、BIOLOGGenⅡ/GenⅢMicrostation自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)等方法，鑒定細(xì)菌941株，分別屬于10個(gè)屬，73種細(xì)菌。第四十頁(yè)，共89頁(yè)。

人工感染用副溶血弧菌V1、蘇云金芽孢桿菌Z7、V1+Z7混合菌分別注射感染對(duì)蝦，在感染后6天全部死亡，死亡率100%，表現(xiàn)典型肝胰腺壞死癥狀。對(duì)照組死亡率為12%，沒(méi)有肝胰腺壞死癥狀。第四十一頁(yè)，共89頁(yè)。其中：鑒定有副溶血弧菌的對(duì)蝦51尾，占鑒定對(duì)蝦總數(shù)的52.6%；鑒定有蠟樣芽胞桿菌的對(duì)蝦27尾，占鑒定對(duì)蝦總數(shù)的27.8%；鑒定有霍亂弧菌的對(duì)蝦23尾，占鑒定對(duì)蝦總數(shù)的23.7%；鑒定有嗜水氣單胞菌的對(duì)蝦19尾，占鑒定對(duì)蝦總數(shù)的19.6%；鑒定有蘇云金芽胞桿菌的對(duì)蝦17尾，占鑒定對(duì)蝦總數(shù)的17.5%；鑒定有金橙黃微小桿菌的對(duì)蝦14尾，占鑒定對(duì)蝦總數(shù)的14.4%；其他細(xì)菌也分別在不同尾蝦中檢出。HPNS不是有單一某種細(xì)菌所導(dǎo)致第四十二頁(yè)，共89頁(yè)?？剐曰驒z測(cè)結(jié)果抗性基因strAfloRSul1Sul2gyrA第一批4525594080第二批10613918第三批258233586合計(jì)80399584184百分比22.99%11.21%27.29%24.14%52.87%第四十三頁(yè)，共89頁(yè)。

（3）病毒性病因分析

對(duì)蝦WSSV、IHHNV、MBV、BP、TSV、YHV、IMNV等11中病毒檢測(cè)和人工感染，證明HPNS不是由病毒所致。第四十四頁(yè)，共89頁(yè)。

亞硝酸氮

N均值（±SD)均值的95%置信區(qū)間顯著性下限上限發(fā)病前4天到發(fā)病當(dāng)天濃度最大值20497.160（±509.205）258.845735.475P=0.022沒(méi)發(fā)病塘濃度最大值775.000（±95.1898）-13.036163.036發(fā)病前4天到發(fā)病當(dāng)天濃度平均值20429.915（±414.543）235.903623.927P=0.025沒(méi)發(fā)病塘濃度平均值718.486（±18.3561）1.50935.462分別比較發(fā)病塘與沒(méi)發(fā)病塘亞硝酸氮濃度最大值和平均值，通過(guò)單因素方差分析，P<0.05,差異顯著。結(jié)果表明，亞硝酸氮與發(fā)病具有密切關(guān)系。根據(jù)結(jié)果分析得亞硝酸氮對(duì)發(fā)病的閾值為：163ug/L~259ug/L。達(dá)到或者超過(guò)閾值，認(rèn)為很可能誘發(fā)對(duì)蝦發(fā)病。亞硝酸氮和氨氮對(duì)發(fā)病的影響（4）環(huán)境因素分析第四十五頁(yè)，共89頁(yè)。（5）飼料投喂量與對(duì)蝦發(fā)病的關(guān)系在第40天，第50天，第70天的養(yǎng)殖時(shí)間點(diǎn)上，茂名示范點(diǎn)生病塘的當(dāng)天平均投喂量都極顯著（P＜0.01)的高于塘沽示范點(diǎn)各正常養(yǎng)殖塘。正常塘平均畝產(chǎn)557.36斤，發(fā)病塘平均畝產(chǎn)479.2斤。時(shí)間示范點(diǎn)樣本量平均值（斤/萬(wàn)尾·畝）平均值（斤/畝）標(biāo)準(zhǔn)差顯著性檢驗(yàn)第40天投料量茂名（生病）172.6816.890.50816P=0.000

塘沽（正常）160.412.110.17549第50天投料量茂名（生?。?73.3820.920.81227P=0.000

塘沽（正常）160.884.070.47407第70天投料量茂名（生?。?3.8723.011.26945P=0.001

塘沽（正常）161.798.151.12595第四十六頁(yè)，共89頁(yè)。小結(jié)：通過(guò)發(fā)病時(shí)減料前后水質(zhì)濃度對(duì)比可知，飼料投喂量是影響水質(zhì)因子的重要因素。（5）停止投料對(duì)水體理化因子的影響第四十七頁(yè)，共89頁(yè)。

（6）放苗密度與對(duì)蝦發(fā)病的關(guān)系樣本量平均值(萬(wàn)尾/畝)標(biāo)準(zhǔn)差顯著性檢驗(yàn)正常143.8791.3180P=0.002生病36.8000.3464單因素方差分析顯示：在溫州示范點(diǎn)，發(fā)病的養(yǎng)殖塘的平均放苗密度極顯著的大于沒(méi)發(fā)病的塘（P=0.002﹤0.01）。第四十八頁(yè)，共89頁(yè)。（一）肝胰腺壞死癥病因研究與分析1、肝胰腺壞死癥發(fā)生與條件致病菌的關(guān)系2、肝胰腺壞死癥發(fā)生與有毒藻類(lèi)的關(guān)系3、肝胰腺壞死癥發(fā)生與有害理化影子的關(guān)系4、肝胰腺壞死癥發(fā)生的生態(tài)系統(tǒng)問(wèn)題第四十九頁(yè)，共89頁(yè)。珠海：發(fā)病前后水體細(xì)菌弧菌數(shù)量（1）1-6號(hào)塘發(fā)病后水體總菌弧菌數(shù)量下降，7-9號(hào)塘發(fā)病后水體總菌弧菌數(shù)量上升。（2）1-6號(hào)塘發(fā)病后采取換水、停料的措施，使得水體細(xì)菌弧菌數(shù)量下降。7-9號(hào)塘在臺(tái)風(fēng)雨天過(guò)后發(fā)病，結(jié)合藻類(lèi)分析推測(cè)，由于陰雨天氣導(dǎo)致藻類(lèi)死亡，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不能轉(zhuǎn)化使得細(xì)菌弧菌數(shù)量上升，導(dǎo)致發(fā)病。第五十頁(yè)，共89頁(yè)。珠海：發(fā)病前后蝦體細(xì)菌弧菌數(shù)量

各塘發(fā)病后蝦體總菌數(shù)量相比發(fā)病前有明顯下降。說(shuō)明發(fā)病前蝦體細(xì)菌數(shù)量已經(jīng)達(dá)到對(duì)蝦不能承受的程度，而發(fā)病后，經(jīng)過(guò)停料換水等處理，對(duì)蝦體內(nèi)的細(xì)菌數(shù)量有所下降。結(jié)合藻類(lèi)分析的數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)藻類(lèi)數(shù)量低于正常養(yǎng)殖水體中藻類(lèi)數(shù)量，珠?；爻靥辽鷳B(tài)系統(tǒng)并不完整，從而導(dǎo)致致病性細(xì)菌的大量繁生，最終導(dǎo)致對(duì)蝦發(fā)病。第五十一頁(yè)，共89頁(yè)。海南：發(fā)病前后水體細(xì)菌弧菌數(shù)量第五十二頁(yè)，共89頁(yè)。海南：發(fā)病前后蝦體細(xì)菌弧菌數(shù)量104、203塘，6月7號(hào)發(fā)病105塘，31號(hào)發(fā)病海南養(yǎng)殖對(duì)蝦蝦體總菌弧菌數(shù)量較低，與珠海相比低2個(gè)數(shù)量級(jí)，結(jié)合理化因子分析，推測(cè)在藻類(lèi)和益生菌的調(diào)控作用發(fā)揮到最大之后，氨氮等理化因子上升，池塘生態(tài)環(huán)境主要受到理化因子的脅迫。第五十三頁(yè)，共89頁(yè)。蝦發(fā)病后水體總菌升高的有4口塘，下降的有11口塘；水體弧菌升高的有8口塘，下降的有7口塘。結(jié)合氣候和藻類(lèi)檢測(cè)情況，導(dǎo)致細(xì)菌升高的原因與降雨倒藻有關(guān)，停料等因素導(dǎo)致細(xì)菌數(shù)的下降。電白：第五十四頁(yè)，共89頁(yè)。蝦發(fā)病后蝦體總菌升高有6口塘，下降的有9口塘；蝦體弧菌升高有7口塘，下降有8口塘。結(jié)合氣候和藻類(lèi)檢測(cè)情況，導(dǎo)致細(xì)菌升高的原因與降雨倒藻有關(guān)，停料等因素導(dǎo)致細(xì)菌數(shù)的下降。電白第五十五頁(yè)，共89頁(yè)。（一）肝胰腺壞死癥病因研究與分析1、肝胰腺壞死癥發(fā)生與條件致病菌的關(guān)系2、肝胰腺壞死癥發(fā)生與有毒藻類(lèi)的關(guān)系3、肝胰腺壞死癥發(fā)生與有害理化影子的關(guān)系4、肝胰腺壞死癥發(fā)生的生態(tài)系統(tǒng)問(wèn)題第五十六頁(yè)，共89頁(yè)。發(fā)病前后，水體優(yōu)勢(shì)藻為微囊藻的占總發(fā)病池塘的57.1%，以顫藻為優(yōu)勢(shì)藻的池塘占了35.7%，以綠藻為優(yōu)勢(shì)藻的池塘占了21.4%，以卵囊藻、偽魚(yú)腥藻和色球藻為優(yōu)勢(shì)藻的池塘各占了14.3%。以微囊藻、顫藻等有毒藻類(lèi)為優(yōu)勢(shì)藻的池塘占總發(fā)病池塘的92.8%。第五十七頁(yè)，共89頁(yè)。（一）肝胰腺壞死癥病因研究與分析1、肝胰腺壞死癥發(fā)生與條件致病菌的關(guān)系2、肝胰腺壞死癥發(fā)生與有毒藻類(lèi)的關(guān)系3、肝胰腺壞死癥發(fā)生與有害理化影子的關(guān)系4、肝胰腺壞死癥發(fā)生的生態(tài)系統(tǒng)問(wèn)題第五十八頁(yè)，共89頁(yè)。海南六口塘均在不同時(shí)候有不同程度的發(fā)病，其中102,104,202,203發(fā)病后幾天內(nèi)有所緩解，發(fā)病程度較輕，103,105發(fā)病幾天后情況有所加重。對(duì)比發(fā)病前后各理化因子變化，得出，氨氮與發(fā)病情況相關(guān)性較大。第五十九頁(yè)，共89頁(yè)。海南此次養(yǎng)殖過(guò)程中只下過(guò)一場(chǎng)雨，對(duì)比下雨前后各態(tài)氮以及無(wú)機(jī)氮的變化，可以看出在降雨后一天氨氮，無(wú)機(jī)氮，硝態(tài)氮均明顯上升（尤其是氨氮），這可能是由于陰雨天氣帶來(lái)的藻類(lèi)大量死亡，對(duì)無(wú)機(jī)氮的吸收作用明顯降低，同時(shí)對(duì)蝦排泄物積累以及藻類(lèi)死亡會(huì)分解出氨氮排放到池塘內(nèi)，造成氨氮急劇上升。第六十頁(yè)，共89頁(yè)。臺(tái)風(fēng)影響下，藻類(lèi)大量死亡，對(duì)無(wú)機(jī)氮吸收作用減弱，臺(tái)風(fēng)過(guò)后3天氨氮和無(wú)機(jī)氮總量均驟升。珠海第六十一頁(yè)，共89頁(yè)。海南：控料后5天，水體營(yíng)養(yǎng)鹽輸入穩(wěn)定，氨氮總體呈現(xiàn)一個(gè)下降的態(tài)勢(shì)，無(wú)機(jī)氮總體呈現(xiàn)稍微下降至穩(wěn)定，控料五天后硝酸鹽先下降后升高（后期升高部分主要是氨氮轉(zhuǎn)化），控料過(guò)程中發(fā)病緩解，對(duì)蝦狀態(tài)逐漸變好，無(wú)機(jī)氮穩(wěn)定且其中有害理化因子氨氮的逐漸轉(zhuǎn)化為硝酸鹽。第六十二頁(yè)，共89頁(yè)。

海南第六十三頁(yè)，共89頁(yè)。電白：天氣變化對(duì)水體含氮量的影響

天氣由晴轉(zhuǎn)多云，水體三態(tài)氮升高；由多云轉(zhuǎn)為降雨后，水體三態(tài)氮升高；由降雨轉(zhuǎn)多云，水體三態(tài)氮均降低。第六十四頁(yè)，共89頁(yè)。淡水中非離子氨占氨態(tài)氮的百分比含量（換算表）FromUnitedStatesEnvironmentalProtectionAgencyNationalLibraryNetwork溫度和PH與非離子氨在氨態(tài)氮中的百分比含量成正相關(guān)第六十五頁(yè)，共89頁(yè)。引自：鄒玲媛,承憲成.

非離子氨(UIA)水質(zhì)評(píng)價(jià)指標(biāo)及換算方法[J].

水產(chǎn)科學(xué).

2002(02)一般海水(S=34,I=0.7)中非離子氨占氨態(tài)氮的百分比含量（換算表）溫度和pH與非離子氨在氨態(tài)氮中的百分比含量成正相關(guān)，且對(duì)比淡水換算表，鹽度（離子強(qiáng)度）與非離子氨在氨態(tài)氮中的百分比含量成負(fù)相關(guān)第六十六頁(yè)，共89頁(yè)。電白：藻類(lèi)數(shù)量和天氣變化對(duì)pH變化值的影響藻類(lèi)數(shù)量升高，水體藻類(lèi)總光合作用增強(qiáng)，水體早晚pH之差增大，藻類(lèi)數(shù)量降低，藻類(lèi)總光合作用降低，水體早晚pH之差減小。天氣由晴天轉(zhuǎn)陰雨天，藻類(lèi)光合作用降低，水體早晚pH之差減小，由陰雨天氣轉(zhuǎn)多云，藻類(lèi)光合作用增強(qiáng)，水體早晚pH之差增大。第六十七頁(yè)，共89頁(yè)。實(shí)際上，對(duì)蝦池塘藻類(lèi)、條件致病菌和營(yíng)養(yǎng)鹽（含氨氮、亞硝酸鹽）之間發(fā)生了三個(gè)“級(jí)聯(lián)效應(yīng)”：1、第一“級(jí)聯(lián)效應(yīng)”：氣候變化（臺(tái)風(fēng)、溫度劇變、陰雨等），藻類(lèi)大量死亡——

營(yíng)養(yǎng)鹽增加+池底腐敗——水體細(xì)菌（含弧菌）數(shù)量增加——條件致病菌脅迫；2、第二“級(jí)聯(lián)效應(yīng)”：長(zhǎng)周期的天氣晴朗溫度適合的情況下，容易產(chǎn)生老化藻類(lèi)和老化益生菌（非功能性藻類(lèi)和非功能性益生菌）——造成有害理化因子、有毒藻類(lèi)和條件致病菌的脅迫。3、第三個(gè)“級(jí)聯(lián)效應(yīng)”：功能性藻類(lèi)、功能益生菌和理化調(diào)節(jié)劑等發(fā)揮最大功能——池塘營(yíng)養(yǎng)鹽無(wú)法有效消減——造成有害理化因子脅迫和有毒藻類(lèi)的脅迫。維持池塘生態(tài)系統(tǒng)功能性藻類(lèi)和功能性益生菌狀態(tài)、消減池塘水體和池底營(yíng)養(yǎng)鹽和有害理化因子、提高池塘生態(tài)系統(tǒng)抗環(huán)境脅迫能力等，控制生態(tài)系統(tǒng)“級(jí)聯(lián)效應(yīng)”成為對(duì)蝦健康的核心關(guān)鍵技術(shù)。第六十八頁(yè)，共89頁(yè)。廣東主要對(duì)蝦養(yǎng)殖地區(qū)常年基本氣候分析對(duì)廣東主要對(duì)蝦養(yǎng)殖地區(qū)2014年和2013年常年氣候進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，具體結(jié)果如下：第六十九頁(yè)，共89頁(yè)。湛江地區(qū)2013年4月-9月期間月陰雨天氣超過(guò)15天，2014年9天左右；珠海地區(qū)2013年4月-9月期間月陰雨天近20天，2014年近17天；茂名地區(qū)2013年4月-9月期間月陰雨天超過(guò)20天，2014年超過(guò)17天。總體來(lái)說(shuō)，粵西和珠江三角州地區(qū)對(duì)蝦主要養(yǎng)殖時(shí)間陰雨天超過(guò)15天，在此條件下，需要精細(xì)的池塘調(diào)控技術(shù)。第七十頁(yè)，共89頁(yè)。

圖二溴海因處理前后水體總菌數(shù)變化

圖二溴海因處理前后水體弧菌數(shù)變化

在茂名基地養(yǎng)殖池塘開(kāi)展了采取不同消毒方式后細(xì)菌的變化研究：（1）二溴海因；（2）二溴海因+沸石粉第七十一頁(yè)，共89頁(yè)。圖二溴海因+沸石粉處理前后總菌數(shù)變化圖二溴海因+沸石粉處理弧菌數(shù)變化第七十二頁(yè)，共89頁(yè)。（一）肝胰腺壞死癥病因研究與分析1、肝胰腺壞死癥發(fā)生與條件致病菌的關(guān)系2、肝胰腺壞死癥發(fā)生與有毒藻類(lèi)的關(guān)系3、肝胰腺壞死癥發(fā)生與有害理化影子的關(guān)系4、肝胰腺壞死癥發(fā)生的生態(tài)系統(tǒng)問(wèn)題第七十三頁(yè)，共89頁(yè)。肝胰腺壞死癥發(fā)生的根本原因

對(duì)蝦肝胰腺壞死癥發(fā)生的直接原因：

條件致病菌、有害理化因子和有毒藻類(lèi)三類(lèi)因子harmfulmicroalgae,

pathogens,ammonia,nitriate,

根本原因：——養(yǎng)殖生態(tài)系統(tǒng)紊亂，生態(tài)系統(tǒng)抗應(yīng)激能力弱，不能有效控制條件致病菌和有毒藻類(lèi)的發(fā)生；——單位時(shí)間內(nèi)養(yǎng)殖量超過(guò)了環(huán)境容納量，有毒理化因子不能被消除。

第七十四頁(yè)，共89頁(yè)。3、對(duì)養(yǎng)殖池塘條件致病菌、有毒藻類(lèi)和有害理化因子檢測(cè)結(jié)果分析，發(fā)現(xiàn)對(duì)蝦養(yǎng)殖過(guò)程可以分為早期生態(tài)系統(tǒng)、中期生態(tài)系統(tǒng)和晚期生態(tài)系統(tǒng)。第七十五頁(yè)，共89頁(yè)。1、早期生態(tài)系統(tǒng)（培水期和對(duì)蝦大量攝食飼料期，約30天）池塘營(yíng)養(yǎng)鹽缺乏：蝦苗攝食習(xí)性：——不足于時(shí)有益藻類(lèi)和益生菌持續(xù)調(diào)控生態(tài)系統(tǒng)的功能；——不足于抑制條件致病菌和有毒藻類(lèi)的產(chǎn)生；——蝦苗攝食底質(zhì)腐敗的有機(jī)物（死亡藻類(lèi)等）這是對(duì)蝦養(yǎng)殖早期發(fā)生HPNS的根本原因。

對(duì)蝦養(yǎng)殖過(guò)程可以分為早期生態(tài)系統(tǒng)、中期生態(tài)系統(tǒng)和晚期生態(tài)系統(tǒng)。第七十六頁(yè)，共89頁(yè)。2、中期生態(tài)系統(tǒng)（約養(yǎng)殖20天至70天）營(yíng)養(yǎng)鹽大量輸入，容易產(chǎn)生老化的藻類(lèi)和益生菌：——隨著營(yíng)養(yǎng)鹽的大量輸入，老化藻類(lèi)和老化益生菌（非功能性藻類(lèi)和益生菌）過(guò)多，失去了生態(tài)系統(tǒng)調(diào)控功能，生態(tài)系統(tǒng)紊亂；——在環(huán)境脅迫條件下老化藻類(lèi)和益生菌大量死亡，不但不能抑制有毒藻類(lèi)和條件致病菌的發(fā)生，而且起到有害的作用?！衅谏鷳B(tài)系統(tǒng)決定了對(duì)蝦養(yǎng)殖容納量這是對(duì)蝦養(yǎng)殖中期發(fā)生HPNS的根本原因。第七十七頁(yè)，共89頁(yè)。（3）晚期生態(tài)系統(tǒng)（約養(yǎng)殖70天以后）營(yíng)養(yǎng)鹽的輸入大于有益藻類(lèi)吸收和益生菌的轉(zhuǎn)化能力：——有益藻類(lèi)和益生菌作用達(dá)到最大值；——僅依靠有益藻類(lèi)調(diào)控和益生菌調(diào)控已經(jīng)不能維持健康生態(tài)系統(tǒng)；——有害理化因子升高.這是為什么目前對(duì)蝦養(yǎng)殖難以超過(guò)80天的原因所在。第七十八頁(yè)，共89頁(yè)。對(duì)蝦肝胰腺壞死癥（HPNS）防控技術(shù)手冊(cè)初步建立了對(duì)蝦肝胰腺壞死癥生態(tài)防控技術(shù)1、池塘清理2、培水3、種苗密度4、種苗病原檢測(cè)5、養(yǎng)殖周期6、餌料投喂控制7、測(cè)水調(diào)水8、有毒藻類(lèi)監(jiān)控與調(diào)控9、條件致病菌監(jiān)控與處理10、肝胰腺壞死癥控制技術(shù)第七十九頁(yè)，共89頁(yè)。

——2014年第一造，在廣東和海南選擇三個(gè)地點(diǎn)進(jìn)行了技術(shù)示范，共118口池塘，養(yǎng)殖時(shí)間超過(guò)90天，114口池塘養(yǎng)殖成功，養(yǎng)殖成功率超過(guò)94%。——養(yǎng)殖成功池塘平均產(chǎn)量超過(guò)1000斤/畝。——