ICS6502020

B65..

中華人民共和國(guó)林業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

LY/T2347—2014

剛竹屬DNA擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性AFLP

()

分析方法

MethodofDNAamlificationframentlentholmorhismAFLP

pggpyp()

forPhyllostachysbamboo

2014-08-21發(fā)布2014-12-01實(shí)施

國(guó)家林業(yè)局發(fā)布

LY/T2347—2014

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄為規(guī)范性附錄

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)竹藤標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口

(SAC/TC263)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位國(guó)際竹藤中心北京林業(yè)大學(xué)中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院亞熱帶林業(yè)研究所

:、、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人李雪平高志民牟少華陳敏袁金玲

:、、、、。

Ⅰ

LY/T2347—2014

剛竹屬DNA擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性AFLP

()

分析方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了剛竹屬Phyllostachys竹種的提取酶切連接擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)步驟及采用的儀器

()DNA、、、

設(shè)備

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于剛竹屬竹種多態(tài)性的分析

DNA。

2試劑

21所用化學(xué)試劑如沒(méi)有特殊說(shuō)明均為分析純

.,。

22提取液細(xì)胞裂解液

.DNA:1mol/LTris-HClpH8.2、(1mol/LTris-HClpH7.5,0.25mol/LED-

氯化鈉與按混合在使用前加入亞硫酸鈉至終濃

TApH8.0,5mol/L,2%CTAB)5%SLS5∶5∶2,

度為

0.02mol/L。

23三氯甲烷異戊醇

.∶=24∶1。

24異丙醇

.。

25乙醇無(wú)水乙醇加蒸餾水定容到

.70%:70mL100mL。

26氯化鈉稱取氯化鈉用蒸餾水溶解后定容到

.5mol/L:29.22g,100mL。

27溴化乙錠稱取溴化乙錠用蒸餾水溶解后定容到

.0.5mg/mL:5mg,10mL。

28變性緩沖液去離子甲酰胺二甲苯青溴酚

.:50mL,EDTA(0.5mol/L,pH=8.0)1mL,FF0.125g,

藍(lán)

0.125g。

29硼酸定容到

.10×TBE:Tris108.0g,55.0g,0.5mol/LEDTA(pH8.0)40mL,1000mL。

210丙烯酰胺溶液甲叉雙丙烯酰胺丙烯酰胺混合加水定容到

.40%:2.0g,38.0g100mL。

211過(guò)硫酸胺溶液過(guò)硫酸胺加水定容到

.10%:1.0g10mL。

3儀器

31儀具有功能溫度精度

.PCR(touchdown,±0.2℃)。

32移液器

.。

33低溫離心機(jī)以上

.4℃(max14000r/min)。

34水浴鍋

.。

35電泳儀可滿足測(cè)序

.(DNA)。

36紫外分光光度計(jì)

.。

37分析天平

.。

38搖床

.。

4試驗(yàn)步驟

41DNA提取

.

按照附錄的方法提取和檢測(cè)竹子基因組電泳檢測(cè)主帶完整