蛋白質(zhì)含量的測定微量凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)總含量被測的天然含氮化合物與濃硫酸共熱時分解出氨，氨與硫酸反應(yīng)生成硫酸銨。在凱氏定氮儀中加入強堿堿化消化液，使硫酸銨分解出氨。用水蒸汽蒸餾法將氨蒸入無機酸溶液中，然后再用標準酸溶液進行滴定，滴定所用無機酸的量(mol)相當于被測樣品中氨的量(mol)，根據(jù)所測得的氨量即可計算樣品的含氮量。因為蛋白質(zhì)含氮量通常在16%左右，所以將凱氏定氮法測得的含氮量乘上系數(shù)6.25，便得到該樣品的蛋白質(zhì)含量。Folin—酚試劑法(Lowry法)測定蛋白質(zhì)濃度

蛋白質(zhì)含有兩個以上的肽鍵(—CO—NH—)，因此有雙縮脲反應(yīng)，在堿性溶液中，能與Cu2+形成絡(luò)合物。Folin酚反應(yīng)是在雙縮脲反應(yīng)的基礎(chǔ)上，引進Folin試劑(磷鉬酸—磷鎢酸試劑)，蛋白質(zhì)—銅絡(luò)合物能還原磷鉬酸—磷鎢酸試劑，生成藍色物質(zhì)。在一定條件下，藍色強度與蛋白質(zhì)的量成正比例。本法的優(yōu)點是操作簡便、靈敏度高、較紫外吸收法靈敏10—20倍，較雙縮脲法靈敏100倍。其不足之處是此反應(yīng)受多種因素干擾。紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)濃度

由于蛋白質(zhì)分子中酪氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵，因此蛋白質(zhì)具有吸收紫外線的性質(zhì)，吸收高峰在280nm波長處。在此波長范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)溶液的光吸收值(OD280)與其含量呈正比關(guān)系，可用作定量測定。利用紫外吸收法測定蛋白質(zhì)含量的優(yōu)點是迅速、簡便、不消耗樣品，低濃度鹽類不干擾測定。總蛋白定量分析－BCA（Bicinchoninicacid，二辛可寧酸、二羧基二喹啉）準確靈敏：BCA試劑的蛋白質(zhì)測定范圍是20－2000μg/ml；MicroBCA試劑測定范圍是0.5-20μg/ml快速：45分鐘內(nèi)完成測定，比經(jīng)典的Lowry法快4倍而且更加方便經(jīng)濟實用：除試管外，測定可在微孔板中進行，大大節(jié)約樣品和試劑用量不受樣品中離子型和非離子型去污劑影響檢測不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)小于考馬斯亮藍

基本原理：堿性條件下，蛋白將Cu2+還原為Cu+，Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物，測定其在562nm處的吸收值，并與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。BCA蛋白質(zhì)檢測流程：

考馬斯亮藍染色法測定蛋白質(zhì)濃度

考馬斯亮藍在一定蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)和染料結(jié)合符合比爾定律，因此可以通過測定染料在595nm處光吸收的增加量得到與其結(jié)合的蛋白質(zhì)量。該法簡單、迅速、干擾物質(zhì)少、靈敏度高（比Lowry法靈敏4倍）。CoomassieDye-Based蛋白質(zhì)定量PROTEIN+Amax=595nmBLUEAcidCoomassieG-250Protein-DyeComplexOCH2CH3NHCCH3CH3NCH2SO3-CH3CH2NCH2CH2CH3SO3Na+三、操作方法

1.標準曲線制作取14支試管，分兩組按下表平行操作。試管編號0123456標準蛋白含量(g)0102030405060標準蛋白溶液(mL)00.010.020.030.040.050.06待測蛋白質(zhì)溶液(mL)蒸餾水(mL)0.10.090.080.070.060.050.04考馬斯亮藍試劑(mL)2.5mL搖勻，1h內(nèi)以0號試管為空白對照，在595nm處比色OD595nm以O(shè)D595nm為縱坐標，標準蛋白含量為橫坐標，在坐標紙上繪制標準曲線。

2.未知樣品蛋白質(zhì)濃度的測定測定方法同上，取合適的未知樣品體積，使其測定值在標準曲線的直線范圍內(nèi)，根據(jù)所測定的OD595nm值，在標準曲線上查出其相當于標準蛋白的量，從而計算出未知樣品的蛋白質(zhì)濃度(mg/mL)。四.注意事項（1）如果測定要求很嚴格，可以在試劑加入后的5-20min內(nèi)測定光吸收，因為再這段時間內(nèi)顏色最穩(wěn)定。（2）測定中，蛋白-染料復合物會有少部分吸附于比色杯壁上，但此復合物的吸附量可以忽略。測定