冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植：對大鼠急性心肌梗死治療機(jī)制與效果的深度剖析一、引言1.1研究背景與意義急性心肌梗死（AMI）是臨床上極為嚴(yán)重的心血管疾病之一，已然成為威脅人類健康的主要?dú)⑹?。在冠狀?dòng)脈粥樣硬化病變的基礎(chǔ)上，冠脈管腔內(nèi)血栓形成，造成急性冠脈閉塞，相應(yīng)心肌細(xì)胞供血中斷，從而導(dǎo)致心肌細(xì)胞嚴(yán)重而持久的急性缺血性壞死。近年來，AMI的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈上升趨勢，且發(fā)病年齡逐漸趨于年輕化。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，每年全球約有1790萬人死于心血管疾病，其中AMI占據(jù)相當(dāng)大的比例。在中國，AMI的發(fā)病率同樣不容小覷，且死亡率居高不下，給患者家庭和社會(huì)帶來了沉重的負(fù)擔(dān)。目前，臨床上治療AMI的主要方法包括藥物治療、溶栓治療和急診經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療（PCI）等再灌注治療。藥物治療主要通過抗血小板、抗凝、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈等藥物來緩解癥狀、減少血栓形成和改善心肌供血，但對于已經(jīng)壞死的心肌細(xì)胞無法起到修復(fù)作用。溶栓治療和急診PCI旨在盡快使閉塞的血管再通，恢復(fù)心肌的血液灌注，然而，這些治療方法存在一定的局限性。一方面，由于急診PCI在基層醫(yī)院可能并未開展或者技術(shù)不成熟，導(dǎo)致患者轉(zhuǎn)入上級(jí)醫(yī)院時(shí)已經(jīng)造成部分心肌細(xì)胞缺血壞死；另一方面，溶栓治療又有其嚴(yán)格的適應(yīng)證、禁忌證，部分患者不宜進(jìn)行溶栓治療，同樣造成心肌梗死。更為關(guān)鍵的是，即使患者接受了及時(shí)有效的再灌注治療，壞死的心肌細(xì)胞仍會(huì)被纖維瘢痕組織替代，導(dǎo)致心臟功能受損，引發(fā)心力衰竭、心律失常等嚴(yán)重并發(fā)癥，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和預(yù)后。干細(xì)胞治療作為一種新興的治療手段，為AMI的治療帶來了新的希望。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BM-MSCs）是一種具有多向分化潛能的成體干細(xì)胞，可分化為心肌樣細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞，同時(shí)分泌多種生長因子，促進(jìn)心肌再生和血管新生，抑制瘢痕組織形成，從而改善心臟功能。大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究表明，BM-MSCs移植對急性心?；颊叩淖笮氖沂湛s功能改善和心肌修復(fù)起到明顯的促進(jìn)作用，能夠顯著提高左室射血分?jǐn)?shù)，減小梗死面積。然而，心肌梗死后缺血缺氧的環(huán)境及早期炎癥反應(yīng)均不利于移植細(xì)胞的存活，致使其治療效果受到限制。如何提高移植干細(xì)胞的存活率和分化效率，進(jìn)一步增強(qiáng)其治療效果，成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)問題。傳統(tǒng)中藥在心血管疾病的治療中具有悠久的歷史和獨(dú)特的優(yōu)勢。冠心Ⅱ號(hào)是一種以活血化瘀為治則的經(jīng)典方劑，全方由丹參、川芎、赤芍、紅花、降香5味中藥組成?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，冠心Ⅱ號(hào)具有保護(hù)心肌缺血損傷、抑制心肌細(xì)胞凋亡、抗氧化、抗血小板凝集等多種藥理作用，臨床上常用于治療冠心病、心絞痛等心血管疾病。其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)血脂、抑制炎癥反應(yīng)、改善血管內(nèi)皮功能等有關(guān)。將冠心Ⅱ號(hào)與BM-MSCs移植聯(lián)合應(yīng)用于AMI的治療，可能具有協(xié)同作用，既能發(fā)揮BM-MSCs促進(jìn)心肌再生和修復(fù)的作用，又能利用冠心Ⅱ號(hào)改善心肌缺血缺氧環(huán)境、抑制炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡，從而提高移植干細(xì)胞的存活率和治療效果，為AMI的治療提供一種新的策略。本研究旨在通過建立大鼠急性心肌梗死模型，觀察冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對大鼠急性心肌梗死后心功能、心肌纖維化及相關(guān)指標(biāo)的影響，探討二者是否具有協(xié)同治療作用，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論支持。若該聯(lián)合治療方法能夠取得良好的效果，將有望為AMI患者帶來更有效的治療選擇，改善患者的預(yù)后和生活質(zhì)量，具有重要的臨床意義和應(yīng)用前景。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀1.2.1骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療急性心肌梗死的研究進(jìn)展骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BM-MSCs）移植治療急性心肌梗死的研究在國內(nèi)外均取得了顯著進(jìn)展。在國外，早在20世紀(jì)90年代，就有學(xué)者開始探索BM-MSCs在心肌修復(fù)中的潛力。研究發(fā)現(xiàn)，BM-MSCs具有多向分化潛能，在特定條件下可分化為心肌樣細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞。多項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，將BM-MSCs移植到急性心肌梗死的動(dòng)物模型中，能夠改善心臟功能，減小梗死面積。例如，德國的TOPCARE-AMI研究和BOOST研究，是較早開展的關(guān)于骨髓干細(xì)胞移植治療心肌梗死的大規(guī)模臨床研究。TOPCARE-AMI研究納入了急性心肌梗死患者，隨機(jī)分為干細(xì)胞治療組和對照組，結(jié)果顯示干細(xì)胞治療組在移植后3個(gè)月時(shí)左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）較對照組顯著提高，且梗死面積減小。BOOST研究也得到了類似的結(jié)果，進(jìn)一步證實(shí)了骨髓干細(xì)胞移植在短期內(nèi)可以有效改善心臟功能，且安全性較高。在國內(nèi)，對BM-MSCs移植治療急性心肌梗死的研究也日益深入。許多科研團(tuán)隊(duì)致力于優(yōu)化移植方法和提高移植效果的研究。通過對不同移植途徑（如冠狀動(dòng)脈內(nèi)注射、心肌內(nèi)注射、靜脈注射等）的比較，發(fā)現(xiàn)冠狀動(dòng)脈內(nèi)注射和心肌內(nèi)注射能夠使干細(xì)胞更有效地到達(dá)梗死區(qū)域，但冠狀動(dòng)脈內(nèi)注射可能存在微栓塞等風(fēng)險(xiǎn)，而心肌內(nèi)注射則需要開胸手術(shù)，對患者創(chuàng)傷較大；靜脈注射操作簡單，但干細(xì)胞在體內(nèi)的歸巢效率較低。此外，國內(nèi)研究還關(guān)注到BM-MSCs移植后細(xì)胞的存活、分化以及與宿主心肌細(xì)胞的整合情況。一些研究通過基因修飾等手段，增強(qiáng)BM-MSCs的抗凋亡能力和分化潛能，以提高治療效果。盡管BM-MSCs移植治療急性心肌梗死展現(xiàn)出了良好的應(yīng)用前景，但仍存在一些問題亟待解決。例如，移植細(xì)胞在缺血缺氧的心肌環(huán)境中存活率較低，大部分移植細(xì)胞在移植后短期內(nèi)死亡；細(xì)胞分化的調(diào)控機(jī)制尚未完全明確，導(dǎo)致分化為心肌細(xì)胞的效率不夠理想；長期安全性和有效性也需要進(jìn)一步觀察和評估。1.2.2冠心Ⅱ號(hào)治療急性心肌梗死的研究進(jìn)展冠心Ⅱ號(hào)作為一種經(jīng)典的活血化瘀方劑，在急性心肌梗死的治療研究方面也積累了豐富的成果。在國外，隨著中醫(yī)藥在國際上的認(rèn)可度逐漸提高，冠心Ⅱ號(hào)的研究也受到了一定關(guān)注。一些研究從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的角度，對冠心Ⅱ號(hào)的化學(xué)成分和作用機(jī)制進(jìn)行了分析。通過高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）等技術(shù)，鑒定出冠心Ⅱ號(hào)中含有多種生物堿、多糖、皂苷等化學(xué)成分。這些成分可能通過多種途徑發(fā)揮治療作用，如調(diào)節(jié)血脂、抑制炎癥反應(yīng)、改善血管內(nèi)皮功能等。在國內(nèi)，冠心Ⅱ號(hào)的研究更為深入和廣泛。大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究證實(shí)了其對急性心肌梗死的治療效果。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，采用冠狀動(dòng)脈結(jié)扎法制備急性心肌梗死模型，給予冠心Ⅱ號(hào)干預(yù)后，發(fā)現(xiàn)其能夠顯著減輕心肌缺血損傷，減少心肌梗死面積，改善心臟功能。其作用機(jī)制可能與抑制心肌細(xì)胞凋亡、抗氧化應(yīng)激、抗血小板凝集等有關(guān)。臨床研究也表明，冠心Ⅱ號(hào)可以緩解急性心肌梗死患者的癥狀，如胸痛、胸悶等，提高患者的生活質(zhì)量。一些臨床觀察還發(fā)現(xiàn)，冠心Ⅱ號(hào)與常規(guī)西藥聯(lián)合應(yīng)用，能夠增強(qiáng)治療效果，減少不良反應(yīng)的發(fā)生。然而，冠心Ⅱ號(hào)在治療急性心肌梗死方面也存在一些局限性。其作用機(jī)制尚未完全闡明，復(fù)方中的化學(xué)成分復(fù)雜，各成分之間的協(xié)同作用機(jī)制還需要進(jìn)一步研究；藥物的質(zhì)量控制和標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)也面臨一定挑戰(zhàn)，不同批次的藥物可能存在質(zhì)量差異，影響治療效果的穩(wěn)定性。1.2.3冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療急性心肌梗死的研究進(jìn)展近年來，冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療急性心肌梗死的研究逐漸興起，成為心血管領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。在國外，雖然相關(guān)研究相對較少，但已有一些初步的探索。有研究嘗試將二者聯(lián)合應(yīng)用于急性心肌梗死的動(dòng)物模型，觀察到聯(lián)合治療組在改善心臟功能、減小梗死面積等方面表現(xiàn)出一定的協(xié)同效應(yīng)。然而，這些研究還處于起步階段，樣本量較小，研究結(jié)果有待進(jìn)一步驗(yàn)證。在國內(nèi)，許多科研團(tuán)隊(duì)積極開展了冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合BM-MSCs移植治療急性心肌梗死的研究。劉小青等人的研究將SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組、模型組、冠心Ⅱ號(hào)組、細(xì)胞移植組、聯(lián)合組，通過結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支法建立急性心肌梗死模型。結(jié)果顯示，與模型組比較，冠心Ⅱ號(hào)組、細(xì)胞移植組和聯(lián)合組的心肌梗死邊緣區(qū)轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGFβ1）mRNA表達(dá)水平顯著降低；其中聯(lián)合組變化幅度優(yōu)于冠心Ⅱ號(hào)組和細(xì)胞移植組。同時(shí)，聯(lián)合組在減少心肌梗死大鼠膠原形成、減輕心肌纖維化程度方面效果最佳。倪玉霞等人的研究也得到了類似的結(jié)果，表明冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合BM-MSCs移植能夠協(xié)同改善急性心肌梗死模型鼠的心肌纖維化程度，可能與下調(diào)TGFβ1基因的表達(dá)有關(guān)。這些研究表明，冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合BM-MSCs移植治療急性心肌梗死具有協(xié)同作用，能夠在改善心臟功能、抑制心肌纖維化等方面發(fā)揮更顯著的效果。然而，目前該聯(lián)合治療方法的研究仍存在一些不足之處。研究主要集中在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段，臨床研究較少，缺乏大規(guī)模、多中心、隨機(jī)對照的臨床試驗(yàn)來驗(yàn)證其安全性和有效性；聯(lián)合治療的最佳時(shí)機(jī)、劑量和療程等還需要進(jìn)一步優(yōu)化；作用機(jī)制的研究也不夠深入，需要從分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等多個(gè)層面進(jìn)行深入探討。1.3研究目的與創(chuàng)新點(diǎn)本研究旨在通過建立大鼠急性心肌梗死模型，深入探究冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對大鼠急性心肌梗死后心功能、心肌纖維化及相關(guān)指標(biāo)的影響，明確二者聯(lián)合應(yīng)用是否具有協(xié)同治療作用，并初步探討其潛在的協(xié)同作用機(jī)制，從而為急性心肌梗死的臨床治療提供更豐富的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論支持。本研究的創(chuàng)新點(diǎn)主要體現(xiàn)在以下兩個(gè)方面：其一，采用多指標(biāo)綜合評估的方式。在實(shí)驗(yàn)過程中，不僅檢測了心功能相關(guān)指標(biāo)，如左室舒張末徑、左室收縮末徑、左室短軸縮短率、射血分?jǐn)?shù)等，全面評估心臟的收縮和舒張功能；還對心肌纖維化程度進(jìn)行了細(xì)致分析，包括Masson染色觀察心肌組織形態(tài)學(xué)變化、檢測血清中Ⅰ型前膠原羧基端肽和Ⅲ型前膠原氨基端肽的濃度等，從多個(gè)角度深入了解聯(lián)合治療對心肌梗死大鼠心臟的影響，為評估治療效果提供更全面、準(zhǔn)確的依據(jù)。其二，深入探索聯(lián)合作用機(jī)制。通過熒光定量RT-PCR檢測心肌梗死邊緣區(qū)轉(zhuǎn)化生長因子β1等相關(guān)基因的表達(dá)，從分子生物學(xué)層面探討冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植發(fā)揮協(xié)同治療作用的內(nèi)在機(jī)制，有助于揭示二者聯(lián)合治療急性心肌梗死的深層原理，為后續(xù)的臨床應(yīng)用和進(jìn)一步研究奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1急性心肌梗死概述2.1.1發(fā)病機(jī)制急性心肌梗死的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，冠狀動(dòng)脈粥樣硬化是其最主要的病理基礎(chǔ)。在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程中，動(dòng)脈內(nèi)膜下會(huì)逐漸形成粥樣斑塊。這些斑塊主要由脂質(zhì)、平滑肌細(xì)胞、炎癥細(xì)胞以及細(xì)胞外基質(zhì)等成分構(gòu)成。隨著病情的發(fā)展，粥樣斑塊會(huì)不斷增大，致使冠狀動(dòng)脈管腔逐漸狹窄，心肌供血相應(yīng)減少。當(dāng)粥樣斑塊不穩(wěn)定時(shí)，極易發(fā)生破裂，從而暴露其內(nèi)部的脂質(zhì)核心。這一過程會(huì)迅速激活血小板，使其在破損處黏附、聚集，并啟動(dòng)凝血系統(tǒng)，最終導(dǎo)致血栓的形成。一旦血栓形成，就會(huì)突然阻塞冠狀動(dòng)脈，使得相應(yīng)心肌區(qū)域的血液供應(yīng)急劇減少甚至完全中斷，若缺血時(shí)間持續(xù)達(dá)到20-30分鐘及以上，心肌細(xì)胞便會(huì)因嚴(yán)重而持久的缺血發(fā)生壞死，進(jìn)而引發(fā)急性心肌梗死。除了冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和血栓形成這一主要發(fā)病機(jī)制外，還有其他一些因素也可能誘發(fā)急性心肌梗死。例如，當(dāng)人體進(jìn)行劇烈運(yùn)動(dòng)、情緒突然激動(dòng)、受到寒冷刺激或者暴飲暴食等情況時(shí)，會(huì)導(dǎo)致機(jī)體交感神經(jīng)興奮，血壓急劇升高，心率加快，心肌耗氧量顯著增加。在冠狀動(dòng)脈存在不同程度粥樣硬化狹窄的情況下，心肌需氧量的突然增加會(huì)使心肌供血供需失衡，進(jìn)而引發(fā)急性心肌缺血，增加急性心肌梗死的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。另外，冠狀動(dòng)脈痙攣也是一個(gè)不容忽視的誘發(fā)因素。某些因素，如吸煙、藥物刺激、血管內(nèi)皮功能紊亂等，可能會(huì)導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈發(fā)生強(qiáng)烈痙攣，使冠狀動(dòng)脈管腔在短時(shí)間內(nèi)急劇狹窄甚至完全閉塞，同樣會(huì)造成心肌嚴(yán)重缺血，引發(fā)急性心肌梗死。2.1.2病理生理變化急性心肌梗死后，心臟會(huì)發(fā)生一系列復(fù)雜的病理生理變化，這些變化對心臟功能和患者的預(yù)后產(chǎn)生著深遠(yuǎn)的影響。心肌細(xì)胞凋亡是急性心肌梗死后早期出現(xiàn)的重要病理改變之一。當(dāng)心肌細(xì)胞因缺血缺氧而受到損傷時(shí)，會(huì)激活一系列細(xì)胞內(nèi)凋亡信號(hào)通路，促使心肌細(xì)胞發(fā)生凋亡。大量心肌細(xì)胞的凋亡不僅會(huì)導(dǎo)致心肌收縮力減弱，還會(huì)影響心臟的電生理穩(wěn)定性，增加心律失常的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。隨著病程的進(jìn)展，心肌纖維化逐漸成為主要的病理改變。在急性心肌梗死后，機(jī)體的修復(fù)機(jī)制被啟動(dòng)，成纖維細(xì)胞被激活并大量增殖。這些成纖維細(xì)胞會(huì)分泌大量的細(xì)胞外基質(zhì)，其中主要成分包括Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白等，導(dǎo)致心肌組織中膠原纖維過度沉積，從而形成心肌纖維化。心肌纖維化會(huì)使心肌組織的彈性降低，順應(yīng)性下降，心臟的舒張功能和收縮功能均受到嚴(yán)重影響。一方面，心肌纖維化會(huì)阻礙心肌細(xì)胞之間的電信號(hào)傳導(dǎo)，導(dǎo)致心臟收縮不同步，進(jìn)一步降低心臟的泵血功能；另一方面，心肌纖維化還會(huì)使心臟的僵硬度增加，心室壁張力升高，心肌耗氧量也隨之增加，加重心臟的負(fù)擔(dān)，最終可發(fā)展為心力衰竭。心室重構(gòu)也是急性心肌梗死后重要的病理生理過程。心室重構(gòu)是指在心肌梗死后，心臟為了適應(yīng)心肌損傷和血流動(dòng)力學(xué)改變，在結(jié)構(gòu)、形態(tài)和功能上發(fā)生的一系列變化。心室重構(gòu)主要包括梗死區(qū)的擴(kuò)展和非梗死區(qū)的心肌肥厚、拉長等。梗死區(qū)心肌細(xì)胞壞死、變薄，在心室腔內(nèi)壓力的作用下，梗死區(qū)會(huì)逐漸向外擴(kuò)張，導(dǎo)致心室壁變薄，心室腔擴(kuò)大。非梗死區(qū)的心肌為了維持心臟的泵血功能，會(huì)發(fā)生代償性肥厚和拉長，但這種代償機(jī)制在長期內(nèi)并不能完全維持心臟功能，反而會(huì)進(jìn)一步加重心臟的負(fù)擔(dān)，導(dǎo)致心室重構(gòu)不斷進(jìn)展。心室重構(gòu)不僅會(huì)使心臟的幾何形狀發(fā)生改變，還會(huì)影響心臟的電生理特性，增加心律失常和心力衰竭的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，嚴(yán)重影響患者的預(yù)后。2.2骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植理論2.2.1骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞特性骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BM-MSCs）作為一種具有重要醫(yī)學(xué)價(jià)值的成體干細(xì)胞，具備多種獨(dú)特的生物學(xué)特性。自我更新能力是其顯著特性之一，BM-MSCs能夠通過不對稱性的有絲分裂進(jìn)行自我更新，持續(xù)產(chǎn)生大量祖細(xì)胞并使其維持未分化狀態(tài)。這種能力確保了干細(xì)胞數(shù)量的穩(wěn)定，為后續(xù)的分化提供了充足的細(xì)胞來源。例如，在體外培養(yǎng)條件下，BM-MSCs可以在適宜的培養(yǎng)基中不斷增殖，經(jīng)過多代培養(yǎng)后仍能保持干細(xì)胞的特性，為細(xì)胞治療和組織工程提供了豐富的細(xì)胞資源。多向分化潛能是BM-MSCs的另一關(guān)鍵特性。在特定的體內(nèi)或體外環(huán)境下，BM-MSCs能夠分化為多種不同類型的細(xì)胞，如肌細(xì)胞、肝細(xì)胞、成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞以及心肌樣細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞等。這一特性使得BM-MSCs在組織修復(fù)和再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用潛力。在心肌梗死的治療中，利用BM-MSCs向心肌樣細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的能力，有望實(shí)現(xiàn)受損心肌組織的修復(fù)和血管新生，從而改善心臟功能。研究表明，通過在培養(yǎng)基中添加特定的誘導(dǎo)因子，如5-氮胞苷等，可以誘導(dǎo)BM-MSCs向心肌樣細(xì)胞分化，分化后的細(xì)胞表達(dá)心肌特異性標(biāo)志物，如肌鈣蛋白T、α-肌動(dòng)蛋白等。BM-MSCs還具有免疫調(diào)節(jié)功能。它主要通過細(xì)胞間的相互作用及產(chǎn)生細(xì)胞因子來抑制T細(xì)胞的增殖及其免疫反應(yīng)，從而發(fā)揮免疫重建的功能。在免疫調(diào)節(jié)過程中，BM-MSCs可以分泌多種免疫調(diào)節(jié)因子，如白細(xì)胞介素6（IL-6）、肝細(xì)胞生長因子（HGF）、吲哚胺2,3雙加氧酶（IDO）、血紅素氧合酶1（HO-1）、轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）、一氧化氮（NO）、人類白細(xì)胞抗原I類分子G5（HLA-G5）、前列腺素E2（PGE2）和白細(xì)胞介素10（IL-10）等。這些因子之間相互協(xié)同或拮抗，共同參與免疫反應(yīng)的調(diào)控、炎癥反應(yīng)的應(yīng)答和組織損傷修復(fù)等多個(gè)生物學(xué)進(jìn)程。在急性心肌梗死后，機(jī)體處于炎癥狀態(tài)，BM-MSCs的免疫調(diào)節(jié)功能可以抑制過度的炎癥反應(yīng)，減少心肌細(xì)胞和心臟結(jié)構(gòu)功能的損傷，促進(jìn)心臟的修復(fù)。此外，BM-MSCs還具有來源方便，易于分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增和純化的特點(diǎn)，多次傳代擴(kuò)增后仍具備干細(xì)胞特性，且異體移植時(shí)免疫排斥較輕，配型要求不嚴(yán)格。這使得BM-MSCs在臨床應(yīng)用中具有很大的優(yōu)勢，為其廣泛應(yīng)用提供了便利條件。2.2.2移植治療心肌梗死機(jī)制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療心肌梗死的機(jī)制是多方面的，主要包括分化為心肌細(xì)胞、旁分泌作用促進(jìn)血管新生和免疫調(diào)節(jié)等。分化為心肌細(xì)胞是BM-MSCs移植治療心肌梗死的重要機(jī)制之一。在心肌梗死的微環(huán)境中，BM-MSCs可以受到多種信號(hào)分子和細(xì)胞因子的誘導(dǎo)，啟動(dòng)分化程序，向心肌樣細(xì)胞分化。這些分化后的心肌樣細(xì)胞能夠表達(dá)心肌特異性標(biāo)志物，如肌鈣蛋白T、α-肌動(dòng)蛋白、連接蛋白43等，并且具備心肌細(xì)胞的部分功能，如收縮性和電傳導(dǎo)性。它們可以整合到受損的心肌組織中，替代壞死的心肌細(xì)胞，參與心臟的收縮和舒張活動(dòng)，從而改善心臟功能。有研究通過將標(biāo)記的BM-MSCs移植到急性心肌梗死大鼠模型中，發(fā)現(xiàn)移植的細(xì)胞能夠在梗死區(qū)域存活并分化為心肌樣細(xì)胞，與宿主心肌細(xì)胞形成縫隙連接，增強(qiáng)心肌的電傳導(dǎo)和收縮同步性。旁分泌作用促進(jìn)血管新生也是BM-MSCs治療心肌梗死的關(guān)鍵機(jī)制。BM-MSCs能夠分泌多種生物活性因子，如血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）、肝細(xì)胞生長因子（HGF）、單核細(xì)胞趨化蛋白1（MCP1）、基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1（SDF1）等。這些因子在促進(jìn)受損心肌修復(fù)過程中發(fā)揮著重要作用，它們可以刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成，促進(jìn)梗死區(qū)域新生血管的形成，改善心肌的血液供應(yīng)。VEGF能夠特異性地作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)其增殖和遷移，誘導(dǎo)新生血管的生成；bFGF可以促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖和膠原蛋白的合成，為血管新生提供必要的基質(zhì)支持。研究表明，BM-MSCs移植后，梗死區(qū)域的血管密度明顯增加，心肌灌注得到改善，心臟功能也隨之提高。免疫調(diào)節(jié)在BM-MSCs治療心肌梗死中同樣發(fā)揮著不可或缺的作用。急性心肌梗死后，機(jī)體的免疫系統(tǒng)被激活，產(chǎn)生過度的炎癥反應(yīng)。這種過度的炎癥反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致心肌細(xì)胞和心臟結(jié)構(gòu)功能的進(jìn)一步損傷，影響心臟的修復(fù)和瘢痕形成。BM-MSCs具有免疫抑制作用，它可以通過旁分泌作用和直接細(xì)胞間接觸來調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的功能，抑制炎癥反應(yīng)。在細(xì)胞間接觸方面，BM-MSCs表面的一些分子可以與免疫細(xì)胞表面的受體相互作用，抑制免疫細(xì)胞的活化和增殖；在旁分泌作用方面，BM-MSCs分泌的免疫調(diào)節(jié)因子如IL-10、TGF-β1等可以抑制促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生，促進(jìn)抗炎細(xì)胞因子的分泌，從而調(diào)節(jié)免疫平衡，減輕炎癥損傷。研究發(fā)現(xiàn)，在急性心肌梗死模型中，BM-MSCs移植能夠降低梗死區(qū)域炎癥細(xì)胞的浸潤，減少炎癥因子的表達(dá)，改善心室不良重塑及心功能。2.3冠心Ⅱ號(hào)相關(guān)理論2.3.1方劑組成與功效冠心Ⅱ號(hào)作為一種經(jīng)典的活血化瘀方劑，其全方由丹參、川芎、赤芍、紅花、降香5味中藥巧妙配伍而成。丹參，為方中君藥，性微寒，味苦，歸心、肝經(jīng)。其功效十分顯著，具有活血化瘀、通經(jīng)止痛、清心除煩、涼血消癰之功效。在治療心血管疾病中，丹參能夠有效改善血液循環(huán)，抑制血小板聚集，降低血液黏稠度，從而促進(jìn)血液的流暢運(yùn)行，減少血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)。川芎，性溫，味辛，歸肝、膽、心包經(jīng)。它具有活血行氣、祛風(fēng)止痛的功效，為方中臣藥。川芎善于通行氣血，能夠增強(qiáng)丹參活血化瘀的作用，同時(shí)還能上行頭目，下達(dá)血海，旁通四肢，為血中之氣藥，可使全方的藥力更好地通達(dá)周身，增強(qiáng)通絡(luò)止痛之效。赤芍，性微寒，味苦，歸肝經(jīng)。具有清熱涼血、散瘀止痛的功效。在方中協(xié)助丹參和川芎活血化瘀，同時(shí)還能清熱涼血，減輕瘀血阻滯所產(chǎn)生的郁熱，為佐藥。紅花，性溫，味辛，歸心、肝經(jīng)。具有活血通經(jīng)、散瘀止痛的作用。它能增強(qiáng)全方活血化瘀之力，與其他藥物協(xié)同作用，改善血液循環(huán)，緩解瘀血所致的疼痛，同樣為佐藥。降香，性溫，味辛，歸肝、脾經(jīng)。具有化瘀止血、理氣止痛的功效。在方中既能活血化瘀，又能理氣止痛，使氣行則血行，增強(qiáng)全方的治療效果，為使藥。諸藥合用，共奏活血化瘀、行氣止痛之功。在臨床上，冠心Ⅱ號(hào)常用于治療冠心病、心絞痛等心血管疾病，對于緩解患者的胸痛、胸悶、心悸等癥狀具有顯著療效。其通過改善心臟血液循環(huán)，增加心肌供血，降低心肌耗氧量，從而有效緩解心肌缺血缺氧狀態(tài)，保護(hù)心臟功能。此外，冠心Ⅱ號(hào)還具有調(diào)節(jié)血脂、抑制炎癥反應(yīng)、改善血管內(nèi)皮功能等作用，從多個(gè)方面對心血管系統(tǒng)起到保護(hù)和治療作用。2.3.2治療心肌梗死作用機(jī)制冠心Ⅱ號(hào)治療心肌梗死的作用機(jī)制是多方面的，主要包括抗血小板聚集、抗氧化應(yīng)激、調(diào)節(jié)血脂、抑制炎癥反應(yīng)和改善血管內(nèi)皮功能等?？寡“寰奂枪谛蘑蛱?hào)治療心肌梗死的重要作用機(jī)制之一。急性心肌梗死的發(fā)生與血小板的黏附、聚集和血栓形成密切相關(guān)。冠心Ⅱ號(hào)中的多種成分具有抗血小板聚集的作用，能夠抑制血小板的活化和聚集，減少血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)。丹參中的丹參酮ⅡA等成分可以通過抑制血小板膜上的磷脂酶A2活性，減少血栓素A2的生成，從而抑制血小板的聚集；川芎中的川芎嗪能夠抑制血小板內(nèi)鈣離子的釋放，降低血小板的活性，抑制血小板的聚集和黏附。這些成分相互協(xié)同，共同發(fā)揮抗血小板聚集的作用，有助于預(yù)防和治療急性心肌梗死?？寡趸瘧?yīng)激也是冠心Ⅱ號(hào)治療心肌梗死的關(guān)鍵作用機(jī)制。心肌梗死后，心肌組織會(huì)產(chǎn)生大量的氧自由基，導(dǎo)致氧化應(yīng)激損傷，進(jìn)一步加重心肌細(xì)胞的損傷和死亡。冠心Ⅱ號(hào)中的藥物成分具有強(qiáng)大的抗氧化作用，能夠清除體內(nèi)過多的氧自由基，減輕氧化應(yīng)激損傷。丹參中的丹酚酸B具有很強(qiáng)的抗氧化活性，能夠抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，減少丙二醛等氧化產(chǎn)物的生成，保護(hù)心肌細(xì)胞免受氧化損傷；赤芍中的芍藥苷可以提高超氧化物歧化酶等抗氧化酶的活性，增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力，減輕氧自由基對心肌組織的損傷。通過抗氧化應(yīng)激作用，冠心Ⅱ號(hào)可以保護(hù)心肌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能，促進(jìn)心肌的修復(fù)和再生。調(diào)節(jié)血脂在冠心Ⅱ號(hào)治療心肌梗死中也發(fā)揮著重要作用。血脂異常是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的重要危險(xiǎn)因素之一，與急性心肌梗死的發(fā)生密切相關(guān)。冠心Ⅱ號(hào)能夠調(diào)節(jié)血脂代謝，降低血清總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇水平，升高高密度脂蛋白膽固醇水平。丹參中的活性成分可以抑制膽固醇的合成，促進(jìn)膽固醇的排泄，從而降低血脂水平；川芎中的有效成分能夠調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝相關(guān)酶的活性，促進(jìn)脂質(zhì)的分解和代謝，改善血脂異常。通過調(diào)節(jié)血脂，冠心Ⅱ號(hào)可以減少脂質(zhì)在血管壁的沉積，延緩冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展，降低急性心肌梗死的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。抑制炎癥反應(yīng)同樣是冠心Ⅱ號(hào)治療心肌梗死的重要作用機(jī)制。急性心肌梗死后，機(jī)體的炎癥反應(yīng)被激活，炎癥細(xì)胞浸潤和炎癥因子釋放增加，導(dǎo)致心肌組織的炎癥損傷和纖維化。冠心Ⅱ號(hào)中的成分能夠抑制炎癥反應(yīng)，減輕炎癥損傷。丹參中的丹參素可以抑制核因子-κB等炎癥信號(hào)通路的激活，減少腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素-6等炎癥因子的表達(dá)和釋放，從而減輕炎癥反應(yīng)；紅花中的紅花黃色素具有抗炎作用，能夠抑制炎癥細(xì)胞的活化和炎癥介質(zhì)的釋放，減輕心肌組織的炎癥損傷。通過抑制炎癥反應(yīng)，冠心Ⅱ號(hào)可以減少心肌細(xì)胞的凋亡和壞死，抑制心肌纖維化的發(fā)生，改善心臟功能。改善血管內(nèi)皮功能也是冠心Ⅱ號(hào)治療心肌梗死的作用機(jī)制之一。血管內(nèi)皮功能障礙是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和急性心肌梗死發(fā)生發(fā)展的重要病理基礎(chǔ)。冠心Ⅱ號(hào)能夠促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和修復(fù)，提高血管內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮的合成和釋放，增強(qiáng)血管內(nèi)皮的舒張功能。丹參中的活性成分可以促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放一氧化氮，調(diào)節(jié)血管平滑肌的舒張和收縮，改善血管內(nèi)皮功能；降香中的成分能夠抑制血管緊張素Ⅱ等縮血管物質(zhì)的作用，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，維持血管內(nèi)皮的正常功能。通過改善血管內(nèi)皮功能，冠心Ⅱ號(hào)可以增加冠狀動(dòng)脈的血流量，改善心肌供血，減少心肌梗死的發(fā)生和發(fā)展。三、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與材料3.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇本實(shí)驗(yàn)選用健康清潔級(jí)雄性SD大鼠74只，體重200-250g。SD大鼠因其遺傳背景清晰、個(gè)體差異小、對實(shí)驗(yàn)條件的耐受性好等優(yōu)點(diǎn)，在心血管疾病相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究中被廣泛應(yīng)用。其生理特性與人類有一定的相似性，能夠較好地模擬人類急性心肌梗死的病理生理過程，為研究提供可靠的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。?4只SD大鼠隨機(jī)分為5組，分別為正常對照組（n=10）、模型組（n=16）、冠心Ⅱ號(hào)組（n=16）、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BM-MSCs）組（n=16）、冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合BM-MSCs組（n=16）。分組的隨機(jī)性保證了各組大鼠在初始狀態(tài)下的一致性，減少了個(gè)體差異對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更具可靠性和說服力。正常對照組大鼠不進(jìn)行任何造模處理，僅給予正常飼養(yǎng)和生理鹽水灌胃，作為實(shí)驗(yàn)的正常對照標(biāo)準(zhǔn)，用于對比其他造模組大鼠在各項(xiàng)指標(biāo)上的變化。模型組大鼠采用開胸結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈左前降支的方法建立急性心肌梗死模型，造模成功后給予生理鹽水灌胃，用于觀察急性心肌梗死模型自然發(fā)展過程中的各項(xiàng)生理病理變化。冠心Ⅱ號(hào)組大鼠在建立急性心肌梗死模型后，給予冠心Ⅱ號(hào)湯劑灌胃，以探究冠心Ⅱ號(hào)單獨(dú)使用對急性心肌梗死大鼠的治療作用。BM-MSCs組大鼠在建立急性心肌梗死模型后，在心肌梗死區(qū)及邊緣區(qū)分5點(diǎn)注射CM-DiI標(biāo)記的P3代BM-MSCs，同時(shí)給予生理鹽水灌胃，旨在研究BM-MSCs移植對急性心肌梗死大鼠的治療效果。冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合BM-MSCs組大鼠在建立急性心肌梗死模型后，既在心肌梗死區(qū)及邊緣區(qū)分5點(diǎn)注射CM-DiI標(biāo)記的P3代BM-MSCs，又給予冠心Ⅱ號(hào)湯劑灌胃，以此觀察兩者聯(lián)合應(yīng)用是否具有協(xié)同治療作用。3.1.2實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備冠心Ⅱ號(hào)湯劑由丹參、川芎、赤芍、紅花、降香5味中藥組成，按照傳統(tǒng)水煎煮方法制備。具體制備過程如下：將丹參30g、川芎15g、赤芍15g、紅花15g、降香15g洗凈后，加入適量的蒸餾水，浸泡30分鐘，然后武火煮沸后轉(zhuǎn)文火煎煮30分鐘，過濾取汁；藥渣再加入適量蒸餾水，重復(fù)煎煮一次，合并兩次煎液，濃縮至所需濃度，得到冠心Ⅱ號(hào)標(biāo)準(zhǔn)湯劑。制備過程中嚴(yán)格控制藥材的質(zhì)量、煎煮時(shí)間和火候等因素，以確保湯劑質(zhì)量的穩(wěn)定性和一致性。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞提取與培養(yǎng)試劑包括低糖DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、青霉素、鏈霉素、胰蛋白酶-EDTA消化液、PBS緩沖液等。低糖DMEM培養(yǎng)基為細(xì)胞提供基本的營養(yǎng)物質(zhì)，胎牛血清中含有多種生長因子和營養(yǎng)成分，能夠促進(jìn)細(xì)胞的生長和增殖；青霉素和鏈霉素用于防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中的細(xì)菌污染；胰蛋白酶-EDTA消化液用于消化細(xì)胞，使細(xì)胞從培養(yǎng)瓶壁上脫離下來，便于傳代培養(yǎng)；PBS緩沖液用于清洗細(xì)胞，維持細(xì)胞的滲透壓和pH值穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)儀器主要有超凈工作臺(tái)、CO?培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、低溫離心機(jī)、PCR儀、酶標(biāo)儀、心臟多普勒超聲診斷儀等。超凈工作臺(tái)為細(xì)胞培養(yǎng)提供無菌的操作環(huán)境，防止微生物污染；CO?培養(yǎng)箱能夠精確控制溫度、濕度和CO?濃度，為細(xì)胞生長提供適宜的環(huán)境；倒置顯微鏡用于觀察細(xì)胞的形態(tài)和生長狀態(tài)；低溫離心機(jī)用于細(xì)胞離心，分離細(xì)胞和培養(yǎng)液；PCR儀用于熒光定量RT-PCR實(shí)驗(yàn)，檢測相關(guān)基因的表達(dá)水平；酶標(biāo)儀用于酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)，檢測血清中相關(guān)指標(biāo)的濃度；心臟多普勒超聲診斷儀用于檢測大鼠的心功能參數(shù)，如左室舒張末徑、左室收縮末徑、左室短軸縮短率、射血分?jǐn)?shù)等。這些儀器設(shè)備的精確性和穩(wěn)定性對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性起著至關(guān)重要的作用。3.2實(shí)驗(yàn)方法與步驟3.2.1骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的提取與培養(yǎng)選取4只健康清潔級(jí)雄性SD大鼠，采用10%水合氯醛（3.5ml/kg）腹腔注射進(jìn)行麻醉。在無菌條件下，迅速取出雙側(cè)股骨和脛骨，用眼科剪小心地剪去骨骺端，充分暴露骨髓腔。使用含有10%胎牛血清（FBS）、1%青霉素-鏈霉素雙抗的低糖DMEM培養(yǎng)基，反復(fù)輕柔地沖洗骨髓腔，將骨髓細(xì)胞沖洗至無菌培養(yǎng)皿中。收集骨髓細(xì)胞懸液，將其轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，以1000r/min的轉(zhuǎn)速室溫離心5分鐘，去除上清液。向離心管中加入適量的含有10%FBS、1%雙抗的低糖DMEM培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞，然后將細(xì)胞懸液接種于25cm2培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5%CO?的飽和濕度培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)24小時(shí)后，小心地更換培養(yǎng)液，以去除未貼壁的血細(xì)胞。此后，每2-3天更換一次培養(yǎng)液，密切觀察細(xì)胞的生長狀態(tài)。當(dāng)細(xì)胞融合達(dá)到80%-90%時(shí)，進(jìn)行細(xì)胞傳代。具體操作如下：吸去培養(yǎng)液，用預(yù)熱的PBS緩沖液輕輕沖洗細(xì)胞2-3次，以去除殘留的培養(yǎng)液。加入適量的0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液，在37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，顯微鏡下觀察到細(xì)胞皺縮變圓后，立即加入含有10%FBS的低糖DMEM培養(yǎng)基終止消化。用移液器輕輕吹打細(xì)胞，使其從培養(yǎng)瓶壁上脫離下來，形成單細(xì)胞懸液。將單細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，以1000r/min的轉(zhuǎn)速離心5分鐘，去除上清液。用適量的新鮮培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，按照1:2的比例將細(xì)胞接種到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。細(xì)胞傳代到第3代時(shí)，細(xì)胞生長融合后，形態(tài)均一，呈長梭形集落樣分布，且可重疊生長，此時(shí)細(xì)胞純度可達(dá)95%以上，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證細(xì)胞的純度，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物。結(jié)果顯示，細(xì)胞高表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)志物CD29、CD90，低表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)志物CD34，表明所培養(yǎng)的細(xì)胞為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。3.2.2急性心肌梗死大鼠模型建立除正常對照組外，其余各組大鼠均采用開胸結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支法建立急性心肌梗死模型。首先，用10%水合氯醛（3.5ml/kg）對大鼠進(jìn)行腹腔注射麻醉。將大鼠仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，對其胸部進(jìn)行備皮和消毒處理。在無菌條件下，沿胸骨左緣第3-4肋間打開胸腔，小心地剪開心包，充分暴露心臟。用眼科鑷子輕輕提起左心耳，在左冠狀動(dòng)脈前降支起始部下方約2-3mm處，使用6-0絲線進(jìn)行結(jié)扎。結(jié)扎后，若觀察到左心室前壁心肌顏色變暗，且心電圖顯示ST段明顯抬高，則表明急性心肌梗死模型建立成功。隨后，用生理鹽水沖洗胸腔，逐層縫合胸壁肌肉和皮膚。術(shù)后，將大鼠置于37℃的恒溫箱中保暖，直至其蘇醒。模型建立成功后，對大鼠進(jìn)行密切觀察和護(hù)理。給予大鼠充足的水和食物，保持其生活環(huán)境的清潔和安靜。密切關(guān)注大鼠的精神狀態(tài)、飲食情況、呼吸頻率和心率等生命體征。對于出現(xiàn)呼吸困難、心律失常等嚴(yán)重并發(fā)癥的大鼠，及時(shí)進(jìn)行相應(yīng)的處理。若大鼠在術(shù)后24小時(shí)內(nèi)死亡，則視為模型失敗，需進(jìn)行補(bǔ)充造模。通過以上嚴(yán)格的造模方法和術(shù)后護(hù)理措施，確保了急性心肌梗死大鼠模型的成功率和穩(wěn)定性，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行提供了可靠的動(dòng)物模型。3.2.3實(shí)驗(yàn)分組與干預(yù)措施正常對照組：不進(jìn)行任何造模處理，僅給予正常飼養(yǎng)，每日灌胃等體積的生理鹽水，持續(xù)7天。該組作為實(shí)驗(yàn)的正常對照，用于對比其他造模組大鼠在各項(xiàng)指標(biāo)上的變化，以評估造模和干預(yù)措施對大鼠的影響。模型組：采用開胸結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈左前降支的方法建立急性心肌梗死模型。造模成功后，在心肌梗死區(qū)及邊緣區(qū)分5點(diǎn)注射L-DMEM培養(yǎng)液，同時(shí)每日灌胃等體積的生理鹽水，持續(xù)7天。此組用于觀察急性心肌梗死模型自然發(fā)展過程中的各項(xiàng)生理病理變化，為其他干預(yù)組提供對比基礎(chǔ)。冠心Ⅱ號(hào)組：同樣采用開胸結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈左前降支的方法建立急性心肌梗死模型。造模成功后，在心肌梗死區(qū)及邊緣區(qū)分5點(diǎn)注射L-DMEM培養(yǎng)液。從造模后第二天開始，以劑量為10g/kg，容量為1ml/100g的冠心Ⅱ號(hào)標(biāo)準(zhǔn)湯劑進(jìn)行灌胃，每日1次，連續(xù)7天。該組旨在探究冠心Ⅱ號(hào)單獨(dú)使用對急性心肌梗死大鼠的治療作用。干細(xì)胞移植組：建立急性心肌梗死模型后，在左室心肌梗死區(qū)及邊緣區(qū)分5點(diǎn)注射2×10?個(gè)CM-DiI標(biāo)記的P3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。同時(shí)，每日灌胃等體積的生理鹽水，持續(xù)7天。通過該組實(shí)驗(yàn)，研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對急性心肌梗死大鼠的治療效果。聯(lián)合治療組：建立急性心肌梗死模型后，在左室心肌梗死區(qū)及邊緣區(qū)分5點(diǎn)注射2×10?個(gè)CM-DiI標(biāo)記的P3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。從造模后第二天開始，以劑量為10g/kg，容量為1ml/100g的冠心Ⅱ號(hào)標(biāo)準(zhǔn)湯劑進(jìn)行灌胃，每日1次，連續(xù)7天。此組用于觀察冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植是否具有協(xié)同治療作用。3.2.4觀察指標(biāo)與檢測方法心功能指標(biāo)檢測：在細(xì)胞移植4周后，使用心臟多普勒超聲診斷儀對各組大鼠的心功能進(jìn)行檢測。將大鼠用10%水合氯醛（3.5ml/kg）腹腔注射麻醉后，仰臥位固定于檢查臺(tái)上。在大鼠胸部涂抹適量的超聲耦合劑，使用探頭獲取胸骨旁左心室長軸切面和短軸切面圖像。測量并記錄左室舒張末徑（LVEDd）、左室收縮末徑（LVEDs）、左室短軸縮短率（FS）和射血分?jǐn)?shù)（EF）等指標(biāo)。左室舒張末徑和左室收縮末徑反映了左心室的大小和形態(tài)變化，左室短軸縮短率和射血分?jǐn)?shù)則是評估左心室收縮功能的重要指標(biāo)。通過這些指標(biāo)的檢測，可以全面了解各組大鼠心臟的收縮和舒張功能，評估不同治療方法對心功能的影響。心肌組織形態(tài)學(xué)觀察：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，迅速取出大鼠心臟，用生理鹽水沖洗干凈。將心臟置于4%多聚甲醛溶液中固定24小時(shí)，然后進(jìn)行石蠟包埋和切片，切片厚度為4μm。采用蘇木精-伊紅（HE）染色和Masson染色法對心肌組織切片進(jìn)行染色。HE染色可以清晰地顯示心肌細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和炎癥細(xì)胞浸潤情況。正常心肌細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，排列整齊，細(xì)胞核清晰；而急性心肌梗死模型組的心肌細(xì)胞則出現(xiàn)明顯的腫脹、壞死，細(xì)胞核固縮、溶解，炎癥細(xì)胞大量浸潤。Masson染色主要用于觀察心肌纖維化程度，正常心肌組織中膠原纖維含量較少，呈淡紅色；而心肌梗死區(qū)的膠原纖維大量增生，呈藍(lán)色。通過圖像分析軟件測量心肌梗死面積和心肌纖維化面積，定量評估心肌損傷和纖維化程度。相關(guān)因子檢測：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測血清中Ⅰ型前膠原羧基端肽（PICP）和Ⅲ型前膠原氨基端肽（PⅢNP）的濃度。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，通過心臟穿刺采集各組大鼠的血液，將血液置于離心機(jī)中，以3000r/min的轉(zhuǎn)速離心15分鐘，分離出血清。按照ELISA試劑盒的操作說明書進(jìn)行檢測，首先將標(biāo)準(zhǔn)品和待測血清加入到酶標(biāo)板中，然后加入相應(yīng)的抗體和酶標(biāo)記物，經(jīng)過孵育、洗滌等步驟后，加入底物顯色，最后用酶標(biāo)儀在特定波長下測定吸光度值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出PICP和PⅢNP的濃度。PICP和PⅢNP是反映心肌纖維化程度的重要指標(biāo)，它們在血清中的濃度升高，表明心肌纖維化程度加重。通過檢測這兩個(gè)指標(biāo)，可以進(jìn)一步了解不同治療方法對心肌纖維化的影響。采用熒光定量RT-PCR檢測心肌梗死邊緣區(qū)轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）mRNA的表達(dá)水平。提取心肌梗死邊緣區(qū)組織的總RNA，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板，使用TGF-β1特異性引物和熒光定量PCR試劑盒進(jìn)行擴(kuò)增。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30秒，然后進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)包括95℃變性5秒，60℃退火30秒。以GAPDH作為內(nèi)參基因，采用2?ΔΔCt法計(jì)算TGF-β1mRNA的相對表達(dá)量。TGF-β1是一種重要的促纖維化因子，在心肌梗死后的心肌纖維化過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。其mRNA表達(dá)水平的變化可以反映心肌纖維化的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，通過檢測TGF-β1mRNA的表達(dá)水平，有助于深入探討冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對心肌纖維化的影響機(jī)制。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1一般情況觀察在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，對各組大鼠的生存、飲食、活動(dòng)等一般情況進(jìn)行了密切觀察。正常對照組大鼠精神狀態(tài)良好，毛色光滑亮澤，活動(dòng)較為活躍，飲食和飲水量正常，日常行為表現(xiàn)無異常，未見任何病態(tài)體征。模型組大鼠在造模后，精神狀態(tài)明顯萎靡，表現(xiàn)出倦怠、嗜睡的狀態(tài)。毛色變得雜亂無光澤，活動(dòng)量顯著減少，常蜷縮于籠角，對周圍環(huán)境的刺激反應(yīng)較為遲鈍。飲食和飲水量也有所下降，體重增長緩慢甚至出現(xiàn)下降趨勢。部分大鼠在術(shù)后出現(xiàn)呼吸急促、心律失常等癥狀，這與急性心肌梗死后心臟功能受損，導(dǎo)致機(jī)體缺氧及代謝紊亂密切相關(guān)。在實(shí)驗(yàn)過程中，模型組共有4只大鼠死亡，死亡率為25%，死亡原因主要是急性心力衰竭和嚴(yán)重心律失常。冠心Ⅱ號(hào)組大鼠在給予冠心Ⅱ號(hào)湯劑灌胃后，精神狀態(tài)相較于模型組有一定程度的改善，表現(xiàn)為活躍度稍有增加，不再長時(shí)間蜷縮，對環(huán)境刺激的反應(yīng)也有所增強(qiáng)。毛色逐漸恢復(fù)光澤，飲食和飲水量有所回升，體重下降趨勢得到一定程度的緩解。該組有3只大鼠死亡，死亡率為18.75%，死亡原因同樣主要是心力衰竭和心律失常，但死亡數(shù)量相對模型組有所減少，這初步表明冠心Ⅱ號(hào)對急性心肌梗死大鼠的生存狀況具有一定的改善作用。干細(xì)胞移植組大鼠在移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后，精神狀態(tài)也有較為明顯的改善，活動(dòng)能力增強(qiáng)，能夠在籠內(nèi)自由活動(dòng)和探索。飲食和飲水量基本恢復(fù)正常，體重逐漸增加。同樣有4只大鼠死亡，死亡率為25%，雖然死亡率與模型組相同，但從大鼠的整體精神狀態(tài)和活動(dòng)情況來看，干細(xì)胞移植對改善大鼠的一般情況具有積極作用，可能是由于移植的干細(xì)胞在心肌內(nèi)發(fā)揮了一定的修復(fù)和再生作用，從而改善了心臟功能，進(jìn)而影響了大鼠的整體狀態(tài)。聯(lián)合治療組大鼠在接受冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植后，精神狀態(tài)最佳，活動(dòng)活躍，毛色光亮，飲食和飲水量恢復(fù)至接近正常水平，體重增長較為明顯。僅有3只大鼠死亡，死亡率為18.75%。該組大鼠在生存、飲食、活動(dòng)等方面的表現(xiàn)均優(yōu)于其他造模組，表明冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對急性心肌梗死大鼠的一般情況具有更為顯著的改善作用，二者可能具有協(xié)同效應(yīng)，共同促進(jìn)了大鼠機(jī)體功能的恢復(fù)和改善。4.2心功能指標(biāo)變化在細(xì)胞移植4周后，使用心臟多普勒超聲診斷儀對各組大鼠的心功能指標(biāo)進(jìn)行了檢測，具體檢測結(jié)果見表1。正常對照組大鼠左室舒張末徑（LVEDd）為（0.42±0.03）cm，左室收縮末徑（LVEDs）為（0.24±0.02）cm，左室短軸縮短率（FS）為（42.86±3.15）%，射血分?jǐn)?shù)（EF）為（75.34±4.21）%。各項(xiàng)心功能指標(biāo)均處于正常范圍，表明心臟結(jié)構(gòu)和功能正常，心肌收縮和舒張能力良好。模型組大鼠LVEDd顯著增大，達(dá)到（0.65±0.05）cm，與正常對照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。這是由于急性心肌梗死后，心肌細(xì)胞大量壞死，心肌組織變薄，心室壁失去正常的支撐力，在心臟收縮和舒張過程中，左心室逐漸擴(kuò)張，導(dǎo)致LVEDd增大。LVEDs也明顯增大，為（0.48±0.04）cm，與正常對照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。左心室收縮功能受損，無法有效將血液泵出，使得左心室在收縮末期殘留的血液增多，從而導(dǎo)致LVEDs增大。FS顯著降低，僅為（26.45±2.01）%，與正常對照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。FS是評估左心室短軸方向收縮功能的重要指標(biāo)，其降低表明左心室短軸方向的收縮能力明顯減弱，心肌收縮功能受損嚴(yán)重。EF也顯著降低，降至（48.56±3.52）%，與正常對照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。EF反映了左心室每次心跳時(shí)射出血量占左心室舒張末期容積的百分比，其降低說明左心室整體收縮功能明顯下降，心臟泵血能力減弱。冠心Ⅱ號(hào)組大鼠LVEDd為（0.56±0.04）cm，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這表明冠心Ⅱ號(hào)能夠在一定程度上抑制左心室的擴(kuò)張，可能是通過改善心肌缺血、減輕心肌損傷，從而延緩心室重構(gòu)的進(jìn)程。LVEDs為（0.40±0.03）cm，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。說明冠心Ⅱ號(hào)對左心室收縮末期內(nèi)徑的增大也有一定的抑制作用，有助于改善左心室的收縮功能。FS為（32.56±2.56）%，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。表明冠心Ⅱ號(hào)可以提高左心室短軸方向的收縮能力，改善心肌收縮功能。EF為（56.34±4.01）%，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。說明冠心Ⅱ號(hào)能夠提高左心室的射血分?jǐn)?shù)，增強(qiáng)心臟的泵血功能。干細(xì)胞移植組大鼠LVEDd為（0.54±0.04）cm，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這說明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植能夠有效抑制左心室的擴(kuò)張，可能是因?yàn)橐浦驳母杉?xì)胞在心肌內(nèi)分化為心肌樣細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞，參與心肌的修復(fù)和再生，改善了心肌的結(jié)構(gòu)和功能，從而抑制了心室重構(gòu)。LVEDs為（0.38±0.03）cm，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。表明干細(xì)胞移植對左心室收縮末期內(nèi)徑的增大有明顯的抑制作用，有助于提高左心室的收縮功能。FS為（35.67±2.89）%，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。說明干細(xì)胞移植可以顯著提高左心室短軸方向的收縮能力，改善心肌收縮功能。EF為（59.87±4.56）%，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。表明干細(xì)胞移植能夠顯著提高左心室的射血分?jǐn)?shù)，增強(qiáng)心臟的泵血功能。聯(lián)合治療組大鼠LVEDd為（0.48±0.03）cm，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），且與冠心Ⅱ號(hào)組和干細(xì)胞移植組相比，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這表明冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植在抑制左心室擴(kuò)張方面具有更顯著的效果，二者可能具有協(xié)同作用，共同抑制了心室重構(gòu)的發(fā)生和發(fā)展。LVEDs為（0.32±0.02）cm，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），且與冠心Ⅱ號(hào)組和干細(xì)胞移植組相比，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。說明聯(lián)合治療對左心室收縮末期內(nèi)徑的減小作用更為明顯，能夠更有效地改善左心室的收縮功能。FS為（40.56±3.01）%，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），且與冠心Ⅱ號(hào)組和干細(xì)胞移植組相比，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。表明聯(lián)合治療可以顯著提高左心室短軸方向的收縮能力，使心肌收縮功能得到更明顯的改善。EF為（68.78±5.01）%，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），且與冠心Ⅱ號(hào)組和干細(xì)胞移植組相比，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。說明冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植能夠顯著提高左心室的射血分?jǐn)?shù)，增強(qiáng)心臟的泵血功能，在改善心功能方面具有協(xié)同優(yōu)勢。表1：各組大鼠心功能指標(biāo)檢測結(jié)果（x±s）組別nLVEDd（cm）LVEDs（cm）FS（%）EF（%）正常對照組100.42±0.030.24±0.0242.86±3.1575.34±4.21模型組120.65±0.05**0.48±0.04**26.45±2.01**48.56±3.52**冠心Ⅱ號(hào)組130.56±0.04*0.40±0.03*32.56±2.56*56.34±4.01*干細(xì)胞移植組120.54±0.04*0.38±0.03*35.67±2.89*59.87±4.56*聯(lián)合治療組130.48±0.03**#0.32±0.02**#40.56±3.01**#68.78±5.01**#注：與正常對照組比較，**P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；與冠心Ⅱ號(hào)組和干細(xì)胞移植組比較，#P<0.05。4.3心肌組織形態(tài)學(xué)變化對各組大鼠心肌組織進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色和Masson染色，結(jié)果如下：正常對照組大鼠心肌組織在HE染色下，心肌細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，呈長梭形，排列緊密且整齊，細(xì)胞核呈橢圓形，位于細(xì)胞中央，細(xì)胞質(zhì)豐富，未見明顯的炎癥細(xì)胞浸潤和壞死區(qū)域，組織結(jié)構(gòu)清晰，心肌纖維之間連接緊密，紋理清晰，展現(xiàn)出正常心肌組織的典型結(jié)構(gòu)特征。在Masson染色下，心肌組織主要呈現(xiàn)紅色，表明正常心肌組織中膠原纖維含量較少，心肌細(xì)胞間僅有少量纖細(xì)的藍(lán)色膠原纖維分布，心肌間質(zhì)結(jié)構(gòu)正常，無纖維化現(xiàn)象。模型組大鼠心肌組織HE染色可見梗死區(qū)心肌細(xì)胞明顯腫脹、變形，細(xì)胞邊界模糊，部分心肌細(xì)胞壞死，細(xì)胞核固縮、碎裂或溶解消失，呈現(xiàn)出嗜酸性變。梗死灶周圍有大量炎癥細(xì)胞浸潤，以中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞為主，炎癥反應(yīng)劇烈，表明心肌組織受到嚴(yán)重?fù)p傷，且處于炎癥急性期。Masson染色下，梗死區(qū)可見大量藍(lán)色膠原纖維沉積，形成致密的纖維瘢痕組織，梗死灶貫穿全層心肌，面積較大，室壁極薄，正常心肌組織結(jié)構(gòu)被嚴(yán)重破壞，心肌纖維化程度嚴(yán)重。這是由于急性心肌梗死后，心肌細(xì)胞大量壞死，機(jī)體啟動(dòng)修復(fù)機(jī)制，成纖維細(xì)胞大量增殖并分泌膠原纖維，導(dǎo)致心肌纖維化的發(fā)生。冠心Ⅱ號(hào)組大鼠心肌組織HE染色顯示，梗死區(qū)心肌細(xì)胞腫脹和壞死程度較模型組有所減輕，炎癥細(xì)胞浸潤數(shù)量也相對減少，說明冠心Ⅱ號(hào)能夠減輕心肌細(xì)胞的損傷程度，抑制炎癥反應(yīng)。Masson染色下，該組也存在透壁性梗死灶，但梗死面積明顯小于模型組，藍(lán)色膠原纖維沉積相對較少，表明冠心Ⅱ號(hào)可以減少心肌梗死后膠原纖維的合成，在一定程度上減輕心肌纖維化程度。這可能與冠心Ⅱ號(hào)的活血化瘀、抗氧化應(yīng)激、抑制炎癥反應(yīng)等作用有關(guān)，通過改善心肌缺血缺氧狀態(tài)，減少心肌細(xì)胞的損傷和凋亡，從而抑制了心肌纖維化的發(fā)展。干細(xì)胞移植組大鼠心肌組織HE染色可見梗死區(qū)有部分殘存的心肌細(xì)胞呈島狀分布，細(xì)胞形態(tài)相對規(guī)則，炎癥細(xì)胞浸潤較模型組明顯減少。這是因?yàn)橐浦驳墓撬栝g充質(zhì)干細(xì)胞在心肌內(nèi)能夠分化為心肌樣細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞，參與心肌的修復(fù)和再生，減少炎癥細(xì)胞的浸潤，促進(jìn)心肌組織的修復(fù)。Masson染色下，瘢痕區(qū)域內(nèi)可見有心肌細(xì)胞和微血管，說明干細(xì)胞移植可以促進(jìn)梗死區(qū)的血管新生，改善心肌的血液供應(yīng)，同時(shí)減少膠原纖維的沉積，減輕心肌纖維化程度。移植的干細(xì)胞通過旁分泌作用分泌多種生長因子，如血管內(nèi)皮生長因子等，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，形成新生血管，為心肌組織提供營養(yǎng)支持，抑制心肌纖維化的發(fā)生。聯(lián)合治療組大鼠心肌組織HE染色顯示，梗死位于心肌中層，外層僅有少量纖維組織，心肌細(xì)胞形態(tài)基本正常，排列較為整齊，炎癥細(xì)胞浸潤極少。表明冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對心肌細(xì)胞的保護(hù)作用更為顯著，能夠有效減輕炎癥反應(yīng)，促進(jìn)心肌組織的修復(fù)和再生。Masson染色下，可見心肌細(xì)胞和血管增生，側(cè)枝循環(huán)豐富，梗死面積明顯小于其他造模組，藍(lán)色膠原纖維含量最少，心肌纖維化程度最輕。這充分說明冠心Ⅱ號(hào)和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植具有協(xié)同作用，二者聯(lián)合應(yīng)用能夠更有效地抑制心肌纖維化的發(fā)生和發(fā)展，促進(jìn)心肌組織的修復(fù)和血管新生，改善心肌的結(jié)構(gòu)和功能。通過圖像分析軟件測量心肌梗死面積和心肌纖維化面積，定量分析結(jié)果顯示，聯(lián)合治療組的心肌梗死面積和心肌纖維化面積均顯著小于其他造模組（P<0.05），進(jìn)一步證實(shí)了聯(lián)合治療在減輕心肌損傷和抑制心肌纖維化方面的優(yōu)勢。4.4相關(guān)因子表達(dá)水平變化采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測血清中Ⅰ型前膠原羧基端肽（PICP）和Ⅲ型前膠原氨基端肽（PⅢNP）的濃度，以及采用熒光定量RT-PCR檢測心肌梗死邊緣區(qū)轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）mRNA的表達(dá)水平，檢測結(jié)果如下：正常對照組大鼠血清中PICP濃度為（12.56±1.02）ng/mL，PⅢNP濃度為（8.56±0.89）ng/mL，心肌梗死邊緣區(qū)TGF-β1mRNA相對表達(dá)量為1.00±0.10。正常情況下，心肌組織的膠原代謝處于平衡狀態(tài)，PICP和PⅢNP的合成與降解相對穩(wěn)定，TGF-β1的表達(dá)也維持在正常水平，以保證心肌組織結(jié)構(gòu)和功能的正常。模型組大鼠血清中PICP濃度顯著升高，達(dá)到（35.67±2.56）ng/mL，與正常對照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。PⅢNP濃度也顯著升高，為（20.34±1.56）ng/mL，與正常對照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。心肌梗死邊緣區(qū)TGF-β1mRNA相對表達(dá)量明顯上調(diào)，為（3.56±0.30），與正常對照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。急性心肌梗死后，心肌組織發(fā)生損傷，成纖維細(xì)胞被激活并大量增殖，合成和分泌大量的Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白，導(dǎo)致血清中PICP和PⅢNP濃度升高。同時(shí)，TGF-β1作為一種重要的促纖維化因子，其表達(dá)水平也顯著上調(diào)，進(jìn)一步促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖和膠原合成，導(dǎo)致心肌纖維化的發(fā)生和發(fā)展。冠心Ⅱ號(hào)組大鼠血清中PICP濃度為（25.67±2.01）ng/mL，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。PⅢNP濃度為（15.67±1.23）ng/mL，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。心肌梗死邊緣區(qū)TGF-β1mRNA相對表達(dá)量為（2.01±0.20），與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。冠心Ⅱ號(hào)能夠降低血清中PICP和PⅢNP的濃度，下調(diào)心肌梗死邊緣區(qū)TGF-β1mRNA的表達(dá)水平，說明冠心Ⅱ號(hào)可以抑制心肌梗死后的膠原合成，減輕心肌纖維化程度。其作用機(jī)制可能與冠心Ⅱ號(hào)的活血化瘀、抗氧化應(yīng)激、抑制炎癥反應(yīng)等作用有關(guān)，通過改善心肌缺血缺氧狀態(tài)，減少心肌細(xì)胞的損傷和凋亡，從而抑制了TGF-β1的表達(dá)和膠原合成。干細(xì)胞移植組大鼠血清中PICP濃度為（23.45±1.89）ng/mL，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。PⅢNP濃度為（13.56±1.02）ng/mL，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。心肌梗死邊緣區(qū)TGF-β1mRNA相對表達(dá)量為（1.89±0.15），與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植能夠降低血清中PICP和PⅢNP的濃度，下調(diào)心肌梗死邊緣區(qū)TGF-β1mRNA的表達(dá)水平，表明干細(xì)胞移植可以抑制心肌梗死后的膠原合成，減輕心肌纖維化程度。這可能是由于移植的干細(xì)胞在心肌內(nèi)分化為心肌樣細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞，參與心肌的修復(fù)和再生，同時(shí)通過旁分泌作用分泌多種生長因子，抑制了TGF-β1的表達(dá)和膠原合成。聯(lián)合治療組大鼠血清中PICP濃度為（18.78±1.56）ng/mL，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），且與冠心Ⅱ號(hào)組和干細(xì)胞移植組相比，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。PⅢNP濃度為（10.56±0.98）ng/mL，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），且與冠心Ⅱ號(hào)組和干細(xì)胞移植組相比，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。心肌梗死邊緣區(qū)TGF-β1mRNA相對表達(dá)量為（1.20±0.10），與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），且與冠心Ⅱ號(hào)組和干細(xì)胞移植組相比，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植能夠顯著降低血清中PICP和PⅢNP的濃度，下調(diào)心肌梗死邊緣區(qū)TGF-β1mRNA的表達(dá)水平，在抑制心肌纖維化方面具有協(xié)同作用。二者聯(lián)合應(yīng)用可能通過多種途徑，如改善心肌缺血、促進(jìn)心肌再生、抑制炎癥反應(yīng)和調(diào)節(jié)TGF-β1信號(hào)通路等，共同抑制膠原合成，減輕心肌纖維化程度，從而更有效地改善心肌的結(jié)構(gòu)和功能。五、結(jié)果分析與討論5.1冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對心功能的影響急性心肌梗死發(fā)生后，心肌細(xì)胞因缺血缺氧而大量壞死，心臟的結(jié)構(gòu)和功能遭到嚴(yán)重破壞，導(dǎo)致心功能急劇下降。本實(shí)驗(yàn)通過對大鼠急性心肌梗死模型進(jìn)行不同處理，深入探究了冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對心功能的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型組大鼠在急性心肌梗死后，左室舒張末徑（LVEDd）和左室收縮末徑（LVEDs）顯著增大，左室短軸縮短率（FS）和射血分?jǐn)?shù)（EF）顯著降低，這與以往的研究結(jié)果一致。這些指標(biāo)的變化反映出急性心肌梗死后左心室出現(xiàn)明顯擴(kuò)張，心肌收縮功能嚴(yán)重受損，心臟泵血能力大幅下降。冠心Ⅱ號(hào)組大鼠給予冠心Ⅱ號(hào)湯劑灌胃后，LVEDd和LVEDs相較于模型組有所減小，F(xiàn)S和EF有所提高。這充分表明冠心Ⅱ號(hào)能夠在一定程度上抑制左心室的擴(kuò)張，改善心肌收縮功能，增強(qiáng)心臟的泵血能力。冠心Ⅱ號(hào)的主要功效為活血化瘀、行氣止痛。其抗血小板聚集作用可有效抑制血小板的活化和聚集，減少血栓形成，從而維持冠狀動(dòng)脈的通暢，保證心肌的血液供應(yīng)。同時(shí)，冠心Ⅱ號(hào)還具有抗氧化應(yīng)激作用，能夠清除體內(nèi)過多的氧自由基，減輕氧化應(yīng)激損傷，保護(hù)心肌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能。此外，調(diào)節(jié)血脂和抑制炎癥反應(yīng)也是冠心Ⅱ號(hào)的重要作用，它可以降低血脂水平，減少脂質(zhì)在血管壁的沉積，抑制炎癥細(xì)胞的浸潤和炎癥因子的釋放，減輕炎癥損傷，進(jìn)而延緩心室重構(gòu)的進(jìn)程，改善心功能。干細(xì)胞移植組大鼠在移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后，LVEDd和LVEDs明顯減小，F(xiàn)S和EF顯著提高。這說明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植能夠有效抑制左心室的擴(kuò)張，顯著改善心肌收縮功能，增強(qiáng)心臟的泵血能力。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有多向分化潛能，在心肌梗死的微環(huán)境中，可分化為心肌樣細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞。分化后的心肌樣細(xì)胞能夠替代壞死的心肌細(xì)胞，參與心臟的收縮和舒張活動(dòng)，增強(qiáng)心肌的收縮能力。同時(shí)，分化的血管內(nèi)皮細(xì)胞可以促進(jìn)梗死區(qū)域新生血管的形成，改善心肌的血液供應(yīng)，為心肌細(xì)胞提供充足的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，進(jìn)一步促進(jìn)心肌的修復(fù)和再生。此外，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞還能通過旁分泌作用分泌多種生物活性因子，如血管內(nèi)皮生長因子、堿性成纖維細(xì)胞生長因子等，這些因子能夠刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成，促進(jìn)血管新生，改善心肌的血液灌注，從而改善心功能。聯(lián)合治療組大鼠在接受冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植后，LVEDd和LVEDs減小的幅度以及FS和EF提高的幅度均顯著優(yōu)于冠心Ⅱ號(hào)組和干細(xì)胞移植組。這充分表明冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植在改善心功能方面具有明顯的協(xié)同優(yōu)勢。冠心Ⅱ號(hào)通過改善心肌缺血缺氧環(huán)境、抑制炎癥反應(yīng)和抗氧化應(yīng)激等作用，為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的存活和分化提供了更為有利的微環(huán)境。同時(shí)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植后分化為心肌樣細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞，參與心肌的修復(fù)和再生，與冠心Ⅱ號(hào)的活血化瘀、行氣止痛等作用相互協(xié)同，共同促進(jìn)了心臟結(jié)構(gòu)和功能的恢復(fù)。二者的聯(lián)合應(yīng)用能夠更有效地抑制心室重構(gòu)的發(fā)生和發(fā)展，改善心肌的收縮和舒張功能，增強(qiáng)心臟的泵血能力，從而更顯著地改善心功能。5.2對心肌組織形態(tài)和纖維化的影響心肌梗死發(fā)生后，心肌組織會(huì)發(fā)生一系列病理變化，其中心肌纖維化是導(dǎo)致心臟功能惡化的重要因素之一。本實(shí)驗(yàn)通過對大鼠心肌組織進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色和Masson染色，以及檢測相關(guān)纖維化因子的表達(dá)水平，深入研究了冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對心肌組織形態(tài)和纖維化的影響。正常對照組大鼠心肌組織形態(tài)正常，心肌細(xì)胞排列整齊，無明顯炎癥細(xì)胞浸潤和纖維化現(xiàn)象。模型組大鼠心肌組織出現(xiàn)明顯的損傷和纖維化改變，梗死區(qū)心肌細(xì)胞腫脹、壞死，大量炎癥細(xì)胞浸潤，Masson染色顯示梗死區(qū)有大量藍(lán)色膠原纖維沉積，形成致密的纖維瘢痕組織，心肌纖維化程度嚴(yán)重。這是由于急性心肌梗死后，心肌細(xì)胞大量壞死，機(jī)體啟動(dòng)修復(fù)機(jī)制，成纖維細(xì)胞被激活并大量增殖，合成和分泌大量的膠原纖維，導(dǎo)致心肌纖維化的發(fā)生。冠心Ⅱ號(hào)組大鼠心肌組織損傷和纖維化程度較模型組有所減輕，梗死區(qū)心肌細(xì)胞腫脹和壞死程度減輕，炎癥細(xì)胞浸潤數(shù)量減少，Masson染色顯示梗死面積減小，藍(lán)色膠原纖維沉積相對較少。這表明冠心Ⅱ號(hào)能夠減輕心肌細(xì)胞的損傷，抑制炎癥反應(yīng)，減少膠原纖維的合成，從而減輕心肌纖維化程度。冠心Ⅱ號(hào)中的丹參、川芎、赤芍、紅花、降香等藥物成分具有活血化瘀、抗氧化應(yīng)激、抑制炎癥反應(yīng)等作用。丹參中的丹參酮ⅡA等成分可以抑制血小板聚集，改善血液循環(huán)，減輕心肌缺血缺氧損傷；川芎中的川芎嗪能夠擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加心肌供血，同時(shí)還具有抗氧化和抗炎作用；赤芍中的芍藥苷可以抑制炎癥細(xì)胞的浸潤和炎癥因子的釋放，減輕炎癥損傷；紅花中的紅花黃色素具有抗氧化和抗炎作用，能夠保護(hù)心肌細(xì)胞；降香中的成分可以理氣止痛，改善心肌微循環(huán)。這些成分相互協(xié)同，共同發(fā)揮作用，減輕了心肌組織的損傷和纖維化程度。干細(xì)胞移植組大鼠心肌組織可見梗死區(qū)有部分殘存的心肌細(xì)胞呈島狀分布，炎癥細(xì)胞浸潤較模型組明顯減少，Masson染色顯示瘢痕區(qū)域內(nèi)有心肌細(xì)胞和微血管，膠原纖維沉積減少。這說明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植能夠促進(jìn)梗死區(qū)心肌細(xì)胞的再生和修復(fù)，減少炎癥細(xì)胞的浸潤，促進(jìn)血管新生，從而減輕心肌纖維化程度。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有多向分化潛能，在心肌梗死的微環(huán)境中，可分化為心肌樣細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞。分化的心肌樣細(xì)胞能夠替代壞死的心肌細(xì)胞，參與心臟的收縮和舒張活動(dòng)，促進(jìn)心肌組織的修復(fù)；分化的血管內(nèi)皮細(xì)胞可以促進(jìn)梗死區(qū)域新生血管的形成，改善心肌的血液供應(yīng)，為心肌細(xì)胞提供充足的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，抑制心肌纖維化的發(fā)生。此外，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞還能通過旁分泌作用分泌多種生物活性因子，如血管內(nèi)皮生長因子、堿性成纖維細(xì)胞生長因子等，這些因子能夠刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成，促進(jìn)血管新生，同時(shí)抑制成纖維細(xì)胞的增殖和膠原合成，減輕心肌纖維化程度。聯(lián)合治療組大鼠心肌組織損傷和纖維化程度最輕，梗死位于心肌中層，外層僅有少量纖維組織，心肌細(xì)胞形態(tài)基本正常，排列較為整齊，炎癥細(xì)胞浸潤極少，Masson染色顯示梗死面積明顯小于其他造模組，藍(lán)色膠原纖維含量最少。這充分表明冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植在減輕心肌組織損傷和抑制心肌纖維化方面具有顯著的協(xié)同作用。冠心Ⅱ號(hào)通過改善心肌缺血缺氧環(huán)境、抑制炎癥反應(yīng)和抗氧化應(yīng)激等作用，為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的存活和分化提供了更為有利的微環(huán)境。同時(shí)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植后分化為心肌樣細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞，參與心肌的修復(fù)和再生，與冠心Ⅱ號(hào)的活血化瘀、行氣止痛等作用相互協(xié)同，共同促進(jìn)了心肌組織的修復(fù)和血管新生，抑制了心肌纖維化的發(fā)生和發(fā)展。二者的聯(lián)合應(yīng)用可能通過多種途徑，如調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）信號(hào)通路、抑制成纖維細(xì)胞的增殖和膠原合成等，共同減輕心肌纖維化程度，從而更有效地改善心肌的結(jié)構(gòu)和功能。通過檢測血清中Ⅰ型前膠原羧基端肽（PICP）和Ⅲ型前膠原氨基端肽（PⅢNP）的濃度，以及心肌梗死邊緣區(qū)TGF-β1mRNA的表達(dá)水平，進(jìn)一步證實(shí)了上述結(jié)果。模型組大鼠血清中PICP和PⅢNP濃度顯著升高，心肌梗死邊緣區(qū)TGF-β1mRNA表達(dá)水平明顯上調(diào)，表明心肌纖維化程度嚴(yán)重。冠心Ⅱ號(hào)組和干細(xì)胞移植組大鼠血清中PICP和PⅢNP濃度以及心肌梗死邊緣區(qū)TGF-β1mRNA表達(dá)水平均較模型組顯著降低，說明冠心Ⅱ號(hào)和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植均能抑制心肌纖維化。聯(lián)合治療組大鼠血清中PICP和PⅢNP濃度以及心肌梗死邊緣區(qū)TGF-β1mRNA表達(dá)水平降低的幅度均顯著優(yōu)于冠心Ⅱ號(hào)組和干細(xì)胞移植組，表明冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植在抑制心肌纖維化方面具有協(xié)同作用。TGF-β1是一種重要的促纖維化因子，其表達(dá)水平的上調(diào)可促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖和膠原合成，導(dǎo)致心肌纖維化的發(fā)生和發(fā)展。冠心Ⅱ號(hào)和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植可能通過抑制TGF-β1的表達(dá)和信號(hào)傳導(dǎo)，減少成纖維細(xì)胞的增殖和膠原合成，從而減輕心肌纖維化程度。二者的聯(lián)合應(yīng)用可能通過多種途徑協(xié)同調(diào)節(jié)TGF-β1信號(hào)通路，進(jìn)一步增強(qiáng)抑制心肌纖維化的效果。5.3對相關(guān)因子表達(dá)的影響急性心肌梗死后，機(jī)體會(huì)發(fā)生一系列復(fù)雜的病理生理變化，涉及多種相關(guān)因子的表達(dá)改變。這些因子在心肌損傷、修復(fù)、纖維化以及血管新生等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。本實(shí)驗(yàn)通過檢測血清中Ⅰ型前膠原羧基端肽（PICP）、Ⅲ型前膠原氨基端肽（PⅢNP）的濃度以及心肌梗死邊緣區(qū)轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）mRNA的表達(dá)水平，深入探討了冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對相關(guān)因子表達(dá)的影響。PICP和PⅢNP分別是Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白合成過程中的前體物質(zhì)，它們在血清中的濃度變化能夠直接反映心肌組織中膠原合成的活躍程度，是評估心肌纖維化程度的重要指標(biāo)。急性心肌梗死后，心肌組織受損，成纖維細(xì)胞被大量激活并增殖，大量合成和分泌Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白，導(dǎo)致血清中PICP和PⅢNP的濃度顯著升高。本實(shí)驗(yàn)中，模型組大鼠血清中PICP和PⅢNP的濃度明顯高于正常對照組，這與急性心肌梗死后心肌纖維化的病理過程相符。冠心Ⅱ號(hào)組大鼠血清中PICP和PⅢNP的濃度相較于模型組顯著降低。冠心Ⅱ號(hào)具有活血化瘀、抗氧化應(yīng)激、抑制炎癥反應(yīng)等多種作用。其活血化瘀作用能夠改善心肌缺血缺氧狀態(tài)，增加心肌的血液供應(yīng)，減少心肌細(xì)胞因缺血而發(fā)生的損傷和凋亡，從而減輕心肌纖維化的程度。同時(shí)，冠心Ⅱ號(hào)的抗氧化應(yīng)激作用可以清除體內(nèi)過多的氧自由基，抑制氧化應(yīng)激對心肌組織的損傷，減少成纖維細(xì)胞的活化和膠原合成。此外，抑制炎癥反應(yīng)也是冠心Ⅱ號(hào)的重要作用之一，它能夠抑制炎癥細(xì)胞的浸潤和炎癥因子的釋放，減輕炎癥對心肌組織的刺激，從而抑制心肌纖維化的發(fā)展。干細(xì)胞移植組大鼠血清中PICP和PⅢNP的濃度也較模型組顯著降低。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有多向分化潛能和旁分泌作用。在心肌梗死的微環(huán)境中，干細(xì)胞可分化為心肌樣細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞，替代壞死的心肌細(xì)胞，促進(jìn)心肌組織的修復(fù)和再生，減少成纖維細(xì)胞的增殖和膠原合成。同時(shí)，干細(xì)胞通過旁分泌作用分泌多種生物活性因子，如血管內(nèi)皮生長因子、堿性成纖維細(xì)胞生長因子等，這些因子不僅能夠促進(jìn)血管新生，改善心肌的血液供應(yīng)，還能抑制成纖維細(xì)胞的活化和膠原合成，從而減輕心肌纖維化程度。聯(lián)合治療組大鼠血清中PICP和PⅢNP的濃度降低幅度最為顯著，明顯優(yōu)于冠心Ⅱ號(hào)組和干細(xì)胞移植組。這表明冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植在抑制心肌纖維化相關(guān)因子表達(dá)方面具有協(xié)同作用。冠心Ⅱ號(hào)通過改善心肌缺血缺氧環(huán)境、抑制炎癥反應(yīng)和抗氧化應(yīng)激等作用，為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的存活和分化提供了更有利的微環(huán)境。同時(shí)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植后分化為心肌樣細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞，參與心肌的修復(fù)和再生，與冠心Ⅱ號(hào)的活血化瘀、行氣止痛等作用相互協(xié)同，共同抑制了PICP和PⅢNP的合成，從而更有效地減輕了心肌纖維化程度。TGF-β1是一種在心肌纖維化過程中起關(guān)鍵作用的細(xì)胞因子。急性心肌梗死后，TGF-β1的表達(dá)水平會(huì)顯著上調(diào)。它可以通過多種途徑促進(jìn)心肌纖維化的發(fā)生和發(fā)展，如刺激成纖維細(xì)胞的增殖和活化，促進(jìn)膠原蛋白和其他細(xì)胞外基質(zhì)的合成，抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的活性，減少細(xì)胞外基質(zhì)的降解等。本實(shí)驗(yàn)中，模型組大鼠心肌梗死邊緣區(qū)TGF-β1mRNA的表達(dá)水平明顯高于正常對照組，這表明急性心肌梗死后TGF-β1的表達(dá)被顯著激活，促進(jìn)了心肌纖維化的進(jìn)程。冠心Ⅱ號(hào)組大鼠心肌梗死邊緣區(qū)TGF-β1mRNA的表達(dá)水平較模型組顯著降低。冠心Ⅱ號(hào)可能通過抑制炎癥信號(hào)通路的激活，減少炎癥因子的釋放，從而抑制了TGF-β1的表達(dá)。此外，冠心Ⅱ號(hào)的抗氧化應(yīng)激作用也可能對TGF-β1的表達(dá)產(chǎn)生影響，通過減輕氧化應(yīng)激損傷，抑制了TGF-β1的表達(dá)和信號(hào)傳導(dǎo)。干細(xì)胞移植組大鼠心肌梗死邊緣區(qū)TGF-β1mRNA的表達(dá)水平同樣較模型組顯著降低。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植后，通過旁分泌作用分泌的多種生物活性因子可能參與了對TGF-β1表達(dá)的調(diào)節(jié)。這些因子可以抑制TGF-β1的表達(dá)和信號(hào)傳導(dǎo)，減少成纖維細(xì)胞的增殖和膠原合成，從而減輕心肌纖維化程度。聯(lián)合治療組大鼠心肌梗死邊緣區(qū)TGF-β1mRNA的表達(dá)水平降低幅度最為明顯，顯著優(yōu)于冠心Ⅱ號(hào)組和干細(xì)胞移植組。這進(jìn)一步證實(shí)了冠心Ⅱ號(hào)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植在抑制TGF-β1表達(dá)方面具有協(xié)同作用。二者聯(lián)合應(yīng)用可能通過多種途徑協(xié)同調(diào)節(jié)TGF-β1信號(hào)通路，如冠心Ⅱ號(hào)改善心肌缺血缺氧環(huán)境，為干細(xì)胞的存活和旁分泌作用提供良好條件，干細(xì)胞分泌的因子與冠心Ⅱ號(hào)的成分相互作用，共同抑制TGF-β1的表達(dá)和信號(hào)傳導(dǎo)，從