分子診斷質量管理基本內容和要求上海市臨床檢驗中心肖艷群主要內容?

分子診斷技術臨床應用管理政策解讀?

分子診斷技術質量管理基本要求分子診斷技術臨床應用管理?

分子檢測實驗室規(guī)范及內容?

分子檢測技術規(guī)范及內容?

分子檢測項目規(guī)范及內容?

申請注意事項《醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號?

總則第二條

臨床基因擴增檢驗實驗室是指通過擴增檢測特定的DNA或RNA，進行疾病診斷、治療監(jiān)測和預后判定等的實驗室，醫(yī)療機構應當集中設置，統(tǒng)一管理。第三條

本辦法適用于開展臨床基因擴增檢驗技術的醫(yī)療機構。第五條

以科研為目的的基因擴增檢驗項目不得向臨床出具檢驗報告，不得向患者收取任何費用?

第二章

實驗室審核和設置?

第三章

實驗室質量管理第十四條

醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室人員應當經(jīng)省級以上衛(wèi)生行政部門指定機構技術培訓合格后，方可從事臨床基因擴增檢驗工作第十五條

醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室應當按照《醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗工作導則》開展實驗室室內質量控制，參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心或指定機構組織的實驗室室間質量評價?

第四章

實驗室監(jiān)督管理第十八條

省級以上衛(wèi)生行政部門指定機構對室間質量評價不合格的醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室提出警告。對于連續(xù)2次或者3次中有2次發(fā)現(xiàn)臨床基因擴增檢驗結果不合格的醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室，省級衛(wèi)生行政部門應當責令其暫停有關臨床基因擴增檢驗項目，限期整改。整改結束后，經(jīng)指定機構組織的再次技術審核合格后，方可重新開展臨床基因擴增檢驗項目。第二十條

醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室出現(xiàn)以下情形之一的，由省級衛(wèi)生行政部門責令其停止開展臨床基因擴增檢驗項目，并予以公告：（一）開展的臨床基因擴增檢驗項目超出省級衛(wèi)生行政部門核定范圍的；（二）使用未經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局批準的臨床檢驗試劑開展臨床基因擴增檢驗的；（三）在臨床基因擴增檢驗中未開展實驗室室內質量控制的；（四）在臨床基因擴增檢驗中未參加實驗室室間質量評價的；（五）在臨床基因擴增檢驗中弄虛作假的；（六）以科研為目的的基因擴增檢驗項目向患者收取費用的；（七）使用未經(jīng)培訓合格的專業(yè)技術人員從事臨床基因擴增檢驗工作的。（八）嚴重違反國家實驗室生物安全有關規(guī)定或不具備實驗室生物安全保障條件的。分子檢測技術開展規(guī)范一、關于第三類、第二類醫(yī)療技術管理工作（一）取消第三類和本市第二類醫(yī)療技術臨床應用準入審批。（二）已開展《上海市限制臨床應用醫(yī)療技術目錄（2015版）》在列醫(yī)療技術，且經(jīng)審批的醫(yī)療機構，應向衛(wèi)生計生行政部門備案并提交《上海市醫(yī)療技術臨床應用備案表》。原已在《醫(yī)療機構執(zhí)業(yè)許可證》相應診療科目下辦理登記的醫(yī)療機構無需再次辦理。（三）擬開展《上海市限制臨床應用醫(yī)療技術目錄（2015版）》在列醫(yī)療技術的醫(yī)療機構，經(jīng)自我對照評估符合規(guī)定條件并由具備臨床應用能力評估資質的第三方評價機構出具臨床應用能力評估報告后進行備案。衛(wèi)生計生行政部門在《醫(yī)療機構執(zhí)業(yè)許可證》副本備注欄注明后，方可在臨床應用相關醫(yī)療技術。（四）本市首次開展（未納入國家和上海限制臨床應用醫(yī)療技術目錄）的醫(yī)療技術，應按照《關于印發(fā)醫(yī)療衛(wèi)生機構開展臨床研究項目管理辦法的通知》要求進行臨床研究項目管理，完成臨床研究后且條件成熟的，可按照開展目錄在列醫(yī)療技術方式，實施備案管理后進入臨床應用。二、關于醫(yī)療機構技術管理工作（一）醫(yī)療機構對本機構醫(yī)療技術臨床應用和管理承擔主體責任，醫(yī)療機構主要負責人是第一責任人。各級各類醫(yī)療機構應當建立完善本機構醫(yī)療技術臨床應用管理制度并建立健全醫(yī)療技術評估與管理檔案制度。（二）醫(yī)療機構必須嚴格按照相關醫(yī)療技術臨床應用管理規(guī)范進行自我對照評估，醫(yī)療機構基本條件、人員條件、技術管理等不符合相關規(guī)范要求的，不得開展相應技術（三）醫(yī)療機構必須嚴格按照醫(yī)療技術規(guī)范開展診療活動，加強醫(yī)療技術臨床應用質量和安全管理。與醫(yī)療技術有關的專業(yè)技術人員或者設備、設施、輔助條件發(fā)生變化，可能對醫(yī)療技術臨床應用帶來不確定后果或者存在醫(yī)療質量和醫(yī)療安全隱患的技術，應立即停止臨床應用，并向衛(wèi)生計生行政部門報告。衛(wèi)生計生行政部門應當及時取消《醫(yī)療機構執(zhí)業(yè)許可證》副本備注欄注明。（四）醫(yī)療機構應當自備案手續(xù)完成之日起，每年2月底前向衛(wèi)生計生行政部門和相關專業(yè)質量控制中心報告上一年度醫(yī)療技術臨床應用情況，包括診療病例數(shù)、適應癥掌握情況、臨床應用效果、并發(fā)癥、合并癥、不良反應、隨訪情況等。三、關于事中事后監(jiān)督管理工作（一）醫(yī)療機構完成備案手續(xù)，衛(wèi)生計生行政部門要及時將醫(yī)療機構名單向社會公布。市衛(wèi)生計生行政部門依托各相關專業(yè)質量控制中心對醫(yī)療機構進行質控管理。（二）各相關專業(yè)質量控制中心要加強醫(yī)療機構的醫(yī)療質量控制和動態(tài)管理工作。各相關專業(yè)質量控制中心接備案醫(yī)療機構信息后應立即建立醫(yī)療技術臨床應用技術管理檔案，并對醫(yī)療機構醫(yī)療技術臨床應用情況加強日常監(jiān)測，及時向醫(yī)療機構和衛(wèi)生計生監(jiān)督部門反饋質控結果，質控結果作為衛(wèi)生計生監(jiān)督部門參考依據(jù)。（三）各辦醫(yī)主體要加強日常管理，加大對醫(yī)療技術臨床應用情況監(jiān)督檢查力度。各級衛(wèi)生計生監(jiān)督部門要加大對未進行備案、開展禁止臨床應用醫(yī)療技術的醫(yī)療機構、備案后但未按照技術管理規(guī)范開展診療活動的醫(yī)療機構的監(jiān)督執(zhí)法力度。醫(yī)療機構未進行備案或開展禁止臨床應用醫(yī)療技術的，由衛(wèi)生計生行政部門按照《醫(yī)療機構管理條例》第四十七條和《醫(yī)療技術臨床應用管理辦法》第五十條的規(guī)定給予處罰。醫(yī)療機構備案后，醫(yī)師未按照技術管理規(guī)范開展診療活動的，由衛(wèi)生計生行政部門按照《執(zhí)業(yè)醫(yī)師法》第三十七條的規(guī)定給予處罰。（四）建立醫(yī)療技術臨床應用定期抽查評估制度。經(jīng)評估不合格的醫(yī)療機構，禁止開展相關醫(yī)療技術。附件2:上海市限制臨床應用醫(yī)療技術目錄（2015版）序號34醫(yī)療技術名稱臨床基因擴增檢驗及分子診斷相關技術基因芯片診斷技術35分子檢測項目開展技術規(guī)范臨床分子生物學及細胞遺傳學《醫(yī)療機構臨床檢驗項目目錄2013年版

》評估流程醫(yī)療機構提出技術評估申請（）臨檢中心文件初審專家評估（評審會或現(xiàn)場評估）臨檢中心出具評估報告申請注意事項?

申請材料中不需主管部門蓋章?

申請新技術：單獨申請?

無復審環(huán)節(jié)，但有實驗室現(xiàn)場督查?

再申請時無時間周期限制?

臨檢中心為第三方評估機構（/

醫(yī)療技術評估（分子診斷、基因芯片、新技術）/申請、查詢、聯(lián)系方式技術評估需遞交的材料?

醫(yī)療機構執(zhí)業(yè)許可證副本復印件?

技術人員相關資格證書復印件?

與該技術有關的實驗室平面圖?

醫(yī)療機構醫(yī)學倫理審查報告（申請產(chǎn)前篩查、遺傳性疾病需要）?

儀器、試劑三證復印件?

性能驗證報告?

室間質評或室間比對成績?

質量手冊、程序文件、操作規(guī)程?

申請在本市首次開展的醫(yī)療技術還需遞交：國內外有關該技術研究和使用情況的檢索報告及技術資料技術評估需遞交的材料?

《上海市醫(yī)療技術臨床應用能力評估申請書》?

醫(yī)療機構基本情況?

申請單位相關學科基本情況?

項目負責人基本情況?

學科人員基本情況?

項目所在地實驗室的專用設備、設施及工作基礎?

擬開展檢驗項目?

開展該技術的目的、意義和實施方案?

該項醫(yī)療技術的基本概況?

技術路線?

國內外應用情況?

與同種疾病的其他檢測技術的特點及費用比較?

質量控制措施分子診斷質量管理要求?

質量管理內涵：建立一個體系，使在實驗的全過程中所有影響實驗結果的環(huán)節(jié)都處于受控狀態(tài)，保證每個環(huán)節(jié)的協(xié)調和統(tǒng)一，確保實驗結果始終可靠。制定依據(jù)?

《醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法》（衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2006]73號）?

《醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)[2010]194號）?

醫(yī)學實驗室質量和能力認可準則

ISO15189(CNAS-CL02)?

醫(yī)學實驗室質量和能力認可準則在分子診斷領域的應用說明（CNAS-CL36）?

醫(yī)學實驗室質量和能力認可準則在組織病理學檢查領域的應用說明（CNAS-CL37）?

《全國臨床檢驗操作規(guī)程

》第4版?

CLSI文件基本內容?

質量管理體系?

人員?

實驗室設置、環(huán)境和設施?

設備與材料?

實驗室信息系統(tǒng)?

分析前質量控制?

分析過程質量控制?

分析后質量控制一、質量管理體系?

質量管理體系如何建立？?

文件和記錄如何管理？質量管理體系建立?

要素：組織結構、過程、程序、資源?

作用質量手冊程序文件操作規(guī)程?

建立并保持質量管理體系有效運行的重要基礎?

規(guī)范各項工作，保證工作質量?

內容：質量手冊、程序文件、操作規(guī)程、記錄?

依據(jù)：應基于相應的國家標準或國際標準記錄文件編寫?

Why:目的?

Where：范圍?

Who：職責?

What：做什么?

When：何時做?

How：如何做注意：適合自身實際情況，可操作性現(xiàn)行有效寫你所做的、做你所寫的、記你所做的管理文件至少包括1.組織和人員管理方面的文件，應包括實驗室各類人員的崗位職責、崗位培訓、繼續(xù)教育以及定期考核2.

環(huán)境、設施及安全管理3.

儀器、設備的采購、驗收、使用、維修、校準4.

檢驗試劑及其他相關消耗品的采購、驗收、保管、領用及使用5.

樣品的采集、運送、接收、處理及保存6.

檢驗方法的選擇、確認或驗證7.

檢驗項目及儀器設備標準操作程序的建立和管理8.

檢驗結果質量保證9.

檢驗報告管理的規(guī)定。其中包括結果的發(fā)放方式，報告的格式和內容，以及有關保護患者隱私的規(guī)定10.

記錄的管理文件或程序，其中應包括記錄的修改、保存及期限等要求11.

對差錯事故及不符合工作的糾正及預防措施12.

對服務對象投訴處理操作規(guī)程?

項目：（1）項目名稱、檢驗方法名稱；（2）方法學原理；（3）試劑品牌、代號、包裝規(guī)格、內含物；（4）儀器品牌、型號；（5）具體操作步驟（包括主要的儀器測定參數(shù)）；（6）質控品使用方法、使用水平和頻率、質控規(guī)則；（7）操作性能概要，如精密度、正確度、線性范圍、可報告范圍、靈敏度、特異性、方法的局限性（如干擾物質等）、操作注意事項；（8）參考值或參考范圍；（9）臨床意義；（10）病人準備、標本要求；（11）參考文獻；（12）編寫者和日期；（13）科主任對每個項目操作規(guī)程的簽字認可，確定生效日期。?

儀器設備：使用、維護保養(yǎng)、校準等內容記錄管理?

原始記錄和質量記錄應完整、清晰，電子記錄應定期備份。實驗室所有質量管理記錄均應按相關規(guī)定保存（如分子病理、遺傳病、NIPT等）注：質量管理記錄，應包括但不限于標本接收、標本儲存、標本處理、儀器和試劑及耗材使用情況、校準、室內質控、室間質評、檢驗結果、報告發(fā)放等內容?

無儀器打印結果的檢驗項目應有原始記錄，記錄信息至少應包括檢測日期、方法、試劑品牌、批號、有效期、檢驗結果、檢驗者注：凝膠圖像和斑點雜交原始記錄可通過掃描、拍照等方式保留二、人員要求?

實驗室人員資質要求?

至少應有2名有PCR上崗證的本單位技術人員?

開展遺傳性疾病或基于組織、細胞等分子病理并出具診斷報告的實驗室，至少應有1名具備出具相關診斷報告資質的本單位醫(yī)師培訓與效果評估?

培訓：有培訓制度、計劃和培訓記錄?

定期（每12個月至少一次）對學習培訓效果進行評估注1：工作人員的培訓應包括與其提供服務相關的、本實驗室質量保證和質量管理方面的專門培訓注2：

a)計劃制定應有針對性b)員工培訓和能力評審以新進人員或轉崗人員為重點c)培訓形式可以多樣：外出培訓、科、組內部培訓、自學、交流等d)培訓效果評估形式：考試、操作、通過培訓解決問題、通過培訓對自身能力和工作能力的提高e)培訓記錄：可包括培訓課件、培訓照片、簽到表、效果評價證據(jù)能力評估?

對象：每一位員工?

頻率：至少1年1次；新近或轉崗員工：最初6個月內至少評估2次?

方式：???直接觀察常規(guī)工作過程和程序，包括所有使用的安全操作直接觀察設備維護和功能檢查監(jiān)控檢驗結果的記錄和報告過程、核查工作記錄（實驗室原始記錄、質控記錄、定標記錄、試劑、使用記錄、儀器保養(yǎng)維護記錄、儀器維修記錄等）??評估解決問題的技能使用特殊材料執(zhí)行一個給定程序（盲樣檢測、留樣再測）人員管理?

應建立分子診斷技術人員相關的教育背景、專業(yè)資格、培訓、經(jīng)歷及能力記錄檔案，并定期更新，內容包括：a)證書或執(zhí)照復印件b)教育或以前的工作資料c)職務說明d)繼續(xù)教育記錄e)能力評估等三、實驗室設置、設施與環(huán)境?

普通PCR實驗室設置原則上分為四個區(qū)：試劑準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)?

如使用全自動擴增分析儀，后兩區(qū)可合并?

如使用核酸提取、擴增和產(chǎn)物分析一體化的全自動分析系統(tǒng)，后三區(qū)可合并?

具體實驗室分區(qū)應根據(jù)其所使用的技術平臺及檢驗項目和工作量而定?

新一代測序技術實驗室設置原則：工作有序、互不干擾、防止污染、報告及時普通PCR實驗室產(chǎn)物分析區(qū)緩沖區(qū)擴增區(qū)緩沖區(qū)標本制備區(qū)

試劑準備區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)工作流向注意事項：各區(qū)有獨立的緩沖區(qū)各區(qū)都有水池各區(qū)有獨立的通風系統(tǒng)（建議有窗戶的房間為PCR實驗室）標本制備區(qū)有沖眼器和生物安全柜產(chǎn)前篩查與產(chǎn)前診斷（全基因組低拷貝測序技術）測序區(qū)文庫擴增與檢測區(qū)標本與文庫制備區(qū)試劑準備區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)工作流向?

標本與文庫制備區(qū)：血漿分離、DNA提取、末段修復與純化、加“A”與純化、接頭連接與純化?

文庫擴增與檢測區(qū)：PCR擴增與純化、文庫濃度檢測、pooling、pooling后文庫定量?

測序區(qū)：測序前準備（乳液PCR及磁珠富集）、測序上機、信息分析、報告審核及發(fā)放植入前胚胎遺傳學診斷（全基因組低拷貝測序）電泳區(qū)緩沖區(qū)測序區(qū)文庫檢測區(qū)緩沖區(qū)擴增一區(qū)緩沖區(qū)WGA制備區(qū)試劑準備區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)工作流向??????WGA制備區(qū)：全基因組擴增電泳區(qū)：DNA檢測及結果反饋、DNA打斷擴增一區(qū)：末端修復及純化、加“A”與純化、接頭連接與純化、pooling、缺口平移文庫檢測：測序區(qū)：擴增前準備（乳液PCR及磁珠富集）、測序儀上機數(shù)據(jù)分析、報告發(fā)放遺傳病診斷+腫瘤診斷與治療（雜交捕獲測序技術+Sanger測序驗證）電泳區(qū)緩沖區(qū)測序區(qū)

文庫檢測區(qū)

文庫擴增區(qū)

雜交鋪獲區(qū)

DNA打斷區(qū)

標本與文

試劑準備（擴增二區(qū)（擴增一區(qū)）

庫制備區(qū)

區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)?????標本與文庫制備區(qū)：DNA提取及檢測、純化測OD、末端修復與純化、加“A”與純化、Adapter連接與純化雜交捕獲區(qū)：Pre-Captured-PCR與純化

、OD值檢測及pooling、雜交、洗脫與純化文庫擴增與檢測區(qū)：Post-Captured-PCR與純化、Pooling及文庫定量檢測測序區(qū)：測序前準備（C-Bot制備)、測序儀上機數(shù)據(jù)分析、結果解讀、Sanger驗證、報告發(fā)放Sanger測序驗證?????標本與文庫制備區(qū)：DNA提取與檢測、目的片段PCR反應準備擴增一區(qū)：目的片段擴增與純化、測序PCR前準備電泳區(qū)：電泳擴增二區(qū)：測序PCR擴增與純化測序儀上機、結果分析與解讀、報告發(fā)放高通量測序實驗室設計注意事項?

電泳區(qū)：DNA提取、DNA純化后大小檢定等步驟需用電泳，單獨成區(qū)，但不同的檢測項目可共用?

測序區(qū)：應根據(jù)使用儀器要求設定溫、濕度（一般為恒溫恒濕實驗室，2小時內溫度波動不超過2℃）?

分區(qū)設置可根據(jù)自動化儀器設備做適當區(qū)間整合?

無創(chuàng)產(chǎn)前篩查實驗室，因血漿提取為胎兒微量DNA，為防止污染，不能與其他項目的標本制備區(qū)共用?

其他：實驗室通風、生物安全柜等要求參照普通PCR實驗室實驗室設置、設施與環(huán)境?

實驗室有足夠的空間保證：標本處置符合分析前、后樣本分區(qū)放置、儀器放置符合維修和操作要求、打印檢驗報告時交叉污染的控制?

標本接收區(qū)建議放在四個區(qū)域以外的房間?

開展基于組織的分子病理項目宜有獨立的切片制備和前處理（脫蠟、水化）區(qū)域

。脫蠟、水化應在通風設施中進行。有防止切片時造成標本污染措施實驗室設置、設施與環(huán)境?

各工作區(qū)域應有明確的標記?

進入和使用實驗室各區(qū)域應有明確的限制和措施，防止患者和其他非相關人員的隨意進出?

實驗室應根據(jù)所用儀器和檢測過程對環(huán)境溫、濕度的要求，規(guī)定實驗室溫、濕度允許范圍，有效實施監(jiān)控，并有記錄?

不同的實驗區(qū)域應有其各自的清潔用具以防止交叉污染實驗室工作要求?

進入各工作區(qū)域應按照單一方向進行?

不同工作區(qū)域內的設備、物品不得混用?

不同的工作區(qū)域宜使用不同的工作服，工作人員離開各工作區(qū)域時不得將工作服帶出?

工作結束后，必須立即對工作區(qū)進行消毒。可使用可移動紫外燈在工作完成后調至實驗臺上60～90cm內照射?

實驗室的清潔應當按試劑貯存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進行?

有消毒和清潔相關的記錄實驗室工作要求?

實驗室所有操作應符合《實驗室生物安全通用要求》?

標本處理需在生物安全柜內進行，對具有潛在傳染危險性的材料，必須在生物安全柜內開蓋?

所有經(jīng)過檢測的反應管不得在擴增區(qū)打開?

凝膠電泳、雜交、測序等應在產(chǎn)物分析區(qū)進行，應注意此區(qū)擴增產(chǎn)物的污染?

實驗室應嚴格管理實驗標本，醫(yī)療廢棄物應按《醫(yī)療廢棄物管理條例》進行管理四、設備與材料?

實驗室必須有合適、充分、質量可靠的儀器、設備、試劑、耗材、輔助品，適用于各類型、各種工作量的需求，以保證檢驗質量?

實驗室所使用的儀器、商品試劑、耗材、輔助品必須符合國家相關規(guī)定儀器：必須三證齊全試劑：必須CFDA批準（高通量測序試點單位可在限定范圍內開展LDT，藥監(jiān)認可？）儀器管理要求?

設備標識：唯一性標識、狀態(tài)標識（正常使用、故障待修、停用報廢）、校準標識（下次校準日期）?

設備檔案：設備標識；制造商名稱、型號、序列號；制造商聯(lián)系人和電話；到貨日期和投入運行日期；接收時狀態(tài)；說明書；證實可以使用的性能記錄；已執(zhí)行及計劃進行的維護；設備的損壞、故障、改動或維修?

設備檢定/校準:校準參數(shù)、校準量程、校準結果評估?

設備使用：使用SOP、使用授權、有效性確認、人員防護、使用記錄?

設備維護和保養(yǎng)：維修報告、故障修復后性能評估驗證、維護周期及記錄?

設備報廢：去污染處理、保密信息去除?

各類儀器設備均有專人保管，制定維護保養(yǎng)計劃，比對/校準程序，編制年度校準、檢定計劃，并有執(zhí)行記錄。??維護保養(yǎng)計劃應有維護參數(shù)、維護周期，如何維護等（含氯消毒液腐蝕作用應注意，75%乙醇）校準計劃中應有校準儀器、校準單位、校準周期、校準參數(shù)、校準符合要求的判斷標準?

維護、比對/校準的頻度：參照國家計量部門或制造廠商的要求進行，廠商沒有規(guī)定的則每年至少進行一次。應有正規(guī)的校準報告儀器校準?

需對加樣系統(tǒng)、溫控系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)進行校準?

需校準/檢定儀器：擴增儀、雜交儀、生物安全柜、高速冷凍離心機、恒溫金屬浴、移液器、溫度計、溫濕度計等?

有合格的校準/檢定報告（保留校準原始記錄）關注：校準參數(shù)是否齊全、校準量程是否覆蓋常用檢測量程、校準結果是否符合檢測要求校準設備舉例校準設備校準周期校準單位校準參數(shù)判斷標準溫控系統(tǒng)(溫濕度計、

一年計量院/比對溫度、濕度（檢測過程

相關標準涉及）溫度計、雜交儀)加樣系統(tǒng)（移液器）1年計量院/有資質

允許誤差、測量重復性JJG646-2006廠家（檢測過程涉及）光路部分、背景熒光、檢測系統(tǒng)（擴增儀等）1年1年廠家/計量院

溫控部分（溫度準確度、產(chǎn)品均一性、溫度升降速率）

說明書有資質的第三

高效過濾器完整性、流產(chǎn)品生物安全柜方機構入氣流流速、下降氣流流速、氣流模式說明書高速冷凍離心機1年廠家/計量院溫度、轉速相關標準校準、比對?

新購設備在使用前都應校準?

校準給出一組校準因子時，實驗室應正確更新?

內部校準應符合CNAS-CL31《內部校準要求》，人員資質、環(huán)境要求、測量不確定度?

內部比對記錄信息最少應包括：比對設備編號、用于比對設備的校準信息（校準日期、校準有效期、校準單位）、比對時間、標準設備、實測數(shù)據(jù)、比對設備實測數(shù)據(jù)、判斷標準、結論、比對人、比對日期、

科室負責人。設備出現(xiàn)故障時處理措施?

應立即停止使用，并加上明顯標識?

修復的設備如影響儀器性能，必須經(jīng)校準、檢定（驗證）或檢測滿足要求后使用1、可校準的項目實施校準2、質控品檢測結果在允許范圍內3、與其他儀器的檢測結果比較a)定性：選擇陰性和弱陽性的樣品，結果符合預期b)定量：5個樣本，覆蓋測量范圍，至少4個樣本測量結果偏移<±7.5%4、使用留樣再測結果進行判別（方法與結果判斷參照3）?

實驗室應檢查由于上述缺陷對以前檢測工作的影響，并記錄相關分析、處理意見耗材、試劑要求?

試劑和耗材有專人保管，應在有效期內使用，并按其規(guī)定的保存要求存放?

實驗室應對關鍵耗材、不同批號試劑進行驗收??外觀檢查：包裝完整性、溫度要求、有效期等性能驗證：不同批號試劑間的差異、重要耗材的抑制物（如使用不含抑制物免檢，但應有注明）a)定性檢驗試劑：選擇陰性和弱陽性的樣品，結果符合預期b)定量檢驗試劑：5個舊批號試劑檢測過的樣品，覆蓋測量區(qū)間（包括陰性、臨界值、低值、中值和高值），至少4個樣品測量結果偏倚<±7.5%，其中陰性和臨界值樣品必須符合預期）c)耗材驗收（抑制物）：參照試劑性能驗證方法和要求五、實驗室信息系統(tǒng)?

建立信息系統(tǒng)管理制度，制訂計算機（辦公用除外）和計算機網(wǎng)絡使用權限、登陸密碼、維護的規(guī)定，有計算機安全保密和病毒防范的要求，并定期備份計算機數(shù)據(jù)，保證信息安全和完整。?

包括標本接收、報告發(fā)放流程?

定期評估檢驗項目、檢驗結果輸入、輸出一致性六、分析前質量控制?

ISO/IEC15189對于分析前程序的明確定義：按照時間順序，從臨床醫(yī)生開出醫(yī)囑開始，到分析檢驗程序時終止的步驟，包括檢驗申請、患者的準備、原始樣品的采集、運送到實驗室并在實驗室進行傳輸?

這個過程大部分工作都是醫(yī)生、護士、護工等在實驗室以外完成的分析前程序的特點分析前階段所占時間比例大。分析前程序的特點分析前質量管理是最易出現(xiàn)問題、涉及人員最多、潛在因素最多、最難控制的環(huán)節(jié)發(fā)生在臨床實驗室的錯誤分析Analyticalfactorspre-analytical

factorspost-analytical

factorsintra-analytical

factors%oftotalerrors46–68.218.5–47<15MarioPlebani.

Errors

inclinicallaboratoriesorerrorsinlaboratorymedicine?Clinical

ChemicalLaboratoryMedicine.

2006,Volume44,Issue6,750–759分析前主要環(huán)節(jié)?

確?；颊邩悠返牟杉椒ㄕ_?

在采集過程中確保樣品和信息的完整和準確性?

樣品運輸和儲存過程符合規(guī)范?

患者樣品處理（例如核酸提?。┓弦?guī)范標本采集原則?

患者信息：患者資料、標本類別、檢驗目的、臨床診斷、采集部位、采集及接收時間、申請醫(yī)生。遺傳性疾病應增加性別、種族及血緣等相關信息?

采集容器1、一次性無菌拭子、EDTA抗凝管、無菌運送拭子、濾紙等2、采集前檢查有效期？3、采集前檢查包裝完整？液體轉運介質容器液體渾濁？顆粒？泄漏？標本采集原則?

采集?血液：EDTA抗凝、避免溶血DBS標本：適合用于DNA檢測，不推薦作為完整RNA檢測的標本類型。無菌采集4-5滴全血胸腹水：?????痰夜：合格標本：多于10個鱗狀上皮細胞/每低倍鏡視野尿液：避免污染脫落細胞：腫瘤組織：成人40-50mg，兒童至少25mg，轉移灶組織采樣要求同腫瘤組織；組織石蠟切片或冷凍切片要求5-6張切片，切片厚度5-10umDNA:至少需要5-40ug高質量DNA樣本，多項目組合需要100ug?標本運送?

標本運送應符合相關時間、溫度和生物安全的要求，并進行有效監(jiān)控?????靶核酸為DNA的標本：室溫下需24h內運送至實驗室靶核酸為RNA的標本：需4h內送至實驗室，時間長需加冰塊冰凍組織樣本：最好保證其在運送過程中不發(fā)生融化石蠟包埋組織：可常溫下運送DBS標本：可常溫下運送?

運送容器：專用儲存箱（防止丟失、污染、過度振蕩、容器破損、唯一性標識丟失或混淆、高溫/低溫/陽光直射導致標本變質）標本接收?

標本的可溯源性：原始樣本追溯至患者；部分樣本追溯至原始樣本?

標本接收及拒收1、唯一性標識；

2、標本類別；

3、標本容器；

4、標本外觀；5、標本量；6、防腐劑使用；

7、抗凝劑使用；

8、標本運送時間；

9、標本運送條件?

接收記錄：唯一性標識、接收日期和時間、接收者?

拒收記錄：拒收原因要明確，并有記錄?

不合格標本如何處理？??原則上拒收特殊情況（標本來源困難）可優(yōu)先檢測，但在報告單中應注明（參照CLSI-H56）標本保存?

影響血液標本中核酸量的因素主要包括：壞死或凋亡細胞釋放的DNA、RNA；血液中核酸的穩(wěn)定性?

標本的保存對于核酸擴增測定的有效性極為重要??????靶核酸為DNA的標本：2-8℃保存72h；1-2周可保存-20℃；長期保存均應凍存-70℃靶核酸為RNA的標本：應-20℃保存；長期保存均應凍存-70℃純化后的DNA，可在TE緩沖液中2-8℃保存1年

,-20℃可長期保存純化后的RNA應于TE緩沖液中-70℃保存石蠟包埋組織可在2-8℃長期保存DBS標本：室溫：不超過2周；

4℃可保存24個月分析前注意事項?

標本采集特別注意分泌物、痰液、腫瘤組織等樣品留取的注意事項

；基于組織/細胞形態(tài)學標本應由有經(jīng)驗的工作人員進行病理標本評估，腫瘤細胞所占比例應達到所用檢測方法的要求?

樣本采集量需考慮到實驗室本身的需求以及復核實驗所需量?

接收的標本應收集在原始容器中，不能接受從其他檢測分出來的標本?

標本檢測全過程包括核酸提取、擴增、產(chǎn)物分析、保存等應能溯源，分子病理檢測項目在檢測過程中應以病理號作為原始標本、取材標本（包埋盒）、蠟塊或切片的唯一性標識?

定期分析標本拒收原因，有切實可行的整改措施?

標本按相關規(guī)定保存，并進行監(jiān)控和記錄七、分析過程質量控制?

檢驗項目開展?

檢驗方法的確認與驗證?

室內質控、室間質評?

檢驗結果的可比性檢驗項目開展?

臨床需求?

臨床價值?

檢驗周期（TAT）方法性能驗證（與確認區(qū)別）驗證(varification)確認（validation)定義對象通過提供客觀證據(jù)證明特定的要求已得到滿足通過提供客觀證據(jù)證明預期的使用或應用要求已得到滿足CFDA批準試劑、檢測系統(tǒng)（IVDs）1、新開項目前應完成驗證實驗室自建檢測方法（LDTs）1、正式開展項目之前應完成確認時間2、對原有項目的儀器、試劑、方

2、儀器或關鍵試劑更換、檢測樣品類型變法更新時應驗證化、實驗室必須重新進行性能確認準確度、精密度、線性范圍，參考區(qū)間，參數(shù)準確度、精密度、線性范圍、參

分析靈敏度（檢測下限）、分析特異性考區(qū)間（抗干擾物質），其他涉及的重要指標（標本穩(wěn)定性、試劑穩(wěn)定性等）試劑盒或檢測系統(tǒng)說明書提供的參數(shù)判斷標準實驗室自行建立標準（可參考相關標準或文獻）檢驗方法學驗證?

什么情況下需驗證？?

新開項目前?

對原有項目的儀器、試劑、方法更新時?

分子檢測項目需驗證哪些參數(shù)？?

定性檢測項目：至少應包括：精密度和符合率?

定量檢測項目：至少應包括：精密度、正確度、線性范圍、檢出限方法學驗證注意事項?

熟悉驗證系統(tǒng)?

質控在控，數(shù)據(jù)才可用?

實驗方案設計：標本選擇（標本類型、標本數(shù)量、濃度、不同基因型）試驗周期、比對方法的選擇、結果統(tǒng)計和評價1、實驗室應獨立完成性能驗證試驗，充分了解驗證系統(tǒng)的檢測性能2、應優(yōu)先選擇臨床標本3、保留原始記錄驗證的最低要求?定量檢測

至少應驗證精密度、正確度、測量區(qū)間（線性）、檢出限；⒈

精密度驗證

選取2個濃度，其中一個應盡可能選擇臨床決定水平的濃度。可每天測定3次，連續(xù)5天。結果應符合廠商聲稱的指標。⒉

正確度

可采用下列方式之一a、與參考方法比對b、測定參考物質c、與公認或主流方法比對⒊

測量區(qū)間

至少采用廠商聲明測量區(qū)間內的5個濃度進行檢測。⒋

參考范圍

至少檢測20例表觀正常人。檢出限定性檢測

至少應驗證重復性和符合率?⒈

重復性

采用弱陽性和陰性樣本各一份（陽性樣本獲取有困難時可使用質控品），每天檢測3次，連續(xù)測量5天，符合率>90%。⒉

符合率

可采用下列方法之一a、標準血清盤b、臨床診斷明確的陰性和陽性樣本各10份c、與公認或主流方法比對質控要求?

凡出具臨床檢測報告的項目均應開展室內質控?

凡出具臨床檢測報告的項目均應參加室間質評室內質控?

目的

監(jiān)測和控制實驗室常規(guī)工作的重復性?

IQC結果決定了實驗室即時測定結果的可靠性和有效性?

分子檢測質控作用?

監(jiān)測核酸提取、擴增及產(chǎn)物分析的有效性—弱陽性/陽性質控品?

監(jiān)控核酸提取過程中是否發(fā)生污染、試劑是否存在污染—陰性質控品質控品來源及使用?

來源:第三方、試劑盒自帶、自制?

品種：臨床標本、人工合成?

使用:?

凍干質控品復溶時，要確保所用溶劑的質量、所加溶劑的量要準確、應輕輕搖勻，切忌劇烈振搖?

避免反復凍融?

室內質控最好監(jiān)控核酸提取、擴增、產(chǎn)物分析等標本檢測全過程質控品設置、數(shù)量?

定性檢測??每次實驗應設置1個陰性、1個弱陽性和/或陽性質控品如為基因突變、基因多態(tài)性或基因型檢測，則應包括最能反映檢測情況的突變或基因型樣品，每批檢測的質控品至少應有一種基因突變或基因型，并建議在一定周期內涵蓋所有的基因型?質控判斷：與預期結果一致為在控，否則為失控如：CT

DNA：

1個陰性+1個弱陽性和/或陽性質控品HPV基因分型：

1個陰性+1個基因型（不固定）EGFR基因突變：一份野生型（基于組織分子病理陰性質控宜能監(jiān)測包括切片在內的全過程）+1個突變型（不固定）NGS：一個野生型+1個突變型（不固定）質控品設置、數(shù)量?

定量檢測：每次實驗室應使用相應濃度的質控品和1個陰性質控品?

質控判斷：遵循質控規(guī)則（至少應選擇一個隨機誤差和一個系統(tǒng)誤差）質控品位置?

室內質控品在擴增儀中的排列順序：不宜固定位置,盡可能監(jiān)測每一個孔擴增有效性?

板上雜交和膜上斑點印跡雜交的質控：陽性和陰性質控應該在同一板或膜上與病人標本平行進行分析，這可排除不同反應中因使用不同雜交條件所致的對結果的錯誤解釋質控品（定量）均值建立?

暫定均值的建立：20d內得到20個數(shù)值，或至少在5d內，每天不少于4次重復檢測獲得20個數(shù)值。對數(shù)據(jù)進行離群值檢驗（剔除超過3s外的數(shù)據(jù)），計算出均值，作為暫定均值?

常規(guī)均值的建立：以最初20個數(shù)據(jù)和三至五個月在控數(shù)據(jù)匯集的所有數(shù)據(jù)計算的累積平均數(shù)作為質控品有效期內的常規(guī)均值，并以此作為以后室內質控圖的均值?

若使用定值質控品，均值必須在實驗室內使用本室現(xiàn)行的檢測系統(tǒng)進行確定，質控品說明書上的原有標定值只能作參考常用質控規(guī)則的符號、定義及作用符

號定義作用12S一個質控測定值超出±2s控制限一個質控測定值超出±3s控制限警告13S22SR4S隨機誤差系統(tǒng)誤差隨機誤差兩個連續(xù)的質控測定值同時超出+2s或－2s控制限x同一批測定中，兩個不同濃度質控物的測定值之間的差值超出4s控制限41S四個連續(xù)的質控測定值同時超出+1s或－1s控制限系統(tǒng)誤差系統(tǒng)誤差系統(tǒng)誤差7T7個連續(xù)的質控測定值同時呈現(xiàn)一個向上或向下的趨勢變化10X十個連續(xù)的質控測定值同時處于均值的同一側PCR質控其它要求?

必要時，被檢基因組核酸（DNA和/或RNA）濃度應符合制造商規(guī)定的要求?

實驗結果有效性判斷標準?

標準曲線平滑均勻，斜率、截距和/或相關系數(shù)、內標等參數(shù)的數(shù)值允許變化范圍均應在試劑制造商推薦的范圍內?

陰、陽室內質控檢測結果均處于在控狀態(tài)以上幾項標準均達到要求后，當日實驗有效，可以發(fā)放報告。否則，本次實驗無效。失控處理?

及時查找原因，采取糾正措施?

填寫失控原因分析報告失控原因分析?

陽性質控樣本常見的失控原因?

核酸提取中隨機誤差：如提取過程核酸丟失、有機溶劑去除不徹底、標本中擴增抑制物殘留等?

儀器問題：如擴增儀孔間溫度不均一性、孔內溫度與所示溫度不一致性等?

試劑問題：如Taq酶和/或逆轉錄酶失活、探針純度標記效率、核酸提取試劑效率等失控原因分析?

陰性質控樣本常見的失控原因?

標本核酸提取過程中發(fā)生的標本間的交叉污染：實驗室的以前擴增產(chǎn)物的污染、標本間的交叉污染、強陽性標本氣溶膠經(jīng)加樣器導致污染、強陽性標本經(jīng)操作者手導致污染、

翻蓋離心管在較高溫度溫育時蓋子崩開?

擴增產(chǎn)物污染預防措施?

避免基因擴增檢驗假陽性結果的措施????嚴格的實驗室分區(qū)使用帶“濾芯”的吸頭設立“陰性”質控（與標本同時處理）臨床“假陽性”問題：病原微生物如結核桿菌經(jīng)藥物治療后已死亡，但PCR仍可為陽性，故治療結束后至少兩周內不宜做PCR檢測?

避免基因擴增檢驗假陰性結果的措施?避免由于來自于標本的血紅蛋白、肝素、某些激素或來自標本處理中的去垢劑、有機溶劑的抑制作用的措施：純化核酸；標本重復雙份測定；稀釋標本?定期對擴增儀的溫度控制和加熱模塊中熱傳導的一致性進行檢查和校準操作注意事項?

配制反應體系時，先將組分（dNTP、引物、酶和緩沖液）混合，再分裝?

配制反應體系時，應注意移液器使用方法，所有液體都要緩慢加至管底，不要加至管壁；所有液體混勻要用振蕩器進行，不能用移液器吹打；配制完畢后低速離心數(shù)秒，避免產(chǎn)生氣泡?

分裝的試劑注意冷藏，防止酶試劑失活及有機大分子降解?

優(yōu)先選擇含UNG的試劑盒?

試劑經(jīng)充分溶解后混勻，離心后再開蓋，保持試劑均勻性?

標本處理應在生物安全柜內進行，實驗前應打開風機5-10min，待柜內空氣凈化并氣流穩(wěn)定后再進行實驗操作?

為防止標本間交叉污染，在打開離心管前宜短暫離心操作注意事項?

棄上清提取方法，離心時應注意離心管方向，吸棄上清時不要碰到沉淀部分，以免造成提取效率降低?

標本處理嚴格按照試劑說明書進行操作，應做到處理時間充分，保證標本中的DNA或RNA完全釋放?

將提取的核酸加到反應體系中后，應將純化好的剩余核酸樣本凍存，以免在擴增檢測時出現(xiàn)意外需要重新檢測。在結果確定后再將這些樣本按生物污染廢棄物進行處理?

在判斷結果時，應先對擴增的熒光信號作出定性判斷，然后再進行定量分析，避免一些非特異熒光信號對結果分析的干擾?

擴增后的擴增管不能在擴增及產(chǎn)物分析區(qū)打開處理，應用一次性手套包好遠離PCR實驗室的洗滌間消毒處理?

工作結束后，必須立即對各工作區(qū)進行清潔室間質評?

目的：監(jiān)測檢測結果的準確性?

檢測要求：室間質評樣本應與臨床標本同等對待?

評判標準：定性項目結果為：檢測結果與預期結