1、實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)四 酵母細(xì)胞的固定化酵母細(xì)胞的固定化高大響高大響一、一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵髮?shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵髄了解固定化細(xì)胞的原理。了解固定化細(xì)胞的原理。l掌握用海藻酸鈉制備固定化酵母細(xì)胞的方法。掌握用海藻酸鈉制備固定化酵母細(xì)胞的方法。二、二、 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理l工業(yè)上常用包埋法固定微生物細(xì)胞。根據(jù)包埋劑的特性工業(yè)上常用包埋法固定微生物細(xì)胞。根據(jù)包埋劑的特性，海藻酸鈉在水相中加熱溶解呈溶液狀。將細(xì)胞加入混，海藻酸鈉在水相中加熱溶解呈溶液狀。將細(xì)胞加入混勻，滴入氯化鈣溶液中，由于離子的轉(zhuǎn)移作用而凝固，勻，滴入氯化鈣溶液中，由于離子的轉(zhuǎn)移作用而凝固，形成凝膠顆粒，凝膠顆粒中的微小空格將細(xì)胞固定。形成凝膠顆粒，

2、凝膠顆粒中的微小空格將細(xì)胞固定。l海藻酸鈣凝固的顆粒能反復(fù)使用，細(xì)胞在空格中可新陳海藻酸鈣凝固的顆粒能反復(fù)使用，細(xì)胞在空格中可新陳代謝代謝（固定活細(xì)胞），（固定活細(xì)胞），也可以利用細(xì)胞中的酶進(jìn)行酶促也可以利用細(xì)胞中的酶進(jìn)行酶促反應(yīng)反應(yīng)（固定死細(xì)胞）。（固定死細(xì)胞）。l本實(shí)驗(yàn)利用海藻酸鈣凝膠包埋酵母生長細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)利用海藻酸鈣凝膠包埋酵母生長細(xì)胞。 l固定化細(xì)胞材料固定化細(xì)胞材料n2.5海藻酸鈉溶液20mL，加熱助溶，冷至45備用。 n配制50mL 1.5CaCl2。 20毫升注射器，毫升注射器，150ml燒杯和燒杯和50ml燒杯各一個(gè)、三角瓶、燒杯各一個(gè)、三角瓶、玻璃棒、溫度計(jì)、鑷子玻璃棒、溫

3、度計(jì)、鑷子三、三、 實(shí)驗(yàn)材料和儀器實(shí)驗(yàn)材料和儀器l酵母細(xì)胞的活化酵母細(xì)胞的活化n取市售干酵母按1g投入到20ml 3638的溫水中活化1520分鐘，酵母細(xì)胞活化時(shí)體積會(huì)變大，活化前應(yīng)該選擇體積足夠大的容器，以避免酵母細(xì)胞的活化液溢出容器外。四、四、 實(shí)驗(yàn)方法和步驟實(shí)驗(yàn)方法和步驟l酵母細(xì)胞的固定化酵母細(xì)胞的固定化n在冷卻至4550左右海藻酸鈉溶液中，加入5mL預(yù)熱至35的酵母培養(yǎng)液，混合均勻。將混合液裝入注射器中，裝上大好針頭，以緩慢而穩(wěn)定的速度將其滴入1.5CaCl2溶液中，邊滴邊搖動(dòng)三角瓶，即可制得直徑為3mm左右的凝膠珠。n在CaCl2溶液中鈣化30min，即可使用。四、四、 實(shí)驗(yàn)方法和步

4、驟實(shí)驗(yàn)方法和步驟 l加熱使海藻酸鈉溶化是操作中最重要的一環(huán)加熱使海藻酸鈉溶化是操作中最重要的一環(huán)n一定要溶解徹底，在溶解過程中不斷攪拌，在降溫過程中不能低于45 ，否則會(huì)凝固。 五、注意事項(xiàng)五、注意事項(xiàng) l海藻酸鈉的濃度涉及到固定化細(xì)胞的質(zhì)量海藻酸鈉的濃度涉及到固定化細(xì)胞的質(zhì)量n如果海藻酸鈉濃度過高，將很難形成凝膠珠；n如果濃度過低，形成的凝膠珠所包埋的酵母細(xì)胞的數(shù)目少，影響實(shí)驗(yàn)效果。 五、注意事項(xiàng)五、注意事項(xiàng) l剛形成的凝膠珠應(yīng)在剛形成的凝膠珠應(yīng)在CaCl2溶液中浸泡一段時(shí)間，以便形溶液中浸泡一段時(shí)間，以便形 成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu) n檢驗(yàn)?zāi)z珠的質(zhì)量是否合格，可以使用下列方法。檢驗(yàn)?zāi)z珠的質(zhì)量是否合格，可以使用下列方法。n一是用鑷子夾起一個(gè)凝膠珠放在實(shí)驗(yàn)桌上用手?jǐn)D壓，如果凝膠珠不容一是用鑷子夾起一個(gè)凝膠珠放在實(shí)驗(yàn)桌上用手?jǐn)D壓，如果凝膠珠不容易破裂，沒有液體流出，就表明凝膠珠的制作成功。易破裂，沒有液體流出，就表明凝膠珠的制作成功。n二是在實(shí)驗(yàn)桌上用力摔打凝膠珠，如果凝膠珠很容易彈起，也能表明二