ICS67.060CCSX11團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/CNLIC0164－2024Whitekidneybeanext2024-12-24發(fā)布2024-12-24實施中國輕工業(yè)聯(lián)合會發(fā)布T/CNLIC0164－2024前言 II 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4要求 25試驗方法 46檢驗規(guī)則 7標(biāo)簽、標(biāo)志、包裝、運輸和貯存 附錄A（規(guī)范性）白蕓豆α-淀粉酶抑制劑活力檢測方法（DNS比色法） 參考文獻(xiàn) T/CNLIC0164－2024本文件按照GB/T1.1－2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由中國輕工業(yè)聯(lián)合會提出并歸口。本文件起草單位：無錫市食品安全檢驗檢測中心、江南大學(xué)、蘇州朗邦營養(yǎng)科技有限公司、云南天保樺生物資源開發(fā)有限公司、無錫朗健生物科技有限公司、君樂寶乳業(yè)集團(tuán)股份有限公司、湯臣倍健股份有限公司、上海妙可藍(lán)多食品科技股份有限公司、深圳精準(zhǔn)健康食物科技有限公司、仙樂健康科技股份有限公司、武漢森瀾生物科技有限公司、北京康比特體育科技股份有限公司、浙江衡美健康科技股份有限公司、深圳保時健生物工程有限公司、天津卡飛科技有限公司、無錫勵成醫(yī)學(xué)營養(yǎng)有限公司、新產(chǎn)業(yè)大健康科技（珠海）有限公司、南通朗邦生物工程科技有限公司、無錫朗芯生物工程有限公司、法爾瑪國際健康管理有限公司、北京玖又肆分之叁品牌運營管理有限公司、江大科健醫(yī)學(xué)營養(yǎng)科技（鄭州）有限公司、無錫谷瑞食品科技有限公司。本文件主要起草人：馮永巍、蔡培基、趙偉、樊啟磊、費穎、何紹凱、任英、賈曉江、潘彤媛、趙溪、蘇晨曦、張歡、劉建鋒、黃盼、許燦新、李魁星、宋貴林、史慧茹、樂詩義、歐曉玲、徐博翾、劉璐、常青、李勇、張婷。1T/CNLIC0164－2024白蕓豆提取物本文件規(guī)定了白蕓豆提取物的原輔料、感官、理化、微生物等要求，描述了相應(yīng)的試驗方法，規(guī)定了檢驗規(guī)則、標(biāo)志、標(biāo)簽、包裝、運輸和貯存的內(nèi)容。本文件適用于以白蕓豆（拉丁學(xué)名PhaseolusvulgarisLinn.，屬于豆科、菜豆屬）為原料，經(jīng)過研磨或粉碎、水提、殺菌、干燥、包裝等主要工藝加工制成的、對哺乳動物α-淀粉酶具有一定抑制活力的產(chǎn)品的生產(chǎn)、檢驗和銷售。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T191包裝儲運圖示標(biāo)志GB4789.1食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗總則GB4789.2食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定GB4789.3食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗大腸菌群計數(shù)GB4789.4食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗沙門氏菌檢驗GB4789.10食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗金黃色葡萄球菌檢驗GB4789.15食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗霉菌和酵母計數(shù)GB5009.3食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中水分的測定GB5009.5食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測定GB5009.12食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中鉛的測定GB5009.15食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中鎘的測定GB5009.22食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定GB5009.96食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中赭曲霉毒素A的測定GB5009.123食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中鉻的測定GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB7718食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)預(yù)包裝食品標(biāo)簽通則GB14881食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品生產(chǎn)通用衛(wèi)生規(guī)范GB28050食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)預(yù)包裝食品營養(yǎng)標(biāo)簽通則JJF1070定量包裝商品凈含量計量檢驗規(guī)則3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。2T/CNLIC0164－20243.1α-淀粉酶活力α-amylaseactivity在溫度37℃、pH6.9條件下，α-淀粉酶催化淀粉水解的反應(yīng)中，1min內(nèi)催化淀粉生成1μg麥芽糖所需α-淀粉酶的量為1個活力單位。3.2α-淀粉酶抑制劑活力α-amylaseinhibitoractivity在溫度37℃、pH6.9條件下，α-淀粉酶催化淀粉水解的反應(yīng)中，當(dāng)反應(yīng)體系中加入的α-淀粉酶活力（3.1）為100U時，1min內(nèi)抑制1μg麥芽糖生成所需α-淀粉酶抑制劑的量為1個抑制活力單位。3.3白蕓豆α-淀粉酶抑制劑α-amylaseinhibitorfromwhitekidneybean一種存在于白蕓豆提取物中且對哺乳動物α-淀粉酶活力（3.1）具有抑制作用的組分。4要求4.1原輔料要求4.1.1白蕓豆應(yīng)符合相關(guān)食品安全標(biāo)準(zhǔn)的要求。4.1.2所有原輔料應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)規(guī)定。4.2感官要求應(yīng)符合表1的要求。表1感官要求4.3理化指標(biāo)應(yīng)符合表2的要求。表2理化指標(biāo)3T/CNLIC0164－20244.4安全指標(biāo)4.4.1微生物限量應(yīng)符合表3的要求。表3微生物限量ncmM5234522500-500-M為微生物指標(biāo)的最高安全限量值。4.4.2污染物限量應(yīng)符合表4的要求。表4污染物限量4.4.3真菌毒素限量應(yīng)符合表5的要求。表5真菌毒素限量4T/CNLIC0164－20244.5凈含量見《定量包裝商品計量監(jiān)督管理辦法》規(guī)定。4.6生產(chǎn)加工過程的衛(wèi)生要求應(yīng)符合GB14881的規(guī)定。5試驗方法5.1感官要求5.1.1色澤取被測樣品置于一潔凈的白色瓷盤中，在自然光線下用肉眼觀察其色澤。5.1.2滋味和氣味取被測樣品沖調(diào)后，立即嗅其香氣，辨其滋味。5.1.3狀態(tài)取被測樣品置于一潔凈的白色瓷盤中，在自然光線下用肉眼觀察其外觀形態(tài)。5.1.4雜質(zhì)取被測樣品沖調(diào)后，靜置2min，觀察燒杯底部有無異物。5.2理化指標(biāo)5.2.1α-淀粉酶抑制劑活力按照附錄A所述的方法測定。5.2.2水分按照GB5009.3第一法所述的方法測定。5.2.3蛋白質(zhì)按照GB5009.5第一法所述的方法測定，蛋白質(zhì)換算系數(shù)為6.25。5.3安全指標(biāo)5.3.1菌落總數(shù)按照GB4789.2所述的方法測定。5.3.2大腸菌群按照GB4789.3第二法所述的方法測定。5.3.3沙門氏菌按照GB4789.4所述的方法測定。T/CNLIC0164－20245.3.4金黃色葡萄球菌按照GB4789.10所述的方法測定。5.3.5霉菌按照GB4789.15第一法所述的方法測定。5.3.6鉛按照GB5009.12所述的方法測定。5.3.7鎘按GB5009.15所述的方法進(jìn)行測定。5.3.8鉻按GB5009.123所述的方法進(jìn)行測定。5.3.9黃曲霉毒素B1按GB5009.22所述的方法進(jìn)行測定。5.3.10赭曲霉毒素A按GB5009.96所述的方法進(jìn)行測定。5.4凈含量按照J(rèn)JF1070所述的方法測定。6檢驗規(guī)則6.1組批由生產(chǎn)企業(yè)的質(zhì)量管理部門按照相應(yīng)的規(guī)則確定產(chǎn)品的批次。6.2抽樣方法每批抽樣數(shù)獨立包裝應(yīng)不少于12個（不含凈含量抽樣），樣品總含量不少于2kg，檢樣一式二份，供檢驗和復(fù)檢備用。6.3出廠檢驗6.3.1每批產(chǎn)品應(yīng)由本廠質(zhì)檢部門按出廠檢驗項目進(jìn)行檢驗，檢驗合格后方可出廠。6.3.2出廠檢驗項目為色澤、滋味和氣味、狀態(tài)、雜質(zhì)、水分、蛋白質(zhì)、α-淀粉酶抑制劑活力、菌落總數(shù)及大腸菌群。6.4型式檢驗型式檢驗項目為本文件要求中規(guī)定的全部項目。一般情況下正常生產(chǎn)時型式檢驗每半年進(jìn)行1次，有下列情況之一，亦應(yīng)進(jìn)行型式檢驗：a)新產(chǎn)品投產(chǎn)前；6T/CNLIC0164－2024b)原輔材料有較大變化時；c)停產(chǎn)3個月以上，恢復(fù)生產(chǎn)時；d)主要生產(chǎn)設(shè)備更換時；e)出廠檢驗的結(jié)果與上次型式檢驗的結(jié)果有較大差異時；f)食品安全監(jiān)督部門提出要求時。6.5判定規(guī)則檢驗項目全部符合本文件時，判定為合格。檢驗項目如有不合格，可加倍抽樣對不合格項目進(jìn)行復(fù)檢，復(fù)檢后仍不合格的，判定該批次產(chǎn)品為不合格品。微生物項目不合格不應(yīng)復(fù)檢。7標(biāo)簽、標(biāo)志、包裝、運輸和貯存7.1標(biāo)簽、標(biāo)志7.1.1產(chǎn)品的標(biāo)簽和標(biāo)志應(yīng)符合GB7718、GB28050要求。外包裝儲運圖示標(biāo)志應(yīng)符合GB/T191規(guī)定。7.1.2產(chǎn)品標(biāo)簽應(yīng)根據(jù)α-淀粉酶抑制劑活力注明產(chǎn)品等級。7.2包裝7.2.1包裝材料應(yīng)符合相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。7.2.2內(nèi)外包裝應(yīng)牢固整潔、無毒、防潮、無異味。7.3運輸運輸工具應(yīng)清潔、干燥，應(yīng)具有防塵、防雨、防曬設(shè)施，不應(yīng)與有毒、有害、有異味的物品混運。運輸及裝卸時應(yīng)注意輕拿、輕裝、輕卸。7.4貯存產(chǎn)品應(yīng)貯存于通風(fēng)陰涼、干燥、清潔、無異味的倉庫內(nèi)，應(yīng)有防蟲、防鼠設(shè)施。不應(yīng)與有毒、有污染的物品或其他雜物混存。T/CNLIC0164－2024（規(guī)范性）白蕓豆α-淀粉酶抑制劑活力檢測方法（DNS比色法）A.1原理麥芽糖能與3,5-二硝基水楊酸（DNS）發(fā)生氧化還原反應(yīng)，通過比色法測定麥芽糖的含量。α-淀粉酶能水解淀粉生成麥芽糖，添加白蕓豆提取物后α-淀粉酶活力被抑制，麥芽糖的生成量越低則代表白蕓豆提取物中α-淀粉酶抑制劑活力越高，通過測定麥芽糖生成量的變化能計算白蕓豆提取物對α-淀粉酶的抑制活力。A.2試劑和材料除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的三級水。A.2.1試劑A.2.1.1二水磷酸二氫鈉（NaH2PO4·2H2O）。A.2.1.2十二水磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）。A.2.1.3氯化鈉（NaCl）。A.2.1.4可溶性淀粉。A.2.1.5α-淀粉酶（豬胰來源）。A.2.1.6氫氧化鈉（NaOH）。A.2.1.73,5-二硝基水楊酸（C7H4N2O7）。A.2.1.8四水酒石酸鉀鈉（C4H4O6KNa·4H2O）。A.2.1.9苯酚（C6H6O）。A.2.1.10無水亞硫酸鈉（Na2SO3）。A.2.1.11麥芽糖（C12H22O11）。A.2.2試劑配制A.2.2.1磷酸鹽緩沖液（簡稱PBS，0.1mol/L）：a)A液：稱取15.6g二水磷酸二氫鈉和8.78g氯化鈉溶解于1000mL水中；b)B液：稱取35.8g十二水磷酸氫二鈉和8.78g氯化鈉溶解于1000mL水中；c)取300mLA液，將B液往A液中傾倒，邊倒邊攪拌，直至pH為6.9。A.2.2.2可溶性淀粉溶液（1%稱取1.00g可溶性淀粉分散于50mLPBS中，煮沸至液體澄清，冷卻后用PBS定容至100mL，現(xiàn)配現(xiàn)用。A.2.2.3α-淀粉酶溶液：稱取20.0mgα-淀粉酶，溶解于20mLPBS中，分散完全后稀釋至質(zhì)量濃度為0.04mg/mL備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。根據(jù)公式（A.2）計算空白組中α-淀粉酶活力應(yīng)在85U～115U，若小于85U則應(yīng)增加α-淀粉酶溶液質(zhì)量濃度，大于115U則應(yīng)降低α-淀粉酶溶液質(zhì)量濃度。A.2.2.43,5-二硝基水楊酸（簡稱DNS）試劑：a)配制2mol/L氫氧化鈉溶液：稱取21.01g氫氧化鈉溶解于262mL水中；b)稱取6.3gDNS，緩慢加入到45℃水浴中保溫的2mol/L氫氧化鈉中；c)將185g四水酒石酸鉀鈉溶解于500mL水中后與b）中所得溶液混合，一起于水浴鍋中攪拌至DNS溶解；d)稱取5g苯酚和5g無水亞硫酸鈉溶解于c）中所得溶液；8T/CNLIC0164－2024e)冷卻后用水定容至1000mL，放于棕色瓶中一周后使用。A.2.2.5麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（1mg/mL）：取3g麥芽糖置于105℃烘箱中干燥2h，取出后置于干燥器中冷卻。稱取1.0000g麥芽糖，先用300mL水在燒杯中溶解后，倒入1000mL容量瓶中，然后用600mL水分3次反復(fù)潤洗燒杯3次，將潤洗水倒入容量瓶，最后用水定容至1000mL。A.3儀器設(shè)備A.3.1可見分光光度計。A.3.2恒溫水浴鍋。A.3.3磁力攪拌器。A.3.4電磁爐。A.3.5振蕩器。A.3.6天平及分析天平。A.3.7移液槍。A.3.8計時器。A.3.9pH計。A.4分析步驟A.4.1麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作A.4.1.1取7只試管編號，分別加入麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（1mg/mL）0mL、0.15mL、0.45mL、0.75mL、1.05mL、1.35mL和1.50mL，然后用水將各試管中液體體積補足至1.50mL，反應(yīng)體系中麥芽糖質(zhì)量濃度依次為0mg/mL、0.1mg/mL、0.3mg/mL、0.5mg/mL、0.7mg/mL、0.9mg/mL和1.0mg/mL，具體如表A.1所示。表A.1不同質(zhì)量濃度麥芽糖溶液配制表12345670水0A.4.1.2向各試管中加入1mLDNS后，于沸水浴中水浴10min后立即冷卻。A.4.1.3向各試管中加入5mL水，振蕩混勻后，于540nm波長下測定吸光度值。A.4.1.4以麥芽糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。A.4.2樣品的制備與測定A.4.2.1樣品的制備將白蕓豆提取物（取樣量應(yīng)大于100mg）與磷酸鹽緩沖液（PBS）按1∶50~50∶1（質(zhì)量體積比，mg/mL）的比例（或者其他合適的比例）制成液體樣品，配置的液體樣品體積不少于200mL。反應(yīng)體系中制備的樣品對α-淀粉酶的抑制率按公式（A.1）計算應(yīng)在25%～45%，若抑制率低于25%則增大樣品質(zhì)量濃度，抑制率高于45%則降低樣品質(zhì)量濃度。9T/CNLIC0164－2024A.4.2.2樣品的測定取0.50mLPBS加入玻璃試管中，然后加入0.25mLα-淀粉酶液和0.25mL制備的的待測樣品液，于37℃水浴10min后，再加入0.50mL可溶性淀粉溶液（此時應(yīng)保證試管依然在37℃水浴中精確反應(yīng)300s后加入1mLDNS以終止反應(yīng)。將反應(yīng)液于沸水浴中加熱10min后迅速置于冰水浴中冷卻至室溫，然后加入5mL水，混合均勻后于540nm波長下測定吸光值，測定前用水調(diào)零。在測定過程中，設(shè)置空白管、空白對照管、抑制管和抑制對照管。空白管中不添加樣品，空白對照管中不加α-淀粉酶液和樣品，抑制對照管中不加α-淀粉酶液。體積不足處均以PBS補足。每根管均設(shè)置兩組平行。反應(yīng)體系如表A.2所示。表A.2α-淀粉酶抑制劑活力檢測反應(yīng)體系水0000A.4.3計算A.4.3.1反應(yīng)體系中白蕓豆提取物對α-淀粉酶的抑制率（AR）按公式（A.1）計算：式中：AR——反應(yīng)體系中白蕓豆提取物對α-淀粉酶的抑制率；A3——抑制管的吸光度的算術(shù)平均值；A4——抑制對照管的吸光度的算術(shù)平均值；A1——空白管的吸光度的算術(shù)平均值；A2——空白對照管的吸光度的算術(shù)平均值。A.4.3.2空