ICS71.040.10CCSN53CITS團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)Testingmethodforimagingperformanceofmatrixassistedlaserdesorptionionizationtimeofflightmassspectrometry中國(guó)檢驗(yàn)檢測(cè)學(xué)會(huì)發(fā)布IT/CITS337—2025前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語(yǔ)和定義 4縮略語(yǔ) 5測(cè)試環(huán)境 6儀器設(shè)備 6.1移液管 6.2光學(xué)顯微鏡 6.3電熱板 6.4振蕩混合器 6.5分析天平 6.6渦旋儀 6.7瞬時(shí)離心機(jī) 7試劑或材料 7.1標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 8性能測(cè)試 8.1測(cè)試準(zhǔn)備 8.2空間分辨率 8.2.1調(diào)整激光直徑和二維移動(dòng)平臺(tái)移動(dòng)速率 8.2.2待測(cè)試空間分辨率 8.2.3信噪比測(cè)試 8.2.4空間分辨率確認(rèn) 8.3成像速率 8.3.1調(diào)整激光直徑和二維移動(dòng)平臺(tái)移動(dòng)速率 8.3.2像素測(cè)試 8.3.3成像速率確定 8.4單像素靈敏度 8.4.1調(diào)整激光直徑和二維移動(dòng)平臺(tái)移動(dòng)速率 8.4.2信噪比測(cè)試 8.4.3單像素靈敏度確定 8.5成像質(zhì)量范圍（上限） 8.5.1調(diào)整激光直徑和二維移動(dòng)平臺(tái)移動(dòng)速率 8.5.2信噪比測(cè)試 8.5.3質(zhì)量范圍上限確定 8.6定量重復(fù)性 8.7其他性能測(cè)試方法 附錄A（規(guī)范性）試劑耗材及樣品制備 A.1試劑或耗材 A.2樣品制備 附錄B（資料性）質(zhì)譜儀成像性能測(cè)試實(shí)例 T/CITS337—2025B.1空間分辨率測(cè)試 B.2成像速率測(cè)試 B.3單像素靈敏度測(cè)試 B.4成像質(zhì)量范圍（上限） B.5定量重復(fù)性 附錄C（資料性）測(cè)試結(jié)果記錄格式（示例） T/CITS337—2025本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由中國(guó)檢驗(yàn)檢測(cè)學(xué)會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：融智生物科技（青島）有限公司、北京融智優(yōu)譜生物科技有限公司、南京醫(yī)科大學(xué)、中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)、中國(guó)科學(xué)院生物物理研究所、中國(guó)科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院、江蘇省人民醫(yī)院。本文件主要起草人：周曉光、李運(yùn)濤、胡昕芳、林建涵、李巖、李芳、梁鍇、李晨、李海晶、蘇東明、張杰、張智弘、楊致一。1T/CITS337—2025基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜成像性能測(cè)試方法本文件描述了基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜的空間分辨率、成像速率、單像素靈敏度、成像質(zhì)量范圍、定量重復(fù)性等成像性能測(cè)試方法。本文件適用于基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜生產(chǎn)、檢驗(yàn)和銷售等。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改版）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法JJF1528-2015飛行時(shí)間質(zhì)譜儀校準(zhǔn)規(guī)范3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1質(zhì)譜成像massspectrometryimaging一種測(cè)量樣品化學(xué)成分空間分布的方法，質(zhì)譜離子源掃描樣品的不同空間位置，使樣品離子化并由質(zhì)譜儀離子檢測(cè)器檢測(cè)，通過(guò)軟件擬合成包含被測(cè)樣品離子質(zhì)荷比、離子強(qiáng)度和離子空間位置信息的圖像。3.2像素pixel質(zhì)譜儀離子源激光器所能實(shí)現(xiàn)的最小激光掃描范圍，以直徑為單位。3.3有效像素effectivepixel質(zhì)譜成像分析中，可以獲得有效信噪比（通常為SNR≥1.5）的最小激光掃描直徑，也可稱為空間分辨率。3.4成像速率imagingrate質(zhì)譜成像分析中，單位時(shí)間內(nèi)可獲得的最高像素?cái)?shù)。3.5單像素靈敏度singlepixelsensitivity質(zhì)譜成像分析中，單像素檢測(cè)可達(dá)到的最高靈敏度。2T/CITS337—20253.6成像質(zhì)量范圍imagingqualityrange質(zhì)譜成像分析中，單像素檢測(cè)可得到的最小和最大質(zhì)荷比。4縮略語(yǔ)下列縮略語(yǔ)適用于本文件。ACN：乙腈（Acetonitrile）BSA：牛血清白蛋白（BovineSerumAlbumin）ITO：氧化銦錫（Indium-TinOxide）MALDI-TOFMS：基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（Matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtime-of-flightmassspectrometry）SA：芥子酸（SinapicAcid）TFA：三氟乙酸（Trifluoroaceticacid）5測(cè)試環(huán)境實(shí)驗(yàn)室環(huán)境應(yīng)滿足儀器安裝要求，無(wú)強(qiáng)烈的機(jī)械振動(dòng)和電磁干擾，校準(zhǔn)時(shí)實(shí)驗(yàn)室溫度應(yīng)控制在（15~30）℃,相對(duì)濕度不大于80%。6儀器設(shè)備下列設(shè)備應(yīng)經(jīng)計(jì)量校準(zhǔn)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)優(yōu)先使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。6.1移液管A級(jí)檢定合格。6.2光學(xué)顯微鏡放大倍數(shù)不少于40倍，具有測(cè)距功能，最小量程≤1μm。6.3電熱板溫度范圍可覆蓋39℃,溫度偏差±1℃。6.4振蕩混合器可選，圓周振蕩方式。6.5分析天平精度0.0001g。6.6渦旋儀可選。6.7瞬時(shí)離心機(jī)3T/CITS337—2025可選。7試劑或材料7.1標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)BSA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)值66446g/mol；糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)值15868g/mol；細(xì)胞色素C標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)值12355g/mol。8性能測(cè)試8.1測(cè)試準(zhǔn)備性能測(cè)試應(yīng)在質(zhì)譜儀經(jīng)過(guò)開(kāi)機(jī)預(yù)熱、真空度滿足要求、儀器達(dá)到正常工作條件后進(jìn)行。測(cè)試前應(yīng)當(dāng)調(diào)節(jié)、優(yōu)化合適的質(zhì)譜條件（例如：激光能量、激光頻率等），確保質(zhì)譜儀工作狀態(tài)正常，信號(hào)靈敏度適中，檢測(cè)器未達(dá)到飽和狀態(tài)。以下性能測(cè)試采用的試劑和樣品制備方法應(yīng)符合附錄A的要求。8.2空間分辨率8.2.1調(diào)整激光直徑和二維移動(dòng)平臺(tái)移動(dòng)速率調(diào)整待測(cè)試質(zhì)譜儀的激光直徑為待測(cè)試激光直徑，二維移動(dòng)平臺(tái)移動(dòng)速率≥5mm/sec。8.2.2待測(cè)試空間分辨率按附錄A中A.2.2要求，將制備好的ITO玻片放入質(zhì)譜儀測(cè)試。進(jìn)行單路徑的激光掃描，掃描結(jié)束后，取出ITO玻片，置于顯微鏡下測(cè)量激光采集的痕跡寬度，在不同痕跡處取三處測(cè)量結(jié)果計(jì)算均值，見(jiàn)圖1。該均值為待測(cè)空間分辨率。圖1空間分辨率測(cè)量示意圖8.2.3信噪比測(cè)試保持質(zhì)譜儀條件不變，按附錄A.2.1要求，將待測(cè)試信噪比測(cè)試ITO玻片放入質(zhì)譜儀進(jìn)行測(cè)試。對(duì)BSA標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量點(diǎn)和5個(gè)測(cè)試樣本點(diǎn)進(jìn)行成像測(cè)試，選取BSA標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量點(diǎn)測(cè)試結(jié)果中m/z66447和m/z4T/CITS337—202533224對(duì)整體測(cè)試結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量校準(zhǔn)。每個(gè)測(cè)試樣本點(diǎn)選取3個(gè)m/z66447信號(hào)強(qiáng)度最高的單像素，對(duì)選取的總共15個(gè)單像素的信噪比（SNR）取均值。8.2.4空間分辨率確認(rèn)當(dāng)8.2.3中測(cè)試結(jié)果均值SNR≥5時(shí)，認(rèn)為該空間分辨率有效，空間分辨率為8.2.2測(cè)量結(jié)果。重復(fù)8.2.1~8.2.3測(cè)試，以獲取的最小空間分辨率參數(shù)作為質(zhì)譜儀最高空間分辨率。8.3成像速率8.3.1調(diào)整激光直徑和二維移動(dòng)平臺(tái)移動(dòng)速率調(diào)整待測(cè)試質(zhì)譜儀的激光直徑為最小可用激光直徑。調(diào)整二維移動(dòng)平臺(tái)移動(dòng)速率至待測(cè)試速率。8.3.2像素測(cè)試按A.2.3要求，將制備好的ITO玻片放入質(zhì)譜儀，對(duì)1個(gè)細(xì)胞色素C標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量點(diǎn)和5個(gè)測(cè)試樣本點(diǎn)進(jìn)行測(cè)試，在每個(gè)樣本點(diǎn)中心框選約500μm×500μm的尺寸進(jìn)行成像測(cè)試。選取細(xì)胞色素C標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量點(diǎn)測(cè)試結(jié)果中m/z12356、m/z6178對(duì)整體測(cè)試結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量校準(zhǔn)。根據(jù)質(zhì)譜儀采集后的結(jié)果經(jīng)軟件擬合之后獲得的圖片中的像素?cái)?shù)量除以實(shí)際采集時(shí)間計(jì)算得到采集速率（像素/秒確定5個(gè)樣本點(diǎn)的平均采集速率。以單像素譜圖含有m/z12356、m/z6178中至少一個(gè)峰（SNR≥1.5）的像素點(diǎn)作為有效像素點(diǎn)。8.3.3成像速率確定當(dāng)≥50%的像素點(diǎn)為有效像素點(diǎn)時(shí)，成像速率為該采集速率。重復(fù)8.3.1~8.3.2測(cè)試，以獲取的最大成像速率參數(shù)作為質(zhì)譜儀最高成像速率，單位為像素/秒。8.4單像素靈敏度8.4.1調(diào)整激光直徑和二維移動(dòng)平臺(tái)移動(dòng)速率設(shè)置質(zhì)譜儀條件為最高空間分辨率、最高成像速率狀態(tài)。8.4.2信噪比測(cè)試按A.2.4要求，將制備好的ITO玻片放入質(zhì)譜儀進(jìn)行測(cè)試。選取BSA標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量點(diǎn)測(cè)試結(jié)果中m/z66447和m/z33224對(duì)整體測(cè)試結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量校準(zhǔn)。根據(jù)成像結(jié)果，在測(cè)試樣本點(diǎn)的5個(gè)測(cè)試重復(fù)點(diǎn)內(nèi)，每個(gè)點(diǎn)隨機(jī)選取3個(gè)m/z66447信號(hào)強(qiáng)度最高的單像素，計(jì)算其信噪比（SNR），并對(duì)15個(gè)點(diǎn)的SNR取均值。8.4.3單像素靈敏度確定當(dāng)8.4.2中測(cè)試結(jié)果均值SNR≥5時(shí)，認(rèn)為單像素靈敏度滿足要求，單像素靈敏度的結(jié)果為測(cè)試樣本點(diǎn)中BSA的絕對(duì)量，用mol表示。重復(fù)8.4.1~8.4.2測(cè)試，其中8.4.2實(shí)驗(yàn)中，適當(dāng)改變測(cè)試樣本點(diǎn)中的BSA絕對(duì)量，以獲取的BSA最小絕對(duì)量為單像素靈敏度。8.5成像質(zhì)量范圍（上限）8.5.1調(diào)整激光直徑和二維移動(dòng)平臺(tái)移動(dòng)速率在8.4測(cè)試的基礎(chǔ)上，設(shè)置質(zhì)譜儀條件為最高空間分辨率、最高成像速率。5T/CITS337—20258.5.2信噪比測(cè)試按A.2.5要求，將制備好的ITO玻片放入質(zhì)譜儀，對(duì)BSA標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量點(diǎn)和3個(gè)測(cè)試樣本點(diǎn)進(jìn)行成像測(cè)試。選取BSA標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量點(diǎn)測(cè)試結(jié)果中m/z66447和m/z33224對(duì)整體測(cè)試結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量校準(zhǔn)。根據(jù)成像結(jié)果，在測(cè)試樣本點(diǎn)的5個(gè)測(cè)試重復(fù)點(diǎn)內(nèi)，每個(gè)點(diǎn)隨機(jī)選取3個(gè)m/z66447信號(hào)強(qiáng)度最高的單像素。對(duì)選取的總共15個(gè)像素的信噪比（SNR）取均值。8.5.3質(zhì)量范圍上限確定當(dāng)均值SNR≥5時(shí)，為達(dá)到該質(zhì)荷比范圍（上限）要求。參考附錄A中BSA測(cè)試溶液的配比方法，調(diào)整其他標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行測(cè)試，確定質(zhì)荷比范圍。8.6定量重復(fù)性按A.2.6要求，將制備好的靶板置入質(zhì)譜儀進(jìn)行測(cè)試，選取其中一個(gè)樣本點(diǎn)的平均譜圖中最高峰作為m/z15868進(jìn)行內(nèi)校準(zhǔn)后，根據(jù)每個(gè)采集區(qū)域的平均譜圖進(jìn)行m/z16030信號(hào)強(qiáng)度與m/z16030和m/z15868信號(hào)強(qiáng)度和的比值計(jì)算，計(jì)算10個(gè)樣本點(diǎn)該比值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relativestandarddeviation；RSD該記錄值為質(zhì)譜儀的定量重復(fù)性能力。8.7其他性能測(cè)試方法質(zhì)譜儀分辨力、示值誤差、漂移、重復(fù)性等相關(guān)性能按照J(rèn)JF1528-2015進(jìn)行測(cè)定。6T/CITS337—2025（規(guī)范性）試劑耗材及樣品制備本附錄規(guī)定了本文件所適用的試劑耗材以及樣品制備方法。A.1試劑或耗材除非另有規(guī)定，僅使用分析純?cè)噭?。A.1.1水：符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。A.1.2ITO玻片：適用于待測(cè)試質(zhì)譜儀點(diǎn)樣用的導(dǎo)電玻片，一般是在鈉鈣基或硅硼基基片玻璃的基礎(chǔ)上，利用磁控濺射的方法鍍一層氧化銦錫（ITO）膜加工制作成。A.1.3靶板：適用于待測(cè)試質(zhì)譜儀的點(diǎn)樣用鋼片。A.1.4SAA.1.5ACNA.1.6TFAA.2樣品制備A.2.1總則：本附錄所使用的樣品均已指定濃度、分子量和含量等。具體測(cè)試時(shí)，可根據(jù)待測(cè)試質(zhì)譜儀的實(shí)際性能進(jìn)行濃度、分子量和含量調(diào)整，以獲得該質(zhì)譜儀的極限性能。以下待測(cè)試溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。A.2.2待測(cè)試空間分辨率樣品：用0.1%TFA水溶液將BSA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制成1nmol/μLBSA溶液，使用0.1%TFA水溶液梯度稀釋至10pmol/μL作為牛血清白蛋白測(cè)試溶液；SA基質(zhì)溶液：10mg/mL，溶劑體系30%ACN-0.1%TFA(aq)。待測(cè)試信噪比樣品:將ITO玻片導(dǎo)電層向上置于平面實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。將1nmol/μL的BSA溶液與SA基質(zhì)溶液按照1:9（體積比）混合搖勻，每次取1μL混合液點(diǎn)在ITO玻片表面，自然擴(kuò)散，該樣本點(diǎn)作為BSA標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量點(diǎn)。將10pmol/μLBSA測(cè)試溶液與SA基質(zhì)溶液按照1:9（體積比）混合搖勻，各取1μL混合液點(diǎn)在ITO玻片表面，平行點(diǎn)5個(gè)樣本點(diǎn)，自然擴(kuò)散，且5個(gè)樣本點(diǎn)與BSA標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量點(diǎn)不互相交疊，作為測(cè)試樣本點(diǎn)。放置（5~10）min，自然干燥。A.2.3測(cè)試成像速率樣品：用水將細(xì)胞色素C標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制成5nmol/μL細(xì)胞色素C溶液，作為質(zhì)量校準(zhǔn)點(diǎn)；再把5nmol/μL細(xì)胞色素C溶液使用0.1%TFA水溶液梯度稀釋至100pmol/μL作為細(xì)胞色素C測(cè)試溶液；SA基質(zhì)溶液：SA過(guò)飽和溶液，溶劑體系30%ACN-0.1%TFA（aq）。將ITO玻片導(dǎo)電層向上置于電熱板上，溫度39℃,待溫度穩(wěn)定。將5nmol/μL的細(xì)胞色素C溶液與過(guò)飽和SA基質(zhì)溶液按照1:9（體積比）混合搖勻，取0.5μL混合液點(diǎn)在ITO玻片導(dǎo)電層表面，自然擴(kuò)散，在電熱板上加熱至干燥。干燥后，再覆蓋0.5μLSA基質(zhì)溶液，在電熱板上干燥，作為細(xì)胞色素C標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量點(diǎn)。將細(xì)胞色素C測(cè)試溶液與過(guò)飽和SA基質(zhì)溶液1:9（體積比）混合，各取0.5μL混合液平行點(diǎn)在ITO玻片表面，平行點(diǎn)5個(gè)樣本點(diǎn)，自然擴(kuò)散，且5個(gè)樣本點(diǎn)與細(xì)胞色素C標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量點(diǎn)不互相交疊。在電熱板上干燥。干燥后，在樣點(diǎn)上覆蓋0.5μLSA基質(zhì)溶液，在電熱板上干燥，作為測(cè)試樣本點(diǎn)。7T/CITS337—2025A.2.4測(cè)試單像素靈敏度樣品：用0.1%TFA水溶液將BSA標(biāo)品配制成1nmol/μLBSA溶液，使用0.1%TFA水溶液梯度稀釋至單像素靈敏度待評(píng)價(jià)水平BSA測(cè)試溶液；SA基質(zhì)溶液：10mg/mL，溶劑體系30%ACN-0.1%TFA(aq)。將ITO玻片導(dǎo)電層向上置于平面實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。取1nmol/μLBSA溶液與SA基質(zhì)溶液按照1:9（體積比）混合搖勻，取1μL混合液點(diǎn)在ITO玻片表面，自然擴(kuò)散，干燥，作為BSA標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量點(diǎn)。取單像素靈敏度待評(píng)價(jià)水平BSA測(cè)試溶液與SA基質(zhì)溶液按照1:9（體積比）混合搖勻，各取1μL混合液點(diǎn)在ITO玻片表面，平行點(diǎn)5個(gè)樣本點(diǎn)，自然擴(kuò)散，且5個(gè)樣本點(diǎn)、BSA標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量點(diǎn)不互相交疊，作為測(cè)試樣本點(diǎn)。取單像素靈敏度待評(píng)價(jià)水平BSA測(cè)試溶液與SA基質(zhì)溶液按照混合搖勻，取1μL混合液點(diǎn)在ITO玻片表面，平行點(diǎn)5個(gè)樣本點(diǎn)，自然擴(kuò)散，干燥，且5個(gè)樣本點(diǎn)、質(zhì)量校準(zhǔn)點(diǎn)不互相交疊，作為測(cè)試樣本點(diǎn)。放置（5~10）min，自然干燥。A.2.5測(cè)試成像質(zhì)量范圍樣品：本測(cè)試以BSA為例，可根據(jù)質(zhì)譜儀性能情況調(diào)整其他標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，限定條件為所選取標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在質(zhì)譜儀最高空間分辨率、最高成像速率和最高單像素靈敏度條件下進(jìn)行測(cè)試。將1nmol/μL的BSA溶液與SA基質(zhì)溶液按照1:9（體積比）混合，取1μL混合液點(diǎn)在ITO玻片表面，自然擴(kuò)散，作為BSA標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量點(diǎn)，將單像素靈敏度待評(píng)價(jià)水平BSA測(cè)試溶液與SA基質(zhì)溶液按照1:9（體積比）混合，各取1μL混合液點(diǎn)在ITO玻片表面，平行點(diǎn)5個(gè)樣本點(diǎn)，自然擴(kuò)散，且5個(gè)樣本點(diǎn)、BSA標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量點(diǎn)不互相交疊，作為測(cè)試樣本點(diǎn)。放置（5~10）min，自然干燥。A.2.6測(cè)試定量重復(fù)性樣品：取糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1μL用500μL水稀釋混勻，作為待測(cè)試溶液；SA基質(zhì)溶液：10mg/mL，溶劑體系30%ACN-0.1%TFA(aq)。將糖化血紅蛋白測(cè)試溶液與SA基質(zhì)溶液按照1:9（體積比）混合搖勻，各取0.3μL混合液點(diǎn)在靶板表面樣本點(diǎn)上，平行點(diǎn)不少于10個(gè)樣本點(diǎn)，自然擴(kuò)散，且樣本點(diǎn)、質(zhì)量校準(zhǔn)點(diǎn)不互相交疊，作為測(cè)試樣本點(diǎn)。放置（5~10）min，自然干燥。8T/CITS337—2025（資料性）質(zhì)譜儀成像性能測(cè)試實(shí)例本附錄依據(jù)本文件要求進(jìn)行了成像質(zhì)譜儀性能的實(shí)際測(cè)試。B.1空間分辨率測(cè)試按本文件及附錄A.2.2要求，將制備好的ITO玻片放入質(zhì)譜儀測(cè)試。儀器條件：——質(zhì)量范圍：m/z20000-80000——聚焦質(zhì)量：m/z66000——激光二維直徑：10μm——二維移動(dòng)平臺(tái)移動(dòng)速率：5mm/sec——激光頻率：5000Hz——檢測(cè)器電壓：-0.80kV——激光能量：15μJ圖B.1制作好的ITO玻片對(duì)質(zhì)量校準(zhǔn)點(diǎn)和5個(gè)測(cè)試樣本點(diǎn)進(jìn)行成像測(cè)試，選取質(zhì)量校準(zhǔn)點(diǎn)測(cè)試結(jié)果中m/z66447和m/z33224對(duì)整體測(cè)試結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量校準(zhǔn)。在每個(gè)測(cè)試樣本點(diǎn)選取3個(gè)m/z66447信號(hào)強(qiáng)度最高的單像素，對(duì)選取的總共15個(gè)像素的信噪比（SNR）取均值，當(dāng)均值SNR≥5時(shí)，為達(dá)到該空間分辨率，空間分辨率水平的取值為圖B.3測(cè)量結(jié)果。圖B.2質(zhì)譜采集信號(hào)情況（局部）9T/CITS337—2025表B.15個(gè)樣本點(diǎn)單像素靈敏度情況測(cè)試樣本點(diǎn)編號(hào)單個(gè)像素點(diǎn)信噪比（m/z66447）信噪比均值（m/z66447）123125.676.568.516.9137.776.259.017.6846.326.767.066.7156.787.618.448.24本模擬切片的信噪比符合要求。該測(cè)試條件下測(cè)量的空間分辨率結(jié)果有效。圖B.3空間分辨率測(cè)量由圖B.3可知，該測(cè)試條件下的空間分辨率表現(xiàn)，取均值后為15.81μm。表B.2空間分辨率測(cè)量結(jié)果直徑測(cè)量選取點(diǎn)空間分辨率(μm)123B.2成像速率測(cè)試按本文件要求及附錄A.2.3要求，將制備好的ITO玻片放入質(zhì)譜儀測(cè)試。儀器條件：——質(zhì)量范圍：m/z2000-20000——聚焦質(zhì)量：m/z12000——激光直徑：10μm——二維移動(dòng)平臺(tái)移動(dòng)速率：5mm/sec——激光頻率：5000Hz——檢測(cè)器電壓：-0.75kV——激光能量：15μJT/CITS337—2025圖B.4制作好的ITO玻片以單像素譜圖含有m/z12356、m/z6178中至少一個(gè)峰（SNR≥1.5）的像素點(diǎn)作為有效像素點(diǎn)。其中≥50%的像素點(diǎn)為有效像素點(diǎn)時(shí)，成像速率為有效采集速率。選擇5個(gè)樣本點(diǎn)，在每個(gè)樣本點(diǎn)中心框選約500μm×500μm的尺寸進(jìn)行成像測(cè)試，根據(jù)每個(gè)樣本點(diǎn)內(nèi)采集的像素點(diǎn)和實(shí)際采集時(shí)間計(jì)算得到采集速率（像素/秒），確定5個(gè)樣本點(diǎn)的平均采集速率。以單像素譜圖含有m/z12356、m/z6178中至少一個(gè)峰（SNR≥1.5）的像素點(diǎn)作為有效像素點(diǎn)。其中≥50%的像素點(diǎn)為有效像素點(diǎn)時(shí)，成像速率為有效采集速率。圖B.5質(zhì)譜采集信號(hào)情況（局部）根據(jù)表B.3有效像素情況，該儀器條件下，有效像素占比超過(guò)50%，該設(shè)定的成像速率測(cè)試結(jié)果有效，成像素率為229像素/秒。表B.3有效像素情況測(cè)試樣本點(diǎn)編號(hào)實(shí)際采集時(shí)保存的像素點(diǎn)個(gè)數(shù)成像采集速率（pixel/s)有效像素點(diǎn)個(gè)數(shù)有效像素點(diǎn)占比12811201223279.4%22876205217075.4%34367139992822862151222058.6%55.5%53640260227562.5%平均值229T/CITS337—2025B.3單像素靈敏度測(cè)試按本文件要求及附錄A.2.4要求，將制備好的ITO玻片放入質(zhì)譜儀測(cè)試。儀器條件：——質(zhì)量范圍：m/z20000-80000——聚焦質(zhì)量：m/z66000——激光直徑：10μm——二維移動(dòng)平臺(tái)移動(dòng)速率：5mm/sec——激光頻率：5000Hz——檢測(cè)器電壓：-0.80kV——激光能量：15μJ圖B.6制作好的ITO玻片選取質(zhì)量校準(zhǔn)點(diǎn)測(cè)試結(jié)果中m/z66447和m/z33224對(duì)整體測(cè)試結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量校準(zhǔn)。根據(jù)成像結(jié)果，在測(cè)試樣本點(diǎn)的5個(gè)測(cè)試重復(fù)點(diǎn)內(nèi)，每個(gè)點(diǎn)隨機(jī)選取3個(gè)m/z66447信號(hào)強(qiáng)度最高的單像素，計(jì)算其信噪比（SNR），并對(duì)15個(gè)點(diǎn)的SNR取均值，SNR≥5時(shí)，認(rèn)為單像素靈敏度滿足要求，單像素靈敏度的結(jié)果為測(cè)試樣本點(diǎn)中BSA的絕對(duì)含量。圖B.7質(zhì)譜采集信號(hào)情況（局部）在測(cè)試樣本點(diǎn)的5個(gè)測(cè)試重復(fù)點(diǎn)內(nèi)，每個(gè)點(diǎn)隨機(jī)選取3個(gè)m/z66447信號(hào)強(qiáng)度最高的單像素，計(jì)算其信噪比（SNR），并對(duì)15個(gè)點(diǎn)的信噪比（SNR）取均值。T/CITS337—2025表B.4單像素靈敏度測(cè)試結(jié)果測(cè)試樣本點(diǎn)編號(hào)單個(gè)像素點(diǎn)信噪比（m/z66447）信噪比均值（m/z66447）12317.856.558.6027.288.068.337.8936.159.2548.546.908.5255.647.427.068.26根據(jù)附錄A.2.4測(cè)試樣品配制情況，本測(cè)試的單像素靈敏度為BSA，10pmol。B.4成像質(zhì)量范圍（上限）本測(cè)試選擇BSA作為上限質(zhì)量測(cè)試物質(zhì)。按本文件要求，參考附錄A.2.5，將制備好的ITO玻片放入質(zhì)譜儀進(jìn)行測(cè)試。儀器條件：——質(zhì)量范圍：m/z20000-80000——聚焦質(zhì)量：m/z66000——激光直徑：10μm——二維移動(dòng)平臺(tái)移動(dòng)速率：5mm/sec——激光頻率：5000Hz——檢測(cè)器電壓：-0.80kV——激光能量：15μJ選取質(zhì)量校準(zhǔn)點(diǎn)測(cè)試結(jié)果中m/z66447和m/z33224對(duì)整體測(cè)試結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量校準(zhǔn)。根據(jù)成像結(jié)果，在測(cè)試樣本點(diǎn)的5個(gè)測(cè)試重復(fù)點(diǎn)內(nèi)，每個(gè)點(diǎn)隨機(jī)選取3個(gè)m/z66447信號(hào)強(qiáng)度最高的單像素，計(jì)算其信噪比（SNR），并對(duì)15個(gè)點(diǎn)的SNR取均值，SNR≥5時(shí)，認(rèn)為質(zhì)譜儀在最高空間分辨率、最高成像速率和最高靈單像素靈敏度條件下可有效實(shí)現(xiàn)的最大質(zhì)量。圖B.8制作好的ITO玻片T/CITS337—2025圖B.9質(zhì)譜采集信號(hào)情況（局部）表B.5質(zhì)量范圍(上限，以BSA為例)測(cè)試結(jié)果測(cè)試樣本點(diǎn)編號(hào)單個(gè)像素點(diǎn)信噪比（m/z66447）信噪比均值（m/z66447）12317.546.325.845.8427.107.878.788.7837.456.5645.246.087.247.2458.628.627.56B.5定量重復(fù)性按本文件要求及附錄A.2.6要求，將制備好的ITO玻片放入質(zhì)譜儀測(cè)試。儀器條件：——質(zhì)量范圍：m/z10000-20000——聚焦質(zhì)量：m/z15000——激光直徑：10μm——二維移動(dòng)平臺(tái)移動(dòng)速率：5mm/sec——激光頻率：5000Hz——檢測(cè)器電壓：-0.60kV——激光能量：10μJ圖B.10制作好的ITO玻片T/CITS337—2025選取其中一個(gè)樣本點(diǎn)的平均譜圖中最高峰作為m/z=15868進(jìn)行內(nèi)校準(zhǔn)后，根據(jù)每個(gè)采集區(qū)域的平均譜圖進(jìn)行m/z16030信號(hào)強(qiáng)度與m/z16030和m/z15868信號(hào)強(qiáng)度和的比值計(jì)算，計(jì)算10個(gè)樣本點(diǎn)該比值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。圖B.11質(zhì)譜采集信號(hào)情況（局部）表B.6定量重復(fù)性RSD測(cè)試結(jié)果測(cè)試樣本點(diǎn)編號(hào)峰信號(hào)強(qiáng)度強(qiáng)度比值（m/z16030/15868+16030）RSDm/z15868m/z1603010.00530.00090.14522.66%20.0070.00130.156630.00380.00070.155640.00390.00070.152250.0060.00110.154960.0050.00090.152570.00450.00080.150