ICS65.020.20DB23黑龍江省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布IDB23/T2735-2020本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T1.1-2009的編寫規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由黑龍江省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張國(guó)民、馬軍韜、鄧凌韋、趙文生、宋顯東、張麗艷、王春榮、胡亞軍、王永力、張齊鳳、高洪儒、張君、王南博、任洋。1DB23/T2735-2020水稻穗頸瘟人工接種鑒定技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水稻穗頸瘟人工接種鑒定技術(shù)的術(shù)語(yǔ)與定義、環(huán)境條件、技術(shù)流程、評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)和技術(shù)檔案。本標(biāo)準(zhǔn)適用于水稻資源、品種（系）等材料對(duì)穗頸瘟抗性的人工鑒定。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB3095環(huán)境空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB5084農(nóng)田灌溉水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)GB15618土壤環(huán)境質(zhì)量農(nóng)用地土壤污染風(fēng)險(xiǎn)管控標(biāo)準(zhǔn)（試行）GB/T15970稻瘟病測(cè)報(bào)調(diào)查規(guī)范NY/T3257-2018水稻稻瘟病抗性室內(nèi)離體葉片鑒定技術(shù)規(guī)程3術(shù)語(yǔ)與定義下列術(shù)語(yǔ)與定義適用于本文件。3.1穗頸瘟和枝梗瘟穗頸瘟是稻瘟病的一種形式，發(fā)生在穗頸、穗軸和枝梗上，初期為暗褐色小斑點(diǎn)，后逐步呈環(huán)狀或上下擴(kuò)展，因品種不同，病部分別呈現(xiàn)黃褐色、褐色或黑褐色。早期發(fā)病大多形成全白穗或局部白穗，晚期發(fā)病則谷粒不飽滿，千粒重下降。3.2谷粒瘟谷粒瘟是稻瘟病的一種形式，發(fā)生在谷殼和護(hù)穎上，早期發(fā)病，病斑呈橢圓形，較大，中央灰白色，以后可逐漸擴(kuò)展至整個(gè)谷粒，造成灰白色至暗灰色癟粒。后期發(fā)病，多形成橢圓形或近圓形斑點(diǎn)，褐色至紅褐色，嚴(yán)重時(shí)谷粒不飽滿，米粒變黑。3.3人工接種在適宜條件下，通過(guò)人工操作將接種體置于水稻植株適當(dāng)?shù)牟课徊⑹怪l(fā)病的過(guò)程。3.4接種體能夠侵染水稻植株并引起病害的病原體。3.5注射接種2DB23/T2735-2020用醫(yī)用注射器將一定量的接種體注射進(jìn)水稻植株體內(nèi)的接種方法。3.6對(duì)照品種在人工接種鑒定時(shí)以全感水稻品種為對(duì)照。3.7抗病性植物體所具有的能夠減輕或克服病原物致病作用的可遺傳性狀。3.8病情指數(shù)（3.8中只保留文字?jǐn)⑹觯Ａ舻桨俜致时硎?，公式移到后?.2中，這一點(diǎn)的修改需要與專家組長(zhǎng)李榮田老師協(xié)商，必須得到專家認(rèn)可）（3.8中只保留文字?jǐn)⑹?，保留到百分率表示，公式移到后?.2中，這一點(diǎn)的修改需要與專家組長(zhǎng)李榮田老師協(xié)商，必須得到專家認(rèn)可）一種評(píng)價(jià)植物病害發(fā)生程度的綜合性指標(biāo)，包括植物病害的發(fā)病率與嚴(yán)重度。其中，發(fā)病率是指感病樣本數(shù)占調(diào)查總樣本數(shù)的百分率，表示發(fā)病的普遍程度；嚴(yán)重度用分級(jí)法表示，即將發(fā)病的嚴(yán)重程度由輕到重劃分出若干個(gè)級(jí)別，分別用各級(jí)的代表值或百分率表示。3.9水稻品種水稻品種包括對(duì)照品種和待測(cè)水稻材料。3.10產(chǎn)量損失率一種評(píng)價(jià)植物受逆性條件影響后產(chǎn)量損失程度的指標(biāo)，包括未發(fā)病植株產(chǎn)量和發(fā)病植株產(chǎn)量。以穗為單位，產(chǎn)量損失率計(jì)算公式為：A=(B-C)/B×100%...........................（1）式中：A——產(chǎn)量損失率；B——同一小區(qū)內(nèi)未發(fā)病穗產(chǎn)量，kg；C——同一小區(qū)內(nèi)接種發(fā)病穗產(chǎn)量，kg。4環(huán)境條件鑒定時(shí)的環(huán)境條件，環(huán)境空氣質(zhì)量應(yīng)符合GB3095規(guī)定；土壤環(huán)境質(zhì)量應(yīng)符合GB15618規(guī)定；農(nóng)田灌溉用水質(zhì)量應(yīng)符合GB5084規(guī)定。5技術(shù)流程5.1鑒定圃的建立與小區(qū)設(shè)計(jì)選擇易發(fā)病環(huán)境條件的較為中間的整塊田塊，有獨(dú)立的進(jìn)水口和排水口。在鑒定圃內(nèi)種植對(duì)照和待測(cè)材料。依據(jù)水稻材料的數(shù)量，在鑒定圃內(nèi)布局若干個(gè)小區(qū)，小區(qū)內(nèi)種植待測(cè)水稻材料，小區(qū)設(shè)置為2行區(qū)，行距為30cm，株距為12cm，每行15蔸，單本插秧。根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康?，設(shè)置重復(fù)。5.2田間管理水稻種植全過(guò)程在常規(guī)管理的基礎(chǔ)上，創(chuàng)造有利于稻瘟病發(fā)病的條件。不帶藥移栽，偏重施用氮肥（一般情況下比生產(chǎn)用氮肥增加30%左右），生長(zhǎng)過(guò)程中可防蟲(chóng)、除草，但不能施用任何殺菌劑。在水稻生長(zhǎng)的中后期，若發(fā)生倒伏，需及時(shí)地搭建竹架。3DB23/T2735-20205.3接種鑒定5.3.1接種體制備將稻瘟病菌接種在燕麥片番茄汁瓊脂培養(yǎng)基上，于25℃-27℃條件下培養(yǎng)5d-7d，用無(wú)菌水輕輕洗下菌絲（菌絲團(tuán)要?。┖头稚咦樱瑢⑵鋺腋∫壕鶆蛲坑诹硪恍碌钠桨迮囵B(yǎng)基上（培養(yǎng)基要適當(dāng)硬一些每皿約400μl，超凈工作臺(tái)中吹干。置于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)約35-40h至培養(yǎng)基表面長(zhǎng)出一層稀疏的氣生菌絲體。向菌落上加少量無(wú)菌水，用棉簽輕輕擦去表面的氣生菌絲，并用水將培養(yǎng)基表面的菌絲和分生孢子清洗干凈，待培養(yǎng)基表面晾干后罩上2層紗布，用皮筋綁好，于25℃光照條件下培養(yǎng)至有大量分生孢子產(chǎn)生。從培養(yǎng)基上洗下分生孢子，離心（3000轉(zhuǎn)/min棄上清，沉淀下的分生孢子用0.025%吐溫20水溶液懸浮，血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，孢子懸浮液濃度調(diào)至2×105個(gè)孢子/mL，可用混合菌株或單個(gè) 菌株，供接種使用。5.3.2接種方法在水稻始穗期（稻穗抽出1/3左右）用醫(yī)用注射器將合格的孢子懸浮液注入水稻穗苞中下部，接種量為1mL/穗，依據(jù)試驗(yàn)所需，每個(gè)處理接種100穗以上。接種后，如中午日照強(qiáng)烈，建議應(yīng)用單層遮陰網(wǎng)進(jìn)行遮擋，以創(chuàng)造利于穗頸瘟發(fā)病的田間小氣候。5.4病情調(diào)查5.4.1調(diào)查時(shí)間水稻乳熟期進(jìn)行調(diào)查，調(diào)查2次，間隔7d-10d。5.4.2調(diào)查方法每個(gè)材料接種處理的100穗全部調(diào)查，記錄每穗水稻穗頸瘟的病級(jí)，結(jié)果記入表A.1。5.4.3穗頸瘟病情分級(jí)指標(biāo)穗頸瘟病情按以下標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)：0級(jí)：整穗無(wú)穗頸瘟、枝梗瘟和谷粒瘟；1級(jí)：僅有谷粒瘟，發(fā)病子粒比例＜2%；2級(jí)：僅有谷粒瘟，2%≤發(fā)病子粒比例＜5%；3級(jí)：有谷粒瘟和枝梗瘟，產(chǎn)量損失率＜10%；4級(jí)：有谷粒瘟和枝梗瘟，10%≤產(chǎn)量損失率＜20%；5級(jí)：有谷粒瘟和枝梗瘟，20%≤產(chǎn)量損失率＜30%；6級(jí)：有谷粒瘟和枝梗瘟，或穗頸瘟，30%≤產(chǎn)量損失率＜50%；7級(jí)：有谷粒瘟和枝梗瘟，或穗頸瘟，50%≤產(chǎn)量損失率＜60%；8級(jí)：僅有穗頸瘟，60%≤產(chǎn)量損失率＜70%；9級(jí)：僅有穗頸瘟，產(chǎn)量損失率≥70%。6評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)6.1調(diào)查數(shù)據(jù)登記與計(jì)算將水稻穗頸瘟的田間調(diào)查數(shù)據(jù)，鑒定圃中水稻農(nóng)事操作及相關(guān)情況進(jìn)行電子數(shù)據(jù)登記。計(jì)算每個(gè)水稻材料年度間的最高穗頸瘟病情指數(shù)，登記到表A.2中。4DB23/T2735-20206.2病情指數(shù)計(jì)算公式以穗為單位，當(dāng)嚴(yán)重度用分級(jí)指標(biāo)表示時(shí)，病情指數(shù)計(jì)算公式為：R=100×Σ(Pi×Di)/(P×DM)........................（2）式中：R——病情指數(shù)；Pi——各級(jí)病穗數(shù)，個(gè)；Di——各級(jí)代表值；P——調(diào)查總穗數(shù)，個(gè)；DM——最高級(jí)代表值。6.3抗瘟性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)水稻材料的病情指數(shù)評(píng)價(jià)其抗穗頸瘟性，評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表A.3。7技術(shù)檔案建立水稻穗頸瘟人工接種鑒定技術(shù)檔案，內(nèi)容包括環(huán)境條件、技術(shù)流程、評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)及試驗(yàn)數(shù)據(jù)等。5DB23/T2735-2020附錄A資料性附錄水稻穗頸瘟田間調(diào)查A.1