不同品種的醋炮制延胡索有效成分測定

醋制是與中藥制備過程中最相關(guān)的液體制劑之一。據(jù)統(tǒng)計，中藥湯片需要50多年的歷史。由于炮制用醋沒有具體質(zhì)量要求,飲片廠用醋非?；靵y,醋制飲片的質(zhì)量很難保證。延胡索(元胡)為罌粟科延胡索CorydalisyanhusuoW.T.Wang的干燥塊莖,具有活血、理氣、止痛之功效,其主要有效成分為生物堿類。延胡索是醋制后增效的典型藥物,故選用延胡索為研究對象,共收集全國范圍內(nèi)有代表性的27種不同類型、不同品牌的醋(見表1),并對同批延胡索用同一方法進(jìn)行炮制。采用HPLC和酸堿滴定法對其樣品中有效成分延胡索乙素及總生物堿的溶出量進(jìn)行比較,篩選出能提高延胡索有效成分溶出率的醋,為確定炮制最佳輔料醋的類別、品種、規(guī)格奠定基礎(chǔ)。1延胡索醋肉HP1100高效液相色譜儀,HP1100紫外-可見光檢測器。延胡索乙素(中國藥品生物制品檢定所,含量測定),0.02mol·L-1硫酸、0.02mol·L-1氫氧化鈉(北京市藥品檢驗所),磷酸、三乙胺為化學(xué)純,甲醇為色譜純,氯仿、氨水、甲基紅-溴甲酚綠、碘化鉍鉀均為分析純。延胡索購自道地產(chǎn)地浙江磐安,經(jīng)鑒定為罌粟科植物延胡索的干燥塊莖。按《中國藥典》2000年版延胡索炮制方法制備。2~29號醋制延胡索樣品制備取凈延胡索300g,加入醋水混合液120mL(醋∶水=1∶1),浸潤24h(醋吸盡)后,文火(電磁爐300W)炒15min左右,自然晾干。1號醋采用2種炮制方法,1-1號采用上法,1-2號浸潤時間為4h(醋未被藥材吸盡即炒),其他同上法。以上樣品粉碎過80目篩備用。2方法和結(jié)果2.1流動相甲醇-3.1%磷酸三乙胺-1-基苯甲酰胺三乙胺氧基甲基-1,3.色譜柱Kromasil-C18(4.6mm×250mm,5μm),柱溫30℃,流動相甲醇-0.1%磷酸(三乙胺調(diào)pH至6.0,65∶35),流速1.0mL·min-1,檢測波長280nm,進(jìn)樣量20μL。此條件下延胡索乙素對照品和樣品HPLC圖譜見圖1。2.2加標(biāo)回歸方程精密稱取延胡索乙素2.54mg,甲醇配制成0.1016mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別進(jìn)樣2,5,8,12,16μL,以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X),以峰面積為縱坐標(biāo)(Y),回歸方程Y=838.485X-0.7748,r=0.9999,延胡索乙素在0.2032~1.6256μg,進(jìn)樣量與峰面積呈線性關(guān)系,采用外標(biāo)一點法定量。2.3加氨水用量試驗①萃取次數(shù):采用萃取4次和5次進(jìn)行比較,其余操作同含量測定,測定結(jié)果依次為0.0792%,0.0788%,無明顯差異,故選擇4次。②加氨水量:分別比較加氨水1,2,3,4mL,其余操作同含量測定。測定結(jié)果依次為0.0772%,0.0792%,0.0785%,0.0772%,說明以2mL為最好。2.4精密度測試取供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次,測得延胡索乙素峰面積值RSD0.7%。2.5穩(wěn)定性試驗取供試品溶液,分別在0,3,6,9,12,24h測定,延胡索乙素峰面積值RSD1.0%,表明延胡索乙素在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。2.6重復(fù)試驗精密稱取延胡索樣品5份,按含量測定方法操作,測得延胡索乙素,平均含量為0.0782%,RSD0.8%。2.7延胡索樣品溶液制備精密稱取延胡索乙素對照品,配制成含量為0.100mg·mL-1對照品溶液,精密量取2mL,60℃水浴揮干,分別精密加入延胡索樣品250mg,按含量測定方法制備樣品溶液。測得延胡索乙素平均回收率為101.4%,RSD1.0%。2.8整合乙烯層,回收乙烯層精密稱取延胡索樣品0.65g,精密加水25mL,稱重,置沸水浴回流1h,放至室溫,補至原重,離心(3000r·min-1),過濾,取續(xù)濾液10mL,再加2mL氨水,搖勻,加乙醚萃取4次,每次20mL,收集乙醚層,減壓回收至干。再用甲醇溶解,定量轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中,用微孔濾膜濾過(0.45μm),取續(xù)濾液,即得。2.9樣品測定將對照品溶液和樣品溶液依次注入高效液相色譜儀,采用外標(biāo)一點法計算含量,測定了總計28個樣品,結(jié)果見表2。2.10無氧化物萃取法稱取樣品10g,精密加水150mL,稱重,浸泡1h,沸水浴回流1h,放冷后補至原重,離心(3000r·min-1),精密移取上清液50mL至分液漏斗中。氨水調(diào)pH至11~12,氯仿萃取至無生物堿反應(yīng)。合并氯仿液,回收。精密加入0.02mol·L-1硫酸溶液20mL,揮干。加入甲基紅-溴甲酚綠指示劑4滴,用0.02mol·L-1氫氧化鈉回滴,紅色變?yōu)樗{(lán)綠色為滴定終點,結(jié)果見表2。3醋制對有效成分的影響3.1已有文獻(xiàn)報道,醋制延胡索煎劑中延胡索乙素溶出較生品增加。本實驗也得到了相似結(jié)果。27個醋制延胡索煎劑樣品中,成分較生品都有提高,提高幅度在5.36%~56.1%,集中分布在30%~40%。以大于38%為界,初步篩選出1,3,5,8,9,10,15,16,17,22,23,24,25號樣品。另外,從表2結(jié)果可知,延胡索經(jīng)醋制后,總生物堿含量比生品也增加,提高率在6%~50%,集中分布在18%~28%,以大于25%為界,初步篩選出1,5,8,9,10,11,12,14,15,20,27號樣品。其中1,5,8,9,10,15為兩種指標(biāo)成分優(yōu)選的共同結(jié)果。本實驗進(jìn)一步證實了醋制的增效作用,同時也證明不同質(zhì)量的醋對其有效成分影響確實不同。3.2初步分析認(rèn)為樣品中延胡索乙素及總生物堿溶出量的增加與炮制輔料醋中總酸含量高低有關(guān),從以上數(shù)據(jù)來看,成分的增加與醋中醋酸含量的高低并非完全呈正比關(guān)系,以此認(rèn)為有效成分溶出量的增加還可能與醋中所含其他