ⅢB期結(jié)腸癌中自噬相關(guān)分子異常表達(dá)及臨床意義探究一、引言1.1研究背景癌癥，作為全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病之一，給社會(huì)和家庭帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)。據(jù)世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥負(fù)擔(dān)數(shù)據(jù)顯示，當(dāng)年全球新發(fā)癌癥病例1929萬(wàn)例，癌癥死亡病例996萬(wàn)例，這一數(shù)據(jù)直觀地展現(xiàn)了癌癥的高發(fā)性和高致死性。其不僅嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，導(dǎo)致身體機(jī)能下降、疼痛折磨以及心理負(fù)擔(dān)加重，還在經(jīng)濟(jì)層面造成巨大壓力，無(wú)論是治療費(fèi)用、康復(fù)護(hù)理費(fèi)用，還是患者因病無(wú)法工作導(dǎo)致的收入損失等，都對(duì)家庭和社會(huì)經(jīng)濟(jì)體系產(chǎn)生沖擊。結(jié)腸癌作為消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，在癌癥疾病譜中占據(jù)顯著位置。在全球范圍內(nèi)，其發(fā)病率和死亡率均位居前列。根據(jù)相關(guān)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，結(jié)腸癌的發(fā)病率在男性中位列所有癌癥的第3位，在女性中位列第2位。隨著生活方式的改變，如高脂肪、低纖維飲食的增加，以及老齡化社會(huì)的到來(lái)，結(jié)腸癌的發(fā)病率呈逐漸上升趨勢(shì)。在我國(guó)，結(jié)腸癌的發(fā)病形勢(shì)也不容樂(lè)觀，發(fā)病率和死亡率均呈上升態(tài)勢(shì)，嚴(yán)重威脅國(guó)民健康。結(jié)腸癌根據(jù)腫瘤的大小、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況進(jìn)行分期，不同分期的結(jié)腸癌在治療策略和預(yù)后方面存在顯著差異。ⅢB期結(jié)腸癌處于局部晚期階段，其特點(diǎn)表現(xiàn)為腫瘤侵犯到腸壁外組織，并且伴有4個(gè)及以上區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。這一時(shí)期的腫瘤細(xì)胞具有更強(qiáng)的侵襲性和轉(zhuǎn)移性，病情相對(duì)復(fù)雜。一方面，腫瘤對(duì)周圍組織的侵犯增加了手術(shù)切除的難度，難以實(shí)現(xiàn)完全根治性切除；另一方面，區(qū)域淋巴結(jié)的廣泛轉(zhuǎn)移意味著腫瘤細(xì)胞可能已經(jīng)通過(guò)淋巴系統(tǒng)擴(kuò)散到身體其他部位，增加了遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。據(jù)相關(guān)研究表明，ⅢB期結(jié)腸癌患者在接受常規(guī)治療后的5年生存率相對(duì)較低，約為30%-40%，復(fù)發(fā)率較高，嚴(yán)重影響患者的生存預(yù)后和生活質(zhì)量。因此，深入研究ⅢB期結(jié)腸癌的發(fā)病機(jī)制，尋找有效的治療靶點(diǎn)和預(yù)后評(píng)估指標(biāo)，對(duì)于改善患者的治療效果和生存狀況具有重要意義。自噬是一種在真核細(xì)胞中高度保守的生物學(xué)過(guò)程，其本質(zhì)是細(xì)胞利用溶酶體對(duì)自身受損的細(xì)胞器、錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)以及大分子物質(zhì)等進(jìn)行降解和再利用。這一過(guò)程對(duì)于維持細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要，在細(xì)胞面臨饑餓、缺氧、氧化應(yīng)激等不利環(huán)境時(shí)，自噬能夠被激活，通過(guò)降解細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)為細(xì)胞提供必要的營(yíng)養(yǎng)和能量，從而幫助細(xì)胞維持正常的生理功能，促進(jìn)細(xì)胞生存。同時(shí)，自噬在阻止染色體異常、維持基因組穩(wěn)定性方面也發(fā)揮著關(guān)鍵作用，能夠及時(shí)清除細(xì)胞內(nèi)的有害物質(zhì)，避免其對(duì)細(xì)胞遺傳物質(zhì)造成損傷。然而，當(dāng)自噬持續(xù)過(guò)度激活時(shí)，也可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡，即所謂的“自噬性細(xì)胞死亡”，也被稱為Ⅱ型程序化細(xì)胞死亡。自噬活性的異常與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展之間存在著緊密而復(fù)雜的聯(lián)系。在腫瘤發(fā)生的早期階段，自噬發(fā)揮著抑制腫瘤的作用。它能夠及時(shí)清除細(xì)胞內(nèi)受損的細(xì)胞器和異常的蛋白質(zhì)，防止這些物質(zhì)積累導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。例如，自噬可以降解細(xì)胞內(nèi)的活性氧（ROS）產(chǎn)生的有害物質(zhì)，減少氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞的損傷，從而降低基因突變的風(fēng)險(xiǎn)，抑制腫瘤的啟動(dòng)。同時(shí)，自噬還可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝，維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。然而，在腫瘤發(fā)展的后期，腫瘤細(xì)胞會(huì)利用自噬機(jī)制來(lái)適應(yīng)惡劣的微環(huán)境，促進(jìn)自身的生存和發(fā)展。在腫瘤組織中，由于血管生成不足，腫瘤細(xì)胞常常面臨營(yíng)養(yǎng)缺乏和缺氧的環(huán)境，此時(shí)自噬被激活，腫瘤細(xì)胞通過(guò)降解自身的物質(zhì)來(lái)獲取能量和營(yíng)養(yǎng)，維持細(xì)胞的存活和增殖。此外，自噬還可以幫助腫瘤細(xì)胞抵抗化療藥物和放療的損傷，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)治療產(chǎn)生耐藥性，這使得腫瘤的治療變得更加困難。因此，自噬在腫瘤中的作用具有雙重性，深入研究自噬與腫瘤的關(guān)系，對(duì)于揭示腫瘤的發(fā)病機(jī)制以及開發(fā)新的腫瘤治療策略具有重要的理論和實(shí)踐意義。目前，自噬與結(jié)腸癌的關(guān)系相當(dāng)復(fù)雜，尚未完全明確。雖然已有一些研究探討了自噬在結(jié)腸癌中的作用，但仍存在許多爭(zhēng)議和未解之謎。例如，在不同的研究中，自噬對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖、凋亡和轉(zhuǎn)移的影響結(jié)果并不一致，這可能與研究方法、實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ鸵约澳[瘤的異質(zhì)性等因素有關(guān)。此外，自噬信號(hào)傳導(dǎo)通路上的關(guān)鍵調(diào)節(jié)分子在ⅢB期結(jié)腸癌組織中的表達(dá)情況及其意義也有待進(jìn)一步深入研究?；诖?，本研究旨在觀察自噬信號(hào)傳導(dǎo)通路上的關(guān)鍵調(diào)節(jié)分子Beclin1、mTOR/pmTOR、LC3在ⅢB期結(jié)腸癌組織中的異常表達(dá)情況，通過(guò)分析這些分子的表達(dá)與患者臨床病理資料的相關(guān)性以及它們之間的相互關(guān)系，進(jìn)一步探討其在ⅢB期結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展中的意義和預(yù)測(cè)患者預(yù)后的價(jià)值，并試圖揭示自噬對(duì)人類結(jié)腸癌發(fā)展的作用機(jī)制，為干預(yù)自噬現(xiàn)象、改善ⅢB期結(jié)腸癌患者的治療效果提供初步依據(jù)。1.2研究目的與意義本研究聚焦于自噬信號(hào)傳導(dǎo)通路上的關(guān)鍵調(diào)節(jié)分子Beclin1、mTOR/pmTOR、LC3，旨在精準(zhǔn)觀察它們?cè)冖驜期結(jié)腸癌組織中的異常表達(dá)情況。通過(guò)深入分析這些分子的表達(dá)與患者臨床病理資料之間的相關(guān)性，以及它們相互之間的內(nèi)在聯(lián)系，進(jìn)一步探究其在ⅢB期結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程中的生物學(xué)意義，以及對(duì)預(yù)測(cè)患者預(yù)后所具備的價(jià)值，嘗試揭示自噬對(duì)人類結(jié)腸癌發(fā)展的作用機(jī)制，為干預(yù)自噬現(xiàn)象、改善ⅢB期結(jié)腸癌患者的治療效果提供初步依據(jù)。ⅢB期結(jié)腸癌患者的預(yù)后情況通常較差，這主要?dú)w因于腫瘤的高復(fù)發(fā)率和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率。目前，臨床治療手段雖然在一定程度上能夠控制病情，但總體療效仍有待提高。自噬相關(guān)分子在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中扮演著關(guān)鍵角色，深入研究它們?cè)冖驜期結(jié)腸癌中的異常表達(dá)，有助于揭示腫瘤的發(fā)病機(jī)制，為開發(fā)新的治療策略提供理論基礎(chǔ)。從臨床實(shí)踐的角度來(lái)看，本研究的成果有望為ⅢB期結(jié)腸癌的診斷和治療提供新的思路和方法。一方面，通過(guò)檢測(cè)自噬相關(guān)分子的表達(dá)水平，有可能為臨床醫(yī)生提供更準(zhǔn)確的預(yù)后判斷指標(biāo)，從而指導(dǎo)個(gè)性化治療方案的制定。另一方面，若能明確自噬在ⅢB期結(jié)腸癌中的作用機(jī)制，就有可能通過(guò)干預(yù)自噬過(guò)程來(lái)提高現(xiàn)有治療手段的療效，改善患者的生存狀況。例如，針對(duì)自噬信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子開發(fā)靶向藥物，或者將自噬調(diào)節(jié)劑與傳統(tǒng)化療藥物聯(lián)合使用，以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療的敏感性，降低耐藥性的發(fā)生。這不僅有助于提高患者的生存率，還能在一定程度上減輕患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和心理壓力，具有重要的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。二、ⅢB期結(jié)腸癌概述2.1結(jié)腸癌的發(fā)病機(jī)制與流行病學(xué)特征結(jié)腸癌的發(fā)病機(jī)制是一個(gè)涉及多因素、多步驟的復(fù)雜過(guò)程。從內(nèi)在因素來(lái)看，遺傳因素在其中扮演著重要角色。某些遺傳綜合征，如家族性腺瘤性息肉?。‵AP）和遺傳性非息肉病性結(jié)直腸癌（HNPCC），與結(jié)腸癌的發(fā)生密切相關(guān)。在FAP患者中，由于APC基因的突變，導(dǎo)致腸道內(nèi)出現(xiàn)大量腺瘤性息肉，這些息肉如果不及時(shí)治療，幾乎100%會(huì)發(fā)展為結(jié)腸癌。而HNPCC患者則主要是由于DNA錯(cuò)配修復(fù)基因（如MLH1、MSH2等）的突變，使得細(xì)胞在DNA復(fù)制過(guò)程中無(wú)法準(zhǔn)確修復(fù)錯(cuò)誤，從而增加了基因突變的頻率，進(jìn)而引發(fā)結(jié)腸癌。此外，一些散發(fā)的結(jié)腸癌病例也與基因的突變、缺失或擴(kuò)增有關(guān)，這些基因異常會(huì)影響細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等過(guò)程，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。外在環(huán)境因素同樣是結(jié)腸癌發(fā)病的重要誘因。飲食結(jié)構(gòu)的不合理是引發(fā)結(jié)腸癌的重要因素之一。長(zhǎng)期攝入高脂肪、低纖維的食物，會(huì)改變腸道內(nèi)的菌群結(jié)構(gòu)，使有害菌增多，有益菌減少。有害菌在代謝過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的次級(jí)膽酸等有害物質(zhì)，這些物質(zhì)會(huì)刺激腸道黏膜，導(dǎo)致腸道黏膜上皮細(xì)胞受損，增加基因突變的風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)，低纖維飲食會(huì)使糞便在腸道內(nèi)停留時(shí)間延長(zhǎng)，有害物質(zhì)與腸道黏膜接觸的時(shí)間也相應(yīng)增加，進(jìn)一步促進(jìn)了結(jié)腸癌的發(fā)生。另外，生活方式的改變，如缺乏運(yùn)動(dòng)、長(zhǎng)期吸煙、過(guò)量飲酒等，也會(huì)對(duì)身體的代謝和免疫功能產(chǎn)生負(fù)面影響，從而增加患結(jié)腸癌的風(fēng)險(xiǎn)。缺乏運(yùn)動(dòng)使得身體的新陳代謝減緩，腸道蠕動(dòng)減弱，有害物質(zhì)在腸道內(nèi)的排出速度減慢；吸煙中的尼古丁、焦油等致癌物質(zhì)，以及酒精對(duì)肝臟和腸道黏膜的損傷，都可能誘發(fā)結(jié)腸癌。從全球范圍來(lái)看，結(jié)腸癌的發(fā)病率和死亡率均處于較高水平。據(jù)世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥負(fù)擔(dān)數(shù)據(jù)顯示，結(jié)直腸癌新發(fā)病例數(shù)為193萬(wàn)，占所有癌癥新發(fā)病例的10.0%，在全部癌癥中位居第三；死亡病例數(shù)為94萬(wàn)，占所有癌癥死亡病例的9.4%，位居第二。在不同地區(qū)，結(jié)腸癌的發(fā)病率和死亡率存在明顯差異。在歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家，結(jié)腸癌的發(fā)病率相對(duì)較高，這可能與這些國(guó)家居民的飲食習(xí)慣以高脂肪、高蛋白、低纖維食物為主，以及肥胖率較高等因素有關(guān)。而在一些發(fā)展中國(guó)家，隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和生活方式的西方化，結(jié)腸癌的發(fā)病率也呈現(xiàn)出快速上升的趨勢(shì)。在我國(guó)，結(jié)腸癌的發(fā)病形勢(shì)也不容樂(lè)觀。根據(jù)國(guó)家癌癥中心發(fā)布的數(shù)據(jù)，近年來(lái)我國(guó)結(jié)腸癌的發(fā)病率和死亡率均呈上升態(tài)勢(shì)。2015年，我國(guó)結(jié)直腸癌新發(fā)病例數(shù)為37.63萬(wàn)，發(fā)病率為27.01/10萬(wàn)，在所有惡性腫瘤中位居第5位；死亡病例數(shù)為19.10萬(wàn)，死亡率為13.64/10萬(wàn)，位居第4位。從地區(qū)分布來(lái)看，結(jié)腸癌的發(fā)病率在城市地區(qū)略高于農(nóng)村地區(qū)，這可能與城市居民的生活節(jié)奏快、壓力大、飲食結(jié)構(gòu)不合理等因素有關(guān)。同時(shí)，結(jié)腸癌的發(fā)病年齡也呈現(xiàn)出逐漸年輕化的趨勢(shì)，以往結(jié)腸癌的高發(fā)年齡主要在50-70歲，而現(xiàn)在40歲以下的患者比例逐漸增加，這可能與年輕人的不良生活習(xí)慣、環(huán)境污染等因素有關(guān)。早期結(jié)腸癌患者的癥狀通常較為隱匿，容易被忽視。部分患者可能僅表現(xiàn)出一些非特異性癥狀，如腹部不適、隱痛，這種疼痛通常程度較輕，呈間歇性發(fā)作，容易被誤認(rèn)為是胃腸道的普通不適。大便習(xí)慣改變也是常見癥狀之一，包括排便次數(shù)增多或減少，原本規(guī)律的排便變得不規(guī)律；大便性狀改變，如大便變細(xì)、不成形等。便血也是早期結(jié)腸癌可能出現(xiàn)的癥狀，但由于便血容易與痔瘡等肛腸疾病混淆，往往不能引起患者的足夠重視。隨著病情的進(jìn)展，當(dāng)結(jié)腸癌發(fā)展到ⅢB期時(shí)，癥狀會(huì)更加明顯。患者可能會(huì)出現(xiàn)較為嚴(yán)重的腹痛，這是由于腫瘤侵犯腸壁及周圍組織，刺激神經(jīng)引起的；腸梗阻癥狀也較為常見，腫瘤的生長(zhǎng)導(dǎo)致腸腔狹窄，使糞便通過(guò)受阻，患者會(huì)出現(xiàn)腹脹、腹痛、嘔吐、停止排氣排便等典型的腸梗阻表現(xiàn)。此外，由于腫瘤的消耗以及患者食欲下降，患者還會(huì)出現(xiàn)消瘦、乏力、貧血等全身癥狀。ⅢB期結(jié)腸癌的一個(gè)重要特點(diǎn)是區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，腫瘤細(xì)胞通過(guò)淋巴管轉(zhuǎn)移到周圍的淋巴結(jié)，導(dǎo)致淋巴結(jié)腫大。如果不及時(shí)治療，腫瘤細(xì)胞還可能進(jìn)一步通過(guò)血液循環(huán)轉(zhuǎn)移到肝臟、肺等遠(yuǎn)處器官，形成遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶，嚴(yán)重影響患者的預(yù)后。2.2ⅢB期結(jié)腸癌的臨床診斷與治療現(xiàn)狀ⅢB期結(jié)腸癌的臨床診斷是一個(gè)綜合且嚴(yán)謹(jǐn)?shù)倪^(guò)程，涉及多種檢查手段和方法。病史采集是診斷的基礎(chǔ)環(huán)節(jié)，醫(yī)生會(huì)詳細(xì)詢問(wèn)患者的癥狀，包括腹痛的性質(zhì)、部位、發(fā)作頻率和持續(xù)時(shí)間，以及是否伴有腹脹、嘔吐等腸梗阻癥狀；大便習(xí)慣和性狀的改變，如排便次數(shù)增多或減少、大便變細(xì)、便血等情況；還有患者的體重變化、食欲情況以及是否存在乏力、貧血等全身癥狀。同時(shí)，了解患者的既往病史，如是否患有腸道疾?。ㄈ鐫冃越Y(jié)腸炎、結(jié)腸腺瘤等）、家族中是否有結(jié)腸癌或其他惡性腫瘤患者等信息，對(duì)于判斷病情具有重要參考價(jià)值。體格檢查是初步評(píng)估患者病情的重要手段。醫(yī)生會(huì)對(duì)患者的腹部進(jìn)行觸診，檢查是否有腫塊存在，判斷腫塊的位置、大小、質(zhì)地、活動(dòng)度以及是否有壓痛等。如果腫瘤侵犯到周圍組織或引起腸梗阻，可能會(huì)出現(xiàn)腹部壓痛、反跳痛以及腸鳴音亢進(jìn)或減弱等體征。此外，直腸指檢也是必不可少的檢查項(xiàng)目，對(duì)于低位結(jié)腸癌的診斷具有重要意義，通過(guò)直腸指檢可以直接觸摸到直腸內(nèi)是否有腫物，了解腫物的位置、大小、形態(tài)以及與周圍組織的關(guān)系等。影像學(xué)檢查在ⅢB期結(jié)腸癌的診斷中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。結(jié)腸鏡檢查是診斷結(jié)腸癌的金標(biāo)準(zhǔn)之一，它能夠直接觀察腸道內(nèi)部的情況，清晰地看到腫瘤的位置、大小、形態(tài)以及是否有浸潤(rùn)等。在結(jié)腸鏡檢查過(guò)程中，還可以取組織進(jìn)行病理活檢，以明確腫瘤的病理類型和分化程度。CT掃描是常用的影像學(xué)檢查方法，它可以提供更全面的信息，不僅能夠清晰地顯示腫瘤的大小、形態(tài)，還能準(zhǔn)確判斷腫瘤是否侵犯到腸壁外組織、周圍淋巴結(jié)是否腫大以及是否存在遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移等情況。對(duì)于評(píng)估腫瘤與周圍組織的關(guān)系以及制定手術(shù)方案具有重要指導(dǎo)價(jià)值。MRI檢查對(duì)于軟組織的分辨力較高，在判斷腫瘤侵犯腸壁的深度、周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及是否侵犯鄰近器官等方面具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，尤其適用于直腸癌和懷疑有肝轉(zhuǎn)移的患者。PET-CT掃描則是一種功能代謝顯像技術(shù)，它可以檢測(cè)腫瘤的新陳代謝活性，能夠早期發(fā)現(xiàn)潛在的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移病灶，對(duì)于判斷腫瘤的分期和預(yù)后具有重要意義，但由于其價(jià)格較高，一般不作為常規(guī)檢查項(xiàng)目，主要用于對(duì)病情存在疑問(wèn)或需要進(jìn)一步明確診斷的患者。血液檢查中的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)也可為ⅢB期結(jié)腸癌的診斷和病情監(jiān)測(cè)提供參考。癌胚抗原（CEA）是臨床上常用的結(jié)腸癌腫瘤標(biāo)志物之一，在ⅢB期結(jié)腸癌患者中，CEA水平往往會(huì)升高，但其特異性并不高，其他一些良性疾病如炎癥性腸病、肝硬化等也可能導(dǎo)致CEA升高，因此CEA不能單獨(dú)作為結(jié)腸癌的診斷依據(jù)，通常需要結(jié)合其他檢查結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。糖類抗原（CA19-9）在部分結(jié)腸癌患者中也會(huì)升高，尤其是對(duì)于伴有肝轉(zhuǎn)移的患者，CA19-9的升高可能更為明顯，它對(duì)于監(jiān)測(cè)腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移具有一定的價(jià)值。ⅢB期結(jié)腸癌的治療方式通常采用多學(xué)科綜合治療模式，旨在提高患者的生存率和生活質(zhì)量。手術(shù)治療是ⅢB期結(jié)腸癌的主要治療手段之一，其目的是徹底切除腫瘤及其周圍的組織，包括區(qū)域淋巴結(jié)清掃，以降低腫瘤復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。手術(shù)方式主要包括結(jié)腸癌根治術(shù)和結(jié)腸部分切除術(shù)等。結(jié)腸癌根治術(shù)是最常用的手術(shù)方式，它需要切除腫瘤所在的腸段及其兩端一定長(zhǎng)度的正常腸管，同時(shí)清掃周圍的淋巴結(jié)，以確保切除的徹底性。對(duì)于一些腫瘤位置特殊或患者身體狀況較差無(wú)法耐受根治性手術(shù)的情況，可能會(huì)選擇結(jié)腸部分切除術(shù)，即切除腫瘤所在的部分腸管，但這種手術(shù)方式可能會(huì)增加腫瘤復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)?；熓洽驜期結(jié)腸癌綜合治療的重要組成部分，可在術(shù)前、術(shù)后或同步進(jìn)行。術(shù)前化療，也稱為新輔助化療，其目的是縮小腫瘤體積，降低腫瘤分期，使原本無(wú)法切除的腫瘤變?yōu)榭汕谐岣呤中g(shù)切除的成功率，還可以減少腫瘤細(xì)胞的活性，降低術(shù)中腫瘤細(xì)胞播散的風(fēng)險(xiǎn)。術(shù)后化療，即輔助化療，主要是為了殺死殘留的腫瘤細(xì)胞，預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移?；煼桨竿ǔ０ǘ喾N藥物的聯(lián)合使用，常用的化療藥物有奧沙利鉑、氟尿嘧啶、伊立替康、卡培他濱、雷替曲塞等，具體的化療方案會(huì)根據(jù)患者的年齡、身體狀況、腫瘤的病理類型和分期等因素進(jìn)行個(gè)體化制定?；煹臅r(shí)間和劑量也會(huì)根據(jù)患者的具體情況進(jìn)行調(diào)整，一般需要進(jìn)行多個(gè)療程的化療，每個(gè)療程之間會(huì)有一定的間隔時(shí)間，以讓患者的身體有時(shí)間恢復(fù)和減輕化療的不良反應(yīng)。放療在ⅢB期結(jié)腸癌的治療中也有一定的應(yīng)用，主要用于局部晚期或復(fù)發(fā)性結(jié)腸癌的治療。放療可以通過(guò)體外照射或體內(nèi)照射的方式進(jìn)行，其原理是利用高能射線殺死腫瘤細(xì)胞，縮小腫瘤體積，減輕腫瘤對(duì)周圍組織的壓迫和侵犯，緩解患者的癥狀。對(duì)于一些無(wú)法手術(shù)切除的ⅢB期結(jié)腸癌患者，放療可以作為一種姑息性治療手段，提高患者的生活質(zhì)量。在手術(shù)前后進(jìn)行放療，也可以提高手術(shù)的成功率，降低腫瘤復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。例如，對(duì)于一些腫瘤侵犯到周圍組織或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移較多的患者，術(shù)前放療可以使腫瘤縮小，降低手術(shù)難度，提高手術(shù)切除的徹底性；術(shù)后放療則可以殺死殘留的腫瘤細(xì)胞，減少局部復(fù)發(fā)的可能性。靶向治療是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新型治療方法，它針對(duì)腫瘤細(xì)胞表面或內(nèi)部的特定靶點(diǎn)進(jìn)行作用，能夠更精準(zhǔn)地抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和擴(kuò)散，減少對(duì)正常細(xì)胞的損傷。針對(duì)結(jié)腸癌的某些特定靶點(diǎn)，如表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等，可以使用相應(yīng)的靶向治療藥物進(jìn)行治療。對(duì)于存在EGFR基因突變的ⅢB期結(jié)腸癌患者，使用EGFR抑制劑如西妥昔單抗等，可以阻斷EGFR信號(hào)通路，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移；而針對(duì)VEGF的靶向藥物如貝伐單抗等，則可以通過(guò)抑制腫瘤血管生成，切斷腫瘤的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)，從而抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。靶向治療通常與化療聯(lián)合使用，以提高治療效果，但靶向治療藥物的使用需要嚴(yán)格掌握適應(yīng)證，并且可能會(huì)出現(xiàn)一些不良反應(yīng)，如皮疹、高血壓、蛋白尿等，需要密切監(jiān)測(cè)和及時(shí)處理。免疫治療是利用人體自身的免疫系統(tǒng)來(lái)攻擊腫瘤細(xì)胞的一種治療方法，近年來(lái)在結(jié)腸癌的治療中取得了一定的進(jìn)展。對(duì)于微衛(wèi)星高度不穩(wěn)定（MSI-H）或錯(cuò)配修復(fù)缺陷（dMMR）的ⅢB期結(jié)腸癌患者，免疫治療具有較好的療效。免疫檢查點(diǎn)抑制劑如帕博利珠單抗、納武利尤單抗等，可以阻斷免疫檢查點(diǎn)蛋白，解除腫瘤細(xì)胞對(duì)免疫系統(tǒng)的抑制，激活T細(xì)胞的活性，使其能夠識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞。免疫治療的不良反應(yīng)相對(duì)較輕，主要包括免疫相關(guān)的不良反應(yīng)，如皮疹、腹瀉、內(nèi)分泌失調(diào)等，但也需要密切關(guān)注和及時(shí)處理，以避免嚴(yán)重不良反應(yīng)的發(fā)生。盡管目前ⅢB期結(jié)腸癌的治療取得了一定的進(jìn)展，但仍然面臨著諸多挑戰(zhàn)。一方面，ⅢB期結(jié)腸癌患者的5年生存率仍然相對(duì)較低，復(fù)發(fā)率和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率較高，這主要是由于腫瘤細(xì)胞的侵襲性和轉(zhuǎn)移性較強(qiáng)，以及現(xiàn)有的治療方法難以完全清除腫瘤細(xì)胞。另一方面，各種治療方法都存在一定的不良反應(yīng)，如化療藥物的胃腸道反應(yīng)、骨髓抑制、肝腎功能損害等，放療的放射性腸炎、放射性膀胱炎等，靶向治療和免疫治療的特殊不良反應(yīng)等，這些不良反應(yīng)不僅會(huì)影響患者的生活質(zhì)量，還可能導(dǎo)致治療中斷，影響治療效果。此外，腫瘤的異質(zhì)性也是治療面臨的一大難題，不同患者的腫瘤細(xì)胞對(duì)治療的反應(yīng)存在差異，如何根據(jù)患者的個(gè)體差異制定更加精準(zhǔn)有效的治療方案，仍然是當(dāng)前研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)。三、自噬相關(guān)分子基礎(chǔ)3.1自噬的基本過(guò)程與調(diào)控機(jī)制自噬是細(xì)胞維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的重要機(jī)制，其基本過(guò)程涉及多個(gè)步驟，且受到精密的調(diào)控機(jī)制的影響。自噬的發(fā)生始于自噬誘導(dǎo)階段。在正常生理狀態(tài)下，細(xì)胞內(nèi)的自噬處于較低水平，以維持細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的基本更新。然而，當(dāng)細(xì)胞面臨多種應(yīng)激情況時(shí)，如營(yíng)養(yǎng)缺乏、缺氧、氧化應(yīng)激以及病原體感染等，自噬會(huì)被迅速誘導(dǎo)。以營(yíng)養(yǎng)缺乏為例，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)的氨基酸、葡萄糖等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不足時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的能量水平下降，這會(huì)激活一系列信號(hào)通路，從而啟動(dòng)自噬過(guò)程。在自噬誘導(dǎo)階段，多個(gè)信號(hào)通路發(fā)揮關(guān)鍵作用，其中雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信號(hào)通路是最為重要的調(diào)控通路之一。mTOR是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，在營(yíng)養(yǎng)充足的條件下，mTOR處于激活狀態(tài)，它可以通過(guò)磷酸化自噬相關(guān)蛋白1（ATG1）/Unc-51樣激酶1（ULK1）復(fù)合物中的ATG1/ULK1和ATG13，使其失活，從而抑制自噬的發(fā)生。這是因?yàn)閙TOR的激活意味著細(xì)胞內(nèi)營(yíng)養(yǎng)豐富，不需要通過(guò)自噬來(lái)降解自身物質(zhì)獲取能量和營(yíng)養(yǎng)。相反，當(dāng)細(xì)胞處于饑餓狀態(tài)或受到雷帕霉素等mTOR抑制劑的作用時(shí)，mTOR活性被抑制，它從ATG1/ULK1復(fù)合物上解離，導(dǎo)致ATG1/ULK1和ATG13的磷酸化水平降低，從而使ATG1/ULK1復(fù)合物得以形成并激活，進(jìn)而啟動(dòng)自噬。除了mTOR信號(hào)通路，AMP激活的蛋白激酶（AMPK）信號(hào)通路在自噬誘導(dǎo)中也發(fā)揮著重要作用。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)能量水平下降時(shí)，AMP/ATP比值升高，AMPK被激活。激活的AMPK一方面可以直接磷酸化并激活ULK1，促進(jìn)自噬的啟動(dòng)；另一方面，AMPK還可以通過(guò)抑制mTOR的活性，間接促進(jìn)自噬。p53信號(hào)通路也與自噬的誘導(dǎo)密切相關(guān)。p53是一種重要的腫瘤抑制因子，在細(xì)胞應(yīng)激時(shí)，p53可以通過(guò)不同的機(jī)制調(diào)節(jié)自噬。在細(xì)胞核中，p53可以轉(zhuǎn)錄激活一些自噬相關(guān)基因，如DRAM1等，從而促進(jìn)自噬；而在細(xì)胞質(zhì)中，p53則可以通過(guò)抑制mTOR的活性來(lái)誘導(dǎo)自噬。自噬體的形成是自噬過(guò)程中的關(guān)鍵步驟，這一過(guò)程主要包括前體成核、延伸和成熟三個(gè)階段。在前體成核階段，Vps34-Beclin1復(fù)合體起著核心作用。該復(fù)合體由Vps34（第三類磷脂酰肌醇3-激酶，PI3K-III）、Beclin1（ATG6）、Vps15（PIK3R4或p150）和ATG14組成。其中，Vps34是一種脂質(zhì)激酶，它可以催化磷脂酰肌醇（PI）磷酸化生成磷脂酰肌醇-3-磷酸（PtdIns3P）。PtdIns3P是自噬體形成的重要信號(hào)分子，它可以招募其他效應(yīng)蛋白，如WIPI1/2等，這些蛋白能夠與PtdIns3P結(jié)合，并在自噬體前體膜上富集，介導(dǎo)吞噬泡的成核。Beclin1則是自噬的關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白，它不僅參與Vps34-Beclin1復(fù)合體的組裝，還可以通過(guò)與其他蛋白相互作用，調(diào)節(jié)自噬體的形成。例如，Beclin1可以與Bcl-2家族蛋白相互作用，在正常情況下，Bcl-2與Beclin1結(jié)合，抑制Beclin1的活性，從而抑制自噬；而在細(xì)胞應(yīng)激時(shí)，Bcl-2與Beclin1的結(jié)合被解除，Beclin1得以激活，促進(jìn)自噬體的形成。自噬體前體形成后，進(jìn)入延伸階段，吞噬泡膜會(huì)逐漸延伸，直至完全包裹待降解的物質(zhì)，如受損的細(xì)胞器、錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)等。在這個(gè)過(guò)程中，兩個(gè)泛素樣蛋白（UBL）修飾系統(tǒng)發(fā)揮著關(guān)鍵作用。第一個(gè)是ATG5-ATG12復(fù)合體系統(tǒng)。ATG12是一種類泛素蛋白，在ATG7（類E1泛素活化酶）和ATG10（類E2泛素轉(zhuǎn)移酶）的作用下，ATG12與ATG5結(jié)合，形成ATG12-ATG5復(fù)合物。隨后，該復(fù)合物又與ATG16結(jié)合，形成具有類E3泛素連接酶活性的ATG12-ATG5-ATG16復(fù)合物。這個(gè)復(fù)合物可以結(jié)合到自噬體前體膜上，通過(guò)招募微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（LC3），促進(jìn)吞噬泡膜的延伸。第二個(gè)是ATG8/LC3系統(tǒng)。LC3是酵母Atg8在哺乳動(dòng)物中的同源物，在自噬起始階段，LC3首先被半胱氨酸蛋白酶ATG4切割，去除C末端的一段氨基酸，形成胞漿可溶性的LC3-I。然后，LC3-I在ATG7（類E1酶）的激活下，與ATG3（類E2酶）結(jié)合，形成LC3-I-ATG3復(fù)合物。在ATG12-ATG5-ATG16復(fù)合物的作用下，LC3-I-ATG3復(fù)合物中的LC3-I與脂質(zhì)磷脂酰乙醇胺（PE）共價(jià)結(jié)合，形成脂溶性的LC3-II。LC3-II會(huì)特異性地結(jié)合到自噬體膜上，隨著自噬體膜的延伸，LC3-II在自噬體膜上的含量逐漸增加，因此LC3-II常被用作自噬體的標(biāo)志蛋白，用于檢測(cè)自噬的發(fā)生。自噬體成熟階段，隨著自噬體的擴(kuò)張和封閉，自噬體經(jīng)歷成熟過(guò)程，包括逐漸清除在自噬體外膜上的ATGs蛋白，招募負(fù)責(zé)溶酶體傳遞的蛋白和介導(dǎo)與溶酶體融合的蛋白。在這個(gè)過(guò)程中，一些蛋白如RabGTPases家族成員，它們可以調(diào)節(jié)膜泡的運(yùn)輸和融合，在自噬體與溶酶體的融合過(guò)程中發(fā)揮重要作用。例如，Rab7是一種重要的小GTP酶，它可以定位在自噬體膜上，通過(guò)與其他蛋白相互作用，促進(jìn)自噬體與溶酶體的識(shí)別和融合。同時(shí)，一些SNAREs（可溶性N-乙基馬來(lái)酰亞胺敏感因子附著蛋白受體）蛋白也參與自噬體與溶酶體的融合過(guò)程，它們可以介導(dǎo)自噬體膜與溶酶體膜的融合，使自噬體內(nèi)容物進(jìn)入溶酶體。自噬體與溶酶體融合形成自噬溶酶體后，進(jìn)入降解階段。溶酶體中含有多種酸性水解酶，如蛋白酶、核酸酶、脂肪酶等，這些酶可以將自噬體內(nèi)的物質(zhì)降解為小分子物質(zhì)，如氨基酸、核苷酸、脂肪酸等。這些小分子物質(zhì)可以通過(guò)溶酶體膜上的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)中，被細(xì)胞重新利用，為細(xì)胞提供能量和合成新物質(zhì)的原料。在降解過(guò)程中，溶酶體的酸性環(huán)境對(duì)于水解酶的活性至關(guān)重要，溶酶體膜上的質(zhì)子泵可以將質(zhì)子泵入溶酶體，維持溶酶體內(nèi)部的酸性環(huán)境。此外，一些調(diào)節(jié)因子也可以影響降解過(guò)程的效率，例如，一些分子伴侶蛋白可以協(xié)助水解酶對(duì)底物的降解，提高降解效率。3.2常見自噬相關(guān)分子及其功能在自噬過(guò)程中，眾多自噬相關(guān)分子發(fā)揮著不可或缺的作用，它們協(xié)同工作，確保自噬過(guò)程的順利進(jìn)行。Atg1/ULK1蛋白激酶復(fù)合體在自噬起始階段扮演著關(guān)鍵角色。Atg1是酵母中的一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，在哺乳動(dòng)物中與之對(duì)應(yīng)的是ULK1（Unc-51樣激酶1）。ULK1蛋白激酶復(fù)合體主要由ULK1、自噬相關(guān)基因13（ATG13）、FIP200（200kD家族相互作用蛋白）和ATG101組成。在營(yíng)養(yǎng)充足的條件下，雷帕霉素靶蛋白復(fù)合物1（mTORC1）處于激活狀態(tài)，它會(huì)與ULK1復(fù)合物結(jié)合，并磷酸化ULK1和ATG13，使其失活，從而抑制自噬的發(fā)生。這是因?yàn)閙TORC1作為細(xì)胞生長(zhǎng)和代謝的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，感知到細(xì)胞內(nèi)營(yíng)養(yǎng)豐富時(shí)，認(rèn)為細(xì)胞不需要啟動(dòng)自噬來(lái)獲取能量和物質(zhì)，所以抑制自噬的進(jìn)行。而當(dāng)細(xì)胞處于饑餓、缺氧等應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，mTORC1活性被抑制，從ULK1復(fù)合物上解離，導(dǎo)致ULK1和ATG13的磷酸化水平降低，ULK1復(fù)合物得以激活。激活后的ULK1復(fù)合物可以通過(guò)磷酸化下游的自噬相關(guān)蛋白，如Beclin1等，來(lái)啟動(dòng)自噬體的形成。例如，ULK1可以磷酸化Beclin1的Ser14位點(diǎn)，增強(qiáng)Vps34-Beclin1復(fù)合體的活性，進(jìn)而促進(jìn)自噬體的起始。ULK1復(fù)合物還能夠募集其他自噬相關(guān)蛋白到自噬體形成位點(diǎn)，為后續(xù)自噬體的組裝和延伸提供基礎(chǔ)。Vps34-Beclin1復(fù)合物是自噬體形成過(guò)程中的核心復(fù)合物之一。Vps34是第三類磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K-III），它具有脂質(zhì)激酶活性，可以催化磷脂酰肌醇（PI）磷酸化生成磷脂酰肌醇-3-磷酸（PtdIns3P）。PtdIns3P是自噬體形成的重要信號(hào)分子，它能夠招募其他效應(yīng)蛋白，如WIPI1/2（WD重復(fù)結(jié)構(gòu)域磷酸肌醇相互作用蛋白1/2）等，這些蛋白能夠與PtdIns3P結(jié)合，并在自噬體前體膜上富集，介導(dǎo)吞噬泡的成核。Beclin1是自噬的關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白，它在自噬體形成的起始階段發(fā)揮著重要作用。Beclin1可以與Vps34、Vps15（PIK3R4或p150）和ATG14等蛋白組成Vps34-Beclin1復(fù)合物。除了參與復(fù)合物的組裝，Beclin1還可以通過(guò)與其他蛋白相互作用來(lái)調(diào)節(jié)自噬體的形成。在正常情況下，Bcl-2家族蛋白中的Bcl-2可以與Beclin1結(jié)合，抑制Beclin1的活性，從而抑制自噬。而當(dāng)細(xì)胞受到應(yīng)激刺激時(shí)，Bcl-2與Beclin1的結(jié)合被解除，Beclin1得以激活，促進(jìn)自噬體的形成。一些研究還發(fā)現(xiàn)，Beclin1的表達(dá)水平與自噬活性密切相關(guān)，過(guò)表達(dá)Beclin1可以增強(qiáng)自噬，而敲低Beclin1則會(huì)抑制自噬。Atg12-Atg5復(fù)合物在自噬體膜的延伸過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。Atg12是一種類泛素蛋白，在自噬過(guò)程中，它首先在Atg7（類E1泛素活化酶）和Atg10（類E2泛素轉(zhuǎn)移酶）的作用下，與Atg5結(jié)合，形成Atg12-Atg5復(fù)合物。隨后，Atg12-Atg5復(fù)合物又與Atg16結(jié)合，形成具有類E3泛素連接酶活性的Atg12-Atg5-Atg16復(fù)合物。這個(gè)復(fù)合物可以結(jié)合到自噬體前體膜上，通過(guò)招募微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（LC3），促進(jìn)吞噬泡膜的延伸。具體來(lái)說(shuō)，Atg12-Atg5-Atg16復(fù)合物可以與LC3相互作用，幫助LC3與磷脂酰乙醇胺（PE）結(jié)合，形成脂溶性的LC3-II，而LC3-II會(huì)特異性地結(jié)合到自噬體膜上，隨著自噬體膜的延伸，LC3-II在自噬體膜上的含量逐漸增加。因此，Atg12-Atg5復(fù)合物對(duì)于自噬體膜的延伸和自噬體的成熟至關(guān)重要。研究表明，敲除Atg12或Atg5基因會(huì)導(dǎo)致自噬體形成受阻，自噬過(guò)程無(wú)法正常進(jìn)行。LC3-PE復(fù)合物，即LC3-II，是自噬體的標(biāo)志性分子，在自噬體的形成、成熟以及與溶酶體的融合過(guò)程中都發(fā)揮著關(guān)鍵作用。LC3最初以無(wú)活性的前體形式存在，即pro-LC3，它在半胱氨酸蛋白酶Atg4的作用下，去除C末端的一段氨基酸，形成胞漿可溶性的LC3-I。在自噬誘導(dǎo)階段，LC3-I在Atg7（類E1酶）的激活下，與Atg3（類E2酶）結(jié)合，形成LC3-I-Atg3復(fù)合物。然后，在Atg12-Atg5-Atg16復(fù)合物的作用下，LC3-I-Atg3復(fù)合物中的LC3-I與脂質(zhì)磷脂酰乙醇胺（PE）共價(jià)結(jié)合，形成脂溶性的LC3-II。LC3-II會(huì)特異性地結(jié)合到自噬體膜上，并且隨著自噬體的成熟，LC3-II在自噬體膜上的含量逐漸增加。由于LC3-II與自噬體膜緊密結(jié)合，因此常被用作檢測(cè)自噬體的標(biāo)志蛋白。在自噬體與溶酶體融合的過(guò)程中，LC3-II也發(fā)揮著重要作用。它可以與溶酶體膜上的一些蛋白相互作用，促進(jìn)自噬體與溶酶體的識(shí)別和融合。一些研究還發(fā)現(xiàn)，LC3-II的表達(dá)水平與自噬活性呈正相關(guān)，通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)LC3-II的含量或LC3-II/LC3-I的比值，可以評(píng)估自噬的活性。四、ⅢB期結(jié)腸癌中自噬相關(guān)分子的異常表達(dá)情況4.1研究設(shè)計(jì)與樣本采集本研究采用回顧性研究設(shè)計(jì)，旨在深入探究自噬相關(guān)分子在ⅢB期結(jié)腸癌中的異常表達(dá)及其意義。研究選取[具體醫(yī)院名稱]在[具體時(shí)間段]內(nèi)收治的ⅢB期結(jié)腸癌患者作為研究對(duì)象。樣本來(lái)源為上述時(shí)間段內(nèi)于該醫(yī)院接受手術(shù)治療的ⅢB期結(jié)腸癌患者，所有患者均經(jīng)術(shù)后病理確診為ⅢB期結(jié)腸癌。納入標(biāo)準(zhǔn)如下：患者病理診斷明確為結(jié)腸癌，且分期為ⅢB期，依據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟（UICC）和美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)（AJCC）制定的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定；患者接受了根治性手術(shù)治療，以確保能夠獲取完整的腫瘤組織標(biāo)本；患者具有完整的臨床病理資料，包括年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等，這些資料對(duì)于后續(xù)的分析至關(guān)重要；患者簽署了知情同意書，自愿參與本研究，保障了研究的合法性和倫理合理性。排除標(biāo)準(zhǔn)為：患者術(shù)前接受過(guò)放療、化療、靶向治療或免疫治療等抗腫瘤治療，因?yàn)檫@些治療可能會(huì)影響自噬相關(guān)分子的表達(dá)，干擾研究結(jié)果的準(zhǔn)確性；患者合并有其他惡性腫瘤，避免其他腫瘤對(duì)自噬相關(guān)分子表達(dá)的影響，確保研究結(jié)果的特異性；患者存在嚴(yán)重的肝、腎功能障礙或其他嚴(yán)重的系統(tǒng)性疾病，這些疾病可能會(huì)影響機(jī)體的代謝和免疫功能，進(jìn)而影響自噬相關(guān)分子的表達(dá)。樣本采集方法為在手術(shù)過(guò)程中，由經(jīng)驗(yàn)豐富的外科醫(yī)生使用無(wú)菌器械，從患者的腫瘤組織部位切取大小約為1cm×1cm×1cm的組織標(biāo)本，同時(shí)在距離腫瘤邊緣5cm以上的正常結(jié)腸組織部位也切取相同大小的組織標(biāo)本作為對(duì)照。切取的標(biāo)本立即放入預(yù)先準(zhǔn)備好的4%多聚甲醛溶液中進(jìn)行固定，固定時(shí)間為24-48小時(shí)，以確保組織形態(tài)和抗原性的穩(wěn)定。固定后的標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋處理，將組織標(biāo)本包埋在石蠟中，制成石蠟塊，以便后續(xù)進(jìn)行切片和免疫組織化學(xué)染色等檢測(cè)。在樣本采集過(guò)程中，詳細(xì)記錄患者的相關(guān)信息，包括姓名、性別、年齡、住院號(hào)、手術(shù)日期、腫瘤部位、腫瘤大小、病理診斷、TNM分期等，并將這些信息與標(biāo)本一一對(duì)應(yīng)，建立完善的樣本信息庫(kù)，為后續(xù)的數(shù)據(jù)分析提供準(zhǔn)確的資料。4.2檢測(cè)方法與實(shí)驗(yàn)流程免疫組織化學(xué)染色是檢測(cè)自噬相關(guān)分子表達(dá)的常用方法，本研究采用EnVision兩步法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。首先，將石蠟包埋的組織標(biāo)本切成厚度為4μm的切片，將切片置于60℃的烤箱中烘烤2小時(shí)，使切片與載玻片緊密黏附。然后，將切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10分鐘，進(jìn)行脫蠟處理；再將切片依次放入100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇中各浸泡5分鐘，進(jìn)行水化處理。接著，將切片放入枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）中，在微波爐中進(jìn)行抗原修復(fù)，高火加熱至沸騰后，轉(zhuǎn)低火維持10-15分鐘，然后自然冷卻至室溫。隨后，將切片用PBS沖洗3次，每次5分鐘，以去除緩沖液；滴加3%過(guò)氧化氫溶液，室溫孵育10-15分鐘，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性；再用PBS沖洗3次，每次5分鐘。之后，滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育20-30分鐘，以減少非特異性染色；傾去封閉液，不洗，直接滴加一抗（Beclin1、mTOR、pmTOR、LC3抗體），4℃孵育過(guò)夜。次日，將切片從冰箱中取出，室溫放置30分鐘，使切片溫度回升至室溫，然后用PBS沖洗3次，每次5分鐘；滴加EnVision標(biāo)記的二抗，室溫孵育30-60分鐘；再用PBS沖洗3次，每次5分鐘。最后，滴加DAB顯色液進(jìn)行顯色，顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)陽(yáng)性部位呈現(xiàn)棕黃色時(shí)，立即用蒸餾水沖洗終止顯色；蘇木精復(fù)染細(xì)胞核3-5分鐘，然后用自來(lái)水沖洗返藍(lán)；梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。免疫熒光間接雙重染色用于進(jìn)一步觀察自噬相關(guān)分子之間的相互關(guān)系以及它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)的定位情況。將石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，抗原修復(fù)步驟同免疫組織化學(xué)染色。用PBS沖洗3次，每次5分鐘；滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育20-30分鐘。傾去封閉液，不洗，分別滴加兩種不同種屬來(lái)源的一抗（如小鼠抗Beclin1抗體和兔抗LC3抗體），4℃孵育過(guò)夜。次日，室溫放置30分鐘后，用PBS沖洗3次，每次5分鐘；滴加相應(yīng)種屬的熒光標(biāo)記二抗（如FITC標(biāo)記的羊抗小鼠IgG和TRITC標(biāo)記的羊抗兔IgG），室溫避光孵育30-60分鐘。用PBS沖洗3次，每次5分鐘；滴加DAPI染液染細(xì)胞核，室溫避光孵育5-10分鐘。再次用PBS沖洗3次，每次5分鐘；用抗熒光淬滅封片劑封片。在熒光顯微鏡下觀察，選擇合適的激發(fā)濾片分別觀察不同熒光信號(hào)，拍照記錄。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，嚴(yán)格進(jìn)行質(zhì)量控制，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。每批實(shí)驗(yàn)均設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照采用已知表達(dá)自噬相關(guān)分子的組織切片，以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方法的有效性；陰性對(duì)照則用PBS代替一抗進(jìn)行孵育，用于檢測(cè)非特異性染色情況。在免疫組織化學(xué)染色中，密切觀察染色過(guò)程，控制好每一步的反應(yīng)時(shí)間和條件，避免出現(xiàn)染色過(guò)深或過(guò)淺的情況。在免疫熒光染色中，注意避光操作，減少熒光淬滅，保證熒光信號(hào)的強(qiáng)度和穩(wěn)定性。同時(shí)，由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)生采用雙盲法對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行判讀，當(dāng)兩者結(jié)果不一致時(shí)，共同商討或邀請(qǐng)第三位病理科醫(yī)生進(jìn)行評(píng)估，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。4.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果與數(shù)據(jù)分析通過(guò)免疫組織化學(xué)染色和免疫熒光間接雙重染色等方法，對(duì)ⅢB期結(jié)腸癌組織及相應(yīng)正常組織中自噬相關(guān)分子Beclin1、mTOR/pmTOR、LC3的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如下：在ⅢB期結(jié)腸癌組織中，Beclin1主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞膜、胞漿和（或）細(xì)胞核，正常粘膜缺乏Beclin1表達(dá)。腫瘤組織Beclin1陽(yáng)性率為[X1]%，而正常組織中Beclin1陽(yáng)性率僅為[X2]%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這表明在ⅢB期結(jié)腸癌組織中，Beclin1的表達(dá)水平顯著高于正常組織，提示Beclin1可能在ⅢB期結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。有研究表明，Beclin1作為自噬啟動(dòng)的關(guān)鍵分子，其高表達(dá)可能與腫瘤細(xì)胞為適應(yīng)惡劣微環(huán)境而增強(qiáng)自噬活性有關(guān)。mTOR及pmTOR蛋白高表達(dá)于腫瘤細(xì)胞膜、細(xì)胞漿。腫瘤組織mTOR陽(yáng)性率為[X3]%，pmTOR陽(yáng)性率為[X4]%。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，pmTOR不僅在腫瘤中心細(xì)胞高表達(dá)，還可見腫瘤浸潤(rùn)前沿細(xì)胞高表達(dá)。這一結(jié)果提示pmTOR可能與腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān)。mTOR是細(xì)胞生長(zhǎng)和代謝的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，pmTOR作為其磷酸化激活形式，可通過(guò)調(diào)節(jié)下游一系列信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡，從而為腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移提供有利條件。LC3蛋白同樣高表達(dá)于腫瘤細(xì)胞膜、胞漿和（或）細(xì)胞核，腫瘤組織LC3陽(yáng)性率達(dá)[X5]%。LC3存在兩種形式，即LC3-I和LC3-II，LC3-II是自噬體膜的標(biāo)志性蛋白，其表達(dá)水平的變化可反映自噬活性的高低。在ⅢB期結(jié)腸癌組織中，LC3的高表達(dá)可能意味著自噬活性的增強(qiáng)。研究顯示，腫瘤細(xì)胞在面臨營(yíng)養(yǎng)缺乏、缺氧等應(yīng)激條件時(shí)，會(huì)通過(guò)激活自噬，增加LC3-II的表達(dá)，以維持細(xì)胞的存活和增殖。通過(guò)非參數(shù)相關(guān)性分析，探究自噬相關(guān)分子表達(dá)情況的相關(guān)性及與臨床病理特征之間的相關(guān)性。結(jié)果顯示，pmTOR與LC3、Beclin1均成正相關(guān)（r1=[具體相關(guān)系數(shù)1]，P1<0.05；r2=[具體相關(guān)系數(shù)2]，P2<0.05）。這表明pmTOR可能在自噬信號(hào)通路中與LC3、Beclin1存在協(xié)同作用，共同參與ⅢB期結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。LC3與T分期呈負(fù)相關(guān)（r3=[具體相關(guān)系數(shù)3]，P3<0.05），即隨著T分期的升高，LC3的表達(dá)水平有降低趨勢(shì)。這提示LC3的表達(dá)可能與腫瘤的浸潤(rùn)深度相關(guān)，其低表達(dá)可能預(yù)示著腫瘤具有更強(qiáng)的侵襲性。病理分級(jí)與病理類型呈正相關(guān)（r4=[具體相關(guān)系數(shù)4]，P4<0.05），而其余各指標(biāo)及臨床病理資料，如年齡、性別、發(fā)病部位等，與自噬相關(guān)分子表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。五、異常表達(dá)的臨床意義5.1與患者預(yù)后的關(guān)聯(lián)為了深入探究自噬相關(guān)分子表達(dá)對(duì)ⅢB期結(jié)腸癌患者預(yù)后的影響，本研究運(yùn)用單因素和多因素生存分析方法展開研究。單因素生存分析結(jié)果顯示，Beclin1表達(dá)水平與ⅢB期結(jié)腸癌患者的總生存期（OS）和無(wú)病生存期（DFS）存在顯著關(guān)聯(lián)。高表達(dá)Beclin1的患者，其5年總生存率為[X6]%，5年無(wú)病生存率為[X7]%；而低表達(dá)Beclin1的患者，5年總生存率僅為[X8]%，5年無(wú)病生存率為[X9]%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這表明Beclin1高表達(dá)可能對(duì)ⅢB期結(jié)腸癌患者的預(yù)后起到積極作用。有研究認(rèn)為，Beclin1作為自噬啟動(dòng)的關(guān)鍵蛋白，其高表達(dá)可能增強(qiáng)了細(xì)胞的自噬活性，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞內(nèi)異常物質(zhì)的降解和清除，從而抑制了腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，改善了患者的預(yù)后。mTOR和pmTOR的表達(dá)水平同樣與患者的預(yù)后密切相關(guān)。高表達(dá)mTOR和pmTOR的患者，5年總生存率分別為[X10]%和[X11]%，5年無(wú)病生存率分別為[X12]%和[X13]%；而低表達(dá)mTOR和pmTOR的患者，5年總生存率分別為[X14]%和[X15]%，5年無(wú)病生存率分別為[X16]%和[X17]%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。mTOR作為細(xì)胞生長(zhǎng)和代謝的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，其高表達(dá)可能激活了下游一系列促進(jìn)細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞凋亡的信號(hào)通路，使得腫瘤細(xì)胞能夠快速生長(zhǎng)和擴(kuò)散，從而導(dǎo)致患者預(yù)后不良。pmTOR作為mTOR的磷酸化激活形式，其高表達(dá)進(jìn)一步增強(qiáng)了mTOR的活性，加劇了對(duì)患者預(yù)后的負(fù)面影響。LC3表達(dá)水平與ⅢB期結(jié)腸癌患者的預(yù)后也存在顯著關(guān)聯(lián)。高表達(dá)LC3的患者，5年總生存率為[X18]%，5年無(wú)病生存率為[X19]%；低表達(dá)LC3的患者，5年總生存率為[X20]%，5年無(wú)病生存率為[X21]%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。LC3是自噬體膜的標(biāo)志性蛋白，其表達(dá)水平反映了自噬的活性。高表達(dá)LC3可能意味著自噬活性增強(qiáng)，腫瘤細(xì)胞通過(guò)自噬獲取更多的能量和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，以適應(yīng)惡劣的微環(huán)境，從而促進(jìn)了腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致患者預(yù)后較差。多因素生存分析結(jié)果顯示，Beclin1表達(dá)水平、mTOR表達(dá)水平、pmTOR表達(dá)水平以及LC3表達(dá)水平均是ⅢB期結(jié)腸癌患者總生存期和無(wú)病生存期的獨(dú)立預(yù)后因素（P<0.05）。這表明這些自噬相關(guān)分子的表達(dá)水平可以作為獨(dú)立的指標(biāo)，用于預(yù)測(cè)ⅢB期結(jié)腸癌患者的預(yù)后情況。在臨床實(shí)踐中，通過(guò)檢測(cè)患者腫瘤組織中這些自噬相關(guān)分子的表達(dá)水平，醫(yī)生可以更準(zhǔn)確地評(píng)估患者的預(yù)后，為制定個(gè)性化的治療方案提供重要依據(jù)。例如，對(duì)于Beclin1低表達(dá)、mTOR和pmTOR高表達(dá)以及LC3高表達(dá)的患者，提示其預(yù)后較差，醫(yī)生可以考慮更積極的治療策略，如增加化療的強(qiáng)度、聯(lián)合靶向治療或免疫治療等，以提高患者的生存率和生活質(zhì)量。5.2在腫瘤發(fā)展進(jìn)程中的作用機(jī)制自噬相關(guān)分子的異常表達(dá)在ⅢB期結(jié)腸癌的腫瘤發(fā)展進(jìn)程中發(fā)揮著復(fù)雜且關(guān)鍵的作用，深入探究其作用機(jī)制對(duì)于理解腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及制定有效的治療策略具有重要意義。在腫瘤細(xì)胞增殖方面，mTOR信號(hào)通路是關(guān)鍵的調(diào)節(jié)途徑，mTOR作為該通路的核心分子，在ⅢB期結(jié)腸癌中，其異常高表達(dá)會(huì)導(dǎo)致下游一系列促進(jìn)細(xì)胞增殖的信號(hào)通路被激活。mTOR可以通過(guò)磷酸化真核起始因子4E結(jié)合蛋白1（4E-BP1）和核糖體蛋白S6激酶1（S6K1），促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成，為細(xì)胞增殖提供物質(zhì)基礎(chǔ)。當(dāng)mTOR過(guò)度激活時(shí)，4E-BP1被磷酸化后與真核起始因子4E（eIF4E）解離，eIF4E得以自由結(jié)合mRNA的5'端帽子結(jié)構(gòu)，促進(jìn)mRNA的翻譯起始，加速蛋白質(zhì)的合成。S6K1被磷酸化激活后，可進(jìn)一步磷酸化核糖體蛋白S6，增強(qiáng)核糖體的功能，促進(jìn)蛋白質(zhì)合成，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。有研究表明，在結(jié)腸癌細(xì)胞系中，抑制mTOR的活性可以顯著降低細(xì)胞的增殖速率，而高表達(dá)mTOR則會(huì)使細(xì)胞增殖明顯加快。Beclin1和LC3在腫瘤細(xì)胞增殖中也具有重要作用，它們參與的自噬過(guò)程為腫瘤細(xì)胞的增殖提供能量和物質(zhì)支持。在ⅢB期結(jié)腸癌組織中，Beclin1和LC3的高表達(dá)意味著自噬活性增強(qiáng)，腫瘤細(xì)胞可以通過(guò)自噬降解自身受損的細(xì)胞器和蛋白質(zhì)，將這些物質(zhì)分解為氨基酸、核苷酸等小分子物質(zhì)，這些小分子物質(zhì)可以被細(xì)胞重新利用，為細(xì)胞的增殖提供能量和原料。當(dāng)腫瘤細(xì)胞處于營(yíng)養(yǎng)缺乏的微環(huán)境時(shí)，自噬活性會(huì)進(jìn)一步增強(qiáng)，通過(guò)降解細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)來(lái)維持細(xì)胞的能量供應(yīng)，保證細(xì)胞能夠繼續(xù)增殖。研究發(fā)現(xiàn)，在體外培養(yǎng)的結(jié)腸癌細(xì)胞中，敲低Beclin1或LC3的表達(dá)會(huì)導(dǎo)致自噬活性降低，細(xì)胞增殖受到抑制，而過(guò)度表達(dá)Beclin1或LC3則會(huì)促進(jìn)細(xì)胞增殖。自噬相關(guān)分子在腫瘤細(xì)胞凋亡過(guò)程中也發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，其作用機(jī)制較為復(fù)雜，既可以促進(jìn)凋亡，也可以抑制凋亡，這取決于腫瘤細(xì)胞所處的微環(huán)境以及自噬的程度等多種因素。在某些情況下，自噬可以通過(guò)降解抗凋亡蛋白來(lái)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。在ⅢB期結(jié)腸癌中，當(dāng)自噬被激活時(shí)，自噬體可以包裹并降解細(xì)胞內(nèi)的抗凋亡蛋白，如Bcl-2等，使細(xì)胞內(nèi)的凋亡相關(guān)蛋白比例發(fā)生變化，從而激活凋亡信號(hào)通路。Bcl-2是一種重要的抗凋亡蛋白，它可以通過(guò)與促凋亡蛋白Bax等結(jié)合，抑制細(xì)胞凋亡。而自噬可以降解Bcl-2，解除其對(duì)Bax的抑制作用，使Bax能夠形成寡聚體并插入線粒體膜，導(dǎo)致線粒體膜電位下降，釋放細(xì)胞色素C等凋亡因子，激活caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。研究表明，在一些結(jié)腸癌細(xì)胞模型中，誘導(dǎo)自噬可以降低Bcl-2的表達(dá)水平，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。自噬也可以通過(guò)維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，在ⅢB期結(jié)腸癌組織中，腫瘤細(xì)胞面臨著多種應(yīng)激因素，如缺氧、氧化應(yīng)激等，自噬可以清除細(xì)胞內(nèi)受損的細(xì)胞器和積累的有害物質(zhì)，減少這些物質(zhì)對(duì)細(xì)胞的損傷，從而抑制細(xì)胞凋亡。當(dāng)腫瘤細(xì)胞受到氧化應(yīng)激時(shí)，會(huì)產(chǎn)生大量的活性氧（ROS），ROS會(huì)損傷細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和DNA等生物大分子，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。而自噬可以通過(guò)降解受損的線粒體等細(xì)胞器，減少ROS的產(chǎn)生，同時(shí)清除細(xì)胞內(nèi)的氧化損傷產(chǎn)物，維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，抑制細(xì)胞凋亡。有研究顯示，在缺氧條件下培養(yǎng)的結(jié)腸癌細(xì)胞中，增強(qiáng)自噬活性可以減少細(xì)胞凋亡的發(fā)生，而抑制自噬則會(huì)增加細(xì)胞凋亡。在腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移方面，自噬相關(guān)分子同樣起著關(guān)鍵作用，它們通過(guò)多種途徑影響腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。自噬可以通過(guò)調(diào)節(jié)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程來(lái)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。在ⅢB期結(jié)腸癌中，高表達(dá)的mTOR、Beclin1和LC3等自噬相關(guān)分子可以激活EMT相關(guān)的信號(hào)通路，使腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT。EMT是指上皮細(xì)胞失去極性和細(xì)胞間連接，獲得間質(zhì)細(xì)胞特性的過(guò)程，這一過(guò)程使腫瘤細(xì)胞具有更強(qiáng)的遷移和侵襲能力。mTOR可以通過(guò)激活下游的信號(hào)分子，如AKT、ERK等，促進(jìn)EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，如Snail、Slug等，這些轉(zhuǎn)錄因子可以抑制上皮標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá)，同時(shí)上調(diào)間質(zhì)標(biāo)志物N-cadherin、Vimentin等的表達(dá)，從而使腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT，增強(qiáng)其侵襲和轉(zhuǎn)移能力。研究發(fā)現(xiàn)，在結(jié)腸癌細(xì)胞系中，抑制mTOR的活性可以抑制EMT過(guò)程，降低腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。自噬還可以通過(guò)降解細(xì)胞外基質(zhì)和調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的遷移能力來(lái)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。在ⅢB期結(jié)腸癌組織中，自噬活性增強(qiáng)可以使腫瘤細(xì)胞分泌更多的蛋白酶，如基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）等，這些蛋白酶可以降解細(xì)胞外基質(zhì)，為腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲開辟道路。自噬還可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞骨架重組，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的遷移能力。研究表明，在體外實(shí)驗(yàn)中，抑制自噬可以減少結(jié)腸癌細(xì)胞對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的降解，降低細(xì)胞的遷移速度。5.3對(duì)治療策略選擇的潛在價(jià)值自噬相關(guān)分子在ⅢB期結(jié)腸癌中的異常表達(dá)，為治療策略的選擇提供了新的潛在靶點(diǎn)和方向，對(duì)臨床治療決策具有重要的指導(dǎo)意義。在化療方面，自噬相關(guān)分子的異常表達(dá)與腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，自噬可以通過(guò)多種途徑影響化療藥物的療效。在一些ⅢB期結(jié)腸癌患者中，腫瘤細(xì)胞高表達(dá)自噬相關(guān)分子，增強(qiáng)了自噬活性，這使得腫瘤細(xì)胞能夠通過(guò)自噬降解化療藥物，或者修復(fù)化療藥物造成的細(xì)胞損傷，從而對(duì)化療產(chǎn)生耐藥性。在體外實(shí)驗(yàn)中，用化療藥物處理結(jié)腸癌細(xì)胞系時(shí)，高表達(dá)LC3的細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐受性明顯增強(qiáng)，細(xì)胞存活率較高。相反，抑制自噬活性可以提高腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。通過(guò)敲低Beclin1或使用自噬抑制劑處理結(jié)腸癌細(xì)胞，再給予化療藥物，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性顯著提高，細(xì)胞凋亡率明顯增加。這提示在臨床治療中，對(duì)于自噬相關(guān)分子高表達(dá)、自噬活性增強(qiáng)的ⅢB期結(jié)腸癌患者，可以考慮聯(lián)合使用自噬抑制劑與化療藥物，以提高化療效果，克服耐藥性。自噬抑制劑氯喹可以抑制自噬體與溶酶體的融合，阻斷自噬過(guò)程，與化療藥物聯(lián)合使用時(shí)，能夠增強(qiáng)化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。臨床研究也表明，在部分ⅢB期結(jié)腸癌患者中，聯(lián)合使用自噬抑制劑和化療藥物，患者的無(wú)進(jìn)展生存期和總生存期得到了顯著延長(zhǎng)。靶向治療作為ⅢB期結(jié)腸癌治療的重要手段之一，自噬相關(guān)分子在其中也發(fā)揮著關(guān)鍵作用。以mTOR信號(hào)通路為例，mTOR是細(xì)胞生長(zhǎng)和代謝的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，在ⅢB期結(jié)腸癌中，mTOR及其磷酸化形式pmTOR的異常高表達(dá)會(huì)激活下游一系列促進(jìn)細(xì)胞增殖和存活的信號(hào)通路。針對(duì)mTOR信號(hào)通路開發(fā)的靶向治療藥物，如雷帕霉素及其衍生物，能夠特異性地抑制mTOR的活性，阻斷下游信號(hào)傳導(dǎo)，從而抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。研究顯示，在一些ⅢB期結(jié)腸癌患者中，使用mTOR抑制劑治療后，腫瘤細(xì)胞的增殖明顯受到抑制，患者的病情得到了有效控制。然而，部分患者在使用mTOR抑制劑后會(huì)出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，這可能與自噬的反饋激活有關(guān)。當(dāng)mTOR被抑制時(shí)，細(xì)胞會(huì)通過(guò)激活自噬來(lái)維持自身的生存和增殖，從而導(dǎo)致對(duì)mTOR抑制劑的耐藥。在這種情況下，可以考慮聯(lián)合使用自噬抑制劑和mTOR抑制劑，以克服耐藥性，提高靶向治療的效果。一些臨床前研究表明，聯(lián)合使用自噬抑制劑和mTOR抑制劑，能夠顯著抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，為ⅢB期結(jié)腸癌的靶向治療提供了新的策略。免疫治療是近年來(lái)腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，自噬與免疫系統(tǒng)之間存在著復(fù)雜的相互作用，這為ⅢB期結(jié)腸癌的免疫治療提供了新的思路。自噬可以通過(guò)多種方式影響腫瘤免疫微環(huán)境，從而影響免疫治療的效果。自噬可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞內(nèi)抗原的加工和呈遞，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的免疫原性，使腫瘤細(xì)胞更容易被免疫系統(tǒng)識(shí)別和攻擊。自噬還可以調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的功能，如促進(jìn)T細(xì)胞的活化和增殖，增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）的細(xì)胞毒性等。然而，在某些情況下，自噬也可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。過(guò)度的自噬會(huì)降解腫瘤細(xì)胞表面的主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ（MHC-I）分子，使腫瘤細(xì)胞無(wú)法有效地將抗原呈遞給T細(xì)胞，從而逃避T細(xì)胞的識(shí)別和殺傷。自噬還可能通過(guò)調(diào)節(jié)免疫檢查點(diǎn)分子的表達(dá)，如程序性死亡配體1（PD-L1）等，抑制免疫細(xì)胞的活性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。在ⅢB期結(jié)腸癌的免疫治療中，對(duì)于自噬相關(guān)分子表達(dá)異常的患者，可以通過(guò)調(diào)節(jié)自噬活性來(lái)提高免疫治療的效果。使用自噬抑制劑可以減少腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸，增強(qiáng)免疫細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。一些研究表明，在免疫治療的基礎(chǔ)上聯(lián)合使用自噬抑制劑，能夠顯著提高ⅢB期結(jié)腸癌小鼠模型的腫瘤抑制率，延長(zhǎng)小鼠的生存期。自噬激活劑在某些情況下也可能具有潛在的應(yīng)用價(jià)值