綿羊冷凍胚胎Frozenembryosofsheep2018-05-30實施2018-05-30實施新疆維吾爾自治區(qū)質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布本標(biāo)準(zhǔn)參照GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》的要求制定。本標(biāo)準(zhǔn)由新疆維吾爾自治區(qū)畜牧總站提出。本標(biāo)準(zhǔn)由新疆維吾爾自治區(qū)畜牧廳歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：新疆維吾爾自治區(qū)畜牧總站、新疆畜牧科學(xué)院生物技術(shù)研究所(新疆畜牧科學(xué)院中國-澳大利亞綿羊育種研究中心)、新疆華牛天俊種畜繁育工程有限公司。本標(biāo)準(zhǔn)起草人：耿娟、汪立芹、盧全晟、吳陽升、林嘉鵬、衛(wèi)新璞、韓冰、張玲、程黎明、賈旭升、鄧強(qiáng)、史洪才、黃俊成、黎霞。工標(biāo)準(zhǔn)下載綿羊冷凍胚胎本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了綿羊冷凍胚胎的生產(chǎn)要求、抽樣、試驗方法、判定規(guī)則以及包裝、標(biāo)識、貯存和運(yùn)輸?shù)募夹g(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于綿羊的冷凍胚胎產(chǎn)品。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T2828.2-2008計數(shù)抽樣檢驗程序第2部分：按極限質(zhì)量(LQ)檢索的孤立批檢驗抽樣方案GB/T2828.11-2008計數(shù)抽樣檢驗程序第11部分：小總體聲稱質(zhì)量水平的評定程序GB/T5458液氮生物容器GB/T16306聲稱質(zhì)量水平復(fù)檢與復(fù)驗的評定程序3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。冷凍胚胎frozenembryo經(jīng)過超低溫冷凍處理的、能夠在液氮中(-196℃)長期保存的胚胎。存活率survivalrate胚胎解凍后，存活胚胎占總胚胎的百分率，見公式(A.1)。3.3復(fù)腔率blastocystrecoveryrate胚胎解凍后，經(jīng)培養(yǎng)一段時間，恢復(fù)囊胚腔的胚胎數(shù)占總囊胚數(shù)的百分率，見公式(A.2)。4生產(chǎn)要求2行鑒定見表1,將胚胎依次分為下列4個等級：胞密度大，卵裂球均勻、邊緣整齊、沒有游離細(xì)胞或很少，變性細(xì)胞比例為10%;b)B級：胚齡與胚胎發(fā)育階段符合，透明帶完整無缺陷、厚薄均勻、胞密度小，卵裂球較均勻、邊緣整齊、有少部分游離細(xì)胞，變性細(xì)胞比例20%～30%;c)C級：透明帶完整或有缺陷、輪廓不清晰，色澤過暗或過淡，細(xì)胞密度水泡，游離細(xì)胞占70%以上，細(xì)胞變性率為40%～50%;d)D級：透明帶完整或有缺陷，胚齡與胚胎發(fā)育階段不相符，未受精，發(fā)育停滯，卵裂球少而可觀察到卵裂球，卵裂球間的界線不清晰，無法確定卵裂球的數(shù)量，卵裂球逐漸緊縮，占胚桑椹胚的細(xì)胞團(tuán)繼續(xù)緊縮，完全分不清卵裂球的界線，細(xì)胞團(tuán)邊的細(xì)胞團(tuán)僅占據(jù)胚胎體積的60%～70%細(xì)胞團(tuán)體積逐漸變大，在細(xì)胞團(tuán)內(nèi)部出現(xiàn)一個微小的、發(fā)亮的、充滿法分清內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層細(xì)胞，細(xì)胞團(tuán)占據(jù)胚胎體囊胚腔增大明顯，內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和外周的滋養(yǎng)層細(xì)胞分離，細(xì)胚胎體積增至1.2倍～1.5倍，囊胚腔充分a)胚胎冷凍前后的質(zhì)量均應(yīng)達(dá)到B級(含B級)以上為合格；b)形態(tài)完整，細(xì)胞緊湊的比例不高于80%;d)冷凍胚胎解凍后，放入37℃~38.6℃二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)1h后，胚胎存活率不低于80%;e)冷凍胚胎解凍后，放入37℃~38.6℃二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)12h后，囊胚腔復(fù)腔率不低于70%。3對抽取樣本的檢驗，按照GB/T2828.2-2008中5.2的規(guī)定，當(dāng)d≤Ac,則判可接收；當(dāng)d≥Re,對抽取樣本的檢驗，按照GB/T2828.11-2008中6.10的規(guī)定，當(dāng)d<L(不合格品限定數(shù)),則抽檢樣本符合要求，判定核查通過，當(dāng)d≥L,抽取樣本應(yīng)在監(jiān)督總體(一批綿羊冷凍胚胎)中隨機(jī)抽取，按照監(jiān)督抽樣方案已知抽檢綿羊冷凍檢驗項目常規(guī)檢驗型式檢驗水平抽檢。質(zhì)量監(jiān)督檢驗可為不定期。4細(xì)管冷凍胚胎應(yīng)在管壁(或包裝袋)上印制以下內(nèi)容，并且印制標(biāo)志要清楚：貯存冷凍胚胎的低溫容器應(yīng)符合GB/T5458中的規(guī)5DB65/T4120-2018(資料性附錄)綿羊冷凍胚胎質(zhì)量檢驗方法A.1胚胎數(shù)量檢查A.1.1儀器和器材顯微鏡，細(xì)管剪刀，塑料小皿。A.1.2檢查方法取一支細(xì)管凍胚，在空氣中停留10s,在37℃~39℃的水浴中解凍15s,細(xì)管剪刀剪去兩端，把冷凍胚胎液倒入小皿中，在顯微鏡下檢出胚胎，確定胚胎數(shù)量。A.2胚胎存活率的檢查A.2.1主要儀器和器材顯微鏡、恒溫水浴箱、塑料小皿、二氧化碳培養(yǎng)箱、撿胚針、移液槍、槍頭。A.2.2培養(yǎng)液配制A.2.2.1SOFaa配制成分如下：a)6.29mg/ml氯化鈉；d)0.6μl/ml乳酸鈉；h)0.299mg/ml二水氯化鈣；j)2%必需氨基酸。培養(yǎng)液配制成分如下：b)5mg/ml牛血清白蛋白。4.2.3檢查方法在小皿上做