主要內容1課題背景介紹1.1研究目標和意義1.2技術路線2工作進度匯報2.1有機磷對泥鰍精子運動影響2.2重金屬對泥鰍精子運動影響2.3有機磷對泥鰍精子存活率影響2.4重金屬對泥鰍精子存活率影響2.5有機磷對泥鰍精子細胞SOD酶系統(tǒng)影響2.6重金屬對泥鰍精子細胞SOD酶系統(tǒng)影響2.7有機磷對泥鰍精子細胞脂質過氧化作用2.8重金屬對泥鰍精子細胞脂質過氧化作用2.9泥鰍精子在水環(huán)境檢測中應用及相關檢測指標篩選和優(yōu)化2.10階段性結果展示3出現(xiàn)問題及辦法4下階段工作計劃有機磷和重金屬對泥鰍子的細胞毒性專家講座第1頁1.1研究目標和意義

當前，生態(tài)問題日趨突出。包含有機磷農藥和重金屬在內外源性污染物大量排入水體，對水生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生重大影響。同時，各種污染物經(jīng)過食物鏈及生物富集、擴大作用，危脅著人類健康。1背景介紹水體污染富營養(yǎng)化水生物死亡疾病有機磷和重金屬對泥鰍子的細胞毒性專家講座第2頁1.1研究目標和意義大部分淡水魚營體外受精，生殖細胞直接暴露在污染物中，易受污染物傷害。精子細胞表面缺乏類似卵膜保護層，對毒物更敏感。

魚類終生生活在水中，水體一旦受到污染，魚類受到長久迫害。魚類生殖研究目標：了解銅、鐵等重金屬對泥鰍精子細胞毒性了解敵敵畏、馬拉硫磷、辛硫磷和甲拌磷等有機磷對泥鰍細胞毒性探討泥鰍精子在水環(huán)境檢測中應用研究意義：為銅、鐵離子在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應用提供理論依據(jù)。為有機磷和重金屬毒性評價補充基礎資料。為魚精子毒理學在環(huán)境檢測中應用補充基礎資料，以完善相關指標體系。1背景介紹有機磷和重金屬對泥鰍子的細胞毒性專家講座第3頁1.2技術路線1背景介紹喂養(yǎng)魚取精巢精子懸液暴露酶系統(tǒng)運動能力活性脂質過氧化運動率運動時間相對速度運動軌跡SOD活性MDA積累量重金屬有機磷農藥存活率細胞損傷檢測指標藥品處理取材細胞計數(shù)法精子運動計算機輔助分析（CASA）羥胺法TBA法檢測方法污染物生物檢測體系指標篩選和優(yōu)化精子懸液暴露有機磷和重金屬對泥鰍子的細胞毒性專家講座第4頁2.2重金屬對泥鰍精子運動影響2進度匯報Fe3+對泥鰍精子運動百分數(shù)影響/%濃度/mM0h1h2h4h對照95±2.8394±4.0894±5.4890±5.480.0193±2.6793±4.1889±4.9290±3.760.0383±6.07＊,＃83±9.35＊,＃80±11.40＊,＃71±7.48＊,＃0.0674±7.36＊,＃73±6.32＊,＃75±10.00＊,＃71±12.42＊,＃0.173±10.61＊,＃50±4.47＊,＃48±4.47＊,＃48±5.24＊,＃0.30±0＊,＃0±0＊,＃0±0＊,＃0±0＊,＃Fe3+對泥鰍精子運動時間影響/s濃度/mM0h1h2h4h對照330±25.19315±31.46305±39.87285±31.46＃0.01328±30.47295±35.07＃290±30.98＃280±30.98＃0.03249±27.19＊,＃245±39.87＊,＃240±30.98＊,＃223±29.28＊,＃0.06228±38.44＊,＃230±24.50＊,＃222±26.84＊,＃215±29.50＊,＃0.1203±26.41＊,＃160±30.99＊,＃150±18.98＊,＃155±29.50＊,＃0.30±0＊,＃0±0＊,＃0±0＊,＃0±0＊,＃精子被激活后，伴隨Fe3+濃度增加和時間延長，精子運動百分數(shù)顯著降低有機磷和重金屬對泥鰍子的細胞毒性專家講座第5頁

Fe2+對泥鰍精子運動百分數(shù)影響/%濃度/mM0h1h2h4h對照95±1.0094±4.8695±1.0090±5.48＃0.0393±1.0094±2.4493±2.7489±5.85＃0.0692±6.5292±4.0890±2.89＊,＃86±3.76＊,＃0.391±4.9286±4.43＊,＃84±4.76＊,＃65±10.00＊,＃1.566±18.98＊50±11.94＊,＃33±5.16＊,＃23±17.29＊,＃7.510±1.00＊,＃0±0.00＊,＃0±0.00＊,＃0±0.00＊,＃Fe2+對泥鰍精子運動時間影響/Sec.濃度/mM0h1h2h4h對照330±15.00325±29.50318±32.06295±20.49﹟0.03306±39.11285±22.45＊,＃280±36.33＊,＃270±18.97＊,＃0.06270±21.21＊265±35.07＊,＃240±37.75＊,＃258±27.52＊,＃0.3255±40.25＊233±34.02＊,＃238±37.18＊,＃185±30.98＊,＃1.5165±31.22＊159±23.75＊,＃88±17.54＊,＃63±25.84＊,＃7.511±1.00＊,＃0±0.00＊,＃0±0.00＊,＃0±0.00＊,＃有機磷和重金屬對泥鰍子的細胞毒性專家講座第6頁Cu2+對泥鰍精子運動影響有機磷和重金屬對泥鰍子的細胞毒性專家講座第7頁敵敵畏對泥鰍精子運動影響有機磷和重金屬對泥鰍子的細胞毒性專家講座第8頁2.1有機磷對泥鰍精子運動影響2進度匯報馬拉硫磷對泥鰍精子運動影響有機磷和重金屬對泥鰍子的細胞毒性專家講座第9頁辛硫磷對泥鰍精子運動影響有機磷和重金屬對泥鰍子的細胞毒性專家講座第10頁2.3有機磷對泥鰍精子存活率影響2進度匯報敵敵畏2h在有機磷農藥暴露中，泥鰍精子運動能力與死亡率之間關系馬拉硫磷辛硫磷甲拌磷泥鰍精子細胞生理情況又會出現(xiàn)怎樣改變？有機磷和重金屬對泥鰍子的細胞毒性專家講座第11頁2.4重金屬對泥鰍精子存活率影響2進度匯報氯化鐵2h硫酸亞鐵硫酸銅氯化銅在重金屬暴露中，泥鰍精子運動能力與死亡率之間關系泥鰍精子細胞生理情況又會出現(xiàn)怎樣改變？有機磷和重金屬對泥鰍子的細胞毒性專家講座第12頁2.5有機磷對泥鰍精子細胞SOD

酶系統(tǒng)影響2進度匯報敵敵畏目標：檢測不一樣濃度有機磷暴露泥鰍精子1h對SOD活力影響馬拉硫磷辛硫磷意義：超氧化物歧化酶（SOD）對機體氧化和抗氧化平衡起著至關主要作用。此酶能去除超氧陰離子自由基（O2-）,保護細胞免受損傷原理：經(jīng)過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基（O2-），后者氧化羥胺形成亞硝酸鹽，在顯色劑作用下呈顯紫紅色，用可見光分光光度計測其吸光度。當被測樣品中含有SOD時，則對超氧陰離子自由基有專一性抑制作用，使形成亞硝酸鹽降低，比色時測定管吸光值低于對照管吸光度值。甲拌磷機體經(jīng)過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，后者能攻擊生物膜中不飽和脂肪酸（Polyunsaturatedfallyacid,PUFA）,引發(fā)脂質過氧化作用。脂質過氧化作用不但把活性氧轉化成活性化學劑，即非自由基性脂質分解產(chǎn)物，而且經(jīng)過鏈式或鏈式支鏈反應放大活性氧作用。所以，初始一個活性氧能造成很大脂類分解產(chǎn)物形成，這些分解產(chǎn)物中，一些是無害，另一些則能引發(fā)細胞代謝及功效障礙，甚至死亡。有機磷和重金屬對泥鰍子的細胞毒性專家講座第13頁2.6重金屬對泥鰍精子細胞SOD

酶系統(tǒng)影響2進度匯報氯化鐵目標：檢測不一樣濃度重金屬暴露泥鰍精子1h對SOD活力影響硫酸銅氯化銅意義：超氧化物歧化酶（SOD）對機體氧化和抗氧化平衡起著至關主要作用。此酶能去除超氧陰離子自由基（O2-）,保護細胞免受損傷原理：經(jīng)過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基（O2-），后者氧化羥胺形成亞硝酸鹽，在顯色劑作用下呈顯紫紅色，用可見光分光光度計測其吸光度。當被測樣品中含有SOD時，則對超氧陰離子自由基有專一性抑制作用，使形成亞硝酸鹽降低，比色時測定管吸光值低于對照管吸光度值。機體經(jīng)過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，后者能攻擊生物膜中不飽和脂肪酸（Polyunsaturatedfallyacid,PUFA）,引發(fā)脂質過氧化作用。脂質過氧化作用不但把活性氧轉化成活性化學劑，即非自由基性脂質分解產(chǎn)物，而且經(jīng)過鏈式或鏈式支鏈反應放大活性氧作用。所以，初始一個活性氧能造成很大脂類分解產(chǎn)物形成，這些分解產(chǎn)物中，一些是無害，另一些則能引發(fā)細胞代謝及功效障礙，甚至死亡。有機磷和重金屬對泥鰍子的細胞毒性專家講座第14頁2.7有機磷對泥鰍精子細胞

脂質過氧化作用2進度匯報敵敵畏目標：檢測不一樣濃度有機磷暴露泥鰍精子1h正確脂質過氧化程度。馬拉硫磷辛硫磷意義：脂質過氧化作用形成脂質過氧化物，如醛基（丙二醛MDA）、酮基、羥基、羰基、氫過氧基或內過氧基等，以及新氧自由基等。測試MDA量經(jīng)常反應機體內脂質過氧化程度，間接反應出細胞損傷程度。原理：過氧化脂質降解產(chǎn)物中丙二醛可與硫代巴比妥酸（TBA）縮合，形成紅色產(chǎn)物，在532nm處有最大吸收峰。甲拌磷有機磷和重金屬對泥鰍子的細胞毒性專家講座第15頁2.8重金屬對泥鰍精子細胞

脂質過氧化作用2進度匯報氯化鐵目標：檢測不一樣濃度有機磷暴露泥鰍精子1h正確脂質過氧化程度。硫酸銅氯化銅意義：脂質過氧化作用形成脂質過氧化物，如醛基（丙二醛MDA）、酮基、羥基、羰基、氫過氧基或內過氧基等，以及新氧自由基等。測試MDA量經(jīng)常反應機體內脂質過氧化程度，間接反應出細胞損傷程度。原理：過氧化脂質降解產(chǎn)物中丙二醛可與硫代巴比妥酸（TBA）縮合，形成紅色產(chǎn)物，在532nm處有最大吸收峰。有機磷和重金屬對泥鰍子的細胞毒性專家講座第16頁2.9泥鰍精子在水環(huán)境檢測中應用和相關檢測指標篩選和優(yōu)化2進度匯報標準：可反應污染物生物毒性操作簡單、易于取得范圍：以上七個指標方法：生物統(tǒng)計分析工具：SPSS16.0軟件結果：理想指標體系有機磷和重金屬對泥鰍子的細胞毒性專家講座第17頁2.9階段性結果展示2進度匯報已接受需返修已發(fā)表：2篇

胡家會，張玉博，陳玉明，周蓉蓉.環(huán)境滲透壓影響硬骨魚精子運動開啟研究進展[J]，聊城大學學報（自然科學版），陳玉明，胡家會，盧少勇.利用泥鰍（MisgurnusAuguillicaudatus）精子快速檢測重金屬污染方法[].中國水環(huán)境污染控制與生態(tài)修復技術高級研討會，中國南昌，.11已接收：3篇陳玉明，陳杰，王曰文，胡家會*.Fe2+和Fe3+對泥鰍精子運動影響[J].生態(tài)毒理學報陳玉明，陳杰，王曰文，陳鳳梅，胡家會*.硫酸銅對雄性泥鰍生殖毒性研究[J].動物醫(yī)學進展陳玉明，陳杰，王曰文，胡家會*,陳鳳梅.Fe2+對雄性泥鰍(Misgurnusanguillicaudatus)生殖毒性研究[J].湖北農業(yè)科學

需返修：1篇陳玉明，胡家會*，陳杰，王曰文.Cu2+對泥鰍精子運動影響[J].四川動物有機磷和重金屬對泥鰍子的細胞毒性專家講座第18頁3出現(xiàn)問題及辦法問題CASA軟件測算速度與實際速度不統(tǒng)一采取重復凍融法細胞破碎效果不理想有機磷農藥不輕易買到玫瑰無須鲃核型未取得理想中期分裂相辦法

采取相對速度

重復凍融結合超聲波處理

部分內容由重金屬代替

擬不放入論文中3問題辦法有機磷和重金屬對泥鰍子的細胞毒性專家講座第19頁4下階段工作計劃4工作計劃預期結果及其可行性分析完善和豐富學位論文中相關重金屬和有機磷對泥鰍精子細胞SOD酶系統(tǒng)和脂質過氧化以及存活率方面內容。

擬畢業(yè)前投稿一級核刊1-2篇