1、天冬酰胺酶用于急性淋巴細(xì)胞性 白血病的治療組員：傅祥 李堅(jiān) 張子謙 蘇志有天冬酰胺酶用于急性淋巴細(xì)胞性組員：傅祥 李堅(jiān) 張子謙 蘇志有一、研究背景二、臨床藥物Asparec三、總結(jié)與展望一、研究背景二、臨床藥物Asparec三、總結(jié)與展望研究背景一、急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）兒童期最常見(jiàn)的癌癥形式， 美國(guó)每年約診斷有2900名20歲以下的患者最可治愈的癌癥之一，治療兒童的緩解率超過(guò)95一種起源于B系或T系淋巴祖細(xì)胞的腫瘤性疾病研究背景一、急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）兒童期最常見(jiàn)的癌癥形二、天冬氨酸酶一類(lèi)重要的蛋白水解酶，參與機(jī)體的新陳代謝及生物調(diào)控作用活性中心由兩個(gè)催化性天冬氨酸殘基組成天冬

2、酰胺酶將L-天冬酰胺分解， 癌細(xì)胞突變無(wú)法合成天冬酰胺， 但又需要大量的氨基酸進(jìn)行代謝與增值， 從而抑制腫瘤生長(zhǎng)。研究背景二、天冬氨酸酶一類(lèi)重要的蛋白水解酶，參與機(jī)體的新陳代謝及生物1、大腸桿菌來(lái)源的天冬酰胺酶EC-ASNase及其PEG修飾產(chǎn)物PEG-EC-ASNase，先作為臨床一線(xiàn)用藥。2、天然歐文氏菌來(lái)源的天冬酰胺酶ASNase（n-crisantaspase）3、Sepctrila德國(guó)的Medac GmbH公司研發(fā)的重組天冬酰胺酶2016年1月獲EMA（歐洲藥品管理局）批準(zhǔn)上市治療對(duì)象：出生到18歲的嬰兒和兒童問(wèn)題：臨床數(shù)據(jù)表明使用這兩種藥物的患者 至少有17%會(huì)發(fā)生超敏反應(yīng)研究背景

3、三、治療藥物急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）治療的二線(xiàn)藥物，在大腸桿菌來(lái)源的酶出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)時(shí)使用1、大腸桿菌來(lái)源的天冬酰胺酶EC-ASNase及其PEG修飾臨床藥物AsparecAsparecAlize EUSA pharma和爵士合作開(kāi)發(fā)新型聚乙二醇化重組歐文氏菌L-天冬酰胺酶 （PEG-r-crisantaspase）目前正在進(jìn)行臨床三期試驗(yàn)臨床藥物AsparecAsparecAlize EUSA臨床藥物Asparec制備過(guò)程編碼枯草芽孢桿菌ENX信號(hào)肽歐文氏菌ASNase的序列接入導(dǎo)入大腸桿菌BL21菌株中得到表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的工程化菌 表達(dá)重組蛋白（r-crisantaspase）發(fā)酵至合適的

4、細(xì)胞塊后IPTG誘導(dǎo)提取純化r-crisantaspasePEG修飾PEG-r-crisantaspase臨床藥物Asparec制備過(guò)程編碼枯草芽孢桿菌ENX信號(hào)肽藥理學(xué)研究5U / Kg的PEG-r-crisantaspase相當(dāng)于250U / Kg的n-crisantaspase（ 50倍）治療效果：藥理學(xué)研究5U / Kg的PEG-r-crisantaspa免疫原性研究結(jié)論：聚乙二醇化能有效降低了天冬氨酸酶的免疫原性免疫原性研究結(jié)論：聚乙二醇化能有效降低了天冬氨酸酶的免疫原性體外細(xì)胞毒性不同敏感細(xì)胞系： PEG修飾的天冬氨酸酶表現(xiàn)出更高的活性體外細(xì)胞毒性不同敏感細(xì)胞系： PEG修飾的天冬

5、氨酸酶表現(xiàn)出更PEG-r-crisantaspase體外水解Asn和Gln實(shí)驗(yàn)Gln的水解能力：歐文氏菌來(lái)源的ASNase顯著強(qiáng)于 EC-ASNasePEG-r-crisantaspase體外水解Asn和Gln結(jié)論：Gln消耗可增強(qiáng)ASNase對(duì)癌細(xì)胞的毒性作用解釋了細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn) PEG修飾的天冬氨酸酶活性更高 結(jié)論：Gln消耗可增強(qiáng)ASNase對(duì)癌細(xì)胞的毒性作用PEG-r-crisantaspase對(duì)白血病小鼠的抗白血病作用結(jié)論： PEG-r-crisantaspase能增加分解Asn，控制白細(xì)胞的發(fā)展，提高小鼠存活時(shí)間PEG-r-crisantaspase對(duì)白血病小鼠的抗白血病總結(jié)展望ASN

6、ase是治療ALL中不可或缺的藥物1、天然歐文氏菌來(lái)源的ASNase（n-crisantaspase）2、Sepctrila2016年1月獲EMA（歐洲藥品管理局）批準(zhǔn)上市ALL治療的二線(xiàn)藥物存在問(wèn)題臨床藥物PEG-r-crisantaspase1、保留了65的原始r-crisantaspase活性1、免疫原性問(wèn)題易產(chǎn)生超敏反應(yīng)2、天冬酰胺酶ASNase的沉默失活2、通過(guò)體外體內(nèi)實(shí)驗(yàn)都證明了其良好的治療作用3、幾乎無(wú)免疫原性，不易產(chǎn)生超敏反應(yīng)總結(jié)展望ASNase是治療ALL中不可或缺的藥物1、天然歐文參考文獻(xiàn)1 Chien W W, Allas S, Rachinel N, et al. Ph

7、armacology, immunogenicity, and efficacy of a novel pegylated recombinant Erwinia chrysanthemi-derived L-asparaginaseJ. Investigational new drugs, 2014, 32(5): 795-805.2 Figueiredo L, Cole P D, Drachtman R A. Asparaginase Erwinia chrysanthemi as a component of a multi-agent chemotherapeutic regimen

8、for the treatment of patients with acute lymphoblastic leukemia who have developed hypersensitivity to E. coli-derived asparaginaseJ. Expert review of hematology, 2016, 9(3): 227-234.3 van der Sluis I M, Vrooman L M, Pieters R, et al. Consensus expert recommendations for identification and managemen

9、t of asparaginase hypersensitivity and silent inactivationJ. haematologica, 2016, 101(3): 279-285.4 Lopes A M, Oliveira-Nascimento L, Ribeiro A, et al. Therapeutic l-asparaginase: upstream, downstream and beyondJ. Critical reviews in biotechnology, 2017, 37(1): 82-99.參考文獻(xiàn)1 Chien W W, Allas S, Ra參考文獻(xiàn)

10、5 Kumar K, Kaur J, Walia S, et al. L-asparaginase: an effective agent in the treatment of acute lymphoblastic leukemiaJ. 2014.6 Andrade A F, Borges K S, Silveira V S. Update on the use of L-asparaginase in infants and adolescent patients with acute lymphoblastic leukemiaJ. Clinical Medicine Insights. Oncology, 2014, 8: 95.7 Hijiya N, van der Sluis I M. Asparaginase-associated toxicity in children with acute lymphoblas