1、新生鼠提取液對高脂血癥大鼠血脂代謝的影響及其抗氧化作用研究            【關(guān)鍵詞】  脂肪沉積     【摘要】 目的 觀察新生大鼠提取液對實(shí)驗性高脂血癥大鼠血清總膽固醇、脂蛋白-膽固醇代謝的影響及其抗氧化作用。方法 新生鼠提取液按1.0、2.0、4.0ml/（kg?d）給大鼠連續(xù)灌胃給藥12天，測血脂和MDA含量及SOD活性，并觀察肝臟脂肪沉積情況。結(jié)果 新生鼠提取液2.0、4.0ml/kg能明顯降低實(shí)驗性高脂血癥

2、大鼠TG、TC、LDL-c及MDA含量，并明顯提高HDL-c含量及SOD活性，亦能使TC/HDL-c及LDL-c/HDL-c比值明顯降低。病理檢查可見肝臟脂肪沉積明顯減輕。結(jié)論 新生鼠提取液可能通過調(diào)節(jié)體內(nèi)血脂代謝、糾正自由基代謝紊亂發(fā)揮抗動脈硬化作用。關(guān)鍵詞 新生鼠提取液 高脂血癥大鼠 血脂代謝 脂肪沉積Effect of NRE on blood lipid metabolism and anti-oxidation in hyperlipidemia rats Chen Manqiu，Dong Junshu，Yang Jingwen，et al. Dept.of Me

3、dicine，the First Clinical College，Jilin University，Changchun130021. 【Abstract】 Objective To observe effect of NRE on total cholesterol，lipoprotein cholesterol metabolism and anti-oxidation in experimental hyperlipidemia rats. Methods Hyperlipidemia rats were respectively given NRE 1.0、2.0、4.0ml

4、/（kg?d）ig for twelve days. Blood lipid and malonydialdehyde（MDA）contents and superoxide dismutase（SOD）activitywere measured. At the same time，fat accumulation in liver was observed. Results Triglyceride（TG）、total cholesterol（TC）、low density lipoprotein cholesterol（LDL-c）and LPO contents were signifi

5、cantly decreased，and high density lipoprotein cholesterol（HDL-c）and SOD activity were significantly increased by NRE（2.0、4.0ml/kg）in experimental hyperlipidemia rats. In addition，NRE could decrease TC/HDL-c，LDL-c/HDL-c ratio and inhibit fat accumulation in liver. Conclusion NRE could have anti-arter

6、iosclerosis effect by improving cholesterol and lipoprotein-cholesterol metabolism，suppressing lipid peroxidation，increasing anti-oxidase activity. Key words NRE hyperlipidemia rats blood lipidmetabolism fat accumulation 隨著生物化學(xué)的發(fā)展，生化藥物已經(jīng)成為臨床治療上不可缺少的藥物之一。由新生大鼠提取物、山楂及荷葉等組成的降脂抗栓丸，作為治療高血脂及動脈硬化

7、的院內(nèi)制劑，在臨床上取得良好的療效。為進(jìn)一步開發(fā)利用院內(nèi)制劑，本文對降脂抗栓丸的主要成分新生大鼠提取液（Newborn rat extract，NRE）進(jìn)行了活性成分測定，并通過實(shí)驗性高脂血癥模型，觀察其對血脂代謝的影響，現(xiàn)報道如下。1 材料和方法1.1 動物及試劑 Wistar大鼠，雄性，體重208±13g，合格證號:醫(yī)動字第10-5112，由白求恩醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗動物部提供。甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-c）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-c）、丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）測定試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。1.2 NRE制備 將正

8、常分娩后1天內(nèi)的新生Wistar大鼠剪碎，按1:1（w/v）比例加生理鹽水制成勻漿，電動攪拌將細(xì)胞打碎，以3000rpm離心20min，取上清液部分，置低溫（-40）保存。1.3 NRE活性物質(zhì)測定 按照放免藥盒的測定方法，測定NRE中雌二醇（E2）、促黃體生成素（LH）、促濾泡成熟素（FSH）、垂體泌乳素（PRL）、孕酮（P）、睪酮（T）、生長激素（GH）及心鈉素（ANP）含量。1.4 高脂模型制備1 高脂飲食組在給藥前一天開始，每晚6:007:00給予高脂飼料（配方:2%膽固醇、0.2%甲基硫氧嘧啶、0.3%膽酸鈉、7.5%豬油、90%普通飼料），每只鼠平均20g，白天補(bǔ)充普通飼料，共12

9、天。1.5 方法 取Wistar大鼠72只，隨機(jī)分為6組，每組12只。正常對照組:喂普通飼料，給生理鹽水2ml/kg;模型對照組:喂高脂飼料，給生理鹽水2ml/kg;陽性對照組:喂高脂飼料，給非諾貝特200mg/kg;NRE小、中、大劑量組:喂高脂飼料，分別給NRE1.0、2.0、4.0ml/kg。各組均于上午9:0010:00灌胃給藥1次，連續(xù)12天。于給藥最后1天晚間禁食，不禁水，次日上午，將動物用3%戊巴比妥鈉30mg/kg ip麻醉，自腹主動脈采血，分離血清，按試劑盒說明書方法測定TG、TC、LDL-c、HDL-c、MDA及SOD。取1/2肝臟置10%甲醛液中固定以行脂肪染色，觀察脂肪

10、沉積情況。另1/2肝臟待測MAD及SOD。2 結(jié)果2.1 NRE活性物質(zhì)測定 以8種放免藥盒測定NRE中活性物質(zhì)含量，結(jié)果E2（ng/ml）為35.10±31.22，ANP（ng/ml）為0.37±0.35，GH（ng/ml）為6.804.11，LH（mIU/ml）為0.49±0.05，h-PRL（mU/ml）為5.79±4.41，F(xiàn)SH（mIU/ml）為0.73±1.79，T（pmol/管）為1.27±0.72，P（pmol/ml）為3.83±1.10，表明NRE中含有多種性激素類物質(zhì)及肽類物質(zhì)，以E2、GH、ANP的含量

11、較高。2.2 NRE對高脂血癥大鼠血脂代謝的影響 與正常對照組比較，高脂對照組血清TC、TG、LDL-c、TC/HDL-c及LDL-c/HDL-c均顯著升高（P<0.05或P<0.001），而HDL-c則顯著下降（P<0.01），表明高脂模型復(fù)制成功。 與高脂對照組比較，NRE2.0、4.0ml/kg組均能明顯降低血清TC、TG、LDL-c、TC/HDL-c及LDL-c/HDL-c（P<0.05P<0.01），并明顯升高血清HDL-c（P<0.01），其作用效果與陽性對照藥非諾貝特200mg/kg相當(dāng)。NRE1.0ml/kg組對上述指標(biāo)均無明顯影響，見表1。

12、表1 NRE對高脂血癥大鼠血脂代謝的影響（x±s，mmol/L）(略) 注:與正常對照組比較， P<0.05， P<0.01; P<0.001;與高脂對照組比較， P<0.05， P<0.01， P<0.001。2.3 NRE對高脂血癥大鼠血清及肝臟MAD及SOD的影響 與正常對照組比較，高脂對照組血清及肝臟MDA含量均明顯升高（P<0.01），而SOD活性明顯降低（P<0.05），表明高脂血癥大鼠體內(nèi)伴有自由基脂質(zhì)過氧化損傷及抗氧化 酶活性降低。NRE1.0、2.0、4.0ml/kg劑量組均能使高脂血癥大鼠血清及肝臟MDA含量明顯降低

13、，SOD活性明顯升高（P<0.05或P<0.01），見表2。表2 NRE對高脂血癥大鼠MDA及SOD的影響 （x±s，n=10）(略) 注:與正常對照組比較， P<0.05， P<0.01;與高脂對照組比較 P<0.05， P<0.01。2.4 NRE對高脂血癥大鼠肝組織脂肪沉積的影響 各組織肝臟標(biāo)本固定切片后行脂肪染色，觀察肝組織脂肪沉積情況。結(jié)果表明，正常對照組10只大鼠肝細(xì)胞均未見脂肪變性（0/10），高脂對照組10只大鼠肝細(xì)胞均可見脂肪變性（10/10），NRE1.0、2.0、4.0ml/kg組大鼠肝細(xì)胞脂肪變性分別為6/10、4/10、3

14、/10，且脂肪空泡明顯減少。經(jīng)2檢驗，NRE2.0、4.0ml/kg組與高脂對照組比較差異有顯著性（P<0.05或P<0.01），表明NRE可抑制高脂血癥大鼠肝臟脂肪的沉積。 3 討論動脈粥樣硬化（AS）是缺血性心、腦血管病的主要病理基礎(chǔ)。而脂質(zhì)代謝異常是AS形成的重要因素?，F(xiàn)已知血清TC、TG和LDL水平與AS形成呈正相關(guān);HDL水平與AS形成呈負(fù)相關(guān)2，3。本實(shí)驗結(jié)果表明，NRE能使高脂血癥大鼠的TC、TG、HDL-c明顯降低，并升高HDL-c含量，說明其可能通過增加高脂血癥大鼠外周組織細(xì)胞中的膽固醇向肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)過程，以減少膽固醇在外周組織細(xì)胞中的聚集和對血管內(nèi)皮細(xì)胞的廣泛性損害，防治AS形成。近年來自由基脂質(zhì)過氧化損傷與AS發(fā)病的關(guān)系，已引起人們極大關(guān)注。實(shí)驗性AS早期，MDA就明顯增加，它可損傷內(nèi)皮細(xì)胞膜，造成膜流動性減弱，減少PGI2的合成。MDA增高，使LDL發(fā)生氧化修飾，利用吞噬細(xì)胞吞噬，形成泡沫細(xì)胞，促進(jìn)白細(xì)胞和血小板在動脈內(nèi)膜的粘附和聚集，最終導(dǎo)致平滑肌細(xì)胞移植和脂質(zhì)沉著，形成AS病變4。本實(shí)驗結(jié)果表明，給高脂血癥大鼠灌胃NRE后，血清及肝組織LPO含量均明顯下降，而SOD活性明顯增高，表明其可通過抑制脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生及提高自身的抗氧化酶活性發(fā)揮抗AS作用。NRE中含有雌激素、心鈉素及其它激素類物質(zhì)，是否參與高脂血癥