1、灰樹花工廠化栽培和開發(fā)研究技術總結 A 前言 B 材料與方法C 結果與討論前言灰樹花（Crifola frondosa）是經常發(fā)生于我國東北地區(qū)、高寒地帶的一種優(yōu)質食用菌，有獨特的營養(yǎng)和風味?；覙浠ㄗ訉嶓w形似盛開的蓮花，扇形菌蓋重重疊，又名舞茸、粟子蘑、蓮花菇。鮮嫩的子實體香味濃郁，味道鮮美，口感極佳，其營養(yǎng)豐富，富含灰樹花多糖、維生素、多種必需氨基酸和微量元素，經常食用可預防和治療肝臟系統(tǒng)及胃腸道疾病。同時在日本從子實體提取的灰樹花多糖用作抗癌藥品。 所以灰樹花是一種具有很高開發(fā)價值的珍稀食藥用菌。日本料理盛行此菇?；覙浠ㄒ吧繕O少，幾乎不能形成商品。1974年日本進行人工栽培獲得成功，80

2、年代研究成功了工廠化周年性栽培。我國最早于1983年由浙江慶元引種栽培，目前仍保留在依靠自然條件栽培，一年一次的手工操作家庭作坊式生產水平。由于受氣溫影響，產量不穩(wěn)定，雜菌污染，嚴重導致成品率低、品質差，無法同國際的同行業(yè)進行競爭。 目前國內尚無工廠化栽培灰樹花的先例。本項目旨在開發(fā)研究灰樹花在食用菌新品種，通過引種和DNA種性鑒定及生物育種技術，選育出適于工廠化栽培的灰樹花品種，研究制訂安全、衛(wèi)生的標準化工廠化生產工藝。通過對鮮菇保鮮技術的研究、延長鮮菇的貯藏時間，保證產品的質量。同時進行灰樹花在品種生產示新，實現(xiàn)新時期農民增收。材料與方法一、供試灰樹花品種資源 二、灰樹花品種DNA提取及R

3、APD反應三、培養(yǎng)料配方 四、栽培容器 五、灰樹花菇生育條件 六、原材料、產品的重金屬和農藥殘留 測定 供試灰樹花品種資源 供試杏鮑菇品種資源分別從日本、韓國、美國、臺灣、福建、等國家及地區(qū)收集、引進，共11個品種，編號為“灰1號”至“灰11號”。保藏培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮）200克，葡萄糖20克，瓊脂19-20克，水1000毫升，磷酸二氫鉀或磷酸氫二鉀2克?；覙浠ㄆ贩NDNA提取及RAPD反應 選擇“灰2號”、 “灰3號”、 “灰4號”、 “灰9號”、 “灰14號”菌種，編號依次為1, 2, 3, 4, 5。 菌株經PDY液體培養(yǎng)后，過濾收集各個菌株的菌絲體，采用CTAB 方法提取各菌株的DNA

4、，經瓊脂糖凝膠電泳鑒定，稀釋后進行RAPD。 DNA marker 選用上海鼎國生物技術發(fā)展中心DGL2000，共采用32個上海生工生物技術公司的RAPD隨機引物進行RAPD 擴增，其中共有21個引物有擴增條帶。以其中的18個隨機擴增引物擴增的數(shù)據(jù)統(tǒng)計片段的有無，用NT-SYS程序中的Simqual軟件算出菌株間遺傳相關性；用平均連鎖聚類分析方法(Unweighted Pair Group Method Arithmetic Clustering UPGMA)進行聚類分析，構建樹狀圖譜。培養(yǎng)料配方試驗一、木屑 32.5%; 棉籽殼 32.5%; 麩皮15%; 玉米粉10%; 泥土10%二、木屑

5、 37.5% 棉籽殼37.5%; 麩皮15%; 玉米粉10%; 保水劑適量 三、玉米芯25%; 棉籽殼25%; 木屑25%; 麩皮15 %; 玉米粉10%;保水劑適量 栽培容器試驗大袋：4132cm中袋：4124cm小袋：4817cm大瓶：1100毫升小瓶：850毫升灰樹花菇生育條件試驗培養(yǎng)條件 生育條件溫度： 22-23 C濕度： 70-75 %CO2：2500 ppm光照：無培養(yǎng)時間：3035天溫度： 22-23 C濕度： 85-90 %CO2：1500 ppm光照：300LUX左右培養(yǎng)時間：1520天原材料、產品的重金屬和農藥殘留測定 結果隨機抽取灰樹花栽培的主要原材料玉米芯、棉籽殼、米

6、糠、木屑送上海市產品質量監(jiān)督檢驗所測重金屬鉛、汞、砷及農藥殘留六六六、滴滴涕含量，同時跟蹤檢測用上述原料栽培的灰樹花產品的重金屬鉛、汞、砷及農藥殘留六六六、滴滴涕含量。 結果與分析一、灰樹花品種資源的收集、選育二、灰樹花工廠化栽培生產培養(yǎng)料配方研究三、灰樹花工廠化栽培容器研究四、灰樹花生長發(fā)育過程中所需的生活條件 五、灰樹花工廠化生產病蟲害防治技術研究 六、灰樹花產品安全衛(wèi)生質量及保鮮技術七、灰樹花品種生產示范灰樹花品種資源的收集、選育 表1：不同灰樹花品種栽培比較品種菌絲形態(tài)發(fā)菌時間(天)原基分化形成率（%）產量(克/瓶)灰2號菌絲濃白、健壯22951059灰3號菌絲濃白、健壯2293909

7、灰4號菌絲異常濃白、粗壯288581灰9號菌絲纖細、淡20800圖一：隨機引物7擴增的灰樹花不同品種的DNA指紋圖譜從左到右依次DNA marker， 菌株1, 菌株2, 菌株3, 菌株4, 菌株5分子量標記依次為2kb，1600bp，1000bp，750bp, 500bp， 250bp, 100bp 圖二：隨機引物8擴增的灰樹花不同品種的DNA指紋圖譜 從左到右依次DNA marker， 菌株5, 菌株4, 菌株3, 菌株2, 菌株1分子量標記依次為2kb，1600bp，1000bp，750bp, 500bp， 250bp, 100bp 圖三：隨機引物42擴增的灰樹花不同品種的DNA指紋圖譜

8、 從左到右依次DNA marker， 菌株1, 菌株2, 菌株3, 菌株4, 菌株5分子量標記依次為2kb，1600bp，1000bp，750bp, 500bp， 250bp, 100bp 圖四：不同灰樹花品種DNA遺傳相關性聚類樹狀圖譜灰樹花工廠化栽培生產培養(yǎng)料配方研究表2：不同培養(yǎng)料配方的灰樹花產質量配 方發(fā)菌時間(天)產量（克/瓶）生物學效率（%）配方一22130337配方二22149505配方三24133344灰樹花工廠化栽培容器研究 表3: 不同大小的聚丙烯塑袋栽培灰樹花的產量容器濕料重(Kg)含水量(%)干料重(Kg)單產袋(g)生物學效率(%)大袋2.5630.925254.82

9、7.5中袋1.5630.555294.053.0小袋0.7630.259131.250.7表4: 不同大小的聚丙烯塑瓶栽培灰樹花的產量容器毫升濕料重Kg含水量%干料重Kg單產袋Kg生物學效%11000.58630.21510749.78500.46630.1709254.1灰樹花生長發(fā)育過程中所需的生活條件 溫度：菌絲體生長：23+1； 原基形成子實體生長（開片）1617濕度：菌絲體生長：培養(yǎng)料含水量 63+2%； 空氣相對濕度 70%左右。原基形成： 空氣相對濕度 8085%；子實體生長（開片）： 空氣相對濕度 8590%CO2 濃度：菌絲體生長 3000ppm以下； 原基形成子實體生長（開

10、片） 1000ppm以下，原基形成：子實體生長（開片）：1000ppm以內。CO2濃度過高，開片不良，易造成鹿角狀畸形子實體。光照：菌絲體生長不需要光照； 菌絲體長滿容器后 50100勒克司，弱光誘導7天左右。 原基形成 300勒克司左右； 子實體生長（開片） 5001000勒克司。光照不足，光照色澤淡，產量低。 灰樹花工廠化生產病蟲害防治技術研究通過采用脈動式真空高壓蒸汽滅菌技術，徹底殺滅培養(yǎng)基質中的病原菌，大大改善了固體培養(yǎng)料滅菌的效果使菌種生產成品率大大提高。采用低溫等離子空氣滅菌技術及空氣層流凈化技術，在生產工序中主要的場所，科學合理放置5臺等離子動態(tài)空氣潔凈器，不僅能直接達到滅菌除塵

11、的目的，并能去除空氣中有害、有毒氣體和異物，在機器開啟的情況下，能夠進行正常作業(yè)，無須采用熏蒸和其他化學消毒方法。不僅保證了接種的成品率，而且保障操作人員安全衛(wèi)生。因為灰樹花的工廠化生產在國內尚無先例，我們經過反復試驗證明：在灰樹花黑色蜂窩狀原基形成之前，是感染空氣中細菌和綠霉菌污染的關鍵時間，為此我們利用灰樹花生育階段的生長優(yōu)勢并給以最適應灰樹花生長發(fā)育的條件，在灰樹花菌絲體生長階段完成之后，適時進行弱誘導，使之菌絲墊形成特色并充分扭結成黑色蜂窩狀原基后，打開瓶蓋給予充足的空氣。栽培過程中,通過調節(jié)栽培室空氣濕度控制工藝，有效地降低了10%左右的雜菌侵染率。 灰樹花產品安全衛(wèi)生質量及保鮮技術

12、表5 主要材料及產品檢驗結果材料序號檢驗項目技術要求檢驗結果單項判定棉籽殼1鉛 mg/kg/0.14/2汞 mg/kg/0.01/3砷 mg/kg/0.02/4六六六 mg/kg/0.0005/5滴滴涕 mg/kg/0.001/木屑1鉛 mg/kg/1.44/2汞 mg/kg/0.01/3砷 mg/kg/0.08/4六六六 mg/kg/0.0005/5滴滴涕 mg/kg/0.001/灰樹花1鉛 mg/kg2.00.28合格2汞 mg/kg0.20.01合格3砷 mg/kg1.00.13合格4六六六 mg/kg0.20.0005合格5滴滴涕 mg/kg0.10.001合格6甲胺磷 mg/kg不得檢出未檢出合格7敵敵畏 mg/kg/0.01/8毒死蜱 mg/kg/0.01/9溴氰菊酯 mg/kg/0.005/灰樹花品種生產示范 選擇上海郊區(qū)的南匯匯侖食用菌公司作為生產示范基地，分別于2019年和2019年進行了袋栽灰