1、關(guān)于清洗與消毒第一張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月 清洗和消毒是否徹底直接關(guān)系到細(xì)胞培養(yǎng)的成敗。掌握清洗、消毒知識，學(xué)會清洗、消毒方法是細(xì)胞培養(yǎng)工作的基本功。第二張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月一、 清洗、清洗目的：去除雜物，降低帶菌量、根據(jù)洗滌對象的不同，主要分為：器皿洗滌（包括玻璃、塑料、搪瓷、 不銹鋼器皿等）培養(yǎng)材料洗滌第三張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月1、玻璃用品的清洗 在細(xì)胞培養(yǎng)中，工作量最大的是玻璃器皿的清洗。清洗后的玻璃器皿不僅要求干凈透明、無油跡，而且不能殘留任何物質(zhì)。某些化學(xué)物質(zhì)僅百萬分之一毫克，就會對細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用。因此，玻璃器皿的清洗必須

2、嚴(yán)格按照程序進(jìn)行。 一般玻璃器皿的清洗包括： 浸泡、刷洗、浸酸和沖洗四個步驟。 （一）、器皿洗劑第四張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月 浸泡 初次使用和培養(yǎng)用后的玻璃器皿都需先用清水浸泡，以使附著物軟化或被溶掉。培養(yǎng)后的玻璃器皿多附有大量蛋白質(zhì)，用完后應(yīng)立即初步刷洗，浸泡在蒸餾水中，注意讓水完全進(jìn)入瓶皿中，不要留有氣泡。使用新的器皿應(yīng)先用自來水簡單刷洗，然后用稀鹽酸(5)浸泡過夜或煮沸30分鐘，中和其中的堿性物質(zhì)后再清洗。第五張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月 刷洗浸泡后的玻璃器皿要用軟毛刷和優(yōu)質(zhì)洗滌劑（加熱）刷洗。 浸酸 刷洗不掉的極微量雜質(zhì)經(jīng)過清洗液浸泡的強(qiáng)氧化作用可被除掉

3、。清洗液對玻璃器皿無腐蝕作用，去污十分有效，是清洗過程中關(guān)鍵環(huán)節(jié)。第六張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月酸液的配制 清洗液可根據(jù)需要，配制成不同強(qiáng)度：常用的有下面三種： 重鉻酸鉀63g，濃硫酸1000ml，蒸餾水200ml 強(qiáng)液 重鉻酸鉀120g，濃硫酸200ml，蒸餾水1000ml 次強(qiáng)液 重鉻酸鉀l00g，濃硫酸l00ml，蒸餾水1000ml 弱液 第七張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月 選用耐酸塑料桶或不銹鋼桶配制為宜。 先將重鉻酸鉀溶于水（用玻璃棒攪拌助溶，有時不能完全溶解）。 緩緩加入濃硫酸，切忌過急，否則將產(chǎn)熱而發(fā)生危險(絕不可將重鉻酸鉀倒入濃硫酸中)。 清潔液配好

4、呈棕紅色，待變綠色時表明失效。由于清潔液的腐蝕性極強(qiáng)，配制與應(yīng)用時必須小 心，并做好防護(hù)。清潔液的使用注意事項第八張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月 沖洗 玻璃器皿浸酸后必須用流水充分沖洗，每個器皿用流水灌滿、倒掉，必須重復(fù)10次以上，不留任何殘跡。最后用蒸餾水漂洗3-5次，烤干備用。 第九張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月另：根據(jù)洗滌對象的具體情況可分為以下三種：特殊洗滌微生物大量污染的洗滌常規(guī)洗滌第十張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月 常規(guī)洗滌 自來水洗去油漬、霉菌等臟物； 溫肥皂水中浸泡一定時間后用刷子刷凈；自來水沖洗干凈，至瓶壁不掛水珠為止； 蒸餾水淋洗內(nèi)外壁

5、將玻璃器皿倒置：晾干或烘干（5075） 放入除塵柜中備用第十一張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月 微生物大量污染的洗滌 微生物污染器皿加壓滅菌后再洗滌特殊洗滌（如沾有蛋白質(zhì)類物質(zhì)或其它有機(jī)物時) 經(jīng)過常規(guī)洗滌未過蒸餾水的器具，浸泡入洗液（鉻酸洗滌液是用重鉻酸鉀(K2Cr2O7)與硫酸(H2SO4)配制而成）中數(shù)分至數(shù)小時； 回收洗液，器具先用自來水洗凈，蒸餾水淋洗，烘干（75）第十二張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月2、橡膠用品的清洗 浸泡 2NaOH煮沸15-20 min 自來水沖洗 1稀鹽酸浸泡30min 蒸餾水/2-3次自來水沖洗雙蒸/1次晾干后備用第十三張，PPT共四十

6、一頁，創(chuàng)作于2022年6月3、塑料器皿的清洗 浸泡 脫脂棉清拭/沖洗 2NaOH浸泡過夜過夜 /3次 流水沖凈 自來水沖洗5HCl/30min蒸餾水沖洗晾干后備用第十四張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月 4、金屬器械的清洗 新的解剖器械應(yīng)先用紗布擦去油后，用洗滌劑煮沸刷洗，自來水沖洗，蒸餾水、雙餾水沖洗后，烤干備用。第十五張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月包 裝 包裝的目的是防止消毒滅菌后再次遭受污染，所以經(jīng)清洗烤干或晾干的器材，應(yīng)嚴(yán)格包裝后再行消毒滅菌處理。第十六張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）、試驗材料的清洗 清洗目的：來自自然界的試驗材料，包括來自土壤中的

7、幼莖、磷莖，滋生著各種微生物，尤其是細(xì)菌的芽孢和真菌的孢子，一旦與培養(yǎng)基接觸，就會很快的繁殖起來，造成培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料的污染。 清洗方法：先用自來水沖洗5分鐘，然后用中性洗滌劑清洗，注意勿損傷試驗材料。再用自來水流水沖洗半小時，用于下一步的藥劑滅菌。第十七張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月二、消毒滅菌第十八張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月（一）關(guān)于有菌和無菌的概念 有菌的范疇： 凡是暴露在空氣中的物體，至少其表面都是有菌的，如動植物的表面、超凈工作臺的臺面，未處理的工具和手等。第十九張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月 高壓高溫處理（工具、器皿、培養(yǎng)基等） 物理或化學(xué)處

8、理； 火烤后的物體； 健康的動植物不與內(nèi)外部表面接觸的組織 內(nèi)部可能是無菌的無菌的范疇：第二十張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月 消毒、滅菌的對象： 接種室 材料（外植體）： 完全殺死材料表面的微生物過程： 洗潔精酒精氯化汞等 器皿用具消毒（滅菌） 培養(yǎng)基第二十一張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）滅菌、消毒技術(shù)作用和意義 細(xì)胞培養(yǎng)中，凡用于培養(yǎng)和無菌操作的房間、器具、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)基，培養(yǎng)材料和操作者的衣物和手都應(yīng)隨時進(jìn)行滅菌，以確保不受雜菌污染，否則，由于雜菌的生長繁殖速度一般都比培養(yǎng)的組織快得多，最終將把組織全部殺死，這些污染微生物還可能排泄對動植物組織有毒的代謝廢物，

9、因此在培養(yǎng)容器內(nèi)部保持一個完全無菌的環(huán)境是絕對必須的。第二十二張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月（三）滅菌、消毒種類 化學(xué)消毒方法指使用化學(xué)藥物殺滅、清除環(huán)境中的致病性微生物及其他有害微生物，或者抑制其生長、繁殖。 物理消毒法是指利用物理因素殺滅或消除病原微生物及其他有害微生物的方法。第二十三張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月1.物理滅菌法第二十四張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十五張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十六張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十七張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十八張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于202

10、2年6月第二十九張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十一張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月 濾過除菌 此法適用于消毒大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)用液，如培養(yǎng)液、消化液、Hanks液、血清以及其他不能用高壓蒸汽消毒的液體。用孔徑0.22微米微孔濾膜可除去細(xì)菌和霉菌等。第三十二張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月 紫外線 適用于無菌室、超凈工作臺的消毒。 紫外線的波長為200-300nm，最強(qiáng)是在254 nm，6-15平方米最少一只紫外燈，高度要在2.5m以下，濕度45%60%，桿菌效果好，球菌次之，霉菌、酵母菌最差，實驗前應(yīng)不低于30分鐘

11、的照射時間。 優(yōu)點：消毒效果好，面種大，使用方便。 缺點：產(chǎn)生臭氧、氣味難聞。第三十三張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月 煮沸消毒 金屬器械和膠塞在水中煮2030分鐘，趁熱傾去水分即可使用。緊急情況時使用。 第三十四張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月2 化學(xué)消毒 化學(xué)藥品消毒滅菌法是應(yīng)用能殺死微生物的化學(xué)藥物進(jìn)行消毒滅菌的方法。實驗室地面、桌面、用具及洗手用的溶液均常用化學(xué)藥品進(jìn)行消毒殺菌。 2%煤酚皂溶液（來蘇爾） 0.25%新潔爾滅 1%升汞 35%甲醛溶液 75%酒精。第三十五張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十六張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十七張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十八張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月外植體在接種之前，須經(jīng)嚴(yán)格的滅菌，同時又要注意不損傷外植體。不同滅菌藥劑殺菌力不同，故在使用不同的藥劑時，需要考慮使用濃度和處理時間，對不同植物種類的不同外植體，處理也有不同。另外，外植體在進(jìn)入消毒劑之前，應(yīng)認(rèn)真取材及清洗，盡可能地減少其帶菌量。附加：外植體除菌注意事項：第三十九張，PPT共四十一頁，創(chuàng)作于2022年6月消毒劑 使用濃度() 消毒時間(