內(nèi)蒙古自治區(qū)地方計量技術(shù)規(guī)范JJF(蒙)067—20242024-03-01發(fā)布2024-03-01發(fā)布CalibrationSpeJJF(蒙)067-2024王輝（滿洲里市檢驗檢測中心）劉大偉（赤峰市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗檢測中心）JJF(蒙)067-2024 JJF(蒙)067-2024JJF(蒙)067-2024快速核酸檢測儀校準規(guī)范本規(guī)范適用于快速核酸檢測儀的校準，其他類似設(shè)備JJF(蒙)067-20242從基礎(chǔ)溫度升溫或降溫至設(shè)定溫度時模塊內(nèi)實測溫度偏離設(shè)定溫度的表1快速核酸檢測儀計量特性技術(shù)要求基于實時熒光PCR技術(shù)基于等溫擴增技術(shù)溫度偏差平均升溫速率-平均降溫速率-平均過沖溫度≤2℃-溫度波動度-持續(xù)時間偏差樣本檢測重復(fù)性≤5%3），表2測量標準、其他設(shè)備及技術(shù)要求序號名稱規(guī)格技術(shù)要求基于實時熒光PCR技術(shù)基于等溫擴增技術(shù)1溫度參數(shù)測量標準測量范圍0～120）℃最大允許誤差：0.1℃采樣時間間隔：≤0.1s測量范圍0～120）℃最大允許誤差：0.1℃采樣時間間隔：≤10s2時間參數(shù)測量標準采用溫度記錄器的記錄時間作為快速核酸檢測儀時間測量標準3新型冠狀病毒核酸標準物質(zhì)ORFlab基因、N基因國家有證標準物質(zhì)4移液器表3快速核酸檢測儀校準項目校準項目基于實時熒光PCR技術(shù)基于等溫擴增技術(shù)溫度偏差++平均升溫速率+-平均降溫速率+-平均過沖溫度+-溫度波動度-+4持續(xù)時間偏差++++7.2溫度校準獨立控溫模塊快速核酸檢測儀可逐個模塊校準或同時對多個模塊分別校準，參照圖1所示。非獨立控溫的快速核酸檢測儀作為一個整體進行溫度校準，以8通道、16通道快速核酸檢測儀為例，布點遵循均勻分布的原則，可參照圖2(a)和圖2(b)所示，每增加8通道可增加3個點。多模塊或多通道的快速核酸檢測儀以所有布點計算結(jié)果的最大值作為測量結(jié)果?；趯崟r熒光PCR技術(shù)的快速核酸檢測儀控溫程序設(shè)置可參照表4進行，設(shè)置溫度采樣間隔為0.1s?；诘葴財U增技術(shù)的快速核酸檢測儀溫度設(shè)定程序可參照表5進行，設(shè)置溫度采樣間隔為10s。也可根據(jù)用戶要求設(shè)置溫控程序。將專用無線溫度校準裝置置入樣品槽中，啟動溫度測量標準，自動采集并記錄整個循環(huán)程序溫度數(shù)據(jù)。JJF(蒙)067-2024表4基于實時熒光PCR技術(shù)快速核酸檢測儀控溫程序步驟設(shè)定溫度點/℃設(shè)定溫度持續(xù)時間/s循環(huán)數(shù)1121364516171表5基于等溫擴增技術(shù)快速核酸檢測儀控溫程序步驟設(shè)定溫區(qū)設(shè)定溫度點/℃設(shè)定溫度持續(xù)時間/min1上溫區(qū)2中溫區(qū)3下溫區(qū)DTd=Tc-TsT=1Ti()ni=1TTTn——測量次數(shù)。690℃后采集的第一個值)計算升溫速率，平均升溫速率按照公式(3)、(4)計算：TA—50℃溫度點測量值，℃;m——累積循環(huán)數(shù)，按本規(guī)范程序設(shè)置為6。7.2.4平均降溫速率(基于實時熒光PCR技術(shù))從95℃降至40℃過程中截取90℃至50℃的溫度曲線如圖3所示(取溫度降至90℃和50第一個值)計算降溫速率，平均降溫速率按照公式(5)、(6)計算：T?——50℃溫度點測量值，℃;TB—90℃溫度點測量值，℃;7m——累積循環(huán)數(shù)，按本規(guī)范程序設(shè)置為6。7.2.5平均過沖溫度(實時熒光PCR技術(shù))模塊溫度從40℃升溫至設(shè)定溫度95℃或從95℃降溫至設(shè)定溫度40℃時，模塊內(nèi)實測溫度偏離設(shè)定溫度的溫度值，如圖4所示。平均升溫過沖溫度按照公式(7)、(8)計算，平均降溫過沖溫度按照公式(9))、(10)計算?！鱐?c——模塊升溫平均過沖溫度，℃;Tssc—模塊設(shè)定溫度值，95℃;Tm——模塊第i個循環(huán)升溫實測最大過沖溫度，℃;m——累積循環(huán)數(shù)，按本規(guī)范程序設(shè)置為6。87.2.6溫度波動度(等溫擴增技術(shù))溫度波動度按照公式(11)計算：△T,——模塊溫度波動度，℃;Tmax——模塊恒溫時間內(nèi)實測最高溫度，℃;Tmin——模塊恒溫時間內(nèi)實測最低溫度，℃。t?、t?取點示意圖如圖5所示，持續(xù)時間的偏差按照公式(12)、(13)計算：式中：t.——實際持續(xù)時間，s;t?——校準裝置采集到的第一個到達設(shè)定溫度的時刻；t?——校準裝置采集到的最后一個維持設(shè)定溫度的時刻。7.3樣本檢測重復(fù)性樣本檢測重復(fù)性用變異系數(shù)表示。將標準物質(zhì)稀釋到高于檢出限的一定濃度(比如1000copies/mL)作為樣本，對同一模塊或通道進行6次或6次以上重復(fù)性檢測，分別記錄ORFlab基因和N基因的Ct值。按照公式(14)計算。JJF(蒙)067-2024CV=′100%（14）CV——變異系數(shù)；SD——標準差；M——測量結(jié)果的平均值。）；j）本次校準所用測量標準的溯源性及有效性說明；JJF(蒙)067-2024JJF(蒙)067-2024 型號規(guī)格標準器名稱標準器編號溯源單位證書編號溫度設(shè)定值實測溫度值/℃平均值溫度偏差123456……溫度設(shè)定值/℃測量點123456……JJF(蒙)067-2024溫度設(shè)定值/℃測量點123456……T測量值/℃123456……Tmax或Tmin溫度值/℃測量值/℃TmaxDTf時刻設(shè)定值/s持續(xù)時間/sJJF(蒙)067-2024核酸濃度變異系數(shù)附錄B1.布點示意圖如B.1所示。2.校準結(jié)果：校準項目校準結(jié)果擴展不確定度溫度偏差/℃平均升溫速率/(℃/s)平均降溫速率/(℃/s)升溫平均過沖溫度/℃降溫平均過沖溫度/℃溫度波動度/℃持續(xù)時間偏差/s/JJF(蒙)067-2024 DTd=Tc-Ts TT2==-1表C.1測量重復(fù)性數(shù)據(jù)單位：℃設(shè)定溫度實測溫度平均溫度JJF(蒙)067-2024 (Ti-T2(Ti-T2表C.2重復(fù)性引入的標準不確定度分量單位：℃表C.3各標準不確定度分量匯總溫度點(℃)熒光定量擴增設(shè)備校準系統(tǒng)的準確度引入的不確定度分量重復(fù)性引入的不確定度分量JJF(蒙)067-2024靈敏系數(shù)c1u2(℃)u3(℃)靈敏系數(shù)