ICSCCS43DeterminationofzearalenoneinfoodHighthroughputautomaticpurificationofimmunomagneticbeadsHighperformanceliquidchroIDB43/TXXXX—2025前言 22規(guī)范性引用文件 23術(shù)語和定義 24原理 25試劑與材料 26儀器和設(shè)備 37分析步驟 38結(jié)果計(jì)算 錯(cuò)誤！未定義書簽。9精密度 310檢出限和定量限 4附錄A（資料性）玉米赤霉烯酮（濃度：0.50mg/L）標(biāo)準(zhǔn)品的液相色譜圖 5DB43/TXXXX—20251本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由湖南省市場(chǎng)監(jiān)督管理局提出。本文件由湖南省食品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本文件起草單位：湖南省產(chǎn)商品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院、中南林業(yè)科技大學(xué)、長沙市食品藥品檢驗(yàn)所、湖南省市場(chǎng)監(jiān)督管理局缺陷產(chǎn)品召回服務(wù)中心、長沙縣綜合檢測(cè)中心、吉林省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院本文件主要起草人：李燦、林親錄、李政、戴賽飛、陳同強(qiáng)、上官佳、向俊、周叢、吳海智、鐘菲菲、汪輝、鐘文濤、袁列江、熊鷹、康紹英、梁鋒、唐吉旺、周興旺、秦寄軍、肖泳、宋陽、白婕、李江濤、廖燕芝、徐文泱、王云昊、常曉途、黃輝、赫文龍。DB43/TXXXX—20252食品中玉米赤霉烯酮的測(cè)定免疫磁珠高通量自動(dòng)凈化高效液相色譜法本文件規(guī)定了免疫磁珠高通量自動(dòng)凈化-高效液相色譜法測(cè)定食品中玉米赤霉烤酮的原理、試劑與材料、儀器和設(shè)備、分析步驟、結(jié)果計(jì)算、精密度、檢出限和定量限等內(nèi)容。本文件適用于食品中玉米赤霉烤酮的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理試樣經(jīng)乙腈提取后,用免疫磁珠高通量自動(dòng)凈化,凈化提取液用高效液相色譜熒光檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定,外標(biāo)法定量。5試劑與材料5.1通用要求除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。5.2試劑5.2.1氯化鈉（NaCl）：分析純。5.2.2乙腈（C2H3N）：色譜純。5.3試劑配制5.3.150%乙腈溶液：取乙腈500mL，加入500mL水中，混勻。5.3.290%乙腈溶液：取乙腈900mL，加入100mL水中，混勻。5.4標(biāo)準(zhǔn)品DB43/TXXXX—20253玉米赤霉烯酮(C18H22O5，CAS號(hào)：17924-92-4)，純度>98.0%，或經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)品。5.5標(biāo)準(zhǔn)溶液配制5.5.1玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(100mg/L)：準(zhǔn)確稱取玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品0.0100g（精確到0.0001g用50%乙腈（5.3.1）溶解并定容至100mL，混勻，配制成100mg/L的玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，-18℃以下避光保存6個(gè)月。5.5.2玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(1.0mg/L)：準(zhǔn)確吸取玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液1.00mL于100mL容量瓶中，用50%乙腈（5.3.1）稀釋至刻度，混勻，配制成1.0mg/L的玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。4℃避光保存一個(gè)月。5.5.3玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：準(zhǔn)確吸取玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)中間溶液0mL、0.10mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL和5.00mL，用50%乙腈（5.3.1）定容至10mL，配制成質(zhì)量濃度分別為0mg/L、0.010mg/L、0.025mg/L、0.050mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L和0.50mg/L的玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。4℃避光保存一個(gè)月。6儀器和設(shè)備6.1高效液相色譜儀：配熒光檢測(cè)器。6.2全自動(dòng)免疫磁珠工作站（配玉米赤霉烯酮免疫磁珠試劑盒）。6.3電子天平：感量0.01g和0.0001g。6.4高速粉碎機(jī)。6.5冷凍離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥10000r/min。6.6高速渦旋。6.7具塞離心管：50mL。6.80.22μm有機(jī)濾膜。6.9玻璃纖維濾紙:直徑11cm，孔徑1.5um，無熒光特性。6.1020目標(biāo)準(zhǔn)篩：-Ф200x50-0.85/0.5GB/T6003.1-2022。7分析步驟7.1樣品制備7.1.1液體樣品將所有液體樣品在一個(gè)容器中充分混合均勻,儲(chǔ)存于樣品瓶中備用。7.1.2固體樣品(小麥、玉米、稻谷等)用高速粉碎機(jī)(6.4)將樣品粉碎至全部通過標(biāo)準(zhǔn)篩（6.10）,充分混合均勻,儲(chǔ)存于樣品瓶中備用。7.2提取7.2.1牛奶準(zhǔn)確稱取試樣10.0g（精確到0.0001g）于50ml離心管中，準(zhǔn)確加入25.0mL乙腈（5.2.2），高速渦旋提取20min。冷凍離心機(jī)10000r/min離心10min，取上清備用。7.2.2其他食品（除牛奶外）準(zhǔn)確稱取試樣10.0g（精確到0.0001g乙腈溶液（5.3.2），以高速渦旋提取20min，玻璃纖維濾紙過濾，備用。DB43/TXXXX—202547.3凈化準(zhǔn)確吸取上述溶液2.0mL注入磁珠試劑盒樣品孔中（結(jié)合液孔），混勻。將試劑盒放入到免疫磁珠自動(dòng)工作站內(nèi)。選取相應(yīng)檢測(cè)程序，儀器執(zhí)行自動(dòng)凈化處理，凈化程序大約20min完成。處理完成后，將試劑盒取出，放于專用架上。用移液器吸取洗脫液孔中洗脫液（洗脫孔中洗脫液體積為1.0mL），用0.22μm有機(jī)濾膜過濾到進(jìn)樣瓶中，注入高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)。7.4液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：a）色譜柱：C18柱(250mm×4.6mm×5μm)，或相當(dāng)者；b）流動(dòng)相：乙腈+水溶液（體積比50:50）；c）流速：1.0mL/min；d）柱溫：35℃;e）檢測(cè)波長：激發(fā)波長274nm，發(fā)射波長440nm；f）進(jìn)樣量：50μL。7.5標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制按照7.4的液相色譜參考條件，將玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液（5.5.3）分別注入高效液相色譜儀中，測(cè)定相應(yīng)的峰面積。以玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。在上述色譜條件下，玉米赤霉烯酮保留時(shí)間約為8.579min。玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖見附錄A。7.6試樣測(cè)定按照7.4的液相色譜參考條件，將試樣溶液注入高效液相色譜儀中，得到相應(yīng)的玉米赤霉烯酮的色譜峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到試樣溶液中玉米赤霉烯酮的濃度。7.7空白試驗(yàn)除不加試樣外,空白試驗(yàn)應(yīng)與試樣測(cè)定平行進(jìn)行,并采用相同的分析步驟分析。8結(jié)果計(jì)算試樣中玉米赤霉烯酮的含量按式（1）計(jì)算：式中：X———試樣中玉米赤霉烯酮的含量，單位為毫克每千克（mg/kgc———由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的試樣中玉米赤霉烯酮的濃度，單位為毫克每升（mg/L）；25———加入乙腈或90%乙腈溶液體積，單位為毫升（mL）；m———試樣質(zhì)量，單位為克（g）。計(jì)算結(jié)果需扣除空白值，計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)值。9精密度DB43/TXXX