1、第1章發(fā)酵工程第2節(jié)微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用二微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)學(xué)霸記憶素養(yǎng)積累訓(xùn)練鞏固課堂達(dá)標(biāo)新知預(yù)習(xí)雙基夯實(shí)課內(nèi)探究名師點(diǎn)睛指點(diǎn)迷津撥云見(jiàn)日新知預(yù)習(xí)雙基夯實(shí)一、選擇培養(yǎng)基1水生棲熱菌的篩選：水生棲熱菌能在_ 的高溫條件下生存，而絕大多數(shù)微生物在此條件下_。2選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，允許_的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止_微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。7080不能生存特定種類(lèi)其他種類(lèi)二、微生物的選擇培養(yǎng)1分解尿素的細(xì)菌的分離分解尿素的細(xì)菌能合成_酶，該酶能催化尿素分解產(chǎn)生_，以此作為細(xì)菌生長(zhǎng)的氮源。要將土壤稀釋液中能分解尿素的細(xì)菌分離出來(lái)，培養(yǎng)基的配方設(shè)計(jì)思路是_ _。2稀釋涂布平板法分離分解尿素的細(xì)

2、菌土壤中細(xì)菌的數(shù)量龐大，要想得到能分解尿素的細(xì)菌的純培養(yǎng)物，必須要對(duì)土樣進(jìn)行_，然后再將菌液_到制備好的_。脲NH3培養(yǎng)基中除含有細(xì)菌必需的碳源、水、無(wú)機(jī)鹽外，只含有尿素一種氮源充分稀釋涂布選擇培養(yǎng)基上操作過(guò)程如下：采集土樣將10 g土樣加入盛有90 mL_的錐形瓶中，充分_。取1 mL上清液加入盛有_mL無(wú)菌水的試管中，依次_取_ mL菌液，滴加到_表面將涂布器浸在盛有_的燒杯中將涂布器放在_上灼燒，待酒精燃盡、涂布器_后，再進(jìn)行涂布用涂布器將菌液均勻地涂布在_表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)_，使涂布均勻涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板_，放入_的恒溫箱中培養(yǎng)12 d。無(wú)菌水搖勻9等比稀釋0.1培養(yǎng)基酒

3、精火焰冷卻培養(yǎng)基培養(yǎng)皿倒置3037三、微生物的數(shù)量測(cè)定1稀釋涂布平板法(1)原理：當(dāng)樣品的_足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)單菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的_。通過(guò)_，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)為_(kāi)的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。(2)注意問(wèn)題：統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目_。這是因?yàn)開(kāi)。稀釋度一個(gè)活菌統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)30300少當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落2顯微鏡直接計(jì)數(shù)法(1)方法：利用特定的_或_，在顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)。(2)注意問(wèn)題：統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般是_和_的總和。細(xì)菌計(jì)數(shù)板血細(xì)胞計(jì)數(shù)板活菌數(shù)死菌數(shù)1選擇分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基

4、。()2用平板劃線法培養(yǎng)計(jì)數(shù)，應(yīng)選擇菌落數(shù)在10100的平板。()3統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)就是活菌的實(shí)際數(shù)目。()4統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的理論依據(jù)是一個(gè)菌落來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。()5分解尿素的細(xì)菌在分解尿素時(shí)，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的pH降低。()6在用涂布器涂布平板時(shí)，為了操作方便可完全打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋。()活學(xué)巧練思考：1要分離出分解纖維素的微生物，應(yīng)在什么樣的環(huán)境中取土樣？應(yīng)配制什么樣的培養(yǎng)基？提示：應(yīng)從富含纖維素的培養(yǎng)基中取土樣，如樹(shù)林中多年落葉形成的腐殖土。應(yīng)配制以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基。2根據(jù)選擇培養(yǎng)基的原理，如何篩選出耐酸菌？提示：可將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，再接種培

5、養(yǎng)。3為什么一般選擇菌落數(shù)為30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)？提示：若平板上菌落數(shù)過(guò)多，說(shuō)明稀釋度過(guò)低，菌體的密度大，就會(huì)出現(xiàn)更多的兩個(gè)或兩個(gè)以上的菌體形成的菌落，結(jié)果不準(zhǔn)確，且計(jì)數(shù)較困難。若平板上菌落數(shù)過(guò)少，菌落形成的偶然性大，結(jié)果也不準(zhǔn)確。4稀釋涂布平板法和顯微計(jì)數(shù)法對(duì)微生物計(jì)數(shù)產(chǎn)生的實(shí)驗(yàn)誤差如何？試分析原因。提示：稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)的值比實(shí)際值小，原因是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落；顯微計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)的結(jié)果比實(shí)際值大，原因是顯微鏡下無(wú)法區(qū)分細(xì)胞的死活，計(jì)數(shù)時(shí)包括了死細(xì)胞。學(xué)霸記憶素養(yǎng)積累1選擇培養(yǎng)基是指允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。2只

6、有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基分離能分解尿素的細(xì)菌。3為確保結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。4當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。5統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少，這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。課內(nèi)探究名師點(diǎn)睛知識(shí)點(diǎn)1選擇培養(yǎng)基的選擇作用(1)原理：根據(jù)不同微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性不同而制備培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基(2)三種方法的比較方法特點(diǎn)舉例一利用營(yíng)養(yǎng)缺陷進(jìn)行的選擇培養(yǎng)通過(guò)控制培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分，使?fàn)I養(yǎng)缺陷的微生物不能正常生

7、長(zhǎng)缺乏氮源時(shí)可以分離固氮微生物二利用某種化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行的選擇培養(yǎng)在完全培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)物質(zhì)，利用加入的化學(xué)物質(zhì)對(duì)微生物產(chǎn)生的影響，抑制某些微生物，同時(shí)選擇所需的微生物加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌三利用培養(yǎng)條件進(jìn)行的選擇培養(yǎng)改變微生物的培養(yǎng)條件將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)可以得到耐高溫的微生物能在選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的不一定是所需要的目的菌。原則上選擇培養(yǎng)基只允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，但實(shí)際上，微生物的培養(yǎng)是一個(gè)非常復(fù)雜的問(wèn)題，有些微生物可以利用其他微生物的代謝產(chǎn)物生長(zhǎng)繁殖，因此能在選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物不一定都是所需的微生物，還需進(jìn)一步的鑒定。2尿素分解菌的鑒定在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)

8、菌合成的脲酶將尿素分解成了NH3。NH3會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升高。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果pH升高，指示劑將變紅，則可初步說(shuō)明該種細(xì)菌能夠分解尿素。3鑒別培養(yǎng)基(1)特點(diǎn)：根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品。(2)用途：鑒別不同種類(lèi)的微生物(如可用伊紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌。若有，菌落呈現(xiàn)深紫色)。選擇培養(yǎng)基可以從混雜的微生物群體中分離出所需的微生物，通過(guò)不含有機(jī)物的培養(yǎng)基、缺氮培養(yǎng)基、含尿素(不含其他氮源)的培養(yǎng)基，可從土壤中分離出的微生物依次是()A硝化細(xì)菌、放線菌、根瘤菌B根瘤菌、青霉菌、固氮

9、菌C異養(yǎng)細(xì)菌、放線菌、硝化細(xì)菌D自養(yǎng)細(xì)菌、固氮菌、分解尿素的細(xì)菌典例1典例剖析D解析：不含有機(jī)物的培養(yǎng)基可以選擇自養(yǎng)微生物，缺少氮元素的培養(yǎng)基可以選擇固氮微生物，含尿素(不含其他氮源)的培養(yǎng)基可以選擇能分解尿素的微生物。1分離土壤中分解尿素的細(xì)菌，對(duì)培養(yǎng)基的要求是()變式訓(xùn)練C選項(xiàng)尿素瓊脂葡萄糖硝酸鹽ABCD注：“”表示加入，“”表示不加解析：分離土壤中分解尿素的細(xì)菌，培養(yǎng)基中要有碳源，且以尿素作為唯一的氮源，故不能添加硝酸鹽。知識(shí)點(diǎn)1微生物數(shù)量測(cè)定方法微生物數(shù)量測(cè)定的常用方法有稀釋涂布平板法、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法等。二者的比較如下表所示：微生物數(shù)量測(cè)定方法分析項(xiàng)目顯微鏡直接計(jì)數(shù)法稀釋涂布平板法(

10、間接計(jì)數(shù)法)原理利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定容積的樣品中微生物的數(shù)量當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約有多少活菌項(xiàng)目顯微鏡直接計(jì)數(shù)法稀釋涂布平板法(間接計(jì)數(shù)法)主要用具顯微鏡、細(xì)菌計(jì)數(shù)板(或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板)培養(yǎng)基計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)菌體本身培養(yǎng)基上的菌落數(shù)優(yōu)點(diǎn)計(jì)數(shù)方便、操作簡(jiǎn)單計(jì)數(shù)的是活菌缺點(diǎn)死菌、活菌都計(jì)算在內(nèi)操作較復(fù)雜，有一定誤差計(jì)算公式每毫升原液含菌數(shù)每小格平均菌體數(shù)40010 000稀釋倍數(shù)每毫升原液含菌數(shù)培養(yǎng)基上平均菌落數(shù)稀釋倍數(shù) 涂布液體積稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)的幾個(gè)注意事項(xiàng)(1)為了保

11、證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。(2)要設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，且一定要涂布至少3個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。(3)計(jì)數(shù)時(shí)機(jī)：每隔24 h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。(4)用此種方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)目往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來(lái)表示。2平板劃線法與稀釋涂布平板法的比較項(xiàng)目平板劃線法稀釋涂布平板法工具接種環(huán)涂布器分離單菌落的原理通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散

12、到培養(yǎng)基表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的細(xì)胞群體，即菌落將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落特點(diǎn)可以分離得到單菌落，且操作簡(jiǎn)單，但不宜計(jì)數(shù)可以分離得到單菌落，可以計(jì)數(shù)，但操作復(fù)雜用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106培養(yǎng)基中得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確的是()A涂布1個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)是230B涂布2個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215和260，取平均值238C涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分

13、別是21、212、256，取平均值163D涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為210、240、250，取平均值233典例2典例剖析D解析：在設(shè)計(jì)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)的實(shí)驗(yàn)時(shí)，至少要涂布3個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。A、B項(xiàng)中只涂布了1個(gè)和2個(gè)平板，所以A、B不正確。C項(xiàng)雖涂布了3個(gè)平板，但是其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另兩個(gè)相差太遠(yuǎn)，說(shuō)明在操作過(guò)程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，數(shù)據(jù)重復(fù)性差，不能簡(jiǎn)單地將3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來(lái)求平均值。D項(xiàng)涂布了3個(gè)平板，并且數(shù)據(jù)接近，可重復(fù)性強(qiáng)，D正確。2測(cè)定土壤中細(xì)菌數(shù)量一般選用104、105和106倍的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，而測(cè)定真菌的

14、數(shù)量一般選用102、103和104倍稀釋，其原因是()A細(xì)菌個(gè)體小，真菌個(gè)體大B細(xì)菌易稀釋，真菌不易稀釋C細(xì)菌在土壤中數(shù)量比真菌多D隨機(jī)的，沒(méi)有原因變式訓(xùn)練C解析：土壤中的微生物大約70%90%是細(xì)菌，真菌的數(shù)量要比細(xì)菌少。樣品的稀釋度越高，在平板上生成的菌落數(shù)目就越少。在實(shí)際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在30300之間，適于平板計(jì)數(shù)，所以細(xì)菌的稀釋倍數(shù)要高于真菌的稀釋倍數(shù)。綜上分析，C項(xiàng)正確。知識(shí)點(diǎn)1原理絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分

15、離與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)操作2實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)流程3結(jié)果分析與評(píng)價(jià)內(nèi)容現(xiàn)象結(jié)論有無(wú)雜菌污染的判斷對(duì)照的培養(yǎng)皿中無(wú)菌落生長(zhǎng)未被雜菌污染選擇培養(yǎng)基中菌落數(shù)偏高被雜菌污染菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高培養(yǎng)基中混入其他氮源選擇培養(yǎng)基的篩選作用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目大于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目選擇培養(yǎng)基具有篩選作用樣品的稀釋操作得到3個(gè)或3個(gè)以上菌落數(shù)目在30300的平板操作成功重復(fù)組的結(jié)果若選取同一種土樣，統(tǒng)計(jì)結(jié)果應(yīng)接近分離土壤中分解尿素的細(xì)菌，對(duì)培養(yǎng)基的要求是()加尿素不加尿素加瓊脂不加瓊脂加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸鹽不加硝酸鹽ABCD典例3典例剖析A解析：要分離分解尿素的細(xì)菌應(yīng)以尿素為唯一氮源，正確、 錯(cuò)誤；分離土壤中分

16、解尿素的細(xì)菌用固體培養(yǎng)基，需加入瓊脂，正確，錯(cuò)誤；培養(yǎng)基中需要加碳源即葡萄糖，正確，錯(cuò)誤；不需要氮源，故不加硝酸鹽，錯(cuò)誤，正確。故符合題意的有，A正確。3在做分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，甲同學(xué)從對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基上篩選出大約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只篩選出大約50個(gè)菌落。下列有關(guān)敘述，出現(xiàn)科學(xué)性錯(cuò)誤的是()A甲同學(xué)出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能是土樣不同，也可能是操作過(guò)程出了問(wèn)題B可以將甲同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)作為空白對(duì)照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染C讓其他同學(xué)用與甲同學(xué)一樣的土壤進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如果結(jié)果與甲同學(xué)一致，則可以證明甲同學(xué)無(wú)誤DB、C選項(xiàng)的實(shí)驗(yàn)思路都遵循了實(shí)驗(yàn)的對(duì)照原則

17、變式訓(xùn)練D解析：甲同學(xué)獲得的菌落數(shù)遠(yuǎn)大于其他同學(xué)，可能是由于所取的土樣不同，也可能是由于操作過(guò)程中被污染，A正確；被污染可能是因?yàn)榕囵B(yǎng)基滅菌不徹底，或操作過(guò)程中沒(méi)有保證無(wú)菌操作，將甲同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)作為空白對(duì)照，可以證明培養(yǎng)基是否受到污染，B正確；若題述結(jié)果是土樣不同造成的，讓其他同學(xué)用與甲同學(xué)一樣的土壤進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如果結(jié)果與甲同學(xué)一致，則可以證明甲同學(xué)操作正確，C正確；B選項(xiàng)的實(shí)驗(yàn)思路遵循了實(shí)驗(yàn)的對(duì)照原則，C選項(xiàng)的實(shí)驗(yàn)思路遵循了實(shí)驗(yàn)的重復(fù)原則，D錯(cuò)誤。指點(diǎn)迷津撥云見(jiàn)日選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基是按培養(yǎng)基用途區(qū)分的，兩者在很多方面具有不同的特點(diǎn)，很容易混淆，現(xiàn)將兩者比較如下

18、：項(xiàng)目選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基特殊成分加入允許目標(biāo)微生物生長(zhǎng)，而抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)的化學(xué)物質(zhì)加入某種指示劑或化學(xué)藥品(不影響微生物正常生長(zhǎng))機(jī)理抑制其他微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)目標(biāo)微生物的生長(zhǎng)微生物的某種代謝物與培養(yǎng)基中的特定指示劑或化學(xué)藥品發(fā)生反應(yīng)，使目標(biāo)菌落出現(xiàn)特定的特征項(xiàng)目選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基平板的菌落只出現(xiàn)目標(biāo)菌落(其他微生物被抑制)出現(xiàn)多種菌落，但目標(biāo)菌落出現(xiàn)特定的特征用途培養(yǎng)、分離出目標(biāo)微生物鑒別出目標(biāo)微生物舉例培養(yǎng)酵母菌和霉菌時(shí)，可在培養(yǎng)基中加入青霉素，抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)；利用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)可分解尿素的細(xì)菌；利用高鹽培養(yǎng)基選擇耐鹽微生物等用伊紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基鑒定飲用水或

19、乳制品中是否會(huì)有大腸桿菌(若有，則菌落呈深紫色)；在以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基上加入剛果紅可鑒別纖維素分解菌(有透明圈的菌落即為纖維素分解菌菌落)下列培養(yǎng)基配方中，能作為選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基的依次是()典例4典例剖析B原料蛋白胨10 g10 g10 g10 g乳糖5 g5 g5 g5 g蔗糖5 g5 g5 g5 gK2HPO42 g2 g2 g2 g伊紅0.4 g亞甲藍(lán)0.065 g瓊脂10 g20 gNaCl20 g蒸餾水1 000 mL1 000 mL1 000 mL1 000 mLA B C D解析：中加入了20 g NaCl，從而抑制了不耐鹽微生物生長(zhǎng)，促進(jìn)了耐鹽微生物的生長(zhǎng)，屬于選

20、擇培養(yǎng)基；中加入伊紅亞甲藍(lán)，只是使大腸桿菌菌落呈現(xiàn)深紫色，不會(huì)抑制其他微生物生長(zhǎng)，屬于鑒別培養(yǎng)基，B項(xiàng)正確。解疑答惑思考討論P(yáng)161提示：培養(yǎng)基的配方中應(yīng)含有微生物生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)要素碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽等。由于絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，分解尿素的細(xì)菌也能利用葡萄糖，因此可以用葡萄糖作為碳源，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，在培養(yǎng)基中加入尿素提供氮源，使培養(yǎng)基具有了選擇作用。該培養(yǎng)基以尿素作為唯一氮源，只允許能以尿素作為氮源的微生物生長(zhǎng)。2提示：該培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基相比較，共同點(diǎn)是都以有機(jī)碳(如葡萄糖)作為碳源，都有水和無(wú)機(jī)鹽；不同點(diǎn)是該培養(yǎng)基以尿素作為唯一氮源，使只有能以尿素作

21、為氮源的微生物生長(zhǎng)。探究實(shí)踐P18結(jié)果分析與評(píng)價(jià)1提示：對(duì)照的培養(yǎng)皿在培養(yǎng)過(guò)程中沒(méi)有菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基沒(méi)有被雜菌污染。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說(shuō)明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。2提示：如果得到了2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30300的平板，則說(shuō)明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)。3提示：如果選取的是同一種土樣，統(tǒng)計(jì)的結(jié)果應(yīng)該接近，如果相差太大，可能培養(yǎng)基污染或混入了其他含氮物質(zhì)，也可能是操作失誤。進(jìn)一步探究提示：由于細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升高。因此，可通過(guò)檢測(cè)培養(yǎng)基中pH的變化來(lái)判斷該反應(yīng)是否發(fā)生。鑒定方法可以在以尿素為唯一氮

22、源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某細(xì)菌后，若pH升高，指示劑將變紅，從而鑒定該細(xì)菌能分解尿素。到社會(huì)中去P20提示：教材中幾個(gè)實(shí)驗(yàn)都可采用稀釋涂布平板法進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，實(shí)驗(yàn)流程相似，大致都可分為以下幾個(gè)步驟：在相應(yīng)環(huán)境中取樣制備培養(yǎng)基梯度稀釋與涂布平板培養(yǎng)與觀察菌落計(jì)數(shù)。在對(duì)照實(shí)驗(yàn)設(shè)置方面，都需要設(shè)置一個(gè)未接種的普通培養(yǎng)基作為對(duì)照，以檢測(cè)培養(yǎng)基是否被雜菌污染。第4個(gè)實(shí)驗(yàn)由于是土壤中真菌的分離與計(jì)數(shù)，可能要用到選擇培養(yǎng)基，所以還需設(shè)置一個(gè)接種的普通培養(yǎng)基作對(duì)照，以檢測(cè)選擇培養(yǎng)基是否有選擇作用。練習(xí)與應(yīng)用P20一、概念檢測(cè)1(1)(2)(3)2D二、拓展應(yīng)用1提示：反芻動(dòng)物的瘤胃中含有大量的微生物，

23、其中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多為厭氧菌，接觸空氣后會(huì)死亡，因此分離其中能分解尿素的微生物除了需要準(zhǔn)備選擇培養(yǎng)基外，還應(yīng)參照厭氧菌的培養(yǎng)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。2(1)提示：首先進(jìn)行土壤取樣。在富含纖維素的潮濕土壤中用無(wú)菌小鐵鏟鏟去表層土，迅速鏟取土樣，裝入無(wú)菌信封內(nèi)密封。其次，進(jìn)行選擇培養(yǎng)。將土壤稀釋液接種到選擇培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌的濃度。然后進(jìn)行梯度稀釋，將稀釋后的樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的固體培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)的過(guò)程中，纖維素分解菌產(chǎn)生纖維素酶，將纖維素分解成纖維二糖、葡萄糖。這些產(chǎn)物不能與剛果紅結(jié)合形成紅色復(fù)合物，在培養(yǎng)基上就形成了以纖維素分解菌為中心的透明圈

24、，用接種環(huán)或接種針挑選產(chǎn)生透明圈的菌落就是纖維素分解菌的菌落。(2)提示：打算到富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌。因?yàn)楦鶕?jù)生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對(duì)提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的概率要高于普通環(huán)境。(3)提示：這一做法可行，通過(guò)人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境，使纖維素分解菌聚集。濾紙富含纖維素，將濾紙埋在土壤中，纖維素分解菌就會(huì)在濾紙上聚集，分解纖維素，可以從腐爛濾紙篩選纖維素分解菌。訓(xùn)練鞏固課堂達(dá)標(biāo)1在培養(yǎng)基中加入尿素(唯一氮源)，以分離出能分解尿素的細(xì)菌，這種加入尿素的培養(yǎng)基在功能上屬于()A選擇培養(yǎng)基B固體培養(yǎng)基C液體培養(yǎng)基D半固

25、體培養(yǎng)基解析：在培養(yǎng)基中加入某種物質(zhì)促進(jìn)所需要微生物生長(zhǎng)，抑制不需要微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基。A2從土壤中分離分解纖維素的微生物，進(jìn)行選擇培養(yǎng)的主要原因是()A殺滅不需要的微生物B除去雜菌，獲得能分解纖維素的純種菌C濃縮目標(biāo)菌種D在微生物的菌落上獲得纖維素分解菌菌種解析：在進(jìn)行纖維素分解菌的培養(yǎng)時(shí)，常常進(jìn)行選擇培養(yǎng)，進(jìn)行選擇培養(yǎng)的目的是增加纖維素分解菌的濃度，以確保能從樣品中分離得到所需的微生物，即濃縮目標(biāo)菌種。C3(2021吉林省實(shí)驗(yàn)中學(xué)高二期中)從土壤中分離獲得某種微生物的步驟是()土壤取樣梯度稀釋選擇培養(yǎng)菌懸液涂布平板挑選出單個(gè)菌落ABCD解析：從土壤中篩選分離目的微生物的一般步驟

26、是：土壤取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株，B正確。B4(不定項(xiàng))稀釋涂布平板法是微生物培養(yǎng)中的一種常用的接種方法。下列相關(guān)敘述正確的是()A操作中需要將菌液進(jìn)行一系列的濃度梯度稀釋B需將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基表面C不同濃度的菌液均可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落D操作過(guò)程中對(duì)培養(yǎng)基和涂布器等均需進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌處理ABD解析：稀釋涂布平板法包括系列稀釋和涂布平板兩個(gè)過(guò)程，涂布平板之前需要將菌液進(jìn)行一系列的濃度梯度稀釋，A正確；涂布平板時(shí)，需要將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基表面，B正確；只有稀釋度足夠大的菌液才能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落，C錯(cuò)誤；操作過(guò)程中對(duì)培養(yǎng)基和涂布器等均需進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌處理，以防止雜菌污染，D正確。5為調(diào)查某地土質(zhì)狀況，某研究小組對(duì)該地土壤中分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行了分離和純化。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)分解尿素的細(xì)菌能分解尿素，而其他微生物不能，其根本原因是前者具有_。為篩選出分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)以_作為唯一氮源。分解尿素的細(xì)菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源，但可用葡萄糖作為碳