醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

實(shí)驗(yàn)守則

一、一般要求

1、預(yù)習(xí)：學(xué)生在實(shí)驗(yàn)課前應(yīng)認(rèn)真預(yù)習(xí)本實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)以及教材有關(guān)章節(jié)，

必須對(duì)該次實(shí)驗(yàn)的目的要求、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容、基本原理和操作方法有一定的了

解。

2、講解：教師只對(duì)該實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的安排及注意事項(xiàng)進(jìn)行講解，讓學(xué)生

有充分的時(shí)間按實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)的順序進(jìn)行獨(dú)立的操作和觀察。

3、獨(dú)立操作與觀察：實(shí)驗(yàn)一般都由學(xué)生獨(dú)立進(jìn)行，在實(shí)驗(yàn)中要按操

作程序反復(fù)練習(xí)，以達(dá)到一定的熟練程度。

4、示教：有些實(shí)驗(yàn)備有示教。其目的是幫助學(xué)生對(duì)某些較難的操作

過(guò)程和觀察材料給予演示，學(xué)生建立初步認(rèn)識(shí)后，再獨(dú)立操作，仔細(xì)觀察。

5、作業(yè)：實(shí)驗(yàn)報(bào)告必須根據(jù)各人的觀察，以實(shí)事求是和一絲不茍的

精神忠實(shí)地記錄、分析、綜合。不得抄襲教材或其他同學(xué)的報(bào)告。實(shí)驗(yàn)報(bào)

告一般應(yīng)于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)呈交。它的形式可因?qū)嶒?yàn)內(nèi)容而不同。

6、總結(jié)：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，一般由教師說(shuō)明該次實(shí)驗(yàn)的主要收獲及今后

應(yīng)注意的事項(xiàng)。

二、實(shí)驗(yàn)室規(guī)則和注意事項(xiàng)

1、學(xué)生上實(shí)驗(yàn)課時(shí)必須攜帶教材、實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)、實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙和文具，

進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室要求穿好工作服，按規(guī)定座位入座。

2、實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前要檢查所用儀器、材料、實(shí)驗(yàn)用品是否完好齊全。如

有缺損及時(shí)向帶課教師報(bào)告，自己不得隨意調(diào)換儀器和實(shí)驗(yàn)用品。

3、實(shí)驗(yàn)時(shí)要遵守紀(jì)律，聽(tīng)從教師指導(dǎo)，保持肅靜。有問(wèn)題時(shí)舉手提

問(wèn)，嚴(yán)禁彼此談笑喧嘩或隨意走動(dòng)，也不得進(jìn)行和實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的其他活動(dòng)。

4、實(shí)驗(yàn)時(shí)要遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程，嚴(yán)格按照教師的安排和實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)的

要求進(jìn)行。操作要正規(guī)，觀察要認(rèn)真仔細(xì)，邊做邊看、邊想，及時(shí)完成實(shí)

驗(yàn)報(bào)告。

5、要愛(ài)護(hù)儀器、標(biāo)本和器材設(shè)備，注意節(jié)約實(shí)驗(yàn)材料、試劑和水電。

如損壞了儀器或器材應(yīng)主動(dòng)報(bào)告，說(shuō)明情況。

6、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)自覺(jué)清理實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，認(rèn)真清理好儀器、試劑及其

他用品，放回原處。值日生要負(fù)責(zé)清掃地面，收拾實(shí)驗(yàn)用品，處理垃圾,

關(guān)好水電、門(mén)窗后再離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室。

7、實(shí)驗(yàn)課不得遲到、早退或無(wú)故缺課。

1

實(shí)驗(yàn)一正常人類(lèi)染色體核型觀察及分析

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、熟悉人類(lèi)染色體的數(shù)目及形態(tài)特征。

2、掌握非顯帶染色體的核型分析方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

人類(lèi)非顯帶染色體核型分析是染色體研究的一項(xiàng)基本內(nèi)容，它的一般

程序是先利用顯微照相裝置拍攝人類(lèi)非顯帶染色體的圖象，并放大成染色

體照片，然后按照國(guó)際上統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)染色體的長(zhǎng)短、著絲粒的位置、

隨體的有無(wú)等特征，將人的全套染色體分組編號(hào)，并按順序成對(duì)地將染色

體剪貼，制成染色體核型圖，然后確定染色體核型，這個(gè)過(guò)程就稱(chēng)為核型

分析。利用核型分析可以檢查染色體數(shù)目是否正常，并可發(fā)現(xiàn)較大的染色

體結(jié)構(gòu)畸變以及判定性別等。

ISCN規(guī)定，人的46條染色體中的44條為男女共有的常染色體,

配成22對(duì)同源染色體，按1~22編號(hào)，根據(jù)染色體的長(zhǎng)度和著絲粒的位置

可分為A、B、C、D、E、F、G等7個(gè)組，另外還有2條染色體為性染色

體，男性為X、Y,女性為X、XoX染色體屬于C組，Y染色體屬于G組。

三、實(shí)驗(yàn)用品

1、器械：光學(xué)顯微鏡、剪刀、鏡子、培養(yǎng)皿、擦鏡紙、膠水或漿糊。

2、試劑：乙酸乙酯、香柏油。

3、材料：正常人染色體標(biāo)本、中期染色體分裂相照片。

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

（一）、正常人染色體標(biāo)本形態(tài)觀察

取染色體標(biāo)本，先在低倍鏡下尋找染色體分散良好的中期分裂相，然

后轉(zhuǎn)到油鏡下仔細(xì)觀察分析染色體的形態(tài)特征。鏡下可見(jiàn)，中期細(xì)胞染色

體都已縱裂成2條染色單體，稱(chēng)姐妹染色單體，由一個(gè)著絲粒相連，每條

染色體以著絲粒為界又分為長(zhǎng)、短臂。先計(jì)數(shù)染色體總數(shù)，然后識(shí)別染色

體長(zhǎng)、短臂及隨體，區(qū)分中央著絲粒、亞中著絲粒、近端著絲粒染色體,

再根據(jù)各組染色體的特征予以辨別。

按下述各組染色體的特征對(duì)染色體進(jìn)行分組分析。

2

A組：包括1~3號(hào)共3對(duì)，是最大的一組染色體，第I號(hào)為一對(duì)最大

的中著絲粒染色體；2號(hào)較1號(hào)短些，為最大的亞中著絲粒染色體；3號(hào)

為次大中著絲粒染色體，是A組中最小的一個(gè)。

B組：包括4號(hào)和5號(hào)染色體，均為亞中著絲粒染色體，短臂較短，

彼此間難于區(qū)別。C組：包括6~12號(hào)及X染色體，均為亞中著絲粒染色

體，它們的大小差不多，彼此間難于區(qū)別，其中6、7、8、11及X染色體

短臂較長(zhǎng)，9、10、12號(hào)染色體短臂較短。X染色體大小介于7~8染色體

之間。

D組：包括13、14、15號(hào)三對(duì)染色體，均為中等大小的近端著絲粒染

色體，常有隨體處于短臂的末端，彼此間難于區(qū)別。

E組：包括16、17、18號(hào)三對(duì)染色體，較易區(qū)分，16號(hào)為中著絲粒

染色體，17、18號(hào)為亞中著絲粒染色體，18號(hào)最小，且短臂在E組中最

短。

F組：包括19、20號(hào)染色體，是最小的一組中央著絲粒染色體，相互

間很難區(qū)分。G組；包括21、22號(hào)和Y染色體，是最小的近端著絲粒染

色體，Y染色體是G組中最大的，且沒(méi)有隨體，長(zhǎng)臂平行伸展。21、22常

有隨體，22比21要大些。

（二）、顯微照片核型分析

每個(gè)人取2張相同的正常人中期分裂相染色體照片，首先辨別核型性

別，一般根據(jù)C組和G組的染色體數(shù)目來(lái)判斷，如果C組為16條染色體，

G組為4條染色體，可初步確定該核型是46,XX；如果C組為15條染色

體，G組有5條染色體，則可初步確定該核型為46,XYo然后將小張核型

圖片貼于報(bào)告單的上方空白處，以作對(duì)照。將大張圖片中的每一條染色體

逐條剪下，放到培養(yǎng)皿中，根據(jù)各組特征，按染色體短臂朝上，長(zhǎng)臂朝下，

著絲粒的位置在同一直線上的原則，分別以組、號(hào)順序依次排列在培養(yǎng)皿

中（一般先排列

A、B、D、E、F、G組，C組可留在最后排列），檢查無(wú)誤后粘貼于核

型分析報(bào)告紙上。最后寫(xiě)出分析結(jié)果、報(bào)告者、日期。正常男性核型寫(xiě)為：

46,XY；正常女性核型寫(xiě)為：46,XX

3

［附表］分裂中期染色體分組編號(hào)和主要形態(tài)

組號(hào)染色體號(hào)形態(tài)大小著絲粒位置鑒別要求

A1-3最大中央、亞中著絲粒要求明確區(qū)

分各號(hào)

B4~5次大亞中著絲粒要求不與其

他組相混

C6-12+X中等亞中著絲粒要求按長(zhǎng)短

排列

D13-15中等近端著絲粒要求不與其

他組相混E16-18較小中央、亞中著絲粒要求

明確區(qū)分各號(hào)F19~20次小中央著絲粒

要求不與其他組相混G21-22+Y最小近端著絲粒

要求21、22與Y區(qū)別

［作業(yè)］

1、參照鏡下繪一個(gè)正常人染色體核型快速線條圖，并標(biāo)明1、2、3、

16號(hào)，其余注明組別。

2、每人剪貼分析一個(gè)正常人染色體核型照片。

4

實(shí)驗(yàn)二人類(lèi)G顯帶染色體核型分析

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.觀察G顯帶染色體的形態(tài)結(jié)構(gòu)，了解各號(hào)染色體G帶帶型特征。

2.初步掌握G顯帶核型分析方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

人類(lèi)染色體標(biāo)本經(jīng)過(guò)G顯帶處理后，在每條染色體上可顯示出深淺相

間的條紋，而且有較為恒定的G帶帶紋特征。觀察及分析G帶染色體，可

較為準(zhǔn)確的識(shí)別每條染色體，并可發(fā)現(xiàn)染色體上較細(xì)微的結(jié)構(gòu)畸變，從而

提高染色體核型分析的準(zhǔn)確性。通常染色體長(zhǎng)臂和短臂上被Giemsa染液

深染者稱(chēng)為深帶，淺染或未被染色者稱(chēng)為淺帶。在描述每一條染色體上的

帶時(shí)，根據(jù)帶紋距離著絲粒的遠(yuǎn)近，常使用臂的近端（近側(cè)段）、中部（中

段）、遠(yuǎn)端（遠(yuǎn)側(cè)段）、末端等名稱(chēng)。

三、實(shí)驗(yàn)用品

1、器械：光學(xué)顯微鏡、剪刀、鏡子、培養(yǎng)皿、擦鏡紙、膠水或漿糊。

2、試劑：乙酸乙酯、香柏油。

3、材料：正常人染色體G顯帶標(biāo)本、中期染色體G顯帶分裂相照片。

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

在G顯帶染色體照片上按每號(hào)染色體的特征仔細(xì)辨別每條染色體，在

此基礎(chǔ)上用剪刀將照片上的染色體逐條剪下，排列在核型分析報(bào)告紙上,

經(jīng)反復(fù)調(diào)整，認(rèn)為準(zhǔn)確無(wú)誤后用膠水貼上。根據(jù)核型分析結(jié)果，填寫(xiě)核型、

報(bào)告者、報(bào)告日期。

附1:各號(hào)染色體的帶型特點(diǎn)及鑒別要點(diǎn)

A組：1~3號(hào)染色體。

1號(hào)染色體：

P：近著絲粒處有兩個(gè)深帶，但中部的深帶較寬，遠(yuǎn)端著色漸淺。在

處理較好的標(biāo)本上，遠(yuǎn)側(cè)段可見(jiàn)3?4條淺染的深帶。

q：緊貼著絲粒處為深染的次縊痕（呈多態(tài)性），中段和遠(yuǎn)側(cè)段各有兩

條深帶，中段兩條深帶稍靠近，第二條深帶染色較濃。

5

第1號(hào)染色體鑒別并不困難，但如不注意有時(shí)會(huì)把長(zhǎng)短臂顛倒。有兩

個(gè)明顯的特征可用以區(qū)別長(zhǎng)臂與短臂。其一是短臂遠(yuǎn)側(cè)的一半幾乎為淺染

區(qū)；其二是深染的次縊痕位于長(zhǎng)臂且緊靠著絲粒。

2號(hào)染色體：

P：可見(jiàn)4條深帶，中段的兩條深帶稍靠近些。

q：可見(jiàn)4?7條帶，接近著絲粒的1/3區(qū)段的著色甚淺，其余的遠(yuǎn)

側(cè)區(qū)段上，帶紋分布較均勻，著色也深。

3號(hào)染色體：

兩臂帶型分布對(duì)稱(chēng)，形似“蝴蝶”，為該染色體的獨(dú)有特征，p、q中

部各有一條明顯而寬的淺帶，著絲粒及附近區(qū)段的著色深。

P：近端可見(jiàn)1條深帶，遠(yuǎn)端2條深帶較靠近末端，其中遠(yuǎn)側(cè)的一條

帶較窄，著色較淺，是鑒別第3號(hào)染色體短臂的主要特征。

q：長(zhǎng)臂的近側(cè)部和遠(yuǎn)側(cè)部一般各有1條較寬的深帶。

B組：4~5號(hào)染色體。

4號(hào)染色體：

P：中央一條中等著色帶。

q：4~5條分布均勻的中等著色帶，質(zhì)量?jī)?yōu)良的標(biāo)本中，近中段的兩條

帶又各劃分為兩條深帶。

5號(hào)染色體：

P：中央一條中等著色帶，比4號(hào)更容易深染。

q：中段可見(jiàn)3條深帶，染色較深，有時(shí)融合在一起，呈“黑腰”。遠(yuǎn)

端可見(jiàn)1?2條深帶，其中末端的一條深帶著色更濃。

C組：6~12號(hào)和X染色體。

6號(hào)染色體：

P：中段有一較寬的淺帶，遠(yuǎn)端兩條深帶常融合成一條。

q：可有4~6條深帶，近側(cè)的一條緊貼著絲粒，遠(yuǎn)側(cè)末端的一條深帶

窄而且著色較淺。7號(hào)染色體：

P：末端有一深染帶，形似“瓶蓋”。

q：可見(jiàn)3條分布均勻的著色帶，近側(cè)部和中部的2條帶著色深，遠(yuǎn)

側(cè)近末端的一條深帶著色較淺。

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8號(hào)染色體：

外形使人感到它的帶紋較為模糊。

P：近側(cè)段和遠(yuǎn)測(cè)段各有一條著色帶，中段有一條較寬的淺帶，這是

與10號(hào)染色體短臂相區(qū)別的主要特征。

q：常見(jiàn)2~3條界線不明顯的深帶，遠(yuǎn)端一條染色較深。

9號(hào)染色體：

P：遠(yuǎn)端可見(jiàn)2條深帶，常融合為1條較寬的帶。

q：有2條明顯的深帶，次縊痕通常不著色且往往是多態(tài)性的；有些

標(biāo)本上呈現(xiàn)出特有的“頸部區(qū)二

10號(hào)染色體：

P：大多不出現(xiàn)明顯的深帶；在較好的標(biāo)本上，可出現(xiàn)2條淺染的深

帶。q：有明顯的3條深帶，近端一條染色最深。

11號(hào)染色體：

P：較長(zhǎng)，近中部可見(jiàn)2條深帶（有時(shí)融合為1條）。

q：近中部有2條深帶，常融合成一條，與著絲粒之間是一條較寬的

淺帶。12號(hào)染色體：

P：中部可見(jiàn)一條深帶。

q：中部由中間寬，兩邊窄的3條深帶組成，常融合成一條較寬的深

帶，與著絲之間有一條淺帶，與11號(hào)相比較窄。

X染色體：

大小介于7號(hào)和8號(hào)染色體之間。

P：中部1條明顯的深帶，猶如“竹節(jié)狀”。近端和遠(yuǎn)端為染色較淺的

帶。q：可見(jiàn)4條深帶，近側(cè)部的一條深帶最明顯。

p中部的深帶和q近側(cè)的深帶到著絲粒的距離幾乎是對(duì)稱(chēng)的。

D組：13~15號(hào)染色體

13號(hào)染色體：

P：短臂和隨體均為深染。

q：可見(jiàn)4條深帶，第1和第4條深帶較窄，色亦較淡；第2條深帶

最寬，第3條次之；有時(shí)第2、3和4帶融合在一起。

14號(hào)染色體：

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P：短臂和隨體均為深染。

q：4條深帶，近側(cè)部的第一條窄和第二條寬的深帶常融合在一起，近

側(cè)部的第2帶和遠(yuǎn)側(cè)部的第4帶特別明顯，這二者之間為一很窄且著色較

淺的帶；在較差的標(biāo)本上，通常只顯現(xiàn)兩個(gè)明顯的深帶。

15號(hào)染色體：

P：著絲粒和短臂均為深染。

q：近端有一較窄深帶，中段有一條明顯的深帶，接近末端處有一著

色帶較窄并封口。E組：16~18號(hào)染色體。

16號(hào)染色體：

P：通常著色較淺，但在較好的標(biāo)本上可見(jiàn)1?2條著色不很深的帶

q：著絲粒和次縊痕著色均深，近中部有一明顯的深帶，在較好的標(biāo)

本上，遠(yuǎn)側(cè)部可見(jiàn)另1條著色不太深的帶。

17號(hào)染色體：

P：淺染，中部通常為一窄的深帶。

q：遠(yuǎn)端通?？梢?jiàn)一較寬的深帶，在較好的標(biāo)本上它顯現(xiàn)為2條窄的

深帶，在這條深帶與著絲粒之間為一明顯而寬的淺帶。

18號(hào)染色體：

P：淺染。

q：近側(cè)和遠(yuǎn)側(cè)各有一條明顯的深帶。

F組：19~20號(hào)染色體。

19號(hào)染色體：

著絲粒及其周?chē)钊?，p、q均為淺染。在有些標(biāo)本上長(zhǎng)臂近中段可顯

出一條著色極淺的帶。

20號(hào)染色體：

著絲粒的染色深。

P：有一顯著的深帶。

q：幾乎為淺染色。

G組：21、22號(hào)與Y染色體。

21號(hào)染色體：

著絲粒著色淡，其長(zhǎng)度比22號(hào)染色體短，長(zhǎng)臂緊貼著絲粒處為一深

染色的寬帶。8

22號(hào)染色體：

著絲粒染色深，比21號(hào)染色體長(zhǎng)，在長(zhǎng)臂上可見(jiàn)兩條深帶，近側(cè)的

一條著色濃且緊貼著絲粒，呈點(diǎn)狀，近中段的一條染色淡，在有的標(biāo)本上

不顯現(xiàn)。

Y染色體：

p一般不著色；q遠(yuǎn)側(cè)1/2處是核型中著色最深的區(qū)段，但其長(zhǎng)度變

化不一，有時(shí)整個(gè)長(zhǎng)臂被染成深色。

附2：人類(lèi)染色體G帶歌謠

一禿二蛇三蝶飄，四像鞭炮五黑腰；六號(hào)像個(gè)小白臉，七蓋八下九苗

條；十號(hào)長(zhǎng)臂近帶好，十一低來(lái)十二高；十三、四、五一二一，十六長(zhǎng)臂

縊痕大；十七長(zhǎng)臂帶腳鐐，十八白頭肚子飽；十九中間一點(diǎn)腰；二十頭重

腳飄飄；二十一好像黑葫蘆瓢，二十二頭上一點(diǎn)黑；X染色一擔(dān)挑，Y染

色長(zhǎng)臂帶黑腳。

［作業(yè)］

分析一張正常人G顯帶核型照片。

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人類(lèi)染色體G帶核型

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實(shí)驗(yàn)三人類(lèi)外周血淋巴細(xì)胞的

培養(yǎng)及染色體標(biāo)本制備技術(shù)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、熟悉人體外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)的方法和步驟。

2、掌握人體外周血淋巴細(xì)胞染色體標(biāo)本制備的方法。

3、訓(xùn)練在顯微鏡下觀察分析染色體的能力。

二、實(shí)驗(yàn)原理

在人類(lèi)染色體研究中，外周血是運(yùn)用最多的材料。外周血中的淋巴細(xì)

胞在體外培養(yǎng)時(shí)因受PHA的刺激轉(zhuǎn)化成能進(jìn)入有絲分裂的幼細(xì)胞；并以紡

錘體抑制劑秋水仙素作用于細(xì)胞，使其停滯于分裂中期，從而可制備出處

于有絲分裂中期的染色體標(biāo)本。

三、實(shí)驗(yàn)用品

1、儀器設(shè)備：潔凈工作臺(tái)（或無(wú)菌工作罩、或無(wú)菌操作室）、370c恒

溫培養(yǎng)箱、電冰箱、鼓風(fēng)干燥機(jī)、恒溫水浴鍋、離心機(jī)、高壓消毒鍋、分

析天平、顯微鏡等。

2、一般用品：培養(yǎng)瓶、5ml一次性注射器、棉簽、止血帶、5ml刻度

離心管、吸管和滴頭、試管架、粗天平、燒杯、量筒、載玻片（冰濕）、

PH試紙等等。

3、試劑：肝素（500IU/ml）＞秋水仙素溶液（50ug/ml）、RPMI1640.

小牛血清、青霉素、鏈霉素、5%NaHCO3、植物凝集素（PHA）、0.075mol

/LKQ溶液、甲醇、冰醋酸、Giemsa染液、雙蒸水、生理鹽水等。

4、材料：人外周血

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

（一）、外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)

1、采血接種：用含有肝素的消毒注射器抽取靜脈血，按每培養(yǎng)瓶0.3ml

接種（注意無(wú)菌操作）。

2、培養(yǎng)：搖勻培養(yǎng)物后，靜置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)約72小時(shí)。

3、秋水仙素處理：在終止培養(yǎng)前3~4小時(shí)加入秋水仙素溶液，使最

終濃度為0.05~0.4ug/ml培養(yǎng)基，輕搖混勻后，繼續(xù)放入37℃恒溫培養(yǎng)箱

內(nèi)培養(yǎng)至72小時(shí)，以積累更多的中期分裂相。

11

（二）、染色體標(biāo)本的制備

1、收獲：輕搖混勻培養(yǎng)物后，用吸管吸至錐形刻度離心管內(nèi)。平衡

后離心（1000~1200轉(zhuǎn)/分）8?10分鐘，吸去上清液，留沉淀物約0.5ml。

2、低滲：加入37℃預(yù)溫的0.075mol/LKCI溶液至4ml,用滴管吹打

混勻，37℃水浴中置20分鐘。

3、預(yù)固定：在低滲后，沿管壁緩緩加入1ml新配制的固定液（甲醇：

冰醋酸=3：1）用滴管吹打混勻，離心8?10分鐘，棄上清液，留沉淀物

約0.5ml。

4、固定：加入固定液至5ml,用滴管吹打混勻后以離心8?10分鐘，

棄上清液，留沉淀物約0.5ml。

5、再固定：加入固定液至5ml,用吸管吹打均勻，離心8?10分鐘，

去上清液。視細(xì)胞數(shù)量多少而加適量固定液制成細(xì)胞懸液。

6、滴片：在滴片前，將清潔載玻片在4℃冰箱冷凍成冰片。用吸管吸

取混勻的細(xì)胞懸液在離冰片約15cm距離進(jìn)行滴片，每片約滴細(xì)胞懸液2?

3滴（注意滴片時(shí)動(dòng)作要快，以保證冰片的冰冷程度，且不要重疊），滴片

后斜放、干燥。

7、染色：標(biāo)本用Giemsa染液染色lOmin（染液用pH6.8的磷酸緩沖

液配制）。自來(lái)水沖凈，干后鏡檢。

8、觀察：將制片置于低倍鏡下觀察，選擇染色體分散好、清晰的中

期分裂相，然后換油鏡觀察染色體形態(tài)，在鏡下計(jì)數(shù)、分組和性別鑒定,

并能在鏡下準(zhǔn)確區(qū)分I、2、3、16、17、18對(duì)染色體。

五、注意事項(xiàng)

1、PHA是體外淋巴細(xì)胞培養(yǎng)成敗的關(guān)鍵問(wèn)題，PHA對(duì)淋巴細(xì)胞的作

用，個(gè)體差異較大。因此，要考慮它的質(zhì)量和濃度。濃度一般用1%?2%,

每毫升培養(yǎng)液加0.2?0.4ml；濃度過(guò)高可能會(huì)導(dǎo)致紅細(xì)胞凝集。

2、秋水仙素溶液濃度和處理時(shí)間。一般最終濃度每毫升培養(yǎng)液0.1?

0.211g為宜，作用時(shí)間為3?5h,一般秋水仙素溶液的濃度與處理時(shí)間

有一定的關(guān)系。如果處理時(shí)間太短，則標(biāo)本中的分裂細(xì)胞就少，相反，如

果處理時(shí)間太長(zhǎng)，則標(biāo)本中的分裂細(xì)胞雖多，但其染色體縮得太短，以致

形態(tài)特征模糊。

、培養(yǎng)溫度應(yīng)嚴(yán)格控制在士

337℃0.5℃0

4、雙蒸水必須用玻璃蒸鏘器制備，PH應(yīng)在6?7之間。

12

5、低滲步驟極為重要，關(guān)系到染色體分散的好壞，因此，低滲液濃

度與低滲的時(shí)間應(yīng)掌握適當(dāng)。

6、離心機(jī)最好用水平式的，速度不宜過(guò)快。速度太快細(xì)胞團(tuán)不易打

散，反之分裂相易丟失；固定液應(yīng)在臨用時(shí)新鮮配制，固定一定要徹底、

均勻。若打散不夠，則細(xì)胞在玻片上易集結(jié)。

7、若吹打時(shí)用力過(guò)猛，細(xì)胞易破碎，以致染色體數(shù)目不完整；培養(yǎng)

液的PH值應(yīng)掌握在7.4士0.1左右，PH值偏酸發(fā)育不良，偏堿時(shí)細(xì)胞出

現(xiàn)輕度固縮。

8、玻璃器皿要十分干凈、無(wú)酸，所用試劑以分析純?yōu)楹谩?/p>

9、操作過(guò)程應(yīng)保持高度無(wú)菌，嚴(yán)防細(xì)菌和病毒污染；

13

實(shí)驗(yàn)四人類(lèi)染色體G顯帶標(biāo)本的制備及觀察

、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、了解人類(lèi)染色體G顯帶技術(shù)方法

2、掌握鏡下各號(hào)染色體G帶帶型。

二、實(shí)驗(yàn)原理

人們利用不同的方法和染料處理染色體標(biāo)本后，可使每條染色體上出

現(xiàn)明暗相間，或深淺不同的帶紋，稱(chēng)為顯帶技術(shù)。上世紀(jì)70年代以來(lái)，

顯帶技術(shù)得到很大發(fā)展，人染色體經(jīng)胰蛋白酶或EDTA（乙二胺四乙酸二鈉）

等試劑處理后，再用Giemsa染料染色，染色體上出現(xiàn)深淺交替的橫紋，

即染色體的G帶。在眾多的顯帶技術(shù)中（Q帶、G帶、C帶、R帶、T帶、

N帶）,G帶是應(yīng)用得最廣泛的一種技術(shù)。因?yàn)镚顯帶技術(shù)具有設(shè)備要求低、

試劑便宜、G顯帶標(biāo)本穩(wěn)定而易于保存及觀察方便等優(yōu)點(diǎn)。

三、實(shí)驗(yàn)用品

1、器械：恒溫水浴鍋、溫度計(jì)、60ml立式染色缸、吸管、滴頭、電

吹風(fēng)。

2、試劑］：0.02%胰酶溶液、0.4%酚紅溶液、lNNaHCO3>10%Giemsa

染液、pH6.8磷酸緩沖液、0.85%NaCI溶液。

3、標(biāo)本：外周血培養(yǎng)按常規(guī)法制作染色體標(biāo)本（白片）。

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

（一）、G顯帶標(biāo)本制備

1、外周血培養(yǎng)按常規(guī)法制作染色體標(biāo)本，置75℃烘箱烘2~8小時(shí)或

置室溫自然老化3~7天左右。

2、將0.02%胰蛋白酶溶液倒入染色缸中，加入0.4%酚紅溶液2滴，

并以lNNaHCO3調(diào)節(jié)PH7.0左右，使顏色為橙色?；靹蚝?，置于37℃水

浴鍋恒溫。

3、將經(jīng)過(guò)老化的標(biāo)本片投入0.02%胰蛋白酶溶液中消化30-60秒。

4、取出已消化的標(biāo)本片，立即投入磷酸緩沖液中，沖洗殘留的胰酶。

5、用10%Giemsa染液染色10分鐘。

6、自來(lái)水沖洗，涼干或電吹風(fēng)吹干后鏡檢。

14

（二）、鏡檢

先在低倍鏡下選擇分散良好、長(zhǎng)度適中的中期分裂相，然后轉(zhuǎn)至油鏡

下觀察G帶帶型。選擇帶紋清晰的分裂相進(jìn)行分析，并在實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙上繪

出快速線條分裂相，標(biāo)明各條染色體序號(hào)。

五、注意事項(xiàng)

1、G顯帶的好壞，首先取決于染色體本身制片的質(zhì)量，染色體長(zhǎng)度要

適中，以早中期為宜，且中期相豐富、分散好，無(wú)胞漿背景。若染色體邊

緣發(fā)毛，為顯帶過(guò)頭，若染色體上未出現(xiàn)帶紋，則為顯帶不足，根據(jù)具體

情況調(diào)整顯帶時(shí)間。

2、標(biāo)本片齡不宜太長(zhǎng)，片齡越長(zhǎng)，細(xì)胞對(duì)胰酶處理的抵抗性越強(qiáng)，

片齡過(guò)長(zhǎng)的標(biāo)本染色后會(huì)導(dǎo)致斑點(diǎn)狀而非帶紋。

3、酶溫度和處理時(shí)間需控制好，一般胰酶處理時(shí)間不少于30秒。

［作業(yè)與思考］

1、什么是G帶？為什么說(shuō)G顯帶是應(yīng)用最廣泛的一種技術(shù)？

2、鏡下觀察并繪出一G帶染色體核型圖，在每個(gè)染色體旁標(biāo)明其序

號(hào)。

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實(shí)驗(yàn)五人類(lèi)染色體C顯帶技術(shù)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、學(xué)習(xí)C顯帶標(biāo)本制作方法、了解C顯帶技術(shù)原理。

2、掌握C顯帶染色體的基本特征。

二、實(shí)驗(yàn)原理

用強(qiáng)堿溶液加熱處理染色體標(biāo)本使其DNA變性后，再以溫?zé)岬柠}溶液

處理使其復(fù)性時(shí)，由高度重復(fù)DNA序列組成的染色體結(jié)構(gòu)性異染色質(zhì)區(qū)域

的DNA復(fù)性速度要明顯快于其它區(qū)域，因而易被Giemsa染液深染，在染

色體上呈現(xiàn)出特有的著絲粒和次縊痕深染區(qū)，即所謂的C帶，也稱(chēng)為著絲

粒異染色質(zhì)帶。而常染色質(zhì)只能顯示較淡的輪廓。由于人類(lèi)的第1號(hào)、9

號(hào)、16號(hào)染色體長(zhǎng)臂近著絲粒處為次縊痕區(qū)(結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)區(qū))，Y染色

體長(zhǎng)臂遠(yuǎn)端也為異染色質(zhì)部分，因此這些區(qū)域均可顯示出非常明顯C帶，

故此法可以準(zhǔn)確鑒別第1號(hào)、9號(hào)、16號(hào)和Y染色體，還用于確定著絲粒

的位置和數(shù)目，配合其它顯帶技術(shù)可鑒別部分染色體的結(jié)構(gòu)異常，如雙著

絲粒染色體、環(huán)狀染色體等。不同個(gè)體的染色體，其C帶的大小和染色強(qiáng)

度不同，可呈現(xiàn)出多態(tài)性，因此，C帶技術(shù)在多態(tài)性研究和分析染色體來(lái)

源等方面均有較大的價(jià)值。

三、實(shí)驗(yàn)用品

1、器材：玻璃染缸、滴管、燒杯、水浴鍋。

2、試齊！J：0.2NHCL5%Ba(OH)2溶液、2XSSC緩沖液、Giemsa

染液。

3、材料：按常規(guī)法制作的染色體標(biāo)本。

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

(一)、方法1

1、將標(biāo)本放入已預(yù)溫至60℃的5%Ba(OH)2溶液中處理5分鐘。

2、用預(yù)熱到600c的自來(lái)水沖洗，以除去車(chē)貝垢。

3、將標(biāo)本投入預(yù)溫到60oC的2XSSC溶液中溫育30~60分鐘。

4、取出后用自來(lái)水沖洗干凈。

5、用Giemsa染液染色10分鐘，水洗，空氣干燥，鏡檢。

16

(二)方法2

1、將制好的玻片放入0.2NHCI中15~30分鐘后用自來(lái)水沖洗。

2、浸入預(yù)溫至560c的5%Ba(OH)2溶液中處理10~30秒。

3、用預(yù)熱到560c的自來(lái)水沖洗，以除去車(chē)貝垢。

4、將標(biāo)本投入預(yù)溫到60oC的2XSSC溶液中溫育30~60分鐘。

5、水洗后用Giemsa染液染色30-60分鐘。

6、流水沖洗，晾干，鏡檢。

五、鏡檢

由低倍鏡找到合適的細(xì)胞分裂相，然后換油鏡觀察。注意1、9、16

號(hào)染色體的C帶和Y染色體長(zhǎng)臂的遠(yuǎn)端帶有明顯的形態(tài)變異性。C帶標(biāo)本

的帶型特征：

［作業(yè)與思考］

1、什么是C帶？C帶形成的原理是什么？

2、鏡下觀察并繪出一C帶染色體核型圖，標(biāo)明1、9、16及Y染色體。

17

C顯帶染色體核型圖片

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實(shí)驗(yàn)六人類(lèi)異常染色體核型觀察與分析

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、掌握人類(lèi)常見(jiàn)的異常核型的鑒別方法。

2、了解某些重要染色體病的核型特點(diǎn)。

3、了解某些罕見(jiàn)染色體病的核型特點(diǎn)。

二、實(shí)驗(yàn)用品

1、器械：光學(xué)顯微鏡、眼科剪、眼科鑲、膠水

2、試劑：香柏油、乙酸乙酯

3、材料：人類(lèi)異常染色體核型玻片標(biāo)本、異常核型照片

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

（一）、異常核型玻片標(biāo)本的觀察

1、Down's綜合征患者染色體G帶玻片標(biāo)本的觀察

取Down's綜合征患者染色體G帶玻片標(biāo)本，先在低倍鏡下選擇分散

良好、長(zhǎng)度適中的中期分裂相，然后轉(zhuǎn)至油鏡下，選擇帶紋清晰的分裂相

進(jìn)行分析。先進(jìn)行染色體記數(shù)，然后觀察G帶帶型，并在實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙上繪

出快速線條分裂相，標(biāo)明各條染色體序號(hào)。

2、其它異常染色體核型標(biāo)本的觀察（示教）

（二）、異常染色體核型照片分析

隨機(jī)抽取一張異常染色體G顯帶核型照片，在顯帶染色體照片上按每

號(hào)染色體的特征仔細(xì)辨別每條染色體，在此基礎(chǔ)上用剪刀將照片上的染色

體逐條剪下，排列在核型分析報(bào)告紙上，找出異常染色體，確定染色體畸

變類(lèi)型，經(jīng)反復(fù)調(diào)整，認(rèn)為準(zhǔn)確無(wú)誤后用膠水貼上。根據(jù)核型分析結(jié)果，

填寫(xiě)核型、報(bào)告者、報(bào)告日期。

19

(三)、部分異常染色體核型圖片

20

實(shí)驗(yàn)七人類(lèi)部分遺傳性狀的檢查

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/p>

通過(guò)對(duì)人類(lèi)部分遺傳性狀的檢查分析，初步掌握常見(jiàn)的遺傳性狀的檢

查方法，加深對(duì)人類(lèi)單基因遺傳規(guī)律的理解。

二、實(shí)驗(yàn)原理：

人類(lèi)的一切正常體質(zhì)特征和生理功能都是遺傳的，同時(shí)又是變異的。

人類(lèi)的性狀遺傳，有些是受單基因控制，表現(xiàn)為質(zhì)量性狀遺傳；有些是

受多基因控制，表現(xiàn)為數(shù)量性狀遺傳。現(xiàn)已查明某些遺傳性狀與某些遺

傳病有特異性關(guān)聯(lián)，掌握某些遺傳性狀的特征，可為某些遺傳病的診斷提

供參考。

三、實(shí)驗(yàn)用品：

苯硫胭(phenylthiocarbamide,PTC)1—14溶液，其配制法是：1號(hào)為高

濃度PTC(1.3g/L),以后等量對(duì)半稀釋至14號(hào)。

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

（一）、PTC嘗味測(cè)試

PTC耳白色結(jié)晶藥物，因含有硫代酰胺基而有苦澀味，對(duì)人無(wú)毒亦無(wú)

副作用。人類(lèi)對(duì)PTC的嘗味能力屬不完全顯性或半顯性遺傳，能?chē)L出其苦

味的人，稱(chēng)PTC嘗味者，這決定于顯性基因T的存在。有的人幾乎不能?chē)L

出其苦味，稱(chēng)為味盲，這決定純合的隱性基因壯的存在。這對(duì)基因位于人

類(lèi)第7號(hào)染色體上。不同民族和個(gè)體的嘗味能力不同，在我國(guó)人群中漢族

的味盲率約占10%,而廣西壯族味盲率僅約為4%。顯性純合TT者在溶液

濃度在1/750000時(shí)即可嘗出苦味，隱性純合tt必須在溶液大于1/24000

才能?chē)L出其苦味，有人甚連藥物粉末亦嘗不出來(lái)。雜合子Tt的嘗味能力介

于顯性純合與隱性純合之間。測(cè)試時(shí)受檢者從14號(hào)逆濃度順序進(jìn)行嘗味,

用吸管滴02滴在舌根上，測(cè)出自己對(duì)PTC嘗味能力的閾值。如果對(duì)各種

濃度的溶液都嘗不出苦味來(lái)，可用少量PTC粉末放在舌根上，再?lài)L其味如

何？

有調(diào)查表明：純合味盲（tt）者易患結(jié)節(jié)性甲狀腺腫，原發(fā)性青光眼患者

味盲率占26%,先天愚型中味盲者亦較多。

21

（二卜耳垂遺傳

人群中在耳廓下方有半圓稍隆起的耳殼稱(chēng)耳垂，有些人有耳垂，有些

人則無(wú)耳垂，該性狀受一對(duì)等位基因控制。有耳垂為顯性性狀，無(wú)耳垂為

隱性性狀。

有資料表明在耳垂上有皺褶的人，常與冠心疾病關(guān)聯(lián)。

（三卜達(dá)爾文氏結(jié)節(jié)遺傳

人類(lèi)耳輪邊緣上有一個(gè)小突起稱(chēng)達(dá)爾文氏結(jié)節(jié)，一般認(rèn)為這個(gè)突起與

猴類(lèi)耳殼的耳尖相當(dāng)。有達(dá)爾文氏結(jié)節(jié)為顯性性狀。但在人群中表現(xiàn)不一,

有的僅一個(gè)耳朵有些遺傳特征，有的個(gè)體具顯性基因，但表現(xiàn)率低，類(lèi)似

隱性遺傳，也有人認(rèn)為達(dá)爾文氏結(jié)節(jié)與鼻尖厚度連鎖遺傳。

（四八卷舌和翻舌遺傳

按自己的意志將舌的兩側(cè)緣向中線卷曲呈槽狀或筒狀，在人群中能完

成這個(gè)動(dòng)作的，其遺傳方式為顯性遺傳。翻舌即將舌尖伸出口外能后翻而

對(duì)著上頜門(mén)齒。

舌的活動(dòng)在人群中可見(jiàn)四種類(lèi)型：舌能卷不能翻、舌能卷又能翻、舌

不能卷也不能翻、舌不能卷而能翻。舌不能卷而能翻者實(shí)屬罕見(jiàn)。研究卷

舌與翻舌遺傳特征與我國(guó)人的發(fā)音有關(guān)。

（五）、耳垢性狀遺傳

檢查中耳道內(nèi)的耳垢，有些人是干的有些人是濕的。其遺傳方式濕耳

垢是顯性遺傳，而干耳垢則為隱性遺傳。

（六卜前額發(fā)際遺傳

人類(lèi)有的個(gè)體前額發(fā)際處呈V形發(fā)尖，有的為平線。V形發(fā)尖為顯性

性狀。

卜七）、頭發(fā)的直卷性狀遺傳

在人群中大多數(shù)人的頭發(fā)是順直的，直發(fā)的橫截面是圓形，屬于隱性

性狀；有些人在自然狀態(tài)頭發(fā)是卷曲的，卷發(fā)的橫截面是橢圓形，屬于顯

性性狀。

（八八頭發(fā)螺紋遺傳

在頭頂略靠后方的中線處有一螺紋（個(gè)別人不止一個(gè)）。螺紋的紋路有

兩種方式，有的人是順時(shí)針?lè)较颍行┤藙t是逆時(shí)針?lè)较?。?jù)認(rèn)為其遺傳

方式順時(shí)針發(fā)螺為顯性性狀，逆時(shí)針發(fā)螺為隱性性狀。

22

（九八眼瞼遺傳

主要指雙重瞼和單重瞼。雙重瞼又稱(chēng)蒙古褶，俗稱(chēng)雙眼皮，為顯性性

狀。單重瞼又稱(chēng)單眼皮，為隱性性狀。

（十人拇指關(guān)節(jié)遠(yuǎn)端超伸展遺傳

有些人拇指的最后一節(jié)能超伸展彎曲，其彎曲度與拇指中軸可達(dá)60

度。它屬隱性性狀。

（H^一）、手利遺傳

手利系指人們用手的習(xí)慣，左利與右利俗稱(chēng)左撇于和右撇子。有資料

表明雙親慣用右手，孩子慣用左手頻率為6%；雙親之一慣用左手，孩子

慣用左手頻率為17%；雙親慣用左手，孩子慣用左手頻率為50%；

［作業(yè)］

兩人為一組，相互檢查對(duì)方的遺傳性狀特征，并把檢查情況填在調(diào)查

表上。23

24

實(shí)驗(yàn)八性染色質(zhì)標(biāo)本制作和觀察

一、目的要求：

1、掌握檢查性染色質(zhì)一X染色質(zhì)和Y染色質(zhì)的方法。

2、了解人類(lèi)間期細(xì)胞核中性染色質(zhì)的形態(tài)特征及其在性別決定方面

的意義。二、實(shí)驗(yàn)原理：

女性的兩條X染色體在胚胎發(fā)育16周后，有一條保持轉(zhuǎn)錄活性，而

另一條呈異固縮狀態(tài)，形成X染色質(zhì)（又稱(chēng)X小體或Barr小體），即女性的

性染色質(zhì)。在間期細(xì)胞核中，可被特異的染料染色呈深色而顯示出來(lái)，代

表失活了的X染色體。

男性間期細(xì)胞核中，在熒光顯微鏡下可見(jiàn)核內(nèi)有一個(gè)約0.3Um大小

的熒光小體，系Y染色體長(zhǎng)臂末端被熒光染料著色而成，稱(chēng)為Y染色質(zhì)。

性染色質(zhì)的檢查可作為性別鑒定的依據(jù)和性染色體數(shù)目異常的一種輔助

診斷方法。

三、實(shí)驗(yàn)用品：

1、材料：正常男、女性口腔粘膜細(xì)胞和發(fā)根毛囊細(xì)胞。

2、器材：顯微鏡、熒光顯微鏡，牙簽、染色缸、載玻片、蓋玻片、

擦鏡紙。

3、試劑：硫堇染液、固定液（甲醇：冰酸醋：3：1）,40%醋酸、7.5N

鹽酸，0.5%鹽酸喳口丫因染液。

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：

（-）、X染色質(zhì)制片及觀察：

1、女性口腔粘膜細(xì)胞X染色質(zhì)標(biāo)本制作：受檢者用水漱口后，用牙

簽刮取口腔頰部，將刮起之細(xì)胞均勻涂于干凈的載玻片上，立即用固定液

固定10分鐘，晾干，硫堇染液染色10分鐘，水沖洗、晾干、鏡檢。

2、女性發(fā)根毛囊細(xì)胞制片：拔下受檢者的頭發(fā)2—3根，將根部帶有

完整毛囊組織的部分置于載玻片中央，加1滴40%醋酸處理5?10分鐘軟

化毛囊，再用牙簽刮下毛囊組織，棄去發(fā)干，均勻涂布細(xì)胞，干燥，用固

定液固定15分鐘，晾干，再滴入或浸入7.5N鹽酸中水解10分鐘，用自來(lái)

水沖洗，硫堇工作液染色10分鐘，水沖洗，晾干鏡檢。

3、觀察與計(jì)數(shù)：用油鏡觀察

（1）形態(tài)：X染色質(zhì)呈深紫色，緊貼核膜內(nèi)側(cè)邊緣，呈饅頭形、三角

球形等狀，為一25

直徑約1-1.5Um邊界清楚的深紫小體。

（2）計(jì)數(shù)：選擇核較大，核質(zhì)顆粒少，染色均勻清晰、核膜完整的細(xì)胞

核作為計(jì)數(shù)，每份標(biāo)本至少計(jì)數(shù)50個(gè)細(xì)胞X染色質(zhì)出現(xiàn)率。

臨床指標(biāo)：正常值男性為0—3%,女性為20%以上。

注意：涂布細(xì)胞均勻，所計(jì)數(shù)細(xì)胞要完整，無(wú)缺損，無(wú)皺褶，核染色

均勻。

X染色質(zhì)數(shù)=*染色體數(shù)-1。

（二/Y染色質(zhì)標(biāo)本制備及觀察：

男性口腔粘膜細(xì)胞或發(fā)根毛囊細(xì)胞Y染色質(zhì)標(biāo)本制片；與上述X染色

質(zhì)標(biāo)本制備相同。但所用的染料為0.5%鹽酸喳口丫因染液，染色6分鐘后取

出在蒸儲(chǔ)水中放置10分鐘，以除去多余的染料顆粒，不等干，蓋上蓋玻片，

將標(biāo)本片置熒光顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)。用高倍鏡或油鏡觀察均可，但室內(nèi)光

線較暗為好。Y染色質(zhì)在鏡下的特點(diǎn)是在核內(nèi)出現(xiàn)一個(gè)較強(qiáng)的熒光點(diǎn)，閃

爍如星星，直徑約0.25um左右，一般位于核的中部或邊緣。每份標(biāo)本至

少計(jì)數(shù)50個(gè)細(xì)胞Y染色質(zhì)出現(xiàn)率。Y染色質(zhì)在口腔粘膜細(xì)胞的出現(xiàn)率一般

為20~30%。但由于個(gè)體的差異，出現(xiàn)率常有較大的不同。

注意：1、熒光染料要新鮮配制、現(xiàn)配現(xiàn)用。

2、染好的標(biāo)本片不要久放，一般不超過(guò)2h。

［作業(yè)］

1、在油鏡下分析計(jì)數(shù)50個(gè)細(xì)胞，并計(jì)算X染色質(zhì)的出現(xiàn)率。

2、繪制一口腔粘膜細(xì)胞的X染色質(zhì)圖。

思考題：檢查X染色質(zhì)和Y染色質(zhì)有何臨床意義？

X染色質(zhì)示意圖男性口腔粘膜細(xì)胞Y染色質(zhì)示意

圖

26

實(shí)驗(yàn)九系譜分析

一、目的要求

1、通過(guò)實(shí)驗(yàn)，加深對(duì)單基因遺傳病的四種遺傳方式其及特點(diǎn)的理解。

2、掌握系譜的繪制和分析方法，初步掌握遺傳病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)估計(jì)的基

本要領(lǐng)。

二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

系譜分析是在調(diào)查的基礎(chǔ)上，按一定的形式繪成的一個(gè)圖式，表示發(fā)

病者家系及家中其他成員的發(fā)病情況。通過(guò)家系分析，能獲知遺傳性狀的

遺傳方式和遺傳病發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)，從而對(duì)其家屬提出意見(jiàn)和建議。

例一：先證者為女性肝豆?fàn)詈俗冃曰颊?，通過(guò)調(diào)查證實(shí)：（1）先證者

的大哥、三妹、四弟、五妹以及他們的父母均正常。（2）先證者的父親有

一姐、一弟（即先證者的姑母和叔叔）。（3）先證者的姑母、姑父和他們

的二子一女及先證者的叔、嬸及其二子一女都正常。

1、繪制該家系的系譜。

2、判斷該病屬何種遺傳方式？為什么？

3、寫(xiě)出家系中患者及其雙親的基因型。

例二：下面是一個(gè)家族性高膽固醇血癥的系譜。請(qǐng)分析：

1、該病屬何種遺傳方式？為什么？

2、寫(xiě)出家系各成員的基因型。

3、假如H2與H1再生一個(gè)小孩，他們子女發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)如何？

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例三：下面是一個(gè)苯丙酮尿癥的系譜。請(qǐng)分析：

1、此病屬哪種遺傳方式？為什么？

2、寫(xiě)出患者及雙親的基因型。

3、ini與m2再生子女的患病風(fēng)險(xiǎn)如何？

4、如果ni2是隨機(jī)婚配，其子女患病風(fēng)險(xiǎn)如何？

例四：下面為一個(gè)甲型血友病的系譜。請(qǐng)分析：

1、判斷該病的遺傳方式，為什么

2、寫(xiě)出先證者及其父母和H2的基因型。

3、先證者與正常女性婚配，其子女患病風(fēng)險(xiǎn)如何？可能的基因型是:

4、H1與H2生男孩時(shí)，患病風(fēng)險(xiǎn)如何？

例五：下面為一個(gè)抗維生素D性佝僂病的系譜。請(qǐng)分析：

1、判斷該病的遺傳方式，為什么？

2、寫(xiě)出先證者及其父母的基因型。

3、III、II2再生子女的患病風(fēng)險(xiǎn)如何?

4、118、H9和H3、II4若再生子女，其子女的患病風(fēng)險(xiǎn)如何？

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實(shí)驗(yàn)十人類(lèi)外周血淋巴細(xì)胞

姐妹染色單體交換（SCE）試驗(yàn)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/p>

1、了解SCE實(shí)驗(yàn)的基本原理和設(shè)計(jì)思路。

2、掌握SCE染色體標(biāo)本制備方法及SCE的基本特征、記數(shù)方法。

3、探究受試物的致畸作用。

二、實(shí)驗(yàn)原理：

人類(lèi)生活的環(huán)境中存在著多種有害因子，如物理的（電離輻射、紫外

線、噪聲等）、化學(xué)的（氮氧化物、煤煙、汽車(chē)尾氣等）和生物的（細(xì)菌、

病毒等），對(duì)人體健康產(chǎn)生潛在的危險(xiǎn)，直接或間接地誘發(fā)基因突變、染

色體畸變等細(xì)胞遺傳損傷。體細(xì)胞的突變可以導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生，而生殖細(xì)

胞的突變則可能造成不育、流產(chǎn)、死產(chǎn)及以及使后代獲得遺傳性疾病，使

有害基因在群體中累積，改變?nèi)祟?lèi)整體的遺傳素質(zhì)。因而用適當(dāng)?shù)姆椒▽?duì)

環(huán)境因子的致突、致畸、致癌危險(xiǎn)性作出鑒定和評(píng)價(jià)，進(jìn)而采取相應(yīng)的控

制辦法，對(duì)避免或減少對(duì)人類(lèi)的危害具有重要的意義。現(xiàn)已建立了多種短

期誘變?cè)囼?yàn)方法，其中較為常見(jiàn)的細(xì)胞遺傳毒理學(xué)方法主要有染色體畸變

試驗(yàn)、微核試驗(yàn)、姐妹染色單體交換試驗(yàn)等等。這些試驗(yàn)耗資少，周期短，

終點(diǎn)明確，實(shí)驗(yàn)條件易控制，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好，結(jié)果可靠。

姐妹染色單體交換（sisterchromatidexchange，SCE）是指在染色體

復(fù)制過(guò)程中，一條染色體的兩條染色單體在相同位置上發(fā)生同等對(duì)稱(chēng)的同

源片段交換。由于互換是對(duì)等的，因而染色體的形態(tài)沒(méi)有發(fā)生改變。但SCE

是與DNA的損傷、修復(fù)和DNA復(fù)制緊密相連的自然過(guò)程，如果在DNA復(fù)

制過(guò)程中發(fā)生DNA損傷和修復(fù)，就有可能發(fā)生姐妹染色單體交換。SCE的

發(fā)生頻率可反映細(xì)胞在DNA合成期中的受損程度和DNA損傷的重要標(biāo)志。

在分裂的細(xì)胞中，每條染色體由兩條姐妹染色單體組成，每條染色單

體則由一個(gè)雙鏈DNA分子構(gòu)成。當(dāng)細(xì)胞在加有5澳脫氧尿喀咤核昔（BrdU）

的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，BrdU取代胸腺啥呢脫氧核糖核昔（TdR）摻入到

新復(fù)制的DNA核昔酸鏈中。細(xì)胞在BrdU中生長(zhǎng)，第一個(gè)周期（DNA經(jīng)過(guò)

一次復(fù)制）后，每條染色體的兩條姐妹染色單體的DNA雙鏈中各有一股鏈

含有BrdU。經(jīng)過(guò)第二周期（經(jīng)過(guò)兩次復(fù)制）后，兩條姐妹染色單體中，一

29

條單體的DNA雙鏈類(lèi)似第一周期，為單股鏈含BrdU,另一條單體兩

股鏈均含BrdU。兩股都含有BrdU的染色單體螺旋化程度較低，與某些染

色劑的親和力低，用Giemsa染色時(shí)著色較淺，而僅有單股含BrdU的單體

著色仍較深，兩條姐妹染色單體顯出深淺不同的顏色，當(dāng)姐妹染色單體間

發(fā)生同源片段交換時(shí)，就可以根據(jù)每條染色單體夾雜著深淺不一的著色片

段加以區(qū)分。當(dāng)在BrdU中生長(zhǎng)三個(gè)周期后，50%的染色體因兩條染色單體

的雙股DNA鏈都含有BrdU,因而兩條染色單體都著色淺，50%的染色體因

保留有原來(lái)的母鏈，而呈現(xiàn)出一深一淺染色單體。因此，可以根據(jù)每條染

色體的染色單體著色情況區(qū)分不同細(xì)胞周期。

30

三、試驗(yàn)設(shè)計(jì)

乙基磺酸甲酯（EMS）、環(huán)磷酰胺（CP）、絲裂霉素C（MMC）、黃曲霉

素毒素B1對(duì)染色體具有明顯的致畸作用，本實(shí)驗(yàn)可以采用這些化學(xué)物質(zhì)

作為陽(yáng)性對(duì)照（終濃度：EMS10-3mol/L,CP2X10-4mol/L,MMC0.02ug/ml,

黃曲霉素毒素Bl10-6moi/L）。以受檢物的溶劑或生理鹽水為陰性對(duì)照，對(duì)

受檢物進(jìn)行SCE的測(cè)試。受檢物由學(xué)生自己確定，同一受檢物可設(shè)多組不

同濃度的試驗(yàn)以觀察是否存在劑量一反應(yīng)關(guān)系。每5~8個(gè)學(xué)生為一小組（設(shè)

陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照各一人和不同劑量試驗(yàn)組各一人）。受檢物的試驗(yàn)劑

量一般包括不損傷細(xì)胞生長(zhǎng)潛力的最高劑量、一個(gè)次高劑量和一至三個(gè)較

低劑量，但最高劑量不能超過(guò)5mg/ml。同一受檢物可做多組重復(fù)試驗(yàn)以

減少試驗(yàn)誤差。受檢物可用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙?，但溶劑的終濃度應(yīng)盡可能小

于5%。實(shí)驗(yàn)前，先由學(xué)生劃分小組，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，報(bào)經(jīng)教師確認(rèn)后實(shí)

施。

四、實(shí)驗(yàn)用品

1、器材：水浴鍋、紫外燈、溫度計(jì)、擦鏡紙、培養(yǎng)箱、離心機(jī)、離

心管、培養(yǎng)瓶、顯微鏡、滴管

2、試劑：RPMI1640培養(yǎng)基、2XSSC緩沖液、Giemsa染液、BrdU溶

液（500ug/ml）、甲醇、冰醋酸、0.075MKCL秋水仙素溶液（12.5Ug/ml）.

PH6.8PBS＞陽(yáng)性對(duì)照物、陰性對(duì)照物。

3、材料：人外周血、受試物（不同濃度溶液）

五、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1、外周血培養(yǎng)及染色體標(biāo)本片制備

按常規(guī)方法采血、接種，陽(yáng)性對(duì)照組加入適當(dāng)濃度的陽(yáng)性對(duì)照物0.5mL

陰性對(duì)照組加入0.5ml生理鹽水或受檢物溶劑，各試驗(yàn)組加入不同濃度受

檢物溶液0.5ml,置37℃恒溫培養(yǎng)24h后，各加入BrdU（終濃度為10ug

/ml）,繼續(xù)避光培養(yǎng)48小時(shí)后，按常規(guī)方法收獲、制片。制好片后，置

37℃溫箱中老化3?10天。

2、姐妹染色單體差別染色

將標(biāo)本片放入培養(yǎng)皿中，加2XSSC數(shù)滴于玻片上，蓋一張擦鏡紙，

以濕潤(rùn)擦鏡紙為宜，并在培養(yǎng)皿中加入2XSSC使之浸在玻片底面，把培

養(yǎng)皿置于預(yù)溫75。。水浴鍋平板上，距30W紫外燈管5cm,照射30分鐘，

其間滴加數(shù)次2XSSC,勿使擦鏡紙干燥。用Giemsa染液染色10分鐘，自

來(lái)水沖洗、晾干即為SCE標(biāo)本。

31

3、SCE觀察計(jì)數(shù)

鏡下（油鏡）觀察中期分裂相時(shí)、注意區(qū)分各細(xì)胞周期分裂相的染色

特點(diǎn)：①染色體的兩個(gè)單體均為深染的細(xì)胞記為第一周期的細(xì)胞；②染色

體的兩個(gè)單體染色一深一淺的細(xì)胞為第二周期細(xì)胞；③部分染色體的兩個(gè)

單體染色都為淺色的細(xì)胞為第三周期的細(xì)胞。選擇染色體分散良好、長(zhǎng)

度適中、輪廓清晰、數(shù)目完整、分化良好的的第二周期的分裂相進(jìn)行計(jì)數(shù)。

人體姐妹染色單體交換（SCE）的計(jì)數(shù)方法：

①凡是在染色單體端部出現(xiàn)互換，記為1次交換；②在染色單體中間

出現(xiàn)互換，記為2次交換；③如果在著絲粒處發(fā)生交換，需判明是否為扭

轉(zhuǎn)，不是扭轉(zhuǎn)的為著絲粒部位交換，記為1次交換。每一份標(biāo)本至少需要

計(jì)數(shù)20~50個(gè)細(xì)胞的染色體，計(jì)算SCE平均交換頻率。

SCE平均交換頻率（次/細(xì)胞）=交換總次數(shù)/細(xì)胞數(shù)

六、結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析

分別統(tǒng)計(jì)本班各試驗(yàn)組、陽(yáng)性對(duì)照組、陰性對(duì)照組的SCE平均交換數(shù)

的試驗(yàn)結(jié)果，用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行檢驗(yàn)。以SCE頻率的增加作為劑量函數(shù),

根據(jù)高于本底或自發(fā)水平的統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著增加來(lái)解釋。當(dāng)受試物誘發(fā)的

SCE平均交換數(shù)較陰性對(duì)照有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的增加，并有劑量一反應(yīng)關(guān)系時(shí),

說(shuō)明受試物有誘發(fā)SCE作用，可進(jìn)一步分析受試物的細(xì)胞遺傳毒理性質(zhì)，

并以試驗(yàn)組為單位寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)報(bào)告或研究論文。

32

實(shí)驗(yàn)H—染色體畸變?cè)囼?yàn)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/p>

（1）用細(xì)胞遺傳學(xué)方法檢測(cè)人或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物的外周血、骨髓細(xì)胞染色

體畸變率的增加，以評(píng)價(jià)受試物的致突變性。

（2）了解染色體畸變的可能原因，掌握染色體結(jié)構(gòu)畸變的特點(diǎn)，訓(xùn)

練識(shí)別畸變?nèi)旧w的能力。

二、實(shí)驗(yàn)原理

物理、化學(xué)、環(huán)境污染物均可導(dǎo)致染色體的直接或間接斷裂。斷裂后

的斷片、游離片段彼此間互相重接，便產(chǎn)生各種類(lèi)型的染色體畸變。致畸

因素作用于細(xì)胞周期的G1期時(shí)，引起染色體型畸變，而作用于S期或G2

朝時(shí)，則引起染色單體畸變，作用于M期時(shí)，則有可能導(dǎo)致染色體數(shù)目畸

變。在細(xì)胞分裂中期可以觀察到這些染色體的畸變，哺乳動(dòng)物的骨髓細(xì)胞

一直保持細(xì)胞分裂活動(dòng)，外周血細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量的PHA,也可以使

淋巴細(xì)胞從GO期轉(zhuǎn)化進(jìn)入細(xì)胞增殖周期，利用秋水仙素的處理，可以獲

得大量良好的中期染色體分裂相，在顯微鏡下就可以對(duì)染色體畸變進(jìn)行分

析和統(tǒng)計(jì)，從而可以對(duì)致畸因素的影響作出分析。

三、實(shí)驗(yàn)用品

1、器材：顯微鏡、離心機(jī)、普通天平、恒溫培養(yǎng)箱、注射器，解剖

剪、解剖刀、載玻片、香柏油、二甲苯、擦鏡紙等。

2、試劑：2mg/ml環(huán)磷酰胺、Brdu、小牛血清、肝素、RPMII640培養(yǎng)

基、甲醇、水醋酸、0.075MKCI低滲液、PH6.8磷酸緩沖液、Giemsa原

液、生理鹽水。

3、材料：小白鼠、人外周血

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

（-）小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)

1、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：選擇成年健康小白鼠（大鼠）隨機(jī)分組，至少3個(gè)劑

量組，另設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組和陰性對(duì)照組，每組1只動(dòng)物?？稍O(shè)多組平行組以

增加試驗(yàn)次數(shù)，減少實(shí)驗(yàn)誤差。

2、處置：陽(yáng)性對(duì)照組可采用環(huán)磷酰胺（50ug/g體重），陰性對(duì)照組為

溶劑對(duì)照。分別用陽(yáng)性、陰性對(duì)照物和受試物對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔注射。也可

用經(jīng)口灌胃方式，共染毒兩次，33

間隔24小時(shí)。于第二次染毒后6小時(shí)處死動(dòng)物，處死動(dòng)物前4小時(shí)

腹腔注射秋水仙素（注射劑量按4ug/g體重）。

3、取材：用頸椎脫臼法處死小鼠，取出完整的股骨，用紗布擦去骨

上殘肉，再用生理鹽水洗滌。

4、收集細(xì)胞：剪去股骨兩頭，用注射器吸入低滲液約1ml,插入骨髓

腔中，反復(fù)沖洗腔內(nèi)骨髓入離心管中，直到股骨骨髓變白為止。

5、低滲：加入預(yù)熱低滲液至4mL用吸管吹打混勻，置37℃恒溫水

浴鍋內(nèi)低滲30分鐘。

6、預(yù)固定:加入1ml甲醇、冰醋酸固定液，用吸管吹打混勻，以lOOOrpm

離心8分鐘，去上清液。

7、固定：加入固定液至5ml,用吸管吹打混勻，以lOOOrpm離心8

分鐘，去上清液。按本方法再固定一次。

8、滴片：在離心沉淀物中加入少量固定液，混勻，制備細(xì)胞懸液，

滴片。

9、染色：用姬姆薩染液染色10分鐘，用自來(lái)水沖洗，晾干。

10、觀察：選擇分散良好的中期分裂相，在顯微鏡油鏡下觀察100個(gè)

細(xì)胞，記錄畸變類(lèi)型。小鼠染色體均為端著絲粒染色體，2n=40,大白鼠

染色體有中央、亞中和近端著絲粒染色體三種，2n=42。

(-)外周血淋巴細(xì)胞致染色體畸變實(shí)驗(yàn)

按常規(guī)方法采血、接種，按組分別加入陽(yáng)性對(duì)照物、陰性對(duì)照物和受

試物，按常規(guī)方法培養(yǎng)、收獲、制片，用姬姆薩染液染色后觀察染色體畸

變。也可以進(jìn)行G帶等顯帶后分析。對(duì)每一處理組選100個(gè)分散良好的中

期分裂相進(jìn)行染色體畸變分析，觀察染色體結(jié)構(gòu)的異常及多倍體的出現(xiàn)率。

五、結(jié)果評(píng)價(jià)

計(jì)算畸變細(xì)胞出現(xiàn)率和染色體畸變率，再統(tǒng)計(jì)各平行組的數(shù)據(jù)。所得

各組的數(shù)據(jù)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行處理，以評(píng)價(jià)試驗(yàn)組與對(duì)照組之間是否有明

顯差異。受試物誘發(fā)的染色體畸變的出現(xiàn)率較陰性對(duì)照有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的增

加，并有劑量一反應(yīng)關(guān)系時(shí)，記為陽(yáng)性，同時(shí)標(biāo)明異常細(xì)胞出現(xiàn)的頻度和

種類(lèi)。以實(shí)驗(yàn)小組為單位寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)報(bào)告或研究論文。

畸變細(xì)胞出現(xiàn)率（％）=（各種畸變類(lèi)型細(xì)胞數(shù)/分析總細(xì)胞數(shù)）X100

染色體畸變率（％）=（畸變?nèi)旧w數(shù)/染色體總數(shù)）X100

34

附：染色體畸變類(lèi)型

（一）染色體數(shù)目畸變

1、非整倍性：染色體數(shù)目非成倍性地增加或減少。數(shù)目減少一條或

幾條的，稱(chēng)為亞二倍體，數(shù)目增加一條或幾條的，稱(chēng)為超二倍體。

2、多倍體：染色體數(shù)目成倍性地增加。如三倍體、四倍體等。

3、內(nèi)復(fù)制：一個(gè)細(xì)胞核內(nèi)發(fā)生兩次連續(xù)的染色體復(fù)制，每條染色體

產(chǎn)生四條染色單體，它們彼此兩兩相靠在一起，成為染色體核內(nèi)復(fù)制。

（二）染色體結(jié)構(gòu)畸變

在同一部位兩條染色單體發(fā)生斷裂和重接，稱(chēng)為染色體型畸變。如果

只有一條單體發(fā)生斷裂或互換，稱(chēng)為染色單體畸變。

1、染色體型畸變：

（1）染色體斷裂：一個(gè)染色體兩條染色單體的同一座位因染色質(zhì)損

傷而間斷，其斷裂的長(zhǎng)度大于染色單體的寬度時(shí)稱(chēng)為染色體斷裂。

（2）無(wú)著絲粒斷片：斷裂后的片段離開(kāi)原位稱(chēng)為無(wú)著絲粒斷片。

（3）雙著絲粒染色體：是具有兩個(gè)著絲粒的染色體。

2、染色單體畸變:

指在某一染色體的一條單體上發(fā)生的畸變。

(1)染色單體斷裂：位于一條染色單體上的一種具有清楚的非線性

節(jié)段的間斷。其斷裂的長(zhǎng)度小于或等于染色單體的寬度時(shí)稱(chēng)為染色單體斷

裂。

(2)染色單體缺失：指某一染色體的單一染色單體的某一帶型順序

的缺失。

(3)三射體和四射體：在兩條染色體的染色單體之間斷裂而后互換

重接而成。在此過(guò)程中，如果有三個(gè)臂參予，這種圖象稱(chēng)三射體，如果有

四條臂參與時(shí)稱(chēng)四射體。

35

微核測(cè)定試驗(yàn)

一、目的要求

1、掌握各類(lèi)細(xì)胞微核標(biāo)本制備方法。

2、熟悉微核的形態(tài)特征。

3、了解微核的發(fā)生機(jī)制及微核檢測(cè)技術(shù)的用途。

二、實(shí)驗(yàn)原理

微核(micronucleus)是細(xì)胞核外的染色質(zhì)小體，其直徑一般比主核小

1/3以上。微核的形成與染色體畸變或損傷有密切關(guān)系，當(dāng)分裂細(xì)胞受到

有害理化因子的作用時(shí)會(huì)使染色體受到損傷，產(chǎn)生無(wú)著絲粒的染色體斷片;

另一方面，細(xì)胞在紡錘體毒劑的作用下會(huì)發(fā)生紡錘體機(jī)能障礙，產(chǎn)生落后

的染色體，到分裂末期因缺乏紡錘絲的牽引而無(wú)法進(jìn)入子細(xì)胞的核內(nèi)。這

些染色體斷片或落后染色體往往在分裂的末期仍游離、滯留在細(xì)胞質(zhì)中,

濃縮形成一至幾個(gè)次級(jí)核，其嗜色性與主核一致，故稱(chēng)微核。微核在骨髓

和外周血液的有核細(xì)胞中均可見(jiàn)到。但是，在這類(lèi)只有少量胞漿的有核細(xì)

胞中，微核常難以與正常枝葉及核的突出物相鑒別。而在無(wú)核的骨髓嗜多

染紅細(xì)胞的胞漿中，微核卻十分易于辨認(rèn)。70年代初，Matter和Schmid

首先用嚙齒類(lèi)動(dòng)物骨髓細(xì)胞微核率來(lái)測(cè)定懷疑有誘變活力的物質(zhì)，并建立

了微核測(cè)定法，微核標(biāo)本制作簡(jiǎn)便、靈敏度及可信度高，微核率的大小和

誘變劑的劑量是呈正相關(guān)，故常用來(lái)評(píng)價(jià)理化因子對(duì)染色體損傷危害，可

根據(jù)細(xì)胞的微核率來(lái)判斷某些理化因子對(duì)染色體的損傷程度以及對(duì)遺傳

物質(zhì)致畸效應(yīng)的大小。目前，國(guó)內(nèi)外不少部門(mén)已把微核測(cè)試法應(yīng)用在輻射

防護(hù)、輻射損傷、化學(xué)誘變劑研究、新藥毒理試驗(yàn)、染色體疾病及癌癥前

期診斷等方面。該方法已成為遺傳毒理實(shí)驗(yàn)的一種常用的細(xì)胞遺傳學(xué)方法。

實(shí)驗(yàn)十二小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞(PCE)微核測(cè)定

1、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：

一般選用體重為25?30g的小鼠，雌雄皆可。本實(shí)驗(yàn)采用環(huán)磷酰胺為

陽(yáng)性對(duì)照，陰性對(duì)照采用生理鹽水或受試物溶劑，受試物可設(shè)三個(gè)劑量組，

可設(shè)多組重復(fù)以減少實(shí)驗(yàn)誤差。劑量的選擇很重要，若劑量太低，會(huì)漏掉

陽(yáng)性物；若劑量太高，可致動(dòng)物死亡，或因?qū)撬瓒拘宰饔锰珡?qiáng)，致使嗜

多染紅細(xì)胞受到抑制，難以獲得正確的結(jié)果。一般取受試動(dòng)物L(fēng)D5036

的1/2、1/5、1/10、1/20等劑量，以求獲得微核的劑量一反應(yīng)關(guān)系曲

線。

2、實(shí)驗(yàn)用品

(1)器材：離心機(jī)、顯微鏡、計(jì)數(shù)器、注射器、解剖器械、紗布、

離心管、吸管。

（2）試劑：2mg/ml環(huán)磷酰胺溶液（CP）、小牛血清（FCS）、甲醇溶

液、Giemsa染液、PH6.8的PBS。

（3）材料：2?3月齡健康小鼠。

3、實(shí)驗(yàn)步驟：

（1）染毒：采用腹腔注射或經(jīng)口染毒。常用經(jīng)口灌胃方式，一般采

用30小時(shí)染毒法，即兩次給毒間隔24小時(shí)，第二次給毒后6小時(shí)取材。

環(huán)磷酰胺溶液終濃度50口g/g體重。

（2）取材：以頸椎脫臼法處死小鼠，取出兩根股骨，剔凈肌肉，用

紗布擦掉附在