第頁共頁試論不同凍干保護劑對利巴韋林凍干粉針的影響論文試論不同凍干保護劑對利巴韋林凍干粉針的影響論文在制備凍干粉針劑的過程中，為了保護藥品的活性，獲得均勻、一致、外表光滑、穩(wěn)定的產(chǎn)品，必須參加起到填充、賦形、穩(wěn)定作用的保護劑，很多糖類或多元醇經(jīng)常被用于溶液凍融和凍干過程中的穩(wěn)定劑。常用的保護劑有糖類(如葡萄糖、乳糖等)、多元醇(如甘露醇、山梨醇等)、氨基酸類(如甘氨酸、谷氨酸等)、無機鹽類(如氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣等)和大分子類(如明膠等)。它們既是有效的低溫保護劑，又是很好的凍干保護劑，它們對凍結(jié)的影響取決于種類和濃度。但在實際應用中，因沒有根據(jù)而廣泛嘗試大量保護劑種類，并通過大量實驗探索確定保護劑品種的凍干參數(shù)是對資、時間的浪費。本實驗以利巴韋林為模型藥物，同時輔以空白組作為比照，研究蔗糖、無水乳糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、氯化鉀、甘氨酸7種不同類型常用凍干保護劑的預凍時間、用量、凍干時間等凍干參數(shù)，并比擬其凍干后的外觀和復溶效果、含水量、pH值、主藥含量變化等相關(guān)性能，以期對凍干劑制備時保護劑的選擇提供根據(jù)。1材料BX51TRF型顯微鏡(奧林巴斯株式會社);BSl10S型萬分之一電子分析^p天平、P8-10型pH酸度計(北京賽多利斯儀器系統(tǒng));DW-86L626型超低溫保存箱(青島海爾特種電器);LGJ-12型冷凍枯燥機(北京松華興科技開展);FD-1C-50冷凍枯燥機(北京博醫(yī)康實驗儀器);Lyo-0.4型真空冷凍枯燥機(上海東富龍科技);HCT型微機差熱天平(北京恒久科學儀器廠);Waters超高效液相色譜儀：二元溶劑管理系統(tǒng)、在線脫氣機、自動進樣器、PDA檢測器(美國Waters公司)。利巴韋林由生工生物工程(上海)股份提供。Emprove低內(nèi)毒素蔗糖(批號K43921892)、Emprove低內(nèi)毒素甘露醇(批號M759903247)、Emprove低內(nèi)毒素甘氨酸(批號VP559490329)、Emprove低內(nèi)毒素山梨醇(批號M630297337)、Emprove低內(nèi)毒素氯化鉀(批號A0519420)、Emprove低內(nèi)毒素葡萄糖(批號K45447546413)均由默克化工技術(shù)(上海)提供;無水乳糖(上海昌為醫(yī)藥輔料技術(shù)，批號1320232820)。2方法與結(jié)果2.1凍干粉針的制備2.1.1利巴韋林凍干粉針的制備按照處方量精細稱取利巴韋林250mg以及適量凍干保護劑，用注射用水溶解，定容至10mL，以0.45μm微孔濾膜濾過，分裝于5mL西林瓶，1mL/瓶，25mg/mL。80℃低溫預凍后放入凍干機中枯燥。2.1.2空白凍干粉針的制備按照處方量精細稱取適量凍干保護劑，用注射用水溶解，定容至10mL，以0.45μm微孔濾膜濾過，分裝于5mL西林瓶，1mL/瓶，25mg/mL。80℃低溫預凍后放入凍干機中枯燥。2.1.3凍干粉針的外觀和復溶效果取利巴韋林凍干粉針和空白凍干粉針，凍干保護劑用量為10%，預凍15h，凍干15h，初步比擬不同凍干保護劑的凍干效果。Emprove低內(nèi)毒素葡萄糖、山梨醇凍干失敗，原輔料損失;Emprove低內(nèi)毒素蔗糖和無水乳糖凍干后外觀和復溶均良好，但放置后逐漸塌陷;Emprove低內(nèi)毒素甘露醇、甘氨酸、氯化鉀凍干粉針的外觀飽滿平整、復溶迅速完全。2.2預凍時間的`考察取利巴韋林凍干粉針和空白凍干粉針，凍干保護劑用量為10%，凍干15h，考察不同凍干保護劑的適用的最短預凍時間。鑒于2.1.3的結(jié)果，凍干失敗的原因有可能與預凍不完全有關(guān)，故不同的凍干保護劑選擇了不同的預凍時間程度進展考察。根據(jù)降低能耗、節(jié)約能的原那么，在獲得同樣效果的前提下，選擇預凍時間Emprove低內(nèi)毒素蔗糖24h，無水乳糖、Emprove低內(nèi)毒素甘露醇、Emprove低內(nèi)毒素甘氨酸和Emprove低內(nèi)毒素氯化鉀均為9h，Emprove低內(nèi)毒素葡萄糖、山梨醇仍然失敗。2.3凍干保護劑用量的考察取利巴韋林凍干粉針和空白凍干粉針，按照2.2的結(jié)果確定不同凍干保護劑的預凍時間，凍干15h，考察不同凍干保護劑、不同用量程度適用的最少用量。根據(jù)降低能耗、節(jié)約能的原那么，在獲得同樣效果的前提下，選擇Emprove低內(nèi)毒素蔗糖10%，Emprove低內(nèi)毒素甘露醇、甘氨酸、氯化鉀和無水乳糖均為4%，Emprove低內(nèi)毒素葡萄糖、山梨醇仍然失敗。2.4凍干時間的考察取利巴韋林凍干粉針和空白凍干粉針，按照2.2的結(jié)果確定不同凍干保護劑的預凍時間，按照2.3的結(jié)果確定不同凍干保護劑的用量，考察不同凍干保護劑的適用的最短凍干時間。根據(jù)節(jié)約輔料的原那么，在獲得同樣效果的前提下，選擇Emprove低內(nèi)毒素蔗糖15h，Emprove低內(nèi)毒素甘露醇、甘氨酸、氯化鉀和無水乳糖均為6h，Emprove低內(nèi)毒素葡萄糖、山梨醇仍然失敗。2.5驗證試驗根據(jù)單因素試驗結(jié)果，確定最優(yōu)條件，進展3次驗證實驗，結(jié)果見表5。所得凍干粉針除Emprove低內(nèi)毒素甘氨酸外表略有裂隙外，其他凍干粉針均外觀飽滿、平整，同時所有凍干粉針劑均可以迅速、完全復溶。2.6含水量的測定采用庫侖法測定含水量。取適量樣品，減重法稱量，參加C30庫侖法卡爾費休水分儀中，輸入樣品編號和質(zhì)量后進展測定，最終含水量均為3批樣品含水量的平均值，結(jié)果見表6，均符合凍干制劑含水量低于5%的要求。2.7pH值的測定取凍干前的樣品溶液2mL，將pH計探頭插入溶液中，直到pH計讀數(shù)不變，此時的讀數(shù)即為所求pH值;凍干后的樣品以凍干前一樣體積的水復溶后，取2mL用pH計測定pH值。取實驗所得樣品測定凍干前后的pH值，最終pH值均為3批樣品的平均值，結(jié)果見表7。凍干后pH值變化不大，考慮到pH計存在一定的測量誤差，總體認為pH值沒有根本性改變，影響不大。2.8利巴韋林凍干粉針中利巴韋林的測定2.8.1色譜條件色譜柱：ACQUITYUPLCHSST3色譜柱(100mm×2.1mm，1.8μm);流動相為純水;體積流量0.25mL/min;柱溫30℃;樣品室溫度4℃;檢測波長206____;進樣量1μL。2.8.2對照品溶液的制備精細稱定利巴韋林對照品4.01mg，置10mL量瓶中，純水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。2.8.3供試品溶液的制備取空白凍干粉針劑和利巴韋林凍干粉針劑各1瓶，分別用純水溶解，并各自轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，純水稀釋至刻度，搖勻，即得。2.8.4專屬性試驗分別取空白凍干粉、利巴韋林凍干粉和利巴韋林對照品溶液，進樣測定，并記錄色譜圖。2.8.5標準曲線的建立精細稱定利巴韋林對照品10.03mg，置25mL量瓶中，純水溶解并稀釋至刻度，搖勻即得0.40mg/mL利巴韋林對照品儲藏液。分別精細移取上述儲藏液0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8mL置10mL量瓶中，純水稀釋至刻度，搖勻即得質(zhì)量濃度分別為12、24、36、48、60、72μg/mL對照品溶液。將上述對照品溶液進樣分析^p，并記錄色譜圖。以峰面積對質(zhì)量濃度進展線性回歸，得回歸方程Y=2591.8X-1974.1，R2=0.9997，說明利巴韋林在12～72μg/mL與峰面積線性關(guān)系良好。2.8.6精細度試驗取利巴韋林凍干粉針劑1瓶，制備供試品溶液，連續(xù)進樣測定6次，結(jié)果利巴韋林峰面積的RSD值為1.7%。2.8.7重復性試驗取同一批利巴韋林凍干粉針劑6瓶，制備供試品溶液，進樣測定，結(jié)果利巴韋林質(zhì)量分數(shù)的RSD值為2.1%。2.8.8穩(wěn)定性試驗汲取利巴韋林凍干粉針劑供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、12h進樣測定，計算得利巴韋林峰面積的RSD值為2.2%。結(jié)果說明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性較好。2.8.9加樣回收試驗取量的利巴韋林凍干粉針劑供試品共9份，精細參加一定量利巴韋林對照品溶液，制備供試品溶液6份，進樣測定。結(jié)果利巴韋林的平均回收率為.1%，RSD值為1.7%。2.8.10樣品測定取利巴韋林凍干粉針劑樣品，制備供試品溶液，進樣測定，外標法計算樣品凍干前和凍干后利巴韋林的質(zhì)量分數(shù)。3討論實驗選擇了7種凍干保護劑進展比擬研究，其中Emprove低內(nèi)毒素葡萄糖和Emprove低內(nèi)毒素山梨醇在不同因素程度下均未能成功制備粉針劑。Emprove低內(nèi)毒素蔗糖、無水乳糖、Emprove低內(nèi)毒素氯化鉀、Emprove低內(nèi)毒素甘露醇、Emprove低內(nèi)毒素甘氨酸均能在適宜條件下制備粉針劑。從節(jié)約能耗的角度考慮，Emprove低內(nèi)毒素甘露醇、Emprove低內(nèi)毒素甘氨酸、Emprove低內(nèi)毒素氯化鉀、無水乳糖4種保護劑更為合適選