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用于生物技術(shù)產(chǎn)品及生物制品生產(chǎn)的細(xì)胞基質(zhì)的來源和鑒定Q目錄2.XXXXXX前言本指導(dǎo)原則的目的是對用于生產(chǎn)生物技術(shù)產(chǎn)品及生物制品的人和動物細(xì)胞系、微生物細(xì)胞系及其細(xì)胞庫的制備和鑒定建立合適的標(biāo)準(zhǔn)提供指導(dǎo)意見。本文件還為申請產(chǎn)品上市時在這些方面應(yīng)申報哪些資料提出了建議。本指導(dǎo)原則涵蓋了所有具備細(xì)胞庫系統(tǒng)的細(xì)胞基質(zhì)。這里的“細(xì)胞基質(zhì)”是指微生物細(xì)胞或來自于人或動物的細(xì)胞系，它們具有生產(chǎn)供人類體內(nèi)或體外使用的生物技術(shù)產(chǎn)品及生物制品的全部潛能。體外診斷試劑不在本文件范圍之內(nèi)。目的范圍2.XXXXXX前言基本原理由于細(xì)胞源性的生物制品存在外來污染的可能性，用于制備產(chǎn)品的細(xì)胞特性存在改變的可能性，重組DNA

(rDNA)制品的質(zhì)量也與細(xì)胞基質(zhì)中構(gòu)建的表達(dá)載體有關(guān)。因此，細(xì)胞基質(zhì)的特性以及與之相關(guān)的事件將影響產(chǎn)品的質(zhì)量和安全性。為有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量，需對細(xì)胞基質(zhì)操作的各方面進(jìn)行適宜的控制。為確保制品的質(zhì)量和安全性，需提供一份支持性文件，記載生產(chǎn)生物技術(shù)產(chǎn)品及生物制品的細(xì)胞基質(zhì)的歷史，還應(yīng)記載它們?nèi)炕虿糠謥碓从谀讣?xì)胞系的歷史，以便將細(xì)胞基質(zhì)在研究和開發(fā)階段所發(fā)生的事件與生產(chǎn)制品所用的特定細(xì)胞基質(zhì)相聯(lián)系來全面評估其風(fēng)險。1.

細(xì)胞基質(zhì)的來源、歷史和產(chǎn)生——1.1

細(xì)胞的來源應(yīng)說明所用細(xì)胞基質(zhì)的細(xì)胞來源，引證科學(xué)文獻(xiàn)上的相關(guān)參考資料。直接從實驗室獲得的資料是首選的，如果沒有這些資料，也可以利用文獻(xiàn)。1.

細(xì)胞基質(zhì)的來源、歷史和產(chǎn)生——1.1

細(xì)胞的來源?

對于人源細(xì)胞系，應(yīng)提供原供體組織或器官的起源、人種和地理位置、年齡、性別和一般的生理狀況。如有材料，應(yīng)將供體致病因子的檢查結(jié)果與健康狀況或病史一并報告。特別是人二倍體成纖維細(xì)胞，由于供體的年齡可能影響細(xì)胞系的體外壽命，應(yīng)盡可能提供。?

對于動物細(xì)胞系，應(yīng)提供物種、品系、飼養(yǎng)條件、組織或器官的起源、地理位置、年齡和性別、致病因子的檢查結(jié)果以及原供體的一般生理狀況。? 對于微生物細(xì)胞，應(yīng)提供產(chǎn)生細(xì)胞系的物種、株和已知的遺傳和表型特征。如可能，還應(yīng)提供其致病性、毒素產(chǎn)物和其他生物危害方面的資料。1.

細(xì)胞基質(zhì)的來源、歷史和產(chǎn)生——1.2

細(xì)胞的歷史?

應(yīng)記錄細(xì)胞的培養(yǎng)歷史，包括最初分離細(xì)胞的方法、細(xì)胞體外培養(yǎng)的方法以及建立細(xì)胞系的方法。還應(yīng)提供所有對基因操作和篩選的描述、細(xì)胞內(nèi)源性和外源性因子的鑒別、特性和檢測結(jié)果等資料。?

應(yīng)保存用于開發(fā)細(xì)胞系的方法學(xué)資料。在細(xì)胞系的構(gòu)建期間，會采用包括細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)染、篩選、克隆分離、克隆、基因擴(kuò)增和對特定培養(yǎng)條件或培養(yǎng)基的適應(yīng)等方法中的一種或多種使細(xì)胞系具有所需的特性。這些方法學(xué)資料有助于了解細(xì)胞系的詳細(xì)歷史。1.

細(xì)胞基質(zhì)的來源、歷史和產(chǎn)生——1.3

細(xì)胞基質(zhì)的產(chǎn)生? 對于重組產(chǎn)品，細(xì)胞系是指克隆自一個祖細(xì)胞且含有所需序列的轉(zhuǎn)染細(xì)胞。? 對于非重組產(chǎn)品或非重組疫苗，細(xì)胞系是指來源于那些選擇用作制備主細(xì)胞庫且未經(jīng)進(jìn)一步修飾的母細(xì)胞系的細(xì)胞。? 對源于雜交瘤的產(chǎn)品，細(xì)胞基質(zhì)是指骨髓瘤母細(xì)胞系和其他母細(xì)胞系融合后產(chǎn)生的雜交瘤細(xì)胞系，如免疫脾細(xì)胞。1.

細(xì)胞基質(zhì)的來源、歷史和產(chǎn)生——1.3

細(xì)胞基質(zhì)的產(chǎn)生對于重組產(chǎn)品，選擇合適的母細(xì)胞系是關(guān)鍵的一步。母細(xì)胞系通常是未轉(zhuǎn)染的受體細(xì)胞系。建議采用經(jīng)鑒定的母細(xì)胞庫，但這不是必需的。特別是當(dāng)多個細(xì)胞系產(chǎn)生于同一種母細(xì)胞系時，采用鑒定的母細(xì)胞庫能提供一套對主細(xì)胞庫(MCB)進(jìn)行質(zhì)量評估的信息。比如，骨髓瘤細(xì)胞系可以作為母細(xì)胞系建立雜交瘤細(xì)胞系。1.

細(xì)胞基質(zhì)的來源、歷史和產(chǎn)生——1.3

細(xì)胞基質(zhì)的產(chǎn)生關(guān)于細(xì)胞基質(zhì)的產(chǎn)生，應(yīng)提供詳細(xì)的制備過程中接觸的轉(zhuǎn)染因子。應(yīng)提供培養(yǎng)基的組分，特別是提供關(guān)于人或動物來源的物質(zhì)，如血清、酶、水解產(chǎn)物或其他活細(xì)胞方面的資料。提供的資料還應(yīng)包括來源、制備和質(zhì)控方法、檢測結(jié)果和質(zhì)量保證。還應(yīng)提供上述有關(guān)方面的文獻(xiàn)。這些資料將用于詳細(xì)分析外源因子來源的可能途徑，并作為制品風(fēng)險-收益評估的一部分。1.

細(xì)胞基質(zhì)的來源、歷史和產(chǎn)生用連續(xù)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞生產(chǎn)生物技術(shù)產(chǎn)品及生物制品的最大優(yōu)點是每批產(chǎn)品都有一個經(jīng)檢定過的共同起源，即保存的細(xì)胞庫。生產(chǎn)商可制備自己的細(xì)胞庫，也可從外部獲得。生產(chǎn)商應(yīng)對每個細(xì)胞庫進(jìn)行檢驗，以確保其質(zhì)量。2.細(xì)胞庫2.細(xì)胞庫二級細(xì)胞庫即主細(xì)胞庫（MCB）傳代產(chǎn)生工作細(xì)胞庫(WCB)，通常被認(rèn)為是在連續(xù)生產(chǎn)產(chǎn)品時細(xì)胞基質(zhì)供應(yīng)的最實際方法。單級細(xì)胞庫即僅建有MCB而沒有WCB，如果每年生產(chǎn)的產(chǎn)品僅需有限的幾支細(xì)胞時，這種情況原則上也是允許的。——2.1

細(xì)胞庫系統(tǒng)——2.1

細(xì)胞庫系統(tǒng)MCB與WCB的區(qū)別? MCB直接從最初的克隆或源于最初克隆的初級主細(xì)胞庫中制得。對某些類型的細(xì)胞，不必從克隆制備細(xì)胞庫(如二倍體細(xì)胞）。? WCB來源于一支或多支MCB，WCB是直接用于生產(chǎn)的細(xì)胞。新制備的WCB應(yīng)通過鑒定和檢測，以證明合格。? MCB和WCB在諸如培養(yǎng)基組分和培養(yǎng)條件方面也許有差別，制備MCB和WCB的培養(yǎng)條件也許與產(chǎn)品生產(chǎn)時不同。2.細(xì)胞庫——2.1

細(xì)胞庫系統(tǒng)在一些微生物表達(dá)系統(tǒng)中，對每批新細(xì)胞基質(zhì)進(jìn)行新的轉(zhuǎn)化，這種新的轉(zhuǎn)化要使用經(jīng)過徹底檢驗的宿主細(xì)胞庫和質(zhì)粒庫，每次轉(zhuǎn)化的細(xì)胞基質(zhì)庫都要經(jīng)過檢驗。這個轉(zhuǎn)化的細(xì)胞基質(zhì)庫可被看作MCB，它是生產(chǎn)用細(xì)胞基質(zhì)的來源。宿主細(xì)胞庫、質(zhì)粒庫和MCB都需用適宜方法進(jìn)行保存。因為細(xì)菌和酵母的轉(zhuǎn)化通常是重復(fù)性好、操作容易，不像轉(zhuǎn)染后生動物細(xì)胞那樣復(fù)雜，因此，這種經(jīng)過改變的表達(dá)系統(tǒng)是符合要求的。生產(chǎn)商應(yīng)提供有關(guān)宿主細(xì)胞、重組DNA分子(如質(zhì)粒)、轉(zhuǎn)化及細(xì)胞建庫的方法以及鑒定結(jié)果等方面的資料。2.細(xì)胞庫——2.2

細(xì)胞建庫的步驟?

細(xì)胞建庫通常是逐步增加容器數(shù)量或擴(kuò)大容器培養(yǎng)以獲得足夠量的細(xì)胞，并將其分裝到足夠量的容器中。為確保每個容器中的內(nèi)容物完全一致，如培養(yǎng)細(xì)胞采用多個器皿的，應(yīng)把所有培養(yǎng)器皿中的細(xì)胞混合再分裝。? 將懸浮在培養(yǎng)基中的一批細(xì)胞，定量分裝到無菌容器中并在適宜條件下密封和貯藏。例如，含有細(xì)胞凍存劑的培養(yǎng)基中的動物細(xì)胞，在規(guī)定和控制的條件下，分裝到密封容器中冷凍，然后轉(zhuǎn)移到液氮中或在相當(dāng)?shù)某蜏貤l件下保存。其他的保存和貯藏方法也是可用的，但要根據(jù)細(xì)胞的性質(zhì)而定。總之，應(yīng)使細(xì)胞保持一定的生存能力，來滿足生產(chǎn)及產(chǎn)品一致性的要求。2.細(xì)胞庫——2.2

細(xì)胞建庫的步驟?

生產(chǎn)商應(yīng)說明所用建庫系統(tǒng)的類型、細(xì)胞庫的大小、所用的容器和密閉系統(tǒng)，制備細(xì)胞庫的方法，包括所用的凍存劑、培養(yǎng)基以及細(xì)胞保存和貯藏的條件。? 生產(chǎn)商應(yīng)闡明避免微生物污染和實驗室中其他類型細(xì)胞交叉污染的方法。還應(yīng)介紹可追蹤細(xì)胞庫容器的方法，包括記錄系統(tǒng)，以及能經(jīng)受保存、貯藏和復(fù)蘇而不會丟失的容器標(biāo)簽。2.細(xì)胞庫——2.2

細(xì)胞建庫的步驟注意事項避免被污染的細(xì)胞基質(zhì)（或細(xì)胞庫）用于生產(chǎn)是十分重要的，否則，由于受污染的細(xì)胞庫不能使用，必須重新生產(chǎn)細(xì)胞庫，這將延誤產(chǎn)品上市或開發(fā)的時機(jī)。應(yīng)該認(rèn)識到?jīng)]有哪一種細(xì)胞庫檢測方案能檢測出所有可能潛在的污染。因此，只有在細(xì)胞建庫期間采取預(yù)防措施，才能確保細(xì)胞不被污染，為生產(chǎn)提供可靠的細(xì)胞基質(zhì)。3.細(xì)胞庫——2.2

細(xì)胞建庫的步驟注意事項為確保持續(xù)正常生產(chǎn)，生產(chǎn)商應(yīng)采取預(yù)防措施，防止如火災(zāi)、斷電和人為錯誤等事故的發(fā)生而造成的細(xì)胞庫不能用于生產(chǎn)。生產(chǎn)商應(yīng)提供預(yù)防計劃，例如，在多個冷藏罐中分別保存細(xì)胞庫，使用備用電源，使用自動液氮填充系統(tǒng)，將部分MCB和WCB保存在較遠(yuǎn)的場所，及MCB的再生等。2.細(xì)胞庫——2.2

細(xì)胞建庫的步驟注意事項在生產(chǎn)中體外細(xì)胞的壽命應(yīng)從解凍一個或多個容器MCB開始算起。對于二倍體細(xì)胞系，其體外壽命應(yīng)以細(xì)胞的倍增水平估算，還應(yīng)檢測二倍體細(xì)胞發(fā)生衰老時的細(xì)胞倍增水平。2.細(xì)胞庫3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則對建庫細(xì)胞基質(zhì)的鑒定和檢測是生物技術(shù)產(chǎn)品及生物制品質(zhì)量控制的重要組成部分。通過對MCB的鑒定，生產(chǎn)商可評估是否存在來自其他細(xì)胞系的細(xì)胞、外源和內(nèi)源因子以及其他污染物。檢測的目的是為了證實用于生產(chǎn)的細(xì)胞基質(zhì)的特性、純度和適用性。在有些情況下，其他方面如致癌性或細(xì)胞核學(xué)的檢測也是有用的。對某一細(xì)胞基質(zhì)選擇何種檢測方案要根據(jù)細(xì)胞的生物學(xué)特性（如生長的需求）、培養(yǎng)歷史（包括人源和動物源性生物試劑的使用）以及可應(yīng)用的試驗方法而定。細(xì)胞基質(zhì)的鑒定程度將影響以后的生產(chǎn)階段所需的常規(guī)檢測的類型或水平。3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則? 生產(chǎn)商應(yīng)對每個MCB作一次純度試驗和鑒別實驗，對將要注冊的每一產(chǎn)品在細(xì)胞培養(yǎng)期間作一次穩(wěn)定性試驗。? 生產(chǎn)商應(yīng)對每一個WCB作純度檢測和必要的鑒別試驗。? 申請人應(yīng)參考ICH指導(dǎo)原則中有關(guān)病毒安全性方面的內(nèi)容，進(jìn)行有關(guān)試驗并在申請制品上市時將試驗內(nèi)容和試驗結(jié)果一并上報。3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則對于含有外源構(gòu)建表達(dá)載體的細(xì)胞系，應(yīng)參照ICH指導(dǎo)原則中有關(guān)rDNA表達(dá)載體方面的內(nèi)容，進(jìn)行核苷酸和氨基酸序列方面的鑒定。也可用類似的方法對基因序列明確并已鑒定的某些非重組DNA來源的細(xì)胞系的編碼序列進(jìn)行檢測。但是，沒有必要對那些編碼復(fù)雜的天然產(chǎn)品序列進(jìn)行分析，如相關(guān)的基因產(chǎn)品系列、微生物疫苗抗原或來自于雜交瘤的單克隆抗體。3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則?

如果條件具備，應(yīng)鼓勵生產(chǎn)商在細(xì)胞基質(zhì)鑒定和檢測中使用先進(jìn)方法和技術(shù)改進(jìn)，但新方法的特異性、靈敏度和精密度至少應(yīng)與現(xiàn)有方法相當(dāng)。? 如果理由充分，生產(chǎn)商也可選擇對WCB進(jìn)行鑒定，而不是MCB。3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則應(yīng)采用合適的試驗證明建庫的細(xì)胞就是它本身。鑒別試驗可利用細(xì)胞的表型或遺傳型特征，但不必作所有的試驗。通常對MCB作鑒別試驗，而對每個WCB僅作有限的鑒別試驗?！?.1

鑒別試驗3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則——3.1.1

鑒別試驗?后生動物細(xì)胞對于貼壁生長的人或動物細(xì)胞，可采用形態(tài)學(xué)分析與其他試驗相結(jié)合的方法。在大多數(shù)情況下，同工酶分析足以確證人或動物細(xì)胞庫的種屬來源；依據(jù)細(xì)胞系的歷史情況，可采用其他合適的試驗。對于種族來源亦可用其他替代技術(shù)予以確認(rèn)，如用染色體條帶分析或種屬特異性抗血清的方法。替代方法可顯示其獨特的標(biāo)志物。例如，通過使用染色體細(xì)胞遺傳學(xué)來檢測獨特的標(biāo)記染色體，或用DNA分析來檢測基因組多態(tài)性。只要能確證其起源物種或某種已知細(xì)胞系獨特性標(biāo)記物的存在，就可認(rèn)為是適宜的鑒別試驗方法。目標(biāo)產(chǎn)品的表達(dá)可作為鑒別試驗的一種補(bǔ)充手段。3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則對于大多數(shù)微生物細(xì)胞，分析細(xì)胞在選擇性培養(yǎng)基上生長情況就可用以確證宿主細(xì)胞庫的宿主細(xì)胞種屬特性。對于大腸桿菌，由于有許多不同的株，可考慮采用生物學(xué)鑒別方法，如噬菌體分類，作為鑒別試驗的補(bǔ)充。對于質(zhì)粒庫，可按ICH文件中有關(guān)表達(dá)載體分析的內(nèi)容進(jìn)行特性評估。目標(biāo)產(chǎn)品的表達(dá)也可用以確證微生物表達(dá)系統(tǒng)的特性?！?.1.2

鑒別試驗?微生物細(xì)胞3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則評估MCB和WCB的生物學(xué)純度，即游離的外源微生物和外源細(xì)胞污染，是細(xì)胞開發(fā)和建庫的關(guān)鍵部分。在設(shè)計和進(jìn)行這些試驗時，應(yīng)考慮選擇性試劑和抗生素對檢測外源微生物污染的影響?！?.2

純度檢測3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則——3.2.1

純度檢測?后生動物細(xì)胞①

生物負(fù)荷檢測：應(yīng)采用MCB和WCB的單一容器（容器總數(shù)的1%，但不少于2個）檢測生物負(fù)荷（細(xì)菌和真菌）的存在。目前在歐洲藥典、日本藥局方或美國藥典所記載的用于測試微生物限度或無菌試驗的方法也是適用的。3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則——3.2.1

純度檢測?后生動物細(xì)胞②

支原體檢測：應(yīng)檢測MCB和WCB是否存在支原體。目前所用的瓊脂和肉湯培養(yǎng)基的方法以及指示劑細(xì)胞培養(yǎng)法是適用的。用于支原體測試的方法在歐洲藥典、日本藥局方和FDA

“用于生產(chǎn)生物制品的細(xì)胞系鑒定的考慮要點”一文中都有記載。僅用1支MCB或WCB來源的細(xì)胞進(jìn)行測試就可以了。對于非哺乳動物細(xì)胞系，供選擇的測試方法或條件應(yīng)適當(dāng)，采用哪種方法，生產(chǎn)商應(yīng)咨詢當(dāng)?shù)貒一虻貐^(qū)的管理機(jī)構(gòu)。3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則——3.2.1

純度檢測?后生動物細(xì)胞③

病毒檢測：對于細(xì)胞基質(zhì)中可能污染病毒的檢測，應(yīng)根據(jù)細(xì)胞系的培養(yǎng)史，通過篩選和相關(guān)的特異性試驗，選用可檢測廣譜病毒的方法。申請人應(yīng)就病毒安全性問題參考ICH指南，對于那些尚未在該指南中涉及的產(chǎn)品類別，可參考WHO關(guān)于使用動物細(xì)胞的有關(guān)資料。3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則——3.2.1

純度檢測?后生動物細(xì)胞④

細(xì)胞交叉污染檢測：細(xì)胞基質(zhì)的純度會由于污染相同或不同種系的細(xì)胞而降低。選擇什么樣的純度試驗方法取決于該細(xì)胞存在被何種細(xì)胞系交叉污染的可能。有時，在同一實驗室會同時培養(yǎng)幾種不同的細(xì)胞系，在細(xì)胞建庫過程中，當(dāng)進(jìn)行開放性操作時，應(yīng)注意避免與其他細(xì)胞系同時開放操作而導(dǎo)致交叉污染。在建庫的開放性操作過程中，只要在此操作間有另一種細(xì)胞系存在，就應(yīng)檢測該細(xì)胞庫細(xì)胞中是否污染了另一種細(xì)胞系的細(xì)胞。在鑒別試驗中介紹的細(xì)胞特性的檢測方法一般也可用于檢測是否與其他細(xì)胞系存在交叉污染。另外，從細(xì)胞基質(zhì)中成功地制得預(yù)期產(chǎn)品是說明無交叉污染的另一種旁證。3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則——3.2.2

純度檢測?微生物細(xì)胞在設(shè)計檢測微生物細(xì)胞庫中外源微生物因子和外源細(xì)胞污染的特異性試驗方法時，應(yīng)考慮以下問題：建庫細(xì)胞的性質(zhì)、科技文獻(xiàn)中報道的可能存在的污染、用于細(xì)胞培養(yǎng)的細(xì)胞來源、方法和材料以及存在于建庫實驗室中的其他生物等等。例如，可考慮采用幾種微生物培養(yǎng)基對該微生物細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，其中有些培養(yǎng)基可使細(xì)胞生長，有些則不能，培養(yǎng)后采用目視法對分離的菌落進(jìn)行鑒定，就可以判斷是否有其他微生物污染。3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則——3.3

細(xì)胞基質(zhì)的穩(wěn)定性細(xì)胞鑒定的另一個目的是考察細(xì)胞在生產(chǎn)中的適用性。細(xì)胞基質(zhì)穩(wěn)定性主要應(yīng)考慮兩個方面，即生產(chǎn)產(chǎn)品的一致性和貯存在規(guī)定條件下的細(xì)胞能否維持其生產(chǎn)能力。3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則——3.3

細(xì)胞基質(zhì)的穩(wěn)定性①

生產(chǎn)產(chǎn)品的一致性生產(chǎn)產(chǎn)品的一致性是對細(xì)胞基質(zhì)進(jìn)行評估的主要內(nèi)容。用于此類評估的試驗類型和試驗項目將根據(jù)細(xì)胞基質(zhì)的性質(zhì)、培養(yǎng)方法和所生產(chǎn)的產(chǎn)品而定。對于含有重組DNA表達(dá)載體的細(xì)胞系，在其培養(yǎng)達(dá)到或超過體外代次限度時，應(yīng)通過核酸檢測或產(chǎn)品分析，對表達(dá)載體上編碼序列的一致性進(jìn)行驗證。對于非重組細(xì)胞系，在生產(chǎn)中細(xì)胞培養(yǎng)達(dá)到或超過體外代次限度時，應(yīng)通過核酸檢測或純化蛋白質(zhì)制品的分析驗證其蛋白質(zhì)編碼序列沒有改變。3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則——3.3

細(xì)胞基質(zhì)的穩(wěn)定性如果產(chǎn)品不能按上述方法進(jìn)行分析，則其他特征諸如形態(tài)學(xué)特性、生長特性、生化標(biāo)志、免疫標(biāo)志、對預(yù)期產(chǎn)品的生產(chǎn)能力或其他相關(guān)的表型或遺傳標(biāo)志等都可用于評估細(xì)胞基質(zhì)的穩(wěn)定性。在某些情況下，當(dāng)無法將MCB細(xì)胞的特性直接與達(dá)到或超過細(xì)胞體外代次限度的生產(chǎn)用細(xì)胞比較時，可將生產(chǎn)最初階段的細(xì)胞與達(dá)到或超過細(xì)胞體外代次限度的生產(chǎn)用細(xì)胞進(jìn)行特性比較。某些指標(biāo)，如氧或葡萄糖的消耗量、氨或乳酸的產(chǎn)率可用于這類檢測。3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則——3.3

細(xì)胞基質(zhì)的穩(wěn)定性②貯存細(xì)胞的生產(chǎn)能力在規(guī)定的貯藏條件下，建庫細(xì)胞的穩(wěn)定性一般需通過生產(chǎn)臨床試驗用樣品來驗證。當(dāng)儲存的細(xì)胞復(fù)蘇生產(chǎn)臨床試驗用樣品時，對細(xì)胞活力的測定數(shù)據(jù)可證明這些復(fù)蘇細(xì)胞在儲存過程中仍然保持活力，可證實復(fù)蘇細(xì)胞能用于生產(chǎn)所需的產(chǎn)品。以上這些資料需納入到申報資料中去，并附上對建庫細(xì)胞穩(wěn)定性監(jiān)測的方案。3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則——3.3

細(xì)胞基質(zhì)的穩(wěn)定性?

評估培養(yǎng)期間的穩(wěn)定性，至少應(yīng)考察兩個時間點。一個時間點是采用最少傳代數(shù)的細(xì)胞，另一個時間點是申請上市的生產(chǎn)中達(dá)到或超過細(xì)胞體外傳代限度的細(xì)胞。?

用于生產(chǎn)的細(xì)胞體外傳代限度應(yīng)根據(jù)從中試生產(chǎn)規(guī)?；蛏a(chǎn)規(guī)模的細(xì)胞擴(kuò)增代數(shù)到建議或超過建議的生產(chǎn)代次限度所得的資料來確定。如果要延長用于生產(chǎn)的細(xì)胞的體外代次限度，應(yīng)有體外代次已達(dá)到所建議的新限度的研究資料支持。對于二倍體細(xì)胞，應(yīng)提供擬用于生產(chǎn)條件下的WCB細(xì)胞體外有限代次的資料。? 細(xì)胞基質(zhì)穩(wěn)定性的驗證通常在每個產(chǎn)品上市申請時進(jìn)行一次。3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則——3.4

細(xì)胞核學(xué)和致瘤性試驗根據(jù)細(xì)胞類型、產(chǎn)品的性質(zhì)以及生產(chǎn)工藝，決定是否有必要采用細(xì)胞核學(xué)和致瘤性試驗來評價二倍體細(xì)胞系的安全性或鑒定一個新的細(xì)胞系。3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則——3.4

細(xì)胞核學(xué)和致瘤性試驗需要做細(xì)胞核學(xué)和致瘤性試驗的情況：?

對不能去除活細(xì)胞或幾乎無下游純化工藝（如一些傳統(tǒng)的活病毒疫苗）的制品需要做細(xì)胞基質(zhì)的細(xì)胞核學(xué)和致瘤性試驗。用于非純化制品的新細(xì)胞基質(zhì)，是否需進(jìn)行致瘤性試驗和染色體分析，應(yīng)具體情況具體分析。用已知是致癌的或具有異常細(xì)胞核的細(xì)胞系生產(chǎn)含有細(xì)胞或未高度純化的制品時，應(yīng)在每個產(chǎn)品申報時進(jìn)行風(fēng)險-收益的評估。? 對于新建的或之前未經(jīng)鑒定的二倍體細(xì)胞，應(yīng)采用MCB細(xì)胞證實其具有二倍體細(xì)胞的細(xì)胞核，并確認(rèn)其潛在的致瘤性。3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則——3.4

細(xì)胞核學(xué)和致瘤性試驗不需要做細(xì)胞核學(xué)和致瘤性試驗的情況：?

嚙齒類動物細(xì)胞系或已知為非二倍體的新細(xì)胞系不需要作細(xì)胞核學(xué)測定，因細(xì)胞遺傳學(xué)分析足以評估細(xì)胞基質(zhì)的特性或純度。對文獻(xiàn)已記載具有致瘤性的細(xì)胞不需重復(fù)進(jìn)行致瘤性試驗。?

對于高度純化和不含細(xì)胞的制品，只要通過生產(chǎn)工藝驗證或通過批簽發(fā)檢測，表明殘留的宿主細(xì)胞DNA符合限度要求，通常也不必進(jìn)行細(xì)胞核學(xué)和致瘤性試驗。3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則——3.4

細(xì)胞核學(xué)和致瘤性試驗不需要做細(xì)胞核學(xué)和致瘤性試驗的情況：?

用未進(jìn)行遺傳修飾的MRC5或WL-38細(xì)胞生產(chǎn)時，不必對這些細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞核學(xué)或致瘤性的鑒定，因為對這些細(xì)胞系已作了大量的鑒定工作，并有文獻(xiàn)發(fā)表。但是，對于每個MRC-5或WI-38的WCB，生產(chǎn)商應(yīng)再確認(rèn)生產(chǎn)用細(xì)胞的生長方式符合二倍體細(xì)胞的特點，并具有所預(yù)期的代次。3.細(xì)胞庫鑒定和檢測的一般原則以上指導(dǎo)原則適用于鑒定過的建庫細(xì)胞制備的生物技術(shù)產(chǎn)品及生物制品。然而，也有許多生物制品尤其是一些病毒疫苗是采用原代細(xì)胞制備的。由于原代細(xì)胞是原始組織分離后的第一代細(xì)胞，因此不必像鑒定建庫細(xì)胞那樣在生產(chǎn)之前對其進(jìn)行全面鑒定。此外，用原代細(xì)胞生產(chǎn)的生物制品通常不進(jìn)行深加工處理（如純化）。盡管存在著這些不同，但對原代細(xì)胞基質(zhì)進(jìn)行安全性和適用性的檢測方法在很多方面與前文以及其他指南中所介紹的